几丁质酶(Chitinase)试剂盒使用说明
苏州格锐思生物科技有限公司多聚半乳糖醛酸酶(PG)试剂盒说明书

多聚半乳糖醛酸酶(ploygalacturonase,PG)试剂盒说明书(货号:G0701F分光法48样)一、产品简介:果胶酶是指分解果胶的多种酶,主要包括多聚半乳糖醛酸酶(PG),果胶裂解酶(PL),果胶甲酯酶(PME)和原果胶酶,贮藏过程中起作用的主要是PG。
所以该酶在食品贮藏保鲜和植物抗病性等领域具有较高的研究价值。
果胶在多聚半乳糖醛酸酶(PG)作用下,能水解产生带有具有还原性醛基的半乳糖醛酸。
与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得多聚半乳糖醛酸酶活性。
二、试剂盒组成和配制:试剂名称规格保存要求备注提取液液体60mL×1瓶4℃保存试剂一液体20mL×1瓶4℃保存试剂二液体20mL×1瓶4℃保存试剂三液体46mL×1瓶4℃保存标准品粉剂mg×1支4℃保存若重新做标曲,则用到该试剂三、所需仪器和用品:可见分光度计、1mL玻璃比色皿(光径1cm)、台式离心机、天平、可调式移液器、水浴锅、研钵、冰。
四、多聚半乳糖醛酸酶(PG)活性检测:建议正式实验前选取2个样本做预测定,了解本批样品情况,熟悉实验流程,避免实验样本和试剂浪费!1、样本制备:①组织样本:称取约0.2g组织(水分充足的样本可取1g),加入1mL经预冷的95%乙醇冰浴匀浆,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心5min;弃上清,留沉淀,向沉淀中加入经预冷的80%乙醇混匀,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心5min;弃上清,留沉淀。
再向沉淀中加入1mL经预冷提取液,涡旋混匀,4℃放置10min;12000rpm,4℃离心10min;留上清,弃沉淀。
上清液置冰上待测。
②液体样本:直接检测。
若浑浊,离心后取上清检测。
2、上机检测:①分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
②在EP管中依次加入:试剂名称(μL)测定管对照管样本6060试剂一390试剂二39040℃水浴30min试剂三450450沸水浴(95-100℃)5min,冰浴或淋浴冷却后,全部转移于1mL玻璃比色皿中,540nm处测定吸光值A,△A=A测定管-A对照管(每个测定管设一个对照管)。
厦门市鲎试剂实验厂 透析专用细菌内毒素检测鲎试剂盒说明书

透析透析专用专用专用细菌内细菌内细菌内毒毒素检测鲎试剂盒使用说明书(凝胶法)【品名品名】】透析用水及透析液细菌内毒素检测鲎试剂盒【规格规格】】1样份/盒【用途用途】】用于透析用水或透析液细菌内毒素检测。
【原理原理】】该鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有C因子、B 因子、凝固酶原、凝固蛋白原等。
在适宜的条件下,细菌内毒素激活C 因子,引起一系列酶促反应,使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。
【试剂盒组成试剂盒组成】】名称 规格/数量 用途 1 鲎试剂(TAL ) 0.5EU/ml ×8支 反应主剂 2 内毒素工作标准品(CSE ) 1EU/支×2支 阳性对照和供试品阳性对照 3 细菌内毒素检查用水(TRW ) 2ml ×3支 鲎试剂与内毒素溶解 4 辅液Ⅰ 0.7ml ×1支 样本稀释 5 采样瓶 10ml ×1支 透析用水或透析液采集 6 空安瓿 2ml ×1支 样本稀释 7 除热原吸头 200µl ×2包,1ml ×1包 移取样本及内毒素溶液 8 使用说明书 1份 操作说明 9 质检报告 1份 质检报告【需准备的材料和设备需准备的材料和设备】】除本试剂盒外需准备旋涡混合器、移液器、试管架、恒温水浴箱或恒温器(37±1℃)。
【用法用法】】1. 供试品溶液及对照制备1.1阴性对照溶液的制备即细菌内毒素检查用水(TRW )。
1.2阳性对照溶液的制备一般为浓度为2λ的内毒素溶液(λ为鲎试剂的的标示灵敏度)。
例如:取效价为1EU/支的内毒素工作品(CSE )1支,加入1.0ml 细菌内毒素检查用水(TRW ),在旋涡混合器震摇2-3min 得1.0EU/ml 内毒素阳性对照溶液。
1.3供试品溶液的制备用无热原采样瓶采集适量透析用水或透析液。
若样本的内毒素限值(L )为1.0EU/ml ,按鲎试剂的灵敏度λ及样本的内毒素限值L 计算供试品德最大有效稀释倍数(MVD ),M V D = L /λ当λ= 0.5 EU/ml ,L= 1.0EU/ml 时,M V D =2(倍),取样本0.7ml 于试剂盒配套辅液Ⅰ中,用旋涡混合器混匀1min 后,即为待测供试品溶液。
细胞基质金属蛋白酶2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(

细胞基质金属蛋白酶2活性荧光定量检测试剂盒产品说明书(中文版)主要用途细胞基质金属蛋白酶2(MMP2)活性荧光定量检测试剂是一种旨在通过荧光探针MCA供体和DAP/DNP 受体双重标记的多肽底物PLGLAR,在特定抑制剂存在与否的情况下,受到MMP2蛋白酶的水解,解离抑制基团,产生荧光产物,即采用荧光法来测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。
该技术经过精心研制、成功实验证明的。
其适用于各种细胞裂解萃取液样品(动物、人体)、部分或完全纯化酶样品中基质金属蛋白酶2的特异活性定量检测,以及抑制剂和激活剂的筛选。
产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,安全可靠。
技术背景基质金属蛋白酶(Matrix metalloproteinases;MMPs)是一类结构高度同源的分泌型或膜相关性锌内肽酶的总称,因含有金属(锌、钙)离子而得名。
其功能在于分解细胞外基质成分。
迄今为止发现的MMPs至少有28种,几乎能降解除多糖以外的全部细胞外基质(extracellular matrix)成分,同时参与胚胎发育、形态形成、胚泡植入(blastocyst)、血管形成、组织再吸收(tissue resorption)、疾病发生,例如关节炎、癌细胞浸入转移等。
根据降解的底物不同可将MMPs分为4大类:(1)胶原酶:MMP1、MMP8、MMP13主要消化Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和蛋白多糖;(2)明胶酶(Ⅳ型胶原酶):MMP2、MMP9,又称明胶酶A、B,主要消化Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅹ型胶原和弹性纤维;(3)基质溶解素:MMP3、MMP7、MMP16、MMP11、MMP12,主要作用于纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、弹力纤维、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ胶原及MMP1、MMP8、MMP9;(4)膜型金属蛋白酶:MT1-MMP、MT2-MMP、MT3-MMP,主要作用于明胶、Ⅳ型胶原、MMP2。
体内绝大多数细胞并不储备MMPs,当需要MMPs的信号传递到细胞后才临时合成,合成的MMPs以无活性的酶原(proenzyme)形式分泌到细胞外,随后被多种蛋白酶和非蛋白酶水解以及热处理激活,一种激活的MMPs 可激活另一种MMPs,形成瀑布效应。
试剂盒使用说明书

人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)含量。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)水平。
用纯化的人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1),再与HRP标记的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人G1氨基丁酸A型受体α1(GABRA1)浓度。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:450pg/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
检测试剂盒(酶联免疫法)说明书

清洗去除非特异抗体。
抗人 IgM 的辣根过氧化物(HRP)结合物加入后在 37℃下孵育 1 小时。此步骤与之前形成的抗原抗 体复合物结合。
洗去未结合物。
加入 TMB 底物,底物由过氧化物酶水解,减少底 物的液体产生蓝色产物。
加入终止液,蓝色变为黄色并且在由 ELISA 读数 仪在波长为 450nm 上读取吸光度。 吸光度与结合到包被抗原的特异性抗体的水平成
公式计算:
COL=样本吸光度/COV COV:临界值 NC:阴性质控 COL:临界指数 3. 结果解释: 图 1:肺炎衣原体抗体与 450nm 下吸光度之间的关系
吸光度 (450nm) O.D<1.4XC
OV 1.4XCOV≤ O.D≤1.5×
COV
COL
<1.4
1.41.5
结果
阴性 没有检 测 IgM 抗体 临界值 低水 平的 IgM 抗体
1) 阳性质控:吸光度应在 450nm 波长下≥0.8。 2) 阴 性 质 控 : 阴 性 质 控 的 吸 光 度 平 均 值 在 450nm 波长下为 0.1< NC ≤ 0.4 2. 计算 COV 和 COL 值:
COV=NC×2 NC=在 450nm 波长下检测两个阴性质控吸光度的平均 值
碧云天生物 鱼溶菌酶(LYS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒 使用说明书

鱼溶菌酶(LYS)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定鱼血清,血浆及相关液体样本中溶菌酶(LYS)的活性。
实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中鱼溶菌酶(LYS)水平。
用纯化的鱼溶菌酶(LYS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入溶菌酶(LYS),再与HRP 标记的LYS抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的溶菌酶(LYS)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鱼溶菌酶(LYS)浓度。
试剂盒组成:试剂盒组成48孔配置96孔配置保存说明书1份1份封板膜2片(48)2片(96)密封袋1个1个酶标包被板1×481×962-8℃保存标准品:225U/ml0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液(20ml×20倍)×1瓶(20ml×30倍)×1瓶2-8℃保存样本处理及要求:1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。
2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。
试剂盒使用说明书

大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
1使用目的:本试剂盒用于饲料、鱼、虾和肉类组织(如鸡、牛肉和猪肉),药物、血清和尿样中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)残留的定量检测。
2实验原理本试剂盒采用竞争ELISA方法,在微孔板包被有大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原,加入大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)标准品或样品,游离大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)与微孔条上预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原互相竞争抗大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)抗体酶标记物,用TMB底物显色,加入终止液后颜色由蓝色变为黄色,用酶标仪在450nm波长下进行检测,吸光值与样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)含量成反比,通过标准曲线计算样品中大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)的含量。
3试剂盒组成3.1预包被的大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)偶联抗原的可拆酶标板:1块(12孔×8条)。
3.2大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)标准品:6瓶(1ml/瓶),含量分别是:0ug/ml, 0.1ug/ml,0.3ug/ml,0.9ug/ml,2.7ug/ml,8.1ug/ml3.3抗大肠杆菌菌体蛋白残留量(E.coli DH-5α)抗体酶结合物:1瓶(6ml)。
3.4显色液A:1瓶(6ml)。
3.5显色液B:1瓶(6ml)。
3.6终止液:1瓶(6ml),2M硫酸。
3.7样本稀释液:1瓶(10×,6ml),用于样品稀释用。
3.8浓缩洗涤液:1瓶(20×,20ml),用于洗板。
3.9说明书一份。
4需要而未提供的材料4.1设备4.1.1波长450nm酶标仪。
碱性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明

碱性蛋白酶活性测定试剂盒使用说明分光光度法注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号:BC2300规格:50T/24样产品内容:试剂一:液体×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加10mL蒸馏水溶解。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。
临用前加入10mL试剂一,沸水浴中溶解。
试剂四:粉剂×1瓶,4℃保存。
临用前加50mL蒸馏水溶解。
试剂五:液体×1瓶,4℃保存。
标准品:液体×1支,0.25μmol/mL标准酪氨酸溶液,4℃保存。
产品说明:AKP是指在碱性条件下催化蛋白质肽键水解的酶类,属于丝氨酸蛋白酶。
此外,该酶还能够水解酯键、酰胺键,具有转酯及转肽的功能。
该酶是主要工业用酶之一,广泛应用于制药、丝绸、食品、制革等行业。
在碱性条件下,AKP水解酪蛋白生成酪氨酸;在碱性条件下,酪氨酸还原磷钼酸生成钨蓝;钨蓝在680nm有特征吸收峰,测定680nm吸光度增加速率,来计算AKP活性。
需自备的仪器和用品:可见分光光度计、水浴锅、磁力搅拌器、可调式移液枪、 1.5mL EP管、1mL玻璃比色皿和蒸馏水。
操作步骤:一、粗酶液提取:1.组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)冰浴匀浆,8000g,4℃离心10min,取上清,即粗酶液。
2.血清或培养液:直接测定。
3.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
二、测定操作:1.分光光度计预热30min,调节波长到680nm,蒸馏水调零。
2.试剂二、试剂三和试剂四置于40℃水浴保温30min。
3.对照管:取一支EP管,加入100μL粗酶液(血清或培养液),200μL试剂二,混匀后置于40℃水浴保温10min;加入200μL试剂三,混匀后8000g,4℃离心10min;取200μL上清液,加入新的EP管,再加入1000μL试剂四,200μL试剂五,混匀后置于40℃水浴保温20min,于680nm测定光吸收,记为A对照管。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性,平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益,请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间:9:00-18:30)。
几丁质酶(Chitinase)试剂盒使用说明
微量法货号:BC0825
规格:100T/48S
产品内容:
提取液:液体105mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体10mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体5mL×1瓶,4℃保存。
试剂四:液体10mL×1瓶,4℃避光保存。
产品说明:
几丁质酶要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中。
而几丁质酶(EC3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。
几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸收值增加速率反映了几丁质酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、水浴锅、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g
组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰
上待测。
2.真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议
500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3s,间隔7s,总时间3min);然后10000g,4℃,离心20min,取上清置于冰上待检。
3.培养液:直接测定。
二、测定操作表
对照管测定管
粗酶液(mL)8080
提取液(mL)12040
试剂一(mL)80
混匀,37℃水浴1h,5000rpm,4℃,离心10min,取上清。
试剂二(mL)4040
混匀,沸水浴7min
试剂三(mL)4040
试剂四(mL)8080
混匀,37℃,15min,于微量石英比色皿/96孔板,对照管调零,测定A585。
三、计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y=2.3575x-0.0143,R2=0.9989
计算公式:
1、按照样本重量计算
酶活性定义:37℃条件下,每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/g)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)=1.91×(A 585+0.0143)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.36mL;V 样:反应体系中样本体积,0.08mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g
2、按照蛋白质浓度计算
酶活性定义:37℃条件下,每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/mg prot)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样×Cpr)=1.91×(A 585+0.0143)÷Cpr
V 反总:反应体系总体积,0.36mL;V 样:反应体系中样本体积,0.08mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;
3、按照细胞数量计算
酶活性定义:37℃条件下,每104个细胞每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/104cell)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=1.91×(A 585+0.0143)÷细胞数量
4、按照液体体积计算
酶活性定义:37℃条件下,每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/mL)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷V 样=1.91×(A 585+0.0143)
b.用96孔板测定的计算公式如下标准曲线:y=1.1788x-0.0143,R2=0.9989
1.按照样本重量计算
酶活性定义:37℃条件下,每克组织每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/g)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×W)=3.82×(A 585+0.0143)÷W
V 反总:反应体系总体积,0.36mL;V 样:反应体系中样本体积,0.08mL;V 样总:加入提取液体积,1mL;W:样本质量,g
2.按照蛋白质浓度计算
酶活性定义:37℃条件下,每毫克蛋白每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/mg prot)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样×Cpr)=3.82×(A 585+0.0143)÷Cpr
V 反总:反应体系总体积,0.36mL;V 样:反应体系中样本体积,0.08mL;Cpr:蛋白浓度,mg/mL;
3.按照细胞数量计算
酶活性定义:37℃条件下,每104个细胞每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/104cell)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷(V 样÷V 样总×细胞数量)=3.82×(A 585+0.0143)÷细胞数量
4.按照液体体积计算
酶活性定义:37℃条件下,每毫升培养液每小时分解几丁质产生1mg N-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。
几丁质酶活性(U/mL)=(A 585+0.0143)/2.3575×V 反总÷V 样=3.82×(A 585+0.0143)注意事项:
1、反应结束后立即进行比色。
2、OD 值大于0.8,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数;或者缩短37℃水浴时间到X 小时(如0.5小时),按照原先计算公式得到的结果再除以X。
3、试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。