致病菌分离纯化的例子
实验二微生物的分离纯化_图文_图文

④真空冷冻干燥法 加有保护剂的菌悬液在冻结状态下予以真空干 燥。 适用于各种微生物,便于大量保藏,菌种存活 时间长,是目前最好的保藏方法。 ⑤液氮超低温保藏法 将菌种置于保护剂中,预冻后保存在液氮超低 温冰箱中( -196℃)。 适用于各种微生物的较理想的保藏方法。
几种常用菌种保藏方法的比较
方法名称
实验二微生物的分离纯化_图文_图文.ppt
内容提要
• 分离 • 纯化 • 形态观察
(1)接种
• 半固体培养基:穿刺接种 • 液体培养基接种 • 普通琼脂培养基:涂布平板,平板划线接种,斜
面划线接种 • 浅盘固体接种
划线接种注意要点
• 划线时接种环与平皿约成30-40度角,轻轻接触, 以腕力在琼脂表面轻快滑动,不能划破琼脂.
同一细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落
(4)菌种保藏
• 最常见的保藏方法:斜面 • 细菌的保藏:甘油保藏 • 真菌的保藏:石蜡油保藏、孢子保藏
菌种保藏的方法
菌 种 保 藏 方 法
连续在培养基上(内)移种
生活态 传代培养保藏法 连续在活宿主上(内)移种
固体斜面
湿法 半固体琼脂柱
真菌分离
• 利用低碳/氮比的培养基可使真菌生长菌落 分散,利于计数,分离和鉴定。这里主要是 利用营养成分的减少而使生长减慢,并由此 限制真菌的迁涉生长。
• 一般采用PDA培养基 • 改变培养温度将有利于不同嗜温区真菌的分
离。 • 有时,真菌子实体形成必须有光线,这在分
离培养时应加以考虑。
(2)纯化
2、琼脂平板在使用前应置于37℃培养箱中孵育l 、2天。
3、培养基的生物物理学参数,如pH及盐分也应 调节到与试样的生态系统参数值相近。
肉鸡中魏斯菌属细菌的分离与鉴定

鸡肉中魏斯菌属细菌的分离与鉴定纪淑娟1,李丽1,王金玲2*(1.沈阳农业大学食品学院,辽宁沈阳 110161;2. 沈阳市进出境检验检疫局,辽宁沈阳 110016)摘要:从沈阳某养鸡场抽取病死鸡在无菌条件下采集样品10份,微需氧条件下进行细菌分离纯化,比对魏斯菌属的基本形态和革兰氏染色特点,得到与魏斯菌属类似菌株13株。
采用16SrDNA基因测序方法对分离出的细菌进行基因序列分析。
在NCBI网站用BLAST软件在GenBank上进行同源性比较,比对结果表明编号为X1001,X1002,X1006,X1008,X1009的株菌同源性达90%。
生化实验结果表明,X1006号菌株为魏斯菌属中的融合魏斯菌属。
关键词:肉鸡;魏斯菌属细菌;分离;鉴定;基因测序中图分类号:Q93-331 文献标识码:AIsolation and identification of weissella from the chickenJI Shu-juan1, LI li1,WANG Jin-ling 2*(1.College of Food Science,Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161,China;2. Shenyang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shenyang 110016, China)Abstract:10 samples of dead chickens were drown at sterile conditions from farms in Shenyang. The bacterials for each sample were isolated and purified at micro-aerobic conditions. As a result 13 strains of bacterial derived were preliminary determined as Weissella by comparison with the characteristics of Weissella. The 16SrDNA gene sequencing detected by PCR showed that the strain namely (X1001 X1002 X1006 X1008 X1009) had highly consanguinity with Weissella. Its consanguinity reached 90%. The rusults of biochemical experiment indicated that X1006 strain posses the characteristics of fusion Weissella. Therefore it can be fusion Weissella. Keywords:chicken;weissella;isolation;identification;gene sequence微需氧菌(microaerophilic bacterium)是一类在空气中和厌氧环境中均不生长,只能在含一定浓度二氧化碳(5%~10%)和低浓度氧气(5%左右)条件下生长的细菌。
细菌分离提纯实验报告

细菌分离提纯实验报告细菌分离提纯是一项常见的实验技术,通过这项技术可以从混合菌液中分离出单一的、纯净的细菌菌落。
这项技术在生物学、医学、环境科学等领域都有广泛的应用。
细菌分离提纯的实验步骤主要包括:取样、制备稀释液、涂布平板、培养菌落、筛选菌落、鉴定细菌。
首先,取样是细菌分离提纯的第一步。
当我们需要分离某种细菌时,我们需要从含有该种细菌的样品中取样。
比如,我们可以从水样、土壤样、食品样、人体样等中取样。
然后,制备稀释液。
我们对取样物进行稀释,使得其中的细菌数目降到一定范围内,以便于后续的细菌分离。
通常我们会选择使用生理盐水、缓冲液等来制备稀释液。
接下来,将稀释液涂布在平板上。
我们通常会使用琼脂平板来进行细菌分离提纯实验。
将稀释液均匀涂布在琼脂平板上,然后用培养皿盖好,放入恒温培养箱中进行培养,通常在适宜的温度下进行培养24-48小时。
培养过程中,我们可以观察到平板上出现的不同形态的菌落。
可以根据菌落的形态、颜色、大小等特征来进行筛选。
一般我们会选择孤立的、圆形的、透明或者白色的菌落作为目标菌落。
当我们筛选出目标菌落后,我们需要进行鉴定。
通常我们可以根据细菌的生理生化特性、抗生素敏感性、分子生物学特征等来鉴定细菌的种属。
可以使用生理生化试剂盒、PCR技术、16S rRNA测序等方法进行鉴定。
最终,根据鉴定结果,我们可以获得目标细菌的纯种菌株。
这些纯种菌株可以用于进一步的实验研究,如基因克隆、发酵生产等。
细菌分离提纯实验需要注意以下几点。
首先,取样要注意无菌操作,避免采样器具的污染。
其次,涂布平板时要注意均匀涂布,以避免菌落的融合。
另外,培养过程中要注意恒温,避免细菌在高温或低温下死亡。
总之,细菌分离提纯是一项重要的实验技术,在微生物学研究中起到了至关重要的作用。
通过细菌分离提纯技术,我们能够从混合菌液中得到纯净的细菌菌落,为后续的实验提供了可靠的菌种资源。
这项技术的应用涵盖了多个领域,对于推动生物科学的发展具有重要的意义。
微生物的分离纯化实验报告

微生物的分离纯化实验报告微生物的分离纯化实验报告引言:微生物是一类极小的生物体,包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中,对生态系统的平衡和物质循环起着重要作用。
微生物的分离纯化是微生物学研究的基础,通过分离纯化可以获得单一的微生物菌株,为后续的鉴定、培养和利用提供基础数据。
本实验旨在通过分离纯化微生物的方法,获得纯净的微生物菌株。
材料与方法:1. 实验材料:含有微生物的样品(如土壤、水样等)、琼脂平板培养基、无菌培养皿、无菌移液管、无菌匙、无菌培养管等。
2. 实验步骤:a. 取适量样品,加入适量的无菌生理盐水中,充分搅拌均匀。
b. 取一定体积的悬浮液,分别在琼脂平板上均匀涂布,避免重复涂布。
c. 将涂布好的琼脂平板培养基放置于恒温培养箱中,以适当温度孵育。
d. 孵育一段时间后,观察平板上的菌落情况,选择形态独特的单个菌落。
e. 用无菌匙将选中的菌落划取至无菌培养管中,加入适量的无菌生理盐水。
f. 将培养管中的菌液进行摇匀,称取一定体积的菌液,分别在琼脂平板上均匀涂布。
g. 重复以上步骤,直至获得纯净的微生物菌株。
结果与讨论:通过实验,我们成功地从样品中分离纯化了多个微生物菌株。
在观察菌落形态时,我们发现不同微生物菌株的菌落形态各异,有的呈圆形,有的呈不规则形状,有的呈乳白色,有的呈黄色等。
这些观察结果表明不同的微生物菌株具有不同的生长特性和代谢方式。
在分离纯化的过程中,我们注意到有些菌落会在培养基上形成菌落周围的透明区域,这是由于菌落分泌的溶解酶作用于琼脂平板中的胶原蛋白,导致胶原蛋白溶解而形成的。
这种现象被称为溶解圈,是一种常见的微生物特征,有助于鉴定微生物的溶解能力。
在实验过程中,我们还遇到了一些困难和挑战。
首先,样品中可能存在多种微生物,通过分离纯化的过程中需要进行多次的涂布和筛选,才能获得纯净的菌株。
其次,在涂布过程中需要注意避免交叉污染,以免影响结果的准确性。
细菌分离纯化实验报告

细菌分离纯化实验报告本次实验的目的是通过细菌分离纯化的方法,从混合菌液中分离出目标菌株,并进行纯化,以获得纯净的目标菌株用于后续实验。
实验设备和试剂:1. 细菌培养平板:含有选择性抑制其他细菌生长的培养基。
2. 培养基:适用于目标菌株的培养基,如营养琼脂培养基。
3. 微量离心管:用于样品的处理和离心。
4. 恒温恒湿箱:调节实验环境的湿度和温度。
5. 显微镜:观察细菌形态和数量。
6. 干燥箱:用于处理培养平板和培养皿。
7. 试剂:如无菌生理盐水、酒精,用于消毒和处理细菌样品。
实验步骤:1. 预处理培养基和培养皿:将培养基热解,倒入无菌培养皿中,待凝固。
2. 提取目标菌株:取一定量的混合菌液,加入微量离心管中,并在1000rpm条件下离心10分钟。
3. 厌氧处理(如需要):若目标菌株是厌氧菌,则在无氧条件下进行操作。
4. 稀释样品:取离心后的上清液,逐渐进行稀释,直至可以观察到单个菌落形成的板。
5. 涂布培养:取少量稀释液,利用无菌培养棒均匀涂布在固体培养基上,避免菌落交叉生长。
6. 培养和筛选:将涂布好的培养皿面朝下放入恒温恒湿箱中,以适当的温度和时间进行培养。
根据菌落形态进行初步筛选,挑选出目标菌落。
7. 细菌分离:用无菌培养棒或酒精灯消过菌的鉴别针,在富含目标菌株的培养基上从相应菌落上轻轻刮取少量菌液,涂布于无菌培养基上。
8. 纯化:再次进行培养,重复步骤7直至获得明显的单菌落。
根据菌落形态和生理特性进行进一步鉴定,如果需要较纯净的目标菌株,可进行多次次传代。
9. 存储:将纯化的目标菌株进行保存,可在干燥箱中以适当的温度和湿度保存,或使用冰冻保存。
实验结果与讨论:通过上述实验步骤,我们成功地从混合菌液中分离出了目标菌株,并对其进行了纯化。
在筛选过程中,我们根据菌落形态和生理特性来初步判断目标菌株。
而通过细菌分离和纯化,我们能够获得更纯净的目标菌株。
然而,在实验中可能会遇到一些困难和问题。
例如,在筛选过程中,可能会出现非目标菌落过多的情况,导致目标菌株的分离速度较慢。
噬菌体的分离与纯化(整理优化版)

噬菌体的分离与纯化实验用具及材料1.菌种:大肠杆菌2.试剂:氯仿3.培养基:,,琼0.7g离有5mL牛肉膏蛋白胨培养液1)的试管中,混合均匀后置37℃培养过夜。
/取大肠杆菌斜面一支,加4ml 无菌水洗下菌苔,制成菌悬液。
(2)增殖培养:在盛有10mL 3倍牛肉膏蛋白胨液体培养基2)大的试剂瓶中加入噬菌体原液20mL和大肠杆菌悬液0.3mL,混合后置37℃振荡培养12~24h。
(3)制备裂解液:将上述混合培养物分别倒入五支10mL无菌离心管中,经4000r/min离心15min;将上清液小心的转入另一无菌离心管中。
(4)确证试验所得裂解液经37℃培养过夜,经无菌检查没有细菌生长的滤液作进一步证明噬菌体的存在;还可加入几滴氯仿,稍作混合,备用。
(5)噬菌体检测:在牛肉膏蛋白胨琼脂平板上加入0.1mL(1滴)大培养((~55℃((直至骤⑵、⑶直到出现的噬菌斑形态一致为止注意事项1.使用仪器要保证是灭菌的;2.注意琼脂的浓度;3.氯仿是易燃品,应远离火焰一、生物测定法1、双层琼脂平板法1)倒下层琼脂融化下层培养基,倒平板(约10mL/皿)待用。
2)倒上层琼脂融化上层培养基,待融化的上层培养基冷却至50℃左右时,每管中加入大肠杆菌菌液0.2mL,上述噬菌体增殖液0.2~0.5mL,混合后立即34)2、45℃30℃1、11个底部注明噬菌体稀释度。
2、稀释噬菌体按10倍稀释法,吸取0.5mL大肠杆菌噬菌体,注入一支装有4.5mL 1%蛋白胨水的试管中,即稀释到10-1,依次稀释到10-6稀释度。
噬菌体与菌液混合将11支灭菌空试管分别标记10-4、10-5、10-6和对照。
分别从10-4、10-5和10-6噬菌体稀释液中吸取0.1mL于上述编号的无菌试管中,每个稀释度平行做三个管,在另外两支对照管中加0.1mL无菌水,并分别于各管中加入0.2mL大肠杆菌菌悬液,振荡试管使菌液与噬菌体液混合均匀,置37℃水浴中保温5min,让噬菌体粒子充分吸附并侵入菌体细胞。
微生物学实验五、 肠道致病菌分离、鉴定,抗酸染色、厌氧菌形态培养
尿素酶试验
变形杆菌有尿素酶,能分解培养基中 的尿素产生氨,使培养基变碱,以酚红为 指示剂检测为红色,是为尿素酶试验阳性。
硫化氢试验
有些细菌如沙门菌、变形杆菌等能分解 培养基中的含硫氨基酸 (如胱氨酸、甲硫氢 酸) 生成硫化氢,硫化氢遇铅或铁离子生成 黑色的硫化物。
• SS培养基是分离肠道病原菌的选择 性培养基.
实验五、肠道致病菌分离、鉴定, 抗酸染色、厌氧菌形态培养。
肠道致病菌的分离 鉴定
实验目的
致病性肠道杆菌:伤寒杆菌、副伤寒杆菌和 痢疾杆菌等,是革兰氏阴性菌 肠道正常菌群:大肠杆菌,也是革兰氏阴性菌, 其形态上和致病性肠道杆菌相似。
欲从粪便中检出致病性肠道杆菌,必须首先将肠 道杆菌各自分开,然后在依据其生化反应、血清 学实验进行鉴定。
1、破伤风:G+;
芽胞位于菌体顶端, 呈正圆形, 大于菌体, 使细菌 呈鼓槌状;
菌体细长,有周身鞭毛
2、产气荚膜梭菌:G+; 芽胞位于次极端,呈椭圆形,不大于菌体; 在体内有明显的荚膜; 无鞭毛
气性坏疽
3、肉毒梭菌:G+; 芽胞呈椭圆形,粗于菌体,位于次极端,使细胞呈
汤匙状或网球拍状; 有鞭毛, 无荚膜。
• 利用中性复红作指示剂。
大肠杆菌: 分解乳糖 红色菌落 肠道致病菌:不分解乳糖 黄色或无色菌落
• 半固体双糖含铁培养基: 以酚红为指示剂:产酸黄色,不产酸红色
上层是乳 糖: 检测细菌对乳糖的发酵能力 亚铁固体: 检测产H2S的能力
下层是葡萄糖 半固体
:检测对葡萄糖的发酵能力 :检测细菌的动力
方法
抗酸染色
抗酸染色
一、实验目的:
掌握抗酸染色的原理和方法
二、实验原理:
• 分枝杆菌的细胞壁内含有大量的脂质(主要是分枝 菌酸),一般不易着色,要经过加热和延长染色时 间来促使其着色。一旦分枝杆菌中的分枝菌酸与 染料结合后,又很难被酸性脱色剂脱色。故名抗 酸染色。
微生物的分离与纯化实验报告
微生物的分离与纯化实验报告微生物的分离与纯化实验报告引言:微生物是一类非常微小的生物体,包括细菌、真菌、病毒等。
它们广泛存在于自然界中的土壤、水体、空气中,同时也存在于人体内。
微生物对人类的生活和健康具有重要影响,有些微生物可以引起疾病,而另一些微生物则可以用于食品发酵、环境修复等方面。
为了更好地研究微生物的特性和功能,需要对其进行分离与纯化实验。
材料与方法:1. 样品采集:我们选择了土壤样品作为研究对象,从自然环境中采集了多个不同地点的土壤样品。
2. 稀释与接种:将采集到的土壤样品进行适当稀释,然后在琼脂平板上接种。
3. 培养与分离:将接种好的琼脂平板置于恒温箱中,以适当的温度和湿度进行培养。
经过一段时间后,我们观察到在琼脂平板上形成了不同形状和颜色的菌落。
4. 单菌分离:选择单个菌落,用无菌的铂丝将其转移到新的琼脂平板上,进行二次培养。
重复此过程,直到获得纯净的单菌培养物。
5. 形态观察:观察纯菌培养物的形态特征,包括菌落形状、颜色、透明度等,以及菌体形态特征,如细胞形状、大小等。
6. 生理生化特性检测:对纯菌培养物进行一系列生理生化特性检测,包括氧需求性、温度适应性、酸碱耐受性、产酶能力等。
7. 16S rRNA测序:对纯菌培养物进行16S rRNA基因测序,以确定其系统发育地位和亲缘关系。
结果与讨论:经过分离与纯化实验,我们成功地获得了多个不同的微生物菌株。
通过形态观察,我们发现这些菌株在菌落形状、颜色和透明度等方面存在显著差异。
进一步的菌体形态观察发现,它们的细胞形状和大小也各不相同。
在生理生化特性检测中,我们发现不同菌株对氧的需求性、温度适应性和酸碱耐受性存在差异。
有些菌株需要氧气才能生长,而另一些则可以在无氧条件下生长。
对于温度适应性,有些菌株在低温下能够生长,而另一些则喜欢高温环境。
此外,我们还发现一些菌株对酸性环境更耐受,而另一些则对碱性环境更适应。
通过产酶能力的检测,我们发现一些菌株具有蛋白酶、淀粉酶等多种酶的产生能力,这对于它们在环境修复和食品工业中的应用具有重要意义。
绿脓杆菌实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 学习细菌分离纯化的基本方法。
2. 掌握绿脓杆菌的形态特征。
3. 熟悉绿脓杆菌的生化特性。
二、实验原理绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa)是一种革兰氏阴性杆菌,广泛存在于自然界、土壤、水和植物表面。
它是一种条件致病菌,可引起人类和动物的多种感染,如肺炎、尿路感染、烧伤感染等。
本实验通过分离纯化绿脓杆菌,观察其形态特征,进行生化实验,以鉴定绿脓杆菌。
三、实验材料与仪器1. 实验材料(1)样品:土壤、水体、植物表面等。
(2)培养基:营养肉汤、营养琼脂、伊红美蓝琼脂、葡萄糖发酵管等。
(3)试剂:无菌生理盐水、无菌接种环、无菌移液器、无菌棉签等。
2. 实验仪器(1)显微镜(2)恒温培养箱(3)高压蒸汽灭菌器(4)无菌操作台四、实验方法1. 绿脓杆菌的分离(1)将土壤、水体、植物表面等样品采集后,用无菌生理盐水进行稀释。
(2)取适量稀释液接种于营养琼脂平板,进行涂布培养。
(3)将培养皿放入恒温培养箱中,37℃培养24小时。
2. 绿脓杆菌的形态特征观察(1)观察菌落特征:菌落呈绿色,表面光滑、湿润,边缘整齐。
(2)显微镜观察:取少量菌落涂片,进行革兰氏染色,观察细菌形态。
3. 绿脓杆菌的生化实验(1)葡萄糖发酵实验:将适量菌液接种于葡萄糖发酵管,观察是否有气泡产生。
(2)伊红美蓝琼脂实验:将适量菌液接种于伊红美蓝琼脂平板,观察菌落颜色变化。
五、实验结果与分析1. 绿脓杆菌的分离在营养琼脂平板上,观察到绿色菌落生长,经涂布培养后,菌落形态一致,表明已分离得到绿脓杆菌。
2. 绿脓杆菌的形态特征观察(1)菌落特征:菌落呈绿色,表面光滑、湿润,边缘整齐。
(2)革兰氏染色:细菌呈革兰氏阴性,呈长棒形,两端钝圆。
3. 绿脓杆菌的生化实验(1)葡萄糖发酵实验:接种后,发酵管内产生气泡,表明绿脓杆菌能发酵葡萄糖。
(2)伊红美蓝琼脂实验:接种后,菌落呈黑色,周围有绿色晕圈,表明绿脓杆菌具有氧化酶活性。
病原实验报告
病原物的分离培养和纯化病原物的分离和纯化摘要:本实验主要通过用对辣椒炭疽病或柑橘炭疽病病菌的分离和在pda培养基中对炭疽病菌消毒后做无菌培养然后转移到斜面培养的实验过程观察炭疽病菌的生长情况,了解分离与纯化病原物的基本原理与方法,掌握实验室常用的消毒灭菌方法,并掌握培养基的制作和无菌操作技术。
关键词:分离培养、炭疽病、pda培养基、灭菌前言柯赫氏法则(koch’s rule)又称柯赫氏假设(kochs postulates)或柯赫氏证病律,是确定侵染性病害病原物的操作程序。
如发现一种不熟悉的或新的病害时,就应按柯赫氏法则的四个步骤来完成诊断与鉴定。
诊断是从症状等表型特征来判断其病因,确定病害种类。
鉴定则是将病原物的种类和病害种类同已知种类比较异同,确定其科学名称或分类上的地位。
有些病害特征明显,可直接诊断或鉴定,如霜霉病或秆锈病。
但在许多场合难以鉴定病原物的属、种。
如花叶症状易于识别,要判断由何种病原物引起,就必须经详细鉴定比较后才能确定。
柯赫氏法则表述为:“(1)在病植物上常伴随有一种病原微生物存在;(2)该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养;(3)将纯培养接种到相同品种的健株上,出现症状相同的病害;(4)从接种发病的植物上再分离到其纯培养,性【1】状与接种物相同”。
如果进行了上述四步鉴定工作得到确实的证据,就可以确认该微生物即为其病原物。
但有些专性寄生物如病毒、菌原体、霜霉菌、白粉菌和一些锈菌等,目前还不能在人工培养基上培养,可以采用其他实验方法来加以证明。
侵染性病害的诊断与病原物的鉴定都必须按照柯赫法则来验证,每个医学家和植物病理学家都应能熟练地运用。
柯赫氏法则同样也适用来对非侵染性病害的诊断,只是以某种怀疑因子来代替病原物的作用,例如当判断是否缺乏某种元素而引起病害时,可以补施某种元素来缓解或消除其症状,即可确认是某元素的作用。
1. 材料、仪器与用具1.1实验材料柑橘炭疽病或辣椒炭疽病病害部位、pda培养基(自制)1.2仪器用具超净工作台、培养箱、培养皿、试管、接种铲、接种针、70%酒精、0.1升汞、电炉等 2. 内容与方法2.1培养基的配制“培养基按成分及对成分了解程度分为天然培养基、半组合培养基、组合培养基三类,从物理性分为固体培养基、液体培养基两种,培养基不同,配制方法【2】不同。
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致病菌分离纯化的例子
1. 超过滤法:利用超滤膜将水、盐和小分子滤除,将大分子或病毒等颗粒截留,从而达到纯化的目的,该方法主要用于大容量病毒样品的浓缩,且回收率高。
常用的超滤膜是硝酸纤维素滤膜。
注意:超滤膜孔径一定要比病毒颗粒小,且只能去除比病毒小的细胞碎块
2. 吸附法:利用病毒颗粒或杂质的表面离子与吸附剂之间的亲和作用,将病毒或杂质吸附后,用一定的盐溶液将病毒或杂质洗脱下来。
常用的吸附剂有红细胞、磷酸钙、离子交换树脂等。
注意:吸附剂应有较大的表面积和吸附能力,性质稳定并便于洗脱
3. 层析法:利用物质中各组分的理化性质差异,使各组分在固定相和流动相中的分布程度和移动速度不同,从而达到分离的目的。
常用的层析法有凝胶层析法、离子交换层析法和亲和层析法。
(1)凝胶层析法:样品流经具有一定孔径大小的多孔葡聚糖凝胶时,各组分按分子的大小不同而被分离。
常用的凝胶有磷酸钙凝胶、氢氧化锌凝胶和焦磷酸镁凝胶。
(2)离子交换层析法:在一定pH条件下,利用病毒颗粒所带电荷不同实现分离。
适用于所有带电荷的样品的分离纯化。
(3)亲和层析法:利用样品与基质之间的特异性亲和力,实现分离。
适用于纯化生物大分子。
4. 离心法:根据物质的沉降系数或浮力密度的不同,利用离心力将物质分离纯化。
常用于病毒纯化的方法有差速离心法和密度梯度离心法。
(1)差速离心法:利用不同大小和比重的粒子的沉降速度不同,去除宿主细胞碎片等杂质,最后使病毒沉淀。
该方法能迅速处理大量样品。
(2)密度梯度离心:利用超速离心,将病毒颗粒分配到密度梯度介质中相等密度层中,吸出目的颗粒所在介质层,即可到达分离纯化的目的。
常用的介质有氯化铯和蔗糖。
5. 沉淀法:利用悬浮液中的病毒颗粒在重力作用下产生沉降作用,达到分离纯化的目的。
用于病毒纯化的方法有聚乙二醇(PEG)沉淀法、等电点沉淀法和中性盐沉淀法等。
(1)聚乙二醇(PEG)沉淀法:利用聚乙二醇与病毒颗粒形成多聚体,再离心即可沉淀。
(2)等电点沉淀法:利用病毒粒子在等电点时,所携带的正负电荷相等,分子间相互作用减弱,溶解度降低,从而发生沉淀。
中性盐沉淀法:利用高浓度的中性盐使物质的溶解度降低,从而发生沉淀。
6. 电泳法:利用病毒带电粒子在电场作用下,向着与电性相反的电极的移动速度不同,将组分分离成狭窄的区带,最后收集病毒区带部分。