大肠菌群实验报告doc

大肠菌群实验报告

篇一：大肠杆菌检测实验报告

国标法测定大肠杆菌样本的细菌总数

实验目的

实验原理：国标法操作的原理

实验器材：

培养箱，10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，试管架，4个平皿，500ml大烧杯1个，电子天平，纱布，脱脂棉，灭菌锅，PH计或PH试纸，100ml量筒，橡皮手套，超净台

实验药品：

磷酸盐缓冲液，蒸馏水，LB培养基，琼脂，5%NaOH，5%HCl 实验步骤：

一：

10只移液管，1只250ml锥形瓶，5只大试管，4个平皿，500ml大烧杯1个，100ml量筒进行洗涤，然后一起放入高压蒸汽灭菌锅中在121摄氏度条件下灭菌20min。灭完菌后烘干，完成后放入超净台中。

用酒精擦拭超净台，紫外消毒30min

二：

1：用电子天平称取成品LB 3.1241g和琼脂1.8756g放入250ml的洁净锥形瓶中。 2：用量筒量取125ml的蒸馏水

加入该锥形瓶中，制成培养基。

3：用棉花堵住该锥形瓶的瓶口，用牛皮纸包住瓶口，用橡皮筋扎牢，再将培养基放入灭菌锅中在121摄氏度之下灭菌20min。

4：灭完菌后放入超净台中备用。

三：

1：取1只无菌250ml锥形瓶，用量筒向其中加入49ml PBS 2：将1ml样品加入到该锥形瓶中，摇匀制成1:50的细菌溶液。

3：取4只试管，编号1—4

4：用无菌移液管分别向4只试管中加入9ml的PBS

5：用1ml无菌移液管从样品中移取1ml菌液加入到1中.震荡试管使菌液均匀。 6：用1ml无菌移液管从1号试管中移取1ml的细菌溶液加入2号试管中，摇匀

7：用另一只1ml无菌移液管从2号试管中移取１ｍｌ细菌溶液，加入3中，摇匀．．．．．．以此类推直至4只试管中均加入了细菌溶液。

9：取4只平皿，编号1—4

10：分别用4只无菌移液管从这4只试管中移取１ｍｌ的菌液置于4只平皿中，加入４５—５０摄氏度温度下的培养基，约１５ｍｍ厚度。缓慢旋转平皿使菌液与培养基混合均匀；待培养基冷凝后倒置。

11：将培养基在３6摄氏度条件下培养12小时。

12：取出培养皿，选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数。

四：实验结果（记得在操作过程和得到结果时拍照）

1号，2号菌落个数多不可计，舍弃

4号平皿中菌落数目小于10 cfu ，舍弃

3号平皿中菌落分布较均匀，数3号中的菌落数，一共有210个 cfu 。

计算样品中细菌浓度为：1.05 × 105 Cfu/ml

点评

超净台中的实验步骤讲述详细，明确，不错。前面的步骤叙述有点乱，建议按照如下标题重新调整顺序。

实验步骤：

1、仪器清洗

将烧杯，培养皿、试管等仪器用洗衣粉清洗，超声5min.然后用清水清洗，超声5min,最后用三蒸水清洗，放入烘箱中烘干。

2、培养基配制

精确称量。。。。。。。。。。放入锥形瓶中，加入。。。。mL蒸馏水，摇匀

3，灭菌

包扎、灭菌，烘干备用

3、超净台中的操作（如上）

除了实验步骤和结果，还要有讨论和注意事项

例如：实验讨论：

1、评价该方法（操作简易程度，灵敏度如何，适用性）

2、为何选择细菌个数在30至300个之间的平皿数细菌的个数？

注意事项

比如各种仪器的使用注意事项，以及保持洁净，防止染菌等。

篇二：大肠杆菌实验报告

大肠杆菌紫外线诱变及抗药性菌株筛选

0740063 阿噟兰

1.前言

抗生素能破坏细菌细胞壁的结构，使细菌的繁殖和生长受到抑制。但某些细菌对抗生素表现出抗性，原因是其基因发生了改变，产生能抵抗抗生素的性状。在自然情况下，细菌的基因突变率很低，而且突变是不定向的，因此在自然条件下，想要获得有抗性的细菌是很困难的。当给与适当的物理条件时，其突变率会大大增加。如当用α射线、β射线、γ射线、Χ射线、中子和其他粒子、紫外线、微波等物理因素辐射时，能够促进遗传物质突变。DNA 对紫外线（UV）有强烈的吸收作用，尤其是碱基中的嘧啶，它比嘌呤更为敏感。

紫外线引起DNA 结构变化的形式有 DNA 链断裂、碱基破坏、胸腺嘧啶二聚体等。因此，紫外线通常作为诱变剂，用于微生物菌种选育。一般细胞分裂越旺盛，诱变剂量越大，突变率高，诱变最有效的波长253~265 nm。选择合适的诱变剂量对于获得较高突变率十分关键，过高或过低的辐射剂量会导致菌株死亡或诱变不充分而降低诱变效果。

在紫外线诱变下，菌株发生不定向的突变，想要得到需要的特向变异必须对诱变后的菌株做筛选。本实验想要得到的是能够抵抗抗生素的菌株，因此可以用抗生素培养基作为筛选培养基对菌种进行筛选。若菌株没有发生定向突变，则该菌株不能在抗性培养基上正常生长，只有发生了定向突变才可能在筛选培养基上正常生长。

紫外线对于菌株有诱变作用外，对菌株还有较强的致死作用，因为紫外线改变了菌株的基因结构导致菌株无法正常生长繁殖。

因此，通过本实验的操作，在合适的照射剂量的设置下，比较不同不同照射剂量下的致死效果和突变率，并初步分析两者的相关性。在分析死亡曲线和诱变率曲线的基础上，能了解诱变育种的机理和方法，为做进一步的诱变实验做准备。

2.材料和方法

2.1实验材料、仪器和试剂菌种：大肠杆菌

仪器：超净台、离心机、高压灭菌锅、培养箱、磁力搅

拌器、培养皿、涂布器、移液管、移液器

试剂：牛肉膏蛋白胨培养基相关试剂、硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）、生理盐水 2.2实验方法

普通培养基——牛肉膏蛋白胨培养基（400ml）：

牛肉膏5g 蛋白胨10gNacl 5g琼脂20g蒸馏水1000ml Ph7.0

按配方配制好培养基后置于灭菌锅中115℃ 15min，倒平板，4皿*15ml*5组+2皿*15ml=22皿*15ml=330ml 筛选培养基(200ml)：含抗生素50mg/L。（卡那霉素属于氨基糖苷类抗生素，能结合细菌核糖体的30S亚基上的16SrRNA，阻断细菌蛋白质的合成。）

牛肉膏5g 蛋白胨10g Nacl 5g琼脂20g 蒸馏水1000ml Ph7.0 硫酸卡那霉素水溶液（50mg/ml）0.2ml，按配方先不要加硫酸卡那霉素配制然后115℃ 15min灭菌，取出培养基后冷却至60℃时将硫酸卡那霉素0.2ml加入培养基中，充分震荡混匀，倒平板，2皿*15ml*5组+2皿*15ml=12皿*15ml=180ml ~ 108个/mL）

①固体培养：大肠杆菌划线或涂布接种于固体培养基，37℃培养24-48h。

②菌悬液：用适量生理盐水刮洗菌落，倒入一个无菌小三角瓶（或试管）中，充分振荡使菌

体散开，得到菌悬液。