5 维生素C的定量测定(2,6-二氯酚靛酚滴定法)

中国海洋大学实验报告

姓名庞裕智专业年级生命基地班2011 题目维生素C的定量测定（2,6-二氯酚靛酚滴定法）学号040312011025 科目生物化学实验时间周一90节同组者田特

一、实验目的

掌握2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C的原理和方法。

二、实验原理

维生素c又称为抗坏血酸，其还原型能还原染料2，6-二氯酚靛酚钠盐，本身则氧化成脱氢抗坏血酸。

在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚成红色，被还原后变为无色。因此可用2，6-二氯酚靛酚滴定样品中含有的维生素C，当样品中的维生素C被完全氧化后，在滴加过量的2，6-二氯酚靛酚，溶液变为淡红色，即为终点。

如无其他杂质干扰，则样品液所还原的2，6-二氯酚靛酚的量与样品中所含有维生素C 的量成正比。

三、实验仪器

1.新鲜水果

2.吸管

3.容量瓶

4.滴定装置

5.锥形瓶

6.研钵

7.漏斗

四、实验试剂

1、2%草酸溶液：草酸2g，溶于100ml蒸馏水。

2、标准维生素C液：准确称取10.0mg维生素C，溶于1%草酸溶液，并稀释至100ml，贮于棕色瓶中，冷藏，最好临用时配制。此溶液浓度0.1mg/ml.

3、0.1%2，6-二氯酚靛酚溶液：称取500mg2，6-二氯酚靛酚溶于300ml含有104mg碳酸氢钠的热水中，冷却，加蒸馏水并稀释至500ml，滤去不溶物，贮于棕色瓶中，冷藏。

五、实验步骤

1.样品中抗坏血酸的提取：

将水果用水洗干净，用滤纸吸取表面水分。称取3.0g，加2%草酸试剂5ml置研钵中研成浆状(研的越细越好)。将上述浆状物倒入50ml容量瓶中，用2%草酸溶液稀释并定容，混匀，静止10分钟，过滤（最初数毫升滤液弃去），滤液备用。

2.滴定

样品液的滴定：准确吸取滤液两份，每份10ml，分别放入两个100ml锥形瓶中，用2，6-二氯酚靛酚滴定至淡红色。滴定终点要保持15秒钟。

注：1ml2，6-二氯酚靛酚染料相当于1毫克抗坏血酸。

六、实验结果

按下式计算100mg样品中含抗坏血酸的毫克数：

m=V*T/W*100

V=滴定时所用染料ml数；T=每毫升染料氧化抗坏血酸质量；W=10ml样液相当于含样品的质量数。

T=1mg/ml；W=2.846÷50×10×1000=569.2mg；

第一次第二次平均值

滴定时所用染料V（ml） 1.395 1.391 1.393

∴100mg样品中含抗坏血酸m=1.393×1/569.2×100=0.245mg

七、实验分析

此次实验难点在于微量滴定管的使用，时常出现漏斗下部有空气，染料流不下去的状况，此时应打开漏斗下部的阀，关闭滴定刻度下的阀，让空气流出。此外，为避免这种情况发生，应尽量放慢添加染料的速度。

1、注意事项

（1）2，6-二氯酚靛酚钠盐溶液要节约使用。多余的，洁净的要回收。

（2）此滴定管为微量滴定管，最大刻度为2ml。

（3）滴定过程宜迅速，最好不要超过2min。

2、思考题

（1）2,6-二氯酚靛酚滴定法测定Vc含量的优缺点?

优点：简便易行，快速直接。

缺点：①实验所用的染液2，6-二氯酚靛酚很不稳定，因此实验前还要多做一个标定的步骤；

②在过滤时，能通过滤纸的液体较少而且过滤速度很慢，使得大量的原料在最后只能得到少量的待测液，且所需时间较长。

③此种方法对于无色或淡黄色、绿色样品液的滴定终点易确定，而对于山植、大枣、草葺、酸枣等紫色、粉红或褐色等色泽的朵蔬样品液的滴定终点就难以观察确定。为此，往往经稀释，添加活性炭、白陶土来进行脱色处理，添加维生素C的方法来解决。既使如此，仍难得到满意的结果，测定数据也很难准确；

（2）此实验测定误差的可能来源?

①研磨不充分使抗坏血酸的测量误差增大；

②过滤时滤纸破损，或是多数液体无法通过滤纸；

③滴定时眼睛没有平视刻度线，或放出染液速度过快以致过了滴定终点；

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