绿叶中色素的提取和分离实验注意事项
绿叶中色素的提取和分离实验ppt课件
Ⅰ、提取叶绿素
•
• Ⅱ、探究pH对叶绿素稳定性的影响 取一些叶绿素粗产品，配成一定浓度的溶液，于室温（约25℃）下进行实验，方法和 结果如下表：
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• 小李想了解叶绿素粗产品中是否含有其他色素，请你提供检测方法并说出主 要步骤
参考答案： 纸层析法 。 主要步骤：1.制备滤纸条； 2.画色素液 细线；
操作目的 使滤液中叶绿素的含量高 有助于研磨充分和保护叶绿素
防止溶剂挥发，并充分溶解色素 使分离的色素分层，防止色素重叠 使分离的色素带清晰，便于观察 防止滤液溶解到层析液中，无法分离
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实验拓展、能力提升 1、用毛细吸管划滤液细线时很难保证细且直，有什么解决办法？ 2、课下搜集资料，探究其他色素提取和分离的方法 。
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设计实验
分离色素的原理
各种色素在层析液中溶解度不同，溶解度高的随 层析液在滤纸上扩散得快，反之则慢，从而使各种 色素相互分离。
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实验步骤
两角
1cm
毛细吸管 细齐 直
一两
适量 滤液细线
滤液细线
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分组实验，探究要点
1、制备滤纸条时为什么要剪去两角，否则会出现什么现象？ 2、滤液细线为什么不能浸到层析液中？ 3、画滤液细线为什么要细且直，并待干后重复几次？ 4、为什么装有滤液和层析液的试管一定要用棉塞塞严？ 5、实验后滤纸条上出现了几条色素带?分别是什么颜色? 6、从上往下色素带顺序如何？各色素带宽窄如何？这些说明了什么？
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典例分析 （2012上海）图6表示叶绿体色素提取分离实验中纸层析的结果，据图判断用作
实验材料的叶片颜色为 • A．红色 B．黄色 • C．绿色 DB．紫色
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• 【实践应用】
叶绿素的提取和分离
考点1 绿叶中色素的提取和分离
题组一：考察实验选材、试剂的作用和实验操作：
(2013·江苏单科，5)关于叶绿体中色素的提取和分离实验的操作，正确的是 ( )。
A．使用定性滤纸过滤研磨液 B．将干燥处理过的定性滤纸条用于层析 C．在划出一条滤液细线后紧接着重复划线2～3次 D．研磨叶片时，用体积分数为70%的乙醇溶解色素
(2017全国Ⅲ)植物光合作用的作用光谱是通过测 量光合作用对不同波长光的反应（如O2的释放） 来绘制的。下列叙述错误的是( )
类胡萝卜素在红光区吸收的光能可用于光反应中 ATP的合成
叶绿素的吸收光谱可通过测量其对不同波长光的
A
吸收Байду номын сангаас来绘制
光合作用的作用光谱也可用CO2的吸收速率随光 波长的变化来表示
(2) 研磨时加无水乙醇
溶解色素
提取色素
(3) 加少量SiO2 (4) 加少量CaCO3
研磨充分
保护色素，防止叶绿素被破 坏
(5) 迅速、充分研磨
防止乙醇挥发，充分溶解色 素
(6)
盛放滤液的试管管口加棉 塞
防止乙醇挥发和色素氧化
(1) 滤纸预先干燥处理
使层析液在滤纸上快速扩散
分离色素
(2) 滤液细线要直、细、匀
解析 本题可排除错误选项。色素易被滤纸吸附，故用纱布过滤，A错 误；每次重复画色素滤液细线时，需等干燥后再进行，C错误；由于叶 绿体中的色素不溶于水，因此研磨叶片时需用无水乙醇或丙酮，D错误。 答案 B
易错警示！ 1、实验中的注意事项及操作目的
过程
注意事项
操作目的
(1) 选新鲜绿色的叶片 使滤液中色素含量高
使分离出的色素带平整不重 叠
绿叶中色素的提取与分离
绿叶中色素的提取与分离一、绿叶中色素的种类及作用绿叶中含有多种色素，其中最主要的是叶绿素。
除此之外，还有类胡萝卜素、花青素等。
1. 叶绿素：是植物体内最常见的绿色色素，其结构与血红蛋白相似。
在光合作用中，叶绿素能够吸收光能并将其转化为化学能。
2. 类胡萝卜素：是植物中的一类黄色或橙色的脂溶性色素，具有很强的抗氧化作用。
3. 花青素：是一类水溶性色素，在植物中广泛存在，具有良好的抗氧化和抗癌作用。
二、提取和分离方法1. 提取方法（1）酒精提取法：将新鲜叶片切碎后加入95%乙醇中浸泡数小时，过滤后得到混合液。
将混合液蒸馏干燥即可得到叶绿素。
（2）丙酮提取法：将新鲜叶片切碎后加入丙酮中浸泡数小时，过滤后得到混合液。
将混合液蒸馏干燥即可得到叶绿素。
（3）液液萃取法：将新鲜叶片切碎后加入有机溶剂中，如苯、甲醇等，振荡数小时后过滤，得到混合液。
将混合液进行蒸馏干燥即可得到色素。
2. 分离方法（1）色谱法：通过色谱柱分离不同种类的色素，如硅胶柱层析、薄层层析等。
（2）电泳法：利用电场作用使不同种类的色素在凝胶中移动，从而分离出不同种类的色素。
（3）超滤法：利用超滤膜对混合液进行筛选，将不同分子量的物质分离出来。
三、应用1. 食品工业：叶绿素可以作为食品着色剂使用，也可以作为一种天然的防腐剂。
2. 医药工业：叶绿素和类胡萝卜素具有很好的抗氧化作用，可以应用于医药制品中。
3. 美容保健：花青素可以抑制黑色素形成，具有美白作用，可以应用于美容保健产品中。
四、注意事项在提取和分离过程中，需要注意以下几点：1. 操作时要注意安全，避免有机溶剂的毒性和易燃性对人体和环境的危害。
2. 提取和分离的条件要适宜，如温度、时间、pH值等。
3. 色素的质量要求高，需要对提取后的色素进行检测和分析。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定摘自王尊本主编,综合化学实验(第二版),第226-244页,北京:科学出版社,2007年9月。
实验三十四植物叶绿体色素的提取、分离、表征及含量测定[1-27]一、叶绿体色素的提取(一) 实验目的1)掌握有机溶剂提取叶绿体色素等天然化合物的原理和实验方法。
2)了解皂化-萃取提取胡萝卜素的原理。
3)了解1,4-二氧六环沉淀法提取叶绿素的原理。
(二) 实验原理植物光合作用是自然界最重要的现象,它是人类所利用能量的主要来源。
在把光能转化为化学能的光合作用过程中,叶绿体色素起着重要的作用。
高等植物体内的叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类,主要包括叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素四种。
它们所呈现的颜色和在叶绿体中含量大约比例见表34.1。
表34.1 高等植物体内叶绿体色素的种类、颜色及含量项目叶绿素类胡萝卜素叶绿素a 叶绿素b 胡萝卜素叶黄素颜色蓝绿色黄绿色橙黄色黄色在叶绿体内各色素含量比例 3 1 2 13 1 叶绿素chlorophylls是叶绿酸的酯,它在植物进行光合作用中吸收可见光,并将光能转变为化学能。
叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。
在绿色植物中叶绿素主要以叶绿素a(C55H72O5N4Mg)和叶绿素b(C55H70O6N4Mg)两种结构相似的形式存在,其差别仅是叶绿素a中一个甲基被叶绿素b中的甲酰基所取代。
叶绿素的基本结构见图34.1。
在叶绿素分子结构中含有四个吡咯环,它们由四个甲烯基联结成卟啉环,在卟啉环中央有一个镁原子,它以两个共价键和两个配位键与4个吡咯环的氮原子结合成内配盐,形成镁卟啉。
在叶绿素分子中还有两个羧基,其中一个与甲醇酯化成COOCH3,另一个与叶绿醇酯化成COOC20H39长链。
类胡萝卜素carotenoids是一类不饱和的四萜类碳氢化合物(例如胡萝卜素,carotenes,或它们的氧化衍生物(例如叶黄素类,xanthophylls。
绿叶中色素的提取和分离实验学案
探究实验绿叶中色素的提取和分离
一、提出问题：绿叶为什么会变黄？
二、作出假设：
三、设计实验
1、实验目的
⑴、探究绿叶中色素的种类和和颜色。
⑵、掌握绿叶中色素的提取和分离方法。
2、实验原理
提取：绿叶中的色素能够溶解在中，所以，可以用提取绿叶中的色素。
叶
绿体中叶绿素容易被酸性的细胞液破坏，所以研磨时需要加入________ 保护色素。
分离：叶绿体中的色素在层析液中的溶解度：溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得。
这样几分钟后，绿叶中的色素就会随着层析液在滤纸上扩散而分离开来。
3、材料和用具
新鲜的绿叶（如菠菜的绿叶），无水乙醇，层析液，二氧化硅和碳酸钙，干燥的定性滤纸，试管，棉塞，研钵，玻璃漏斗，尼龙布，毛细吸管，剪刀，药勺，量筒（10ml），天平。
四、实验结果及分析
3、总结实验成功或失败的原因
六、实验拓展
⑴用毛细吸管划滤液细线时也不能保证细且直，有什么解决办法？
⑵课下请查阅资料，探究其他色素提取和分离的方法。
第三讲 第1课时 绿叶中色素的提取和分离(实验课)
类胡萝 卜素 (含量约 占1/4)
吸收 蓝紫光 ______
4.叶绿体色素的分布和功能 (1)分布：叶绿体 类囊体的薄膜 上。
转化 光能(只 (2)功能：吸收、传递 光能(四种色素)、
有少量特殊状态的叶绿素 a)。
1．注意事项及原因分析
过程
(1) (2)
注意事项
选新鲜绿色的叶片 研磨时加无水乙醇
考向三
考查影响叶绿素合成和含量的因素
5． (2015· 广东高考)为推动生态文明建设， 国务院发布了 《大 气污染防治行动计划》 。某科研小组开展酸雨与生态系统 关系的研究。下表是不同 pH 的酸雨对三种植物叶绿素 含量(mg/g)影响的结果。
pH 桃树 腊梅 木樨
5.8(对照) 2.20(100) 3.65(100) 1.07(100)
4． 将长势相同的三盆麦苗分别置于密闭的透明钟罩内， 如下 图所示。若干天后从各装置中的麦苗取得同样质量的叶 片，脱绿后研磨得等量滤液，分别置于甲、乙、丙三支试 管中， 同时在三支试管中加入等量的斐林试剂并进行水浴 加热，一段时间后三支试管中的现象分别是 ( )
A．甲蓝色、乙蓝色、丙蓝色 B．甲浅砖红色、乙浅砖红色、丙深砖红色 C．甲砖红色、乙砖红色、丙砖红色 D．甲蓝色、乙较浅砖红色、丙深砖红色
2 离，扩散最慢的色素带呈________色。酸雨中的 SO4 破坏叶
－
绿素，导致光反应产生的________(产物)减少。由于光反应速 率降低，将直接影响暗反应过程中的 __________，最后导致 (CH2O)生成减少。 (2)由表可知： ①随着酸雨 pH 的降低， 叶绿素含量受影响的程 度______________；②________________________________； ③____________________________。
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇
从菠菜中提取叶绿素实验报告三篇从菠菜中提取叶绿素实验报告一【实验目的】1、通过绿色植物色素的提取和分离，了解天然物质的分离提纯与方法。
2、通过薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。
【实验原理】叶绿色存在两种结构相似的形式即叶绿素a{C55H77O5N4Mg}和叶绿素b{ C55H70O6N4Mg }；胡萝卜素是具有长链结构的共轭多烯，有三种异构体；叶黄素C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物。
当提取时，从上到下颜色依次为：黄绿色，蓝绿色，黄色和橙色。
【实验仪器】研钵，色谱柱，丙酮，乙醇，乙醚，中性氧化铝，菠菜叶，烧杯，漏斗，玻璃棒，滤纸，剪刀，脱脂棉，纱布。
【实验步骤】1、称取30g洗净后用滤纸喜感的新鲜菠菜叶，用剪刀剪碎，放入研钵中研磨，研磨时放入少量碳酸钙，防止研磨过猛破坏叶绿素结构，研磨至烂。
2、将研磨碎的菠菜叶转入小烧杯中，加入30mL配好的乙醇乙醚溶液，盖上表面皿，防止有机溶剂蒸发。
按小组成员分别浸泡10,15,20,25,30,35,40,45,50,55分钟。
3、浸泡期间，填充色谱柱，在最下面垫入脱脂棉，再盖上一个小滤纸片，装入氧化铝至4/5处，再盖上一层滤纸片。
4、将烧杯中的菠菜叶连带着有机溶剂用纱布挤入漏斗中，转入分液漏斗，加入10mL水洗涤，除去水层（下层），再用10mL 水洗涤一次。
5、将分页漏斗中的溶液慢慢倒入色谱柱中，加几滴丙酮既可以看到颜色变化。
6、洗净仪器，收拾实验室，打扫卫生。
【实验记录】虽然分层现象不是非常明显，但是还是可以看得见分层现象。
【结果与讨论】1、做这个实验的时候，我觉得不应该用纱布挤干，因为个人感觉很多色素都被纱布吸走了，导致后来的实验现象没有很明显，经过对比，没用纱布直接过滤的同学做出的现象比用纱布做的现象要明显的多。
2、有机溶剂往往比较容易挥发，所以加入后要盖上表面皿。
3、此实验浸泡15分钟以后现象就可以很明显，因此以后在课堂上给学生演示的时候浸泡的时间不是越长越好的，15分钟足矣。
叶绿体色素的提取与分离实验
3、用纸层析法将色素进行分离，在滤纸条上出现最宽旳一 条色素带旳颜色是（ ） A、橙黄色 B、黄色 C、蓝绿色 D、黄绿色
类胡萝卜素 50
叶绿素b 叶绿素a
0
波长
二、捕获光能旳色素和构造
（一）捕获光能旳色素
色素
叶绿素a （蓝绿色）
叶绿素 叶绿素b
（黄绿色） 含量约占3/4
类胡萝卜素
叶黄素 （黄色） 胡萝卜素 （橙黄色）
含量约占1/4
吸收可见 旳太阳光
类胡萝卜素主 要吸收蓝紫光
叶绿素主要吸收 红光和蓝紫光
课堂检测
1、在叶绿体色素旳提取和分离试验中在滤纸条上扩散速度 最快旳色素是（ ） A、叶绿素a B、叶绿素b C、胡萝卜素 D、叶黄素
分别在A、B、C三个研钵中加入2克菠菜，经研磨、提取得到三种颜色旳溶液： 深绿色、黄绿色（或褐色）、几乎无色。注：“+”表达加，“—”表达不加。
处理
二氧化硅（少许） 碳酸钙（少许）
95%乙醇（10ml） 蒸馏水（10ml）
ABC +++ —+ + + —+ —+ —
（1）A处理得到旳溶液颜色是 黄绿色 ，原因是__叶__绿__素_被__破__坏__________
（6）色素分离旳成果：相邻色素带间距最宽旳是 他们旳颜色是 橙黄色 和 黄色 ，主要吸收 蓝紫
胡萝卜素 和 叶黄素 ， 光。
（ D）
A、安装红色透光薄膜 B、安装蓝紫色透光薄膜
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取和分离实验
叶绿素的提取：称取5 g的绿叶，剪碎，放入研钵中→加入少量二氧化硅、碳酸钙和10 mL无水乙醇→研磨→过滤→收集到试管内并塞严试管口。
准备过滤纸条：将过滤纸条剪成略小于试管长度和直径的过滤纸条，将滤纸条的一端剪去两角，在距离剪角一端1cm处用铅笔画一条细的横线。
画滤细线：用毛细管吸取少量滤液，并沿铅笔线均匀划出一条细线，待滤液干后再画1~2次。
叶绿素分离：在试管中倒入适量层析液。
得到滤纸上的四种颜色、不同宽度的色素带。
叶绿素提取注意事项：
准备滤纸时，要将滤纸的一端剪去两角，这样可使色素扩散到滤纸上，以便于观察实验结果。
过滤时不用滤纸过滤而用单层尼龙布过滤是因为滤纸对色素具有吸附作用，若用其过滤，会导致收集到的滤液色素含量少，使实验效果不明显或失败。
实验：绿叶中色素的提取和分离
－ ＋ ＋ ＋
＋ － ＋ ＋
＋ － － ＋
＋ － ＋ －
A. ①②③④
B②④①③
C．④②③①
D. ③②①④
2.右图表示某同学做“绿叶中色素的提 取和分离”实验的改进装置。下列与之 有关的叙述中,错误的是( A.应向培养皿中倒入层析液 B.应将滤液滴在b处,而不能滴在a处 )
C.实验结果应是得到四个不同颜色的同心圆
第4节 能量之源——光与光合作用
一.捕获光能的色素
分离
色素
实验：绿叶中色素的提取和分离
1.实验原理：
提取
分离
2.实验步骤
研磨
过滤
制备滤纸条
滤液细线
分离滤液中的色舞
画滤液细线
3..实验结果及分析
含量最少
类 胡 萝 卜 素 叶 绿 素
含量最多
总结：
1.色素提取的关键：
（1）选材要新鲜 （2）研磨要迅速充分，要加入少量碳酸钙和二氧化硅，无水乙醇不能加多 (3)过滤要用尼龙布
2.色素分离的关键：
(1)滤液细线要而直，干燥后重复画2次 (2)滤液细线不能触及到层析液
1.在做“绿叶中色素的提取和分离”实验时，甲、乙、丙、丁 四位同学对相关试剂的使用情况如下表所示(“+”表示使用， “一”表示未使用)，其余操作均正确，他们所得的实验结果依 次应为( )
甲
乙
丙
丁
丙 酮 水 CaCO3 SiO2
D.实验得到的若干个同心圆中,最大的一个圆呈橙黄色
笔记
种类 胡萝卜素 颜色 橙黄色 含量 最少 从属 类胡萝卜素 （1/4）
叶黄素
叶绿素a 叶绿素b
黄色
蓝绿色 黄绿色
较少
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绿叶中色素的提取和分离实验注意事项
绿叶中色素的提取和分离实验是一项常见的生物化学实验，在教学及研究中有着广泛的应用。
本文介绍该实验的注意事项，以供参考。
一、实验前准备
1. 绿叶：选用新鲜、健康、没有显著病害和虫害的绿色叶片，并在实验前尽可能避免阳光直射照射叶片，以减少色素分解的影响。
2. 溶剂：常用的溶剂有乙醇、丙酮、甲醇等，需使用无水或去离子纯度的溶剂，并在实验前进行干燥处理。
3. 仪器：实验需要使用的仪器有搅拌器、离心机、热水浴、过滤器、紫外可见分光光度计等。
二、实验步骤
1. 提取叶绿素：将叶片洗净并磨碎，加入适量的溶剂，搅拌，使叶绿素充分溶解。
若叶片中还包含不溶性物质，则需要进行过滤和离心处理。
2. 分离不同色素：将提取的荧光素溶液通过柱层析或薄层色谱等分离方法，将不同色素分离出来，并分别进行检测与分析。
3. 检测与分析：用分光光度计或其他仪器进行色素含量的定量分析，并记录实验结果。
三、注意事项
1. 溶剂的选择：选用合适的溶剂是色素提取和分离的重要因素，应根据不同的色素类型选择不同的溶剂，并根据实验需要进行调配，以达到最佳提取和分离效果。
2. 操作温度：色素提取和分离过程的操作温度对结果的影响很大，应根据实验需求和样本的性质选择适当的温度，并严格控制操作温度和时间，以确保实验结果的准确性和稳定性。
3. 仪器的操作：使用仪器时需要仔细阅读操作说明书，并按照操作方法严格执行。
对于分光光度计等敏感仪器，应在实验前进行校准和质控，以确保精度和可靠性。
4. 质量控制：实验中需要做好质量控制，如使用空白对照，保证数据的可靠性和精度。
同时，实验过程中需遵循严格的实验室规定，避免交叉污染等情况的发生。
5. 安全操作：实验涉及到有机溶剂和化学药品，需采取安全措施，如佩戴防护眼镜和手套等。
同时，需要妥善处理危害废弃物和剩余药品，避免对环境造成污染和危害。