淮南麻鸭IGF-I基因的克隆、序列分析及原核表达

的 ＩＰＴＧ诱 导 表 达ＩＧＦ—Ｉ融 合 蛋 白 结 果 表 明 ：获得 了５３４ ｂｐ的 淮 南麻 鸭ＩＧＦ—Ｉ部 分 基 因 ，经过 生 物 信 息 进 行 序
列 分 析 ，包括 １个４６２ ｂｐ的 开 放 阅 读 框 ，可 编 码 １５３个 氨 基 酸 ，与 鸭 、鸡 、人 、绵 羊 、牛 、野 猪 和 大 鼠 的 同 源 性 分 别 达
ＩＧＦ一，对 淮 南麻 鸭 生 长发 育 的 调控 和淮 南 麻 鸭 的 良 种 开发 与利 用提供 理论 依据 和基础 。 １ 材 料 与 方 法 １．１ 实验材 料 １．１．１ 实 验动 物 、菌株 及抗 体 感受 态 菌 种ＴＧ１和 ＤＨ５ｏＬ、表达 载 体 质 粒ｐＰＲＯＥＸ删ＨＴｈ均 购 自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ１１ 公 司 ，兔抗 人，Ｇ Ｉ抗 体 和羊抗 兔ＩｇＧ—ＨＲＰ购 自武 汉博 士德生 物技 术公 司 。 １．１．２ 试 验试 剂 Ｔａｑ酶 、ｄＮＴＰ、限制 性 内切 酶Ｋｐｎ Ｉ和 Ｉ、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ２０００、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ ＤＬ１５ ０００、 ｐＭＤ１８一Ｔ、ＲＮＡ酶抑 制 剂 载体 均 购 自大 连 宝 生物 工 程有 限公 司 。Ｔ４ ＤＮＡ连接 酶购 白ＮＥＷ ＥＮＧＬＡＮＤ公 司 。 鼠 源 反 转 录 酶 （Ｍ—ＭＬＶ）为 ＳＩＧＭＡ公 司 产 品 。 Ｔｒｉｚｏｌ、Ｎｉ—ＮＴＡ纯 化 系统 试 剂 盒 购 自Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公 司 。 ＮＣ膜 、质粒 抽 提试剂 盒 和胶 回收试 剂 盒购 自上海 华 舜 生物 工程 有 限公 司。其他试 剂 均为分 析纯 。 １．２ 淮南麻 鸭 Ｉ基 因ｃＤＮＡ的克 隆与分 析 １．２．１ 引物设计 根据ＧｅｎＢａｎｋ数据库 中鹅 （ＥＦ３８２６６８ 和ＤＱ４９０２２２）、鸡 （Ｍ３２７９）和鸭 （ＡＢ０６１７２１、ＥＵ０３１０４４ 和 ＤＱ１６８５９３）的ＩＧＦ—Ｉ基 因序 列 ，设 计 １对 引物 Ｐ１／ Ｐ２，用于 扩增淮 南麻 鸭，Ｇ Ｉ的基 因序 列 。Ｐ１（上 游 弓Ｉ物 ）：５ 一ＴＴＣＡ ＩｒｒＣＣＣＡＣＡＣＴＴＴＣＣＡＣ一３ ；Ｐ２（下 游 弓Ｉ物 ）：５ 一ＧＡＴＧＧｃＡＣＡ Ｉ ＣＡＴＴＣ ＩＴＣＡ一３ 。 １．２．２ 组 织 总 ＲＮＡ的提 取 与 反 转 录 利 用 Ｔｒｉｚｏｌ试 剂 盒提 取淮 南麻 鸭肝 脏 中 ￣，ＲＮＡ，按照说 明进行 操 作
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淮南麻鸭 Ｇ Ｉ基 因的克隆 、序列分析及 原 核表达
曲 哲 会 ，唐 雪 峰 ，赵 聘 ，赵 云 焕 ，李 建 柱 ，郭 晓 秋 （信 阳 农 林 学 院 动 物 科 学 系 ，河 南 信 阳 ４６４０００）
摘 要 ：本 研 究 旨在 分 析 淮 南麻 鸭 ，ＧＦ— Ｉ基 因 的 结 构 特 点 以及 获 得 编 码 的 蛋 白 。根 据 ＧｅｎＢａｎｋ数 据 库 中鹅 、鸡
关 键 词 ： Ｉ：克 隆 ：原 核 表 达 ：淮 南 麻 鸭
中 图分 类 号 ：￥８３５．２
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：０２５８—７０３３（２０１４）０１—０００６—０４
胰 岛素样 生 长 因子 （ＩＧＦｓ）最 早被 称 为硫 化 因 子 ，１９７８年被 正式命 名 为胰 岛素样 生长 因子 ｌｌｌ。胰 岛 素样 生 长 因子 一Ｉ（ＩＧＦ—Ｉ）是 ＩＧＦｓ的重要 成 员 ，是 一 种 多功 能 细胞调 节 因子 ，在动 物 出生后 的生 长发 育 调 控 中发 挥 重 要 作 用 ｌ ２ｌ，其 生 物 学 功 能 主 要 是 促 进 细 胞 的分 化 生长 ［３１、加 快糖 代谢 和蛋 白质 合 成 、促进 软 骨 和成骨 的生 长等 。还 可通 过 内分泌 、自分 泌 、旁 分 泌等 多种 方式 发挥 作用 ，调 节成骨 细胞 功能 、参 与 骨 重建 Ｉ 。
本 研究 对淮 南麻 鸭 Ｉ基 因进 行 克隆 ，分 析 其 开放 阅读 框 和氨 基 酸序 列 与 其他 物 种 的 同源 性 ， 并 对 ＩＧＦ—Ｉ蛋 白进 行 原 核 表 达 、纯 化 ，以期 为 研 究
收 稿 日期 ：２０１３—０４—２２：修 回 日期 ：２０１３—０５—０２ 资 助 项 目 ：河 南 省 科 技 攻 关 项 目 （１１２１０２１１００６１）：信 阳 农 专 青 年 教 师 科 研 基 金 项 目（２００９ＺＲＫＸ０２０） 作 者 简 介 ：曲 哲 会 （１９８０一）．男 ，黑 龙 江 鸡 西 人 ，硕 士 ，讲 师 ，主 要 从 事 动 物 传 染 病 学 的 教 学 与 科 研 Ｔ 作 ．Ｅｍａｉｌ：ｑｕｚｈｅｈｕｉ１９８０＠ｓｉｎａ．ｏｎ ￥通 讯 作 者 ：赵 聘 ，教 授 ，Ｅｍａｉｌ：ｚｈａｏｐｉｎ１６６＠１６３．ｏｏｍ
淮 南麻 鸭 （又名 信 阳麻鸭 ）是 我 国优 良的 地方 家 禽 品种 ，属 麻 鸭类 ，中等 体 型 ，蛋 肉兼 用 。该 鸭具 有 喜 水 耐旱 ，抗逆 性 强 ，耐 粗饲 、生长 快 ，产 蛋 较 多 ，肉 质 、肉味 好 等 特 点 ；其 具 有 蛋 品质 优 良 、蛋 壳 厚 、耐 贮 运 的优点 ，是 国家宝 贵 的品种 基 因库 ，已被列 入 《河南 省地方 优 良畜 禽 品种 志 》，是 河南 省重 点保 护 的优 良地方 品种 之一 。但 多年来 由于缺 乏系 统 的选 育 ，导致 品种退 化 、生产性 能 降低情 况 出现 。
到 ９９％ 、９９％ 、８４％ 、８１％ 、８３％ 、８４％和 ７８％ ；经 ＳＤＳ蛋 白 质 电 泳 结 果 表 明 ，成 功 获 得 分 子 量 约２７ ｋｕ的 １ＧＦ—Ｉ融 合
蛋 白 ，纯 化 后 经Ｗｅｓｔｅｒｎ—ｂｌｏｔｔｉｎｇ鉴 定 ，可 与 兔 抗 －＆ＩＧＦ—Ｉ抗 体 Ｉ基 因序 列 ．设 计 ｌ对 引 物 Ｐ１／Ｐ２。利 用 ＲＴ—ＰＣＲ方 法 克 隆 了淮 南 麻 鸭 的 包含 有 编 码 区 的 部 分 Ｉ
基 因。将ＩＧＦ－Ｉ编 码 区基 因连 接到 原 核表 达 载 体 ｐＰＲＯＥＸＴ ＭＨＴｂ，然后 转化 到 感 受 态菌ＤＨ５ 中，经终 浓 度 为 １．０ｍｍｏｌ／Ｌ