内毒素的检测及意义[优质ppt]
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革兰阴性菌脂多糖 内毒素检测
内毒素检测的临床意义
• 体液内毒素水平是严重细菌性炎症（尤其 是革兰阴性菌）的一个重要的特异性指标， 也是脓毒血症和炎症活动有关的多脏器衰 竭的可靠指标。 • 内毒素水平不仅是用于鉴别诊断的急性指 标，而且是监控炎症活动的参数。
内毒素检测的临床意义
• • • • 大多数革兰阴性菌感染疾病的早期诊断 监控具有感染危险的患者 对给药后的治疗效果进行评价 病程监控和预后
革兰阴性菌脂多糖（内毒素）
检验科 XXX
细菌内毒素在机体内反应
• • • • • 发热反应 白细胞反应 内毒素血症（ETM）与内毒素休克（ETS） shwartzman现象 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内毒素在机体内临床表现
• 微量的细菌内毒素进入机体后即可引起机体内发 热、血管扩张、血管通透性增强、中性粒细胞增 多、补体激活、机体血压下降等一系列病理、生 理反应，严重时可导致弥漫性血管内凝血（DIC） 及多器官功能衰竭直至休克、死亡。
抗生素与细菌内毒素的释放
文献表明，β-内酰胺类抗生素释放内毒素的能力大 于氨基糖甙类，氨基糖甙类大于喹诺酮类。在β内酰胺类抗生素中，头孢类高于碳青霉烯类，内 毒素释放量依次为头孢曲松、头孢呋辛、头孢他 啶和环丙沙星，多利培南、亚胺培南、西司他丁 和头孢吡肟较少、阿米卡星最少。
研究证明，头孢他啶使细菌量降低，但血中内毒素 水平较高；而异帕米星、妥布拉霉素使细菌和内 毒素水平均降低；多粘菌素B等多肽类抗菌药物 能有效中和抗生素。
内毒素检测的临床应用
• • • • • • • • • 溃疡性结肠炎 细菌性感染的辅助诊断和预后判断 原因不明的发热 外源性输注的内毒素血症的诊断 革兰阴性败血症的诊断 呼吸道感染 肝脏感染及肝硬化 胆道疾病 急性胰腺炎
中国药典版《细菌内毒素检查法》(2020年整理).pptx
表 3 凝胶半定量试验溶液的制备
编号
内毒素浓度/配制内毒素的 溶液
稀释用液
稀释倍数
所含内毒素的浓 度
A
无/供试品溶液
检查用水
1
—
平行管数 2
2
—
2
4
—
2
8
B
2λ水
检查用水
1
2
4
—
2
2λ
2
2λ
2
1λ
2
0.5λ
2
8
0.25λ
2
D
无/检查用水
—
—
—
2
注：A 为不超过 MVD 并且通过干扰试验的供试品溶液。从通过干扰试验的稀释倍数
λc=1g-1(∑X/4)
1
学海无 涯
式中 X 为反应终点浓度的对数值（1g）。反应终点浓度是指系列递减 的内毒素浓度中最后一个呈阳性结果的浓度。 当λc 在 0.5λ-2λ(包括 0.5λ和 2λ)时，方可用于细菌内毒素检查， 并以标示灵敏度λ为该批鲎试剂的灵敏度。 干扰试验 按表 1 制备溶液 A、B、C 和 D，使用的供试品溶液应为未检 验 出内毒素且不超过最大有效稀释倍数（ MVD）的溶液，按鲎试剂灵敏 度复 核试验项下操作。 只有当溶液 A 和阴性对照溶液 D 的所有平行管都为阴性，并且系列溶液 C 的结果在鲎试剂灵敏度复核范围内时，试验方为有效。按下式计算系列溶 液 C 和 B 的反应终点浓度的几何平均值（Es 和 Et）。
扰 的供试品溶液来制备溶液 A 和 B。按鲎试剂灵敏度复核试验项下操作
。
编号 A
内毒素浓度/配制内毒素的溶液 表 2 凝胶限量试验溶液的制备
无/供试品溶液
平行管数 2
细菌内毒素检测
《中国药典》细菌内毒素检 验及方法建立
1
概述
前言
细菌内毒素
一、前言
热源检查易受试验动物个体差异、方法灵敏度、 药物本身性质的影响，受到一定限制，与家兔 热原法相比，细菌内毒素检查法具有劳动强度 低，实验成本小等特点，还可以通过对原料、 活性成分、灭菌水、容器、赋形剂和终产品的 细菌内毒素检测，对生产过程进行质控，更明 显的特点是可以定量检测药品生产过程中可能 污染的痕量内毒素，为区分干扰作用与内毒素 污染提供了极为重要的技术手段。
干扰无法去除 选择其他方法
2006年6月 山东省药品检验所 26
1 内毒素限值的确定
一个药品在投放市场前，它是否满足内毒素 限值要求？样品的内毒素含量是多少？与前 一批的结果比较相差多少？与内毒素限值含 量相差多少？ 这些问题不但关注用药安全，同时也考虑了 生产环境的内毒素含量变化。 因此，一个完善的细菌内毒素检查法的建立， 除了要满足法规相关的强制性要求，保证临 床用药人群的安全外，还应该最大限度的提 供有关内毒素含量的信息，为药品生产过程 的质量控制提供警戒信息。
2006年6月
山东省药品检验所
22
三、方法学验证注意事项 一个全面可靠的细菌内毒素检查法的方法 验证实验一般应注意：首先要了解产品的 溶解度，按照适当的临床用量确定合适的 内毒素限值，并确证产品对方法是否存在 干扰，如果在样品处理过程中运用了激烈 的处理条件或溶剂，还应证明所采用方法 不会破坏或减少样品中细菌内毒素含量。
2006年6月
山东省药品检验所
9
3 鲎试剂凝胶反应的特征
⑴随着鲎试剂反应的进行，凝固蛋白不 断增加，伴随凝聚的形成，光密度也会 增加。 ⑵内毒素的浓度决定了光密度增加的速 率。 ⑶凝胶形成反应呈S型曲线（分为初期的 平台期、快速增长期和后期的平台期）。 这些特性构成了各种检测方法的理论基 础。
1
概述
前言
细菌内毒素
一、前言
热源检查易受试验动物个体差异、方法灵敏度、 药物本身性质的影响，受到一定限制，与家兔 热原法相比，细菌内毒素检查法具有劳动强度 低，实验成本小等特点，还可以通过对原料、 活性成分、灭菌水、容器、赋形剂和终产品的 细菌内毒素检测，对生产过程进行质控，更明 显的特点是可以定量检测药品生产过程中可能 污染的痕量内毒素，为区分干扰作用与内毒素 污染提供了极为重要的技术手段。
干扰无法去除 选择其他方法
2006年6月 山东省药品检验所 26
1 内毒素限值的确定
一个药品在投放市场前，它是否满足内毒素 限值要求？样品的内毒素含量是多少？与前 一批的结果比较相差多少？与内毒素限值含 量相差多少？ 这些问题不但关注用药安全，同时也考虑了 生产环境的内毒素含量变化。 因此，一个完善的细菌内毒素检查法的建立， 除了要满足法规相关的强制性要求，保证临 床用药人群的安全外，还应该最大限度的提 供有关内毒素含量的信息，为药品生产过程 的质量控制提供警戒信息。
2006年6月
山东省药品检验所
22
三、方法学验证注意事项 一个全面可靠的细菌内毒素检查法的方法 验证实验一般应注意：首先要了解产品的 溶解度，按照适当的临床用量确定合适的 内毒素限值，并确证产品对方法是否存在 干扰，如果在样品处理过程中运用了激烈 的处理条件或溶剂，还应证明所采用方法 不会破坏或减少样品中细菌内毒素含量。
2006年6月
山东省药品检验所
9
3 鲎试剂凝胶反应的特征
⑴随着鲎试剂反应的进行，凝固蛋白不 断增加，伴随凝聚的形成，光密度也会 增加。 ⑵内毒素的浓度决定了光密度增加的速 率。 ⑶凝胶形成反应呈S型曲线（分为初期的 平台期、快速增长期和后期的平台期）。 这些特性构成了各种检测方法的理论基 础。
项目葡萄糖注射液的细菌内毒素检查ppt
（kg·h），放射性药品注射剂K=2.5EU/（kg·h），鞘内用注 射剂K=0.2EU/（kg·h）。 M ：人用每kg体重每h的最大供试品剂量，依据药品说明书或 《临床用药须知》确定。注意M一定要找到最大量，如果有 儿童用量，按体重计一般高于成人量。
例：某注射剂产品人用每公斤体重每小时的最大供试品剂 量为14.3mg/kg，其浓度为100mg/ml ，则L为多少（用 EU/ml 表示）？
鲎
鲎试剂中含有凝固酶原和凝固蛋白原，在适宜的条 件下（温度、pH、无干扰物质等），能被微量的细菌内 毒素激活，而产生凝集反应。
需建立内毒素检查项目的品种
质量标准中有家兔热原检查法需转换为细菌内毒素检查 方法的品种。
用于注射给药，但未有热原质量控制的品种。 注射用新药需建立热原质量控制的品种。 用于静脉给药的原辅料。
本节内容
一、试验动物 二、试验环境 三、操作方法 四、结果判断 五、注意事项
试验动物
供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。 预测体温前7天即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重
应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。 未经用于热原检查的家兔；供试品判定为符合规定但组内
升温达0.6℃家兔；或三周内未曾使用的家兔，均应在检查 供试品前3～7天内预测体温，进行挑选。
2006年，“欣弗”克林霉素磷酸酯葡萄 糖注射液，导致多起悲剧发生。
2009年，西安嘉惠药业有限 公司，肾康注射液，因热原
检查不合格被紧急召回
二、消除热原的方法
1.高温法 180℃干烤3～4h或250℃干烤1h以上 2.吸附法 常见的吸附剂如活性炭、石棉、白陶土等吸附 3.滤过法 超滤法（3.0～15nm）超滤膜 4.蒸馏法 多次蒸馏，并加有隔沫装置 5.酸碱法 强酸、强碱、强氧化剂破坏 6.其它方法 离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等
例：某注射剂产品人用每公斤体重每小时的最大供试品剂 量为14.3mg/kg，其浓度为100mg/ml ，则L为多少（用 EU/ml 表示）？
鲎
鲎试剂中含有凝固酶原和凝固蛋白原，在适宜的条 件下（温度、pH、无干扰物质等），能被微量的细菌内 毒素激活，而产生凝集反应。
需建立内毒素检查项目的品种
质量标准中有家兔热原检查法需转换为细菌内毒素检查 方法的品种。
用于注射给药，但未有热原质量控制的品种。 注射用新药需建立热原质量控制的品种。 用于静脉给药的原辅料。
本节内容
一、试验动物 二、试验环境 三、操作方法 四、结果判断 五、注意事项
试验动物
供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。 预测体温前7天即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重
应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。 未经用于热原检查的家兔；供试品判定为符合规定但组内
升温达0.6℃家兔；或三周内未曾使用的家兔，均应在检查 供试品前3～7天内预测体温，进行挑选。
2006年，“欣弗”克林霉素磷酸酯葡萄 糖注射液，导致多起悲剧发生。
2009年，西安嘉惠药业有限 公司，肾康注射液，因热原
检查不合格被紧急召回
二、消除热原的方法
1.高温法 180℃干烤3～4h或250℃干烤1h以上 2.吸附法 常见的吸附剂如活性炭、石棉、白陶土等吸附 3.滤过法 超滤法（3.0～15nm）超滤膜 4.蒸馏法 多次蒸馏，并加有隔沫装置 5.酸碱法 强酸、强碱、强氧化剂破坏 6.其它方法 离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等
内毒素实验凝胶法
❖ 将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放 入37℃±1℃的适宜恒温器中，保温60分钟±2分钟。
精选版课件ppt
26
鲎试剂灵敏度复核试验
❖ 结果观察
❖
将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管
内形成凝胶，且不从管壁滑脱者为阳性；若不形成凝胶，或
形成凝胶但倒转180°后从管壁滑脱者为阴性。
精选版课件ppt
35
三、操作注意事项
❖ 试验前准备：
1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、 清洗操作方便。
洗净 去污去内毒素 去洗涤剂 精洗
除外源性热原：250 ℃干烤至少1小时。
2、尽量用铝制器具和不锈钢用具，且用蒸馏水 冲洗后250 ℃干烤至少1小时。
3、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管； 塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。
❖ 3. 在鲎试剂的溶解、样品的稀释及加入时，取样均 应准确，缓缓加入避免气泡。
❖ 4. 保温过程中不可随时取出观察，防止形成的凝胶 受到振动后变形而误判为阴性。
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34
注意事项
❖ 5. 冻干的鲎试剂应存放在2-8℃下；避免长时间放 置在高于25℃的温度条件下。已复溶的鲎试剂在间 歇使用过程中最好放在2-8℃的冰箱里，可存放24 小时，在-20℃以下，可存放四个星期，鲎试剂只能 冻融一次。
细菌内毒素检查法 （凝胶法）
苏州大学 卫生与环境技术研究所
精选版课件ppt
1
内容 ❖基本概念
❖实验方法
❖操作注意事项
精选版课件ppt
2
细菌内毒素
❖ 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的产物,它主 要化学成分是脂多糖。细菌在生活状态下不会释放 出来，只有当细菌死亡后才会表现出毒性。
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26
鲎试剂灵敏度复核试验
❖ 结果观察
❖
将试管从恒温器中轻轻取出，缓缓倒转180°时，若管
内形成凝胶，且不从管壁滑脱者为阳性；若不形成凝胶，或
形成凝胶但倒转180°后从管壁滑脱者为阴性。
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35
三、操作注意事项
❖ 试验前准备：
1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、 清洗操作方便。
洗净 去污去内毒素 去洗涤剂 精洗
除外源性热原：250 ℃干烤至少1小时。
2、尽量用铝制器具和不锈钢用具，且用蒸馏水 冲洗后250 ℃干烤至少1小时。
3、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管； 塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。
❖ 3. 在鲎试剂的溶解、样品的稀释及加入时，取样均 应准确，缓缓加入避免气泡。
❖ 4. 保温过程中不可随时取出观察，防止形成的凝胶 受到振动后变形而误判为阴性。
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34
注意事项
❖ 5. 冻干的鲎试剂应存放在2-8℃下；避免长时间放 置在高于25℃的温度条件下。已复溶的鲎试剂在间 歇使用过程中最好放在2-8℃的冰箱里，可存放24 小时，在-20℃以下，可存放四个星期，鲎试剂只能 冻融一次。
细菌内毒素检查法 （凝胶法）
苏州大学 卫生与环境技术研究所
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1
内容 ❖基本概念
❖实验方法
❖操作注意事项
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2
细菌内毒素
❖ 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的产物,它主 要化学成分是脂多糖。细菌在生活状态下不会释放 出来，只有当细菌死亡后才会表现出毒性。
血液透析内毒素检测的意义PPT文档共30页
❖ 知识就是财富 ❖ 丰富你的人生
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
血液透析内毒素检测的意义
1、 舟 遥 遥 以 轻飏， 风飘飘 而吹衣 。 2、 秋 菊 有 佳 色，裛 露掇其 英。 3、 日 月 掷 人 去，有 志不获 骋。 4、 未 言 心 相 醉，不 再接杯 酒。 5、 黄 发 垂 髫 ，并怡 然自乐 。
பைடு நூலகம்
谢谢你的阅读
71、既然我已经踏上这条道路，那么，任何东西都不应妨碍我沿着这条路走下去。——康德 72、家庭成为快乐的种子在外也不致成为障碍物但在旅行之际却是夜间的伴侣。——西塞罗 73、坚持意志伟大的事业需要始终不渝的精神。——伏尔泰 74、路漫漫其修道远，吾将上下而求索。——屈原 75、内外相应，言行相称。——韩非
血液透析内毒素检测的意义
1、 舟 遥 遥 以 轻飏， 风飘飘 而吹衣 。 2、 秋 菊 有 佳 色，裛 露掇其 英。 3、 日 月 掷 人 去，有 志不获 骋。 4、 未 言 心 相 醉，不 再接杯 酒。 5、 黄 发 垂 髫 ，并怡 然自乐 。
பைடு நூலகம்
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内毒素与真菌葡聚糖检测的临床意义37页PPT
备一种能应付逆境的态度。——卢梭
▪
27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
▪
28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
▪
29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
▪
30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
37
内毒素与真菌葡聚糖检测的临床意义
41、俯仰终宇宙，不乐复何如。 42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。 43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。 44、欲言无予和，挥杯劝孤影。 45、盛年不重来，一日难再晨。及时 当勉励 ，岁月 不待人 。
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27、只有把抱怨环境的心情，化为上进的力量，才是成功的保证。——罗曼·罗兰
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28、知之者不如好之者，好之者不如乐之者。——孔子
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29、勇猛、大胆和坚定的决心能够抵得上武器的精良。——达·芬奇
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30、意志是一个强壮的盲人，倚靠在明眼的跛子肩上。——叔本华
谢谢！
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内毒素与真菌葡聚糖检测的临床意义
41、俯仰终宇宙，不乐复何如。 42、夏日长抱饥，寒夜无被眠。 43、不戚戚于贫贱，不汲汲于富贵。 44、欲言无予和，挥杯劝孤影。 45、盛年不重来，一日难再晨。及时 当勉励 ，岁月 不待人 。
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