微球体培养
小球藻的培养方法
小球藻的培养方法
小球藻的培养方法如下：
1.准备培养基：小球藻可以在液体培养基或固体培养基中生长，其中常用的液体培养基有BG11、BG11_0、BG11_1等。
固体培养基可采用琼脂或agar等凝胶。
2.接种：将小球藻接种到培养基中，一般采用无菌技术进行，可以选择胶体主要培养的种类，浓度建议经实验考察后选择。
3.光照和温度控制：小球藻是一种光合作用的蓝藻，需要光照进行生长。
一般采用连续或间歇白天亮度4000~5000 lx，晚上黑暗或亮度不超过200 lx，温度一般控制在20~25。
4.培养后期处理：小球藻的生长过程中要保持培养基中的营养物质适宜，可以选择定期更换培养基。
另外，为避免细菌，真菌等细胞污染，必须采取严格的无菌操作。
5.采集：小球藻的生长周期较短，一般在2-3周内就可以采集得到。
采集时要注意无菌操作，对于液态的小球藻培养基，可以采用离心等处理方式将小球藻和培养基分离，加工自己需要的样品。
动物细胞大规模培养技术
•动物细胞大规模培养技术
(三) 培养基与细胞系
• 动物细胞培养基是细胞赖以生长、增殖的重 要因素。天然培养基、合成培养基后，无血清 培养基开发成为当今细胞领域的一大课题。
• 无血清培养基的优势在于避免血清的批次、质 量、成分等对细胞造成的污染、毒性和不利于 产品纯化等不良影响。
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•动物细胞大规模培养技术
1悬浮培养技术
基本操作 (1)将动物培养材料分散成细胞悬浮液\ 过滤、离心、纯化、漂洗后接种到有适 宜培养液的培养系统中。传代时按比例 稀释即可继续培养。
•动物细胞大规模培养技术
•动物细胞大规模培养技术
• 对贴壁性•细2微胞载，最体初培采养用技在术培养液中加
人一定数量的小滚瓶，增加细胞生长的 贴壁面积。此方法构造简单，成本低， 重复性好，放大过程可依靠滚瓶数量的 增加。但产率低，劳动强度大，占空间 大。微载体系统培养贴壁细胞，一定程 度上改变了以上这些不足。微载体是直 径60—250um的微珠。
•动物细胞大规模培养技术
• 采用胶原酶消化比胰蛋白酶-EDTA法可获 得更完整的细胞膜和更高的细胞活性。 胶原酶专一性好，不损伤细胞膜，效果 较好。
•动物细胞大规模培养技术
(6)分离细胞：
• 对于回收率要求不高的细胞种类，分组 沉降简单易行。
• 脱离微载体的培养液放入细长容器，于上清液 中分离收集细胞，400r／min，2min离心加速 微载体沉淀。
• 1.病毒疫苗 • 2.非抗体免疫调节剂 • 3.多肽生长因子 • 4.酶类 • 5.激素 • 6.肿瘤特异性抗原 • 7.单克隆抗体 • 8.病毒杀虫剂
•动物细胞大规模培养技术
三维肿瘤球培养注意事项
三维肿瘤球培养注意事项嘿，宝子们！今天咱们来唠唠这三维肿瘤球培养的注意事项呀。
这可真是个超重要的事儿呢！首先哇，咱们来说说细胞的选择。
这细胞来源一定要靠谱呀！哎呀呀，你可不能随便找点细胞就开始做三维肿瘤球培养呢。
要确保细胞的活性够高，健康状况良好哇！如果细胞本身就有问题，那后面的培养可就全乱套了呀！再来说说培养基这一块呢。
培养基的成分可不能马虎呀！它得包含细胞生长所需要的各种营养物质呀，像氨基酸、维生素这些都是必不可少的呀。
哇，你要是缺了某种关键营养成分，那肿瘤球的生长可就会受到抑制了呢！而且，培养基的酸碱度也得合适呀。
太酸或者太碱的环境，肿瘤球可受不了哇！这就好比人不能住在特别恶劣的环境里一样呀，是不是这个理儿呢？然后哇，培养的环境也相当关键呢！温度得保持在一个合适的范围呀。
一般来说，大多数细胞适合的温度是37摄氏度左右呢。
哇塞，要是温度偏差太大，细胞可能就罢工了呢！湿度也不能忽视呀，太干燥或者太潮湿都不行的呀。
还有还有，二氧化碳的浓度也得控制好呢。
这就像一个微妙的平衡，一旦打破，培养就可能失败呀。
接下来，咱们聊聊操作过程中的注意点。
在接种细胞的时候，要特别小心呀。
接种的密度要合适呢，要是太密了，肿瘤球可能会相互挤压，影响它们的正常生长；太稀了呢，又可能长不出理想的肿瘤球呀。
哎呀呀，这就需要咱们多做些实验来找到那个最佳的接种密度呢。
在培养过程中，还得定期观察呢。
这可不是看看就行的呀，要仔细记录肿瘤球的大小、形状、颜色这些特征呢。
哇，如果发现有什么异常，就得赶紧找找原因呀！是污染了吗？还是培养条件出问题了呢？说到污染哇，这可是个大麻烦呢！要严格保证无菌操作呀。
培养器皿、工具这些都得消毒到位呀。
要是不小心混入了细菌或者真菌，那辛辛苦苦培养的肿瘤球可就毁了呀！最后呢，在进行后续实验或者分析的时候，取样也要谨慎呀。
可不能把整个肿瘤球都破坏了，还得留一部分继续培养或者用于其他研究呢。
总之哇，三维肿瘤球培养需要咱们细心再细心，注意每一个小细节呢！只有这样，才能培养出理想的三维肿瘤球，为咱们的科研或者其他相关工作打下坚实的基础呀！加油哇，小伙伴们！。
肿瘤细胞成球实验原理
肿瘤细胞成球实验原理
肿瘤细胞成球实验是一种常用的体外细胞培养技术，用于模拟体内肿瘤的生长和发展过程。
该实验可以通过培养肿瘤细胞成三维球体，更真实地反映肿瘤的特性和生物学行为。
实验开始前，我们需要从患者体内获取肿瘤组织，并将其分离出单个的肿瘤细胞。
这些细胞通常具有一定的肿瘤干细胞特性，包括自我更新和多向分化的能力。
我们将肿瘤细胞悬浮在含有适当培养基和营养物质的培养皿中。
培养基中的成分和浓度需要根据具体的实验目的进行调整，以提供细胞生长所需的营养和环境。
然后，我们将培养皿放置在恒温培养箱中，维持适当的温度和湿度，以模拟人体内的生理条件。
在培养过程中，细胞会自发地聚集在一起，形成三维的球体结构，称为肿瘤球。
肿瘤球的形成是由肿瘤细胞间的相互作用和通讯所驱动的。
在这个过程中，细胞之间会发生细胞黏附、细胞间信号传导和基质重塑等重要的细胞生物学事件。
通过观察和研究肿瘤球的形态、大小和结构，我们可以了解肿瘤细胞的增殖能力、侵袭性和抗药性等特性。
此外，肿瘤球还可以用于测试新药的疗效和评估抗肿瘤治疗策略的有效性。
肿瘤细胞成球实验的优势在于它更好地模拟了体内的肿瘤生长环境，相比于传统的二维细胞培养，更能保留肿瘤细胞的原始特性和生物学行为。
这使得肿瘤球实验成为研究肿瘤生物学和开发抗癌药物的重要工具。
肿瘤细胞成球实验通过培养肿瘤细胞形成三维球体结构，模拟体内肿瘤的生长和发展过程。
这种实验方法可以更真实地反映肿瘤的特性和生物学行为，为肿瘤研究和治疗提供重要的参考依据。
微载体培养动物细胞技术的研究与进展
微载体培养动物细胞技术的研究与进展摘要：微载体是将对细胞无害的颗粒-微载体加入到培养容器的培养液中，作为载体，使细胞在微载体表面附着生长，同时通过持续搅动使微载体始终保持悬浮状态。
微载体具有比表面积大等优点，在微载体培养技术中具有决定性作用。
而微载体细胞培养技术是一种微载体与生物反应器结合的技术,现已广泛应用于组织工程领域"组织工程生物反应器系统能使细胞体外培养条件接近体内环境。
报告就近年来制备微载体的生物材料和方法探究技术以及其在培养动物细胞的研究进展做一综述，为微载体培养技术和组织工程的研究提供理论基础。
关键词：微载体、载体类型、细胞培养、综述文献引言：荷兰学者van Wezel 于1967年首先创立了。
微载体培养动物细胞技术。
在微球表面培养细胞可以在较短时间内得到大量的细胞，且细胞传代只需要添加新的微载体，基本上可避免细胞在胰酶消化过程中受到的损伤，因此微载体培养细胞技术是非常方便和有意义的。
20世纪80年代，微载体出现了商品化。
Famarcia 公司利用中性葡聚糖凝胶表面偶联正电荷基团开发出Cytodex 1、Cytodex 2和Cytodex 3系列商品，但这些微载体由于通过特殊处理都不具有降解性或降解性较差，且价格昂贵。
而理想的微载体则应具有良的生物相容性、降解可吸收性。
因此，优质微载体生物材料的开发仍是当前研究热点。
本文综合分析近年来国内外微载体制备材料和方法的研究进展，为细胞微载体培养技术和组织工程的研究提供理论基础。
1 资料和方法：1.1 资料来源由第一作者在CNKI进行检索。
网址：/。
英文资料的检索时间范围为2007/2012；中文资料的检索时间范围为2007/2012。
英文检索词为“microcarrier，biomaterials cellculture, tissue engineering”；中文检索词为“微载体，生物材料，细胞培养，组织工程”。
1.2 入选标准纳入标准：①微载体材料、制备工艺及性能的研究。
小球藻培育的简单方法
小球藻培育的简单方法小球藻是一种单细胞绿藻，广泛应用于生物学研究和教学实验中。
它具有高生长速度、易于培育和操作的特点，因此被广泛用于培养实验。
下面将介绍一种简单的方法来培养小球藻。
材料准备：1. 小球藻培养液：小球藻培养液是一种富含营养物质的培养基，可以购买或自制。
2. 培养容器：可以使用玻璃烧杯、培养皿或培养瓶等透明容器，容器的大小取决于培养的规模。
步骤：1. 准备培养容器：将培养容器清洗干净，并用70%乙醇消毒，然后用蒸馏水冲洗干净。
2. 加入培养液：将培养液倒入培养容器中，约占容器的1/3至1/2。
3. 转接小球藻：从已培养好的小球藻培养液中取出适量的小球藻，倒入培养容器中。
注意避免将杂质一同转接进去。
4. 光照条件：将培养容器放置在光照充足的地方，如实验室植物培养箱或阳光充足的窗台。
小球藻对光照要求较高，光照不足会影响其生长。
5. 培养温度：小球藻的适宜生长温度为20-25摄氏度，因此要保持培养环境的温度稳定。
6. 培养液的更替：每隔一段时间（通常为1-2周）需更换培养液，以保持培养液中的营养物质充足。
更替时，可以将培养液倒出一部分，再加入新的培养液。
7. 观察和记录：定期观察培养容器中的小球藻生长情况，如颜色、密度等，并记录下来。
这些记录有助于了解小球藻的生长特性和培养条件的调整。
小球藻的培养过程需要一定的耐心和细心，但整体来说是比较简单的。
通过掌握培养的基本方法和技巧，可以轻松地进行小球藻的培养实验。
需要注意的是，为了保证实验结果的准确性，培养过程中要避免污染。
在操作过程中，要注意个人卫生，使用消毒好的器具，并避免与外界空气接触时间过长。
小球藻的培养液的配方也是影响培养效果的重要因素之一。
不同的研究目的可能需要不同的培养液配方，可以根据具体实验的要求进行调整。
通过以上简单的方法，我们可以成功地培养小球藻，为后续的研究工作提供可靠的实验材料。
希望本文对于小球藻的培养方法有所帮助。
微载体上MRC-5细胞扩大培养的研究
1BIOTECHWORLD 生物技术世界mrc-5细胞是来源于一个27岁的健康妇女(瑞典)的14周男性胚胎,该细胞核型为46XY,衰老期为48群体倍增代。
MRC-5原始种子库为7代细胞,共481支。
2005年该委员会向WHO建议并被批准建立了新的细胞库,细胞代次为12代。
MRC-5细胞株是世界卫生组织(World Health Organization,WHO)推荐的可以用于人用疫苗生产的标准人二倍体细胞株,其免疫原性好,具有良好的耐受性,无异种移植致癌性,无外源因子污染,其规模化培养适宜生产多种病毒性疫苗。
到目前为止,mrc-5细胞被世界各地很多疫苗生产厂家用于疫苗生产,比如人二倍体细胞狂犬疫苗(HDCV)。
1 材料1.1 生物反应器中国广州奇志公司生产的BC-15L(工作体积12L)以及BC-100L型(工作体积80L)微载体培养系统。
1.2 细胞中国成都康华生物制品有限公司MRC-5工作细胞库细胞,23代。
1.3 微载体GE公司的cytodex I 型,按照厂家指导进行制备和灭菌处理,使用浓度5g/l-15g/l。
1.4 培养液日本株式会社的MEM培养液,补加10%的小牛血清(山西太原润生),0.03%L-谷氨酰胺,1%非必须氨基酸(Gbico)。
1.5 消化液0.01%EDTA-0.25%胰蛋白酶溶液。
1.6 细胞洗涤液pH7.2 0.01mol/l PBS溶液2 方法2.1 mrc-5细胞的准备将MRC-5细胞复苏,并在2000ml K氏瓶中培养扩增,培养条件为pH7.2—7.4、36-37℃、3%-5%CO2、待细胞长成致密单层后,消化、收集细胞悬液。
2.2 微载体培养mrc-5细胞2.2.1 微载体处理cytodex I型微载体,按照GE公司说明将微载体用pH7.2 0.01mol/LPBS水化膨胀,高压灭菌,用培养液置换1-2次后,浸泡2小时以上,备用。
2.2.2 细胞接种将细胞悬液接种到BC-15L细胞培养罐内,接种密度(1×105个/ml),培养浓度5g/L。
Vero细胞的微载体培养_放大过程中的接种工艺
壁时间, 根据本实验结果, 新老球
beads2to 2beads
的比例以 3∶1 为优。
N ew bead s∶o ld bead s
用球转球方法, 以CelliGen
5L 细胞培养用生物反应器作种
2∶3
子罐, 在国产 50L CellCu l250A 细 胞 培 养 反 应 器 中 培 养 V ero 细
1 材料和方法
1. 1 材料 细胞: 非洲绿猴肾V ero 细胞 (A TCC) : 150～ 180 代。 培 养基: DM EM (D u lbecco’s M od ified Eag le M ed ium , G IBCOL ) , 加 5%～ 10% 小牛血
收稿日期: 1998202218 © 1994-2009 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved.
V o l. 24 N o. 6 1998212
华 东 理 工 大 学 学 报 Jou rnal of East Ch ina U n iversity of Science and T echno logy
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Vero 细胞的微载体培养
——放大过程中的接种工艺
张 立3 严 春 范卫民 张元兴 俞俊棠 (华东理工大学生物化工研究所, 上海 200237)
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人肝细胞系CL—I的微载体成功培养及功能检测
人肝细胞系CL—I的微载体成功培养及功能检测
高毅;徐小平;杨继震
【期刊名称】《透析与人工器官》
【年(卷),期】1998(000)001
【摘要】本研究采用微载体培养技术进行人肝细胞系CL－I的高密度培养。
使用微载体浓度为5mg／ml，细胞接种浓度为2×105／ml，在100ml的Bellco搅拌培养瓶中，以30rpm的转速进行持续搅拌培养，光镜和电镜动态观察细胞生长情况，并监测CL－I人白蛋白合成量及安定转化量。
结果表明，在培养的第七天，细胞总量达到最高峰为2．13×108，人白蛋白合成量达71．23μg，安定转化量为619．7μg。
本实验为进一步使用微载体培养技术培养人肝细胞系作为人工肝生物材料的动物实验打下基础。
【总页数】3页(P28-30)
【作者】高毅;徐小平;杨继震
【作者单位】第一军医大学珠江医院普外科人工肝室
【正文语种】中文
【中图分类】R392.1
【相关文献】
1.应用微载体Cytodex 3高密度培养L-02人肝细胞系 [J], 唐南洪;陈燕凌;王晓茜;李秀金;朱金海;殷凤峙
2.球形多孔微载体支持下高密度培养人肝细胞L-02的定时形态变化 [J], 张瑞;刘
明;
3.球形多孔微载体支持下高密度培养人肝细胞L-02的定时形态变化 [J], 张瑞;刘明
4.Cytodex-3微载体培养人肝细胞系CL-1 [J], 徐水平;高毅;杨继震
5.人工肝生物材料人肝细胞系CL-1的微载体培养 [J], 徐小平;高毅;杨继震
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小球藻培育的简单方法(一)
小球藻培育的简单方法(一)小球藻培育的简单方法介绍小球藻是一种常见的微型水生植物，具有丰富的营养价值和广泛的应用前景。
本文将介绍几种简单易行的小球藻培育方法，供大家参考。
方法一：水培法1.准备一个透明的容器，如玻璃瓶或鱼缸。
2.加入适量的藻类培养液，可在宠物店或者网上购买。
3.将小球藻种子（也称为小球藻胞子）撒入培养液中。
4.放置于光照充足、温度适宜的地方。
5.定期给藻类补充充足的光照，并根据需要添加培养液。
方法二：土培法1.准备一个浅盘或花盆，填充适量的腐殖质丰富的湿润土壤。
2.撒入适量的小球藻种子。
3.放置于光照充足、通风良好的地方。
4.定期给藻类补充充足的光照，并注意保持土壤湿润。
5.如有需要，可在特殊的藻类培养液中滴加适量的营养液。
方法三：人工光培法1.准备一个封闭的培养箱，可以使用塑料盒子或特制的小球藻培育箱。
2.安装适当的人工光源，如LED灯或荧光灯。
3.将小球藻种子撒在培养板或培养液中。
4.将培养箱放置于恒温恒湿的环境中，保持适宜的光照周期和温度。
5.根据需要添加充足的培养液和营养液，保持良好的生长环境。
方法四：自然水池培育法1.找到适合小球藻生长的水池，如池塘、蓄水池等。
2.等待春季或夏季，当水温适宜时，撒入适量的小球藻种子。
3.让小球藻自然生长，充分利用阳光和水中的营养物质。
4.定期观察并检查水质，如有需要，可适量添加培养液和营养液。
5.如遇污染或水质下降，及时采取相应的措施进行修复和保护。
结论以上是几种简单易行的小球藻培育方法，每种方法都有其适用的场景和特点。
根据个人的实际情况和需求，可以选择合适的方法来进行小球藻的培育。
希望本文对大家有所帮助！注意：在进行小球藻培育时，应遵循相关的法规和指导，避免对环境造成不良影响。
同时，了解小球藻的生长特性和环境要求也是培育成功的关键。
方法五：浮床培育法1.准备一个浮床，可以使用泡沫塑料板或专用的浮床材料。
2.将浮床放置在水槽、湖泊等水域中，使其浮在水面上。
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Enrichmentoftumor-initiatingbreastcancercellswithinamammosphere-culturemicrodevice
KatayoonSaadin&JeffreyM.Burke&NeeravP.Patel&
RebeccaE.Zubajlo&IanM.White
Publishedonline:21March2013#SpringerScience+BusinessMediaNewYork2013
AbstractWereportforthefirsttimeamicrodevicethatenablestheselectiveenrichment,culture,andidentificationoftumor-initiatingcellsonnativepolydimethylsiloxane(PDMS).Fornearlyadecade,researchershaveidentifiedtumor-initiatingbreastcancercellswithinheterogeneouspopulationsofbreastcancercellsbyutilizinglow-attachmentserum-freecultureconditions,whichleadtotheformationofspheroidalcolonies(mammospheres)thatareenrichedfortumor-initiatingcells.However,theutilityofthisassayhasbeenlimitedbydifficultiesincombiningthisculture-plate-basedtechniquewithothercellularandmolecularanalyses.Integratingthemammospheretech-niqueintoamicrosystemcanenableittobecombineddirectlywithanumberoffunctions,suchascellsorting,drugscreens,andmolecularassays.Inthiswork,wedem-onstratemammosphereculturewithinaPDMSmicrodevice.WefirstprovethatanativehydrophobicPDMSsurfaceisaseffectiveascommerciallow-attachmentplatesatselectivelypromotingtheformationofmammospheres.Wethenexper-imentallyassessthePDMSmicrodevice.Time-lapseimagesofmammosphereformationwithinthemicrodeviceshowthatmammospheresformfromsinglecellsorsmallclustersofcells.Followingformationofthemammospheres,itisdesirabletoevaluatethecellswithinthespheroidsforen-richmentoftumorinitiatingcells.Toperformassayssuchasthis(whichrequiretheloadingandrinsingofreagents)
withoutflushingthecells(whichareinsuspension)fromthedevice,theculturechamberisseparatedfromareagentreservoirbyacommerciallyavailablemicroporousmem-brane,andthusreagentsareexchangedbetweenthereser-voirandtheculturechamberbydiffusiononly.Usingthiscapability,weverifythatthemammospheresareenrichedfortumorinitiatingcellsbystainingaldehydedehydroge-naseactivity,acancerstemcellmarker.Tothebestofourknowledge,thisisthefirstassaythatenablesthedirectobservationoftumor-initiatingcellswithinasuspendedmammosphere.
KeywordsMammosphere.Metastasis.PDMS.Cancerstemcells
1IntroductionDespiteadvancesincancertreatment,themetastasisandrelapseofcancercontinuestobetheleadingcauseofcancer-relateddeaths.Thekeytoeradicatingcancerfrompatientsmaybetobetterunderstandthemolecularandcellularphysiologyofcancerstemcells(CSCs),andtodevelopmethodstodiagnosethepathologyofCSCsinclinicalsettings.Thecancerstemcellhypothesisarguesthataminorityoftumorinitiatingcellsinaheterogeneoustumorpopulationdrivesthetumorgrowthandhasdrugresistantproperties(Lietal.2007b;Pardaletal.2003;Reyaetal.2001;Shackletonetal.2009;SmalleyandAshworth2003;StinglandCaldas2007).Recentreportshavedemonstratedevidenceoftumorinitiatingcellsinsolidtumors,specifi-callybrain,breast,prostate,andlungcancer,aswellasmalignantmelanoma(Al-Hajjetal.2003;Fangetal.2005;Hemmatietal.2003;Kimetal.2005;Lawsonetal.2007;Lietal.2007a;Singhetal.2003;Xinetal.2005).Isolatingandenrichingtumorinitiatingcellsfromtumorbiopsiesandfromculturedcelllinescanaidresearchersin
ElectronicsupplementarymaterialTheonlineversionofthisarticle(doi:10.1007/s10544-013-9755-y)containssupplementarymaterial,whichisavailabletoauthorizedusers.
K.Saadin:I.M.White(*)ChemicalPhysicsProgram,UniversityofMaryland,CollegePark,MD20742,USAe-mail:ianwhite@umd.edu
J.M.Burke:N.P.Patel:R.E.Zubajlo:I.M.White
FischellDepartmentofBioengineering,UniversityofMaryland,CollegePark,MD20742,USA
BiomedMicrodevices(2013)15:645–655DOI10.1007/s10544-013-9755-ydeterminingthetriggersinvolvedintumorgrowth,relapse,andmetastasis(Manietal.2008).Inaddition,enrichingandculturingtumorinitiatingcellscanenableimportantcancerdrugstudies,astumorinitiatingcellshavebeenshowntoberesistanttoanumberofchemotherapeuticagents,andthus,itiscriticaltoevaluatetheeffectivenessofcancerdrugsonthesecells(Bandyopadhyayetal.2010;Botchkinaetal.2010;Guptaetal.2009;Prud’hommeetal.2010).Thus,isolating,identifying,andstudyingtumorinitiatingcellsmaybethekeytotreatingandpreventingrelapseandmetastasis.Anemergingtechniquetoisolateandenrichtumoriniti-atingcellsfromaheterogeneouspopulationistoculturethecellsonlow-attachmentsurfacesinserum-freemediainthepresenceofepidermalgrowthfactor(EGF)andfibroblastgrowthfactor(FGF)(Dontuetal.2003;Vescovietal.1993).Thisconceptofsuspensionculturewasoriginallyusedtoassesstheself-renewalcapacityofneuralstemcells(ReynoldsandWeiss1996).Thiscultureexperimentledtotheformationoftheso-calledneurospheres,whichwereshowntobeenrichedforstemcells.ThetechniquewaslateradoptedforhumanbreastepithelialcellsbyDontuetal.(Dontuetal.2003),inwhichthesuspensioncultureofhumanmammaryepithelialcells(HMECs)resultedintheformationofsphericalcoloniescalledmammospheres.Thesubsequentmonolayercultureofthesemammospheresunderdifferentiat-ingconditionsledtotheformationofmixedcoloniesofluminal-likecellsandmyoepithelial-likecells,anindicationofthestemcellcharacteristicofmultipotency.Pontietal.werethefirsttodemonstratethatmammospherescouldformfromcellstakenfrombreasttumorlesionsandfromtheMCF7breastcancercellline(Pontietal.2005).Thesecellsinitiatednewtumorswhenasfewas1,000cellsfromMCF7mammosphereswereinjectedintothemammaryfatpadofmice(onemillionMCF7cellswererequiredtoformtumorswhenmammosphereenrichmentwasnotused).Similarre-sultswereachievedbyGrimshawetal.,inwhichmammospherecoloniescontainingarelativelyhigh-fractionoftumor-initiatingcellsweregeneratedfrompleuraleffusionsfrombreastcancerpatients(Grimshawetal.2008).Sphericalcolonieshavealsobeenformedfromseveralcelllines,includ-ingMCF7(Engelmannetal.2008;Grimshawetal.2008;Kloppetal.2010;Leeetal.2010;Prud’hommeetal.2010;Sansoneetal.2007),SK-BR-3(Grimshawetal.2008),MDA-MB-231(Grimshawetal.2008),MA-11(Rappaetal.2008),BT474(Koketal.2009),T47D(Koketal.2009),andZR75-1(Koketal.2009).Becauseoftheemerginguseofthemammosphereassay,low-attachment96-wellcultureplatesandserum-freemediaformammosphereculturearenowcommerciallyavailable.Figure1showsmicrographsofMCF7cells(acommonlystudiedbreastcancercellline)culturedinatypicalcom-mercialtissue-culture-treatedflask(Fig.1a)andina