糖原磷酸化酶 b(Glycogen phosphorylase b,GPb)试剂盒说明书
多糖含量试剂盒说明书(3篇)
第1篇一、产品概述本试剂盒是针对多糖含量测定而设计的高效、便捷的检测工具。
适用于各类生物样本中多糖含量的定量分析，包括但不限于植物提取物、动物组织、微生物发酵液等。
本试剂盒采用酶联免疫吸附法（ELISA）原理，通过特异性抗体与多糖的结合，实现对多糖含量的精确测定。
二、产品组成1. 试剂盒- 多糖抗体- 标准品- 酶标抗体- 底物溶液- 洗涤缓冲液- 封闭液- 终止液2. 仪器- 酶标仪- 微量移液器- 恒温水浴箱- 试管3. 试剂- 酶标仪专用缓冲液- 酶标仪专用洗涤液三、使用方法1. 样本准备- 将待测样本按照说明书要求进行稀释。
- 确保样本无污染，避免酶标仪读取误差。
2. 加样- 在酶标板孔中加入50μl的标准品或样本稀释液。
- 在所有孔中加入50μl的多糖抗体。
3. 孵育- 将酶标板放入恒温水浴箱，37℃孵育1小时。
4. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液，将酶标板充分洗涤3次。
5. 加酶标抗体- 在所有孔中加入50μl的酶标抗体。
- 37℃孵育1小时。
6. 洗涤- 使用酶标仪专用洗涤液，将酶标板充分洗涤3次。
7. 加底物溶液- 在所有孔中加入50μl的底物溶液。
- 避光孵育15分钟。
8. 终止- 在所有孔中加入50μl的终止液。
9. 检测- 使用酶标仪在450nm波长下检测各孔的吸光度（OD值）。
10. 数据分析- 将测得的OD值与标准曲线进行比较，计算多糖含量。
四、注意事项1. 试剂和仪器- 使用前请仔细阅读说明书，确保试剂和仪器符合使用要求。
- 使用酶标仪时，请按照仪器说明书进行操作。
2. 样本处理- 样本处理过程中，请确保无污染，避免影响检测结果。
- 样本稀释时，请使用适宜的稀释液，确保稀释倍数合理。
3. 操作步骤- 操作过程中，请严格按照说明书进行，避免人为误差。
- 注意操作环境，避免交叉污染。
4. 标准曲线- 标准曲线的绘制应使用新鲜标准品，并确保标准曲线线性良好。
5. 质量控制- 定期进行质量控制，确保试剂盒的准确性和可靠性。
β-葡萄糖苷酶(β-GC)活性检测试剂盒说明书__微量法UPLC-MS-4219
β-葡萄糖苷酶（β-GC）活性检测试剂盒说明书微量法UPLC-MS-4219100T/48S试剂名称规格保存条件提取液液体100mL×1瓶2-8℃保存试剂一粉剂×2瓶-20℃保存试剂二液体15mL×1瓶2-8℃保存试剂三液体15mL×1瓶2-8℃保存标准品液体1mL×1支2-8℃保存溶液的配制：1、试剂一：临用前取1瓶加入6mL蒸馏水，充分溶解；用不完的试剂-20℃分装保存4周，避免反复冻融；2、标准品：5μmol/mL的对硝基苯酚溶液。
β-GC（EC3.2.1.21）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化β-糖苷键水解，具有多方面生理作用：在纤维素的糖化作用中，β-GC负责进一步水解纤维素二糖和纤维素寡糖生成葡萄糖；β-GC水解萜烯类香气前驱体，使糖苷键合态变成游离态。
从而产生香味；β-GC能够水解植物体内野黑樱苷，释放HCN，从而防止昆虫取食。
β-GC分解对-硝基苯-β-D-吡喃葡萄糖苷生成对-硝基苯酚，后者在400nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算β-GC活性。
p-Nitrophenylβ-D-glucopyranosideβ-GC p-Nitrophenol(400nm)注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。
如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、超声破碎仪、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、细菌或培养细胞的处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议1000万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次），15000g，4℃条件下离心20min，取上清，置冰上待测。
人钙调磷酸酶(CaN)酶联免疫分析 试剂盒说明书
人钙调磷酸酶(CaN)酶联免疫分析试剂盒使用说明书本试剂盒仅供研究使用。
检测范围：96T1U/L–32U/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中钙调磷酸酶(CaN)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人钙调磷酸酶(CaN)水平。
用纯化的人钙调磷酸酶(CaN)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入钙调磷酸酶(CaN)，再与HRP标记的钙调磷酸酶(CaN)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的钙调磷酸酶(CaN)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人钙调磷酸酶(CaN)浓度。
试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（64U/L）0.5ml×1瓶3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液 1.5ml×1瓶4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
32U/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液16U/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液8U/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液4U/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液2U/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
12糖类的生物合成
多分支，提高水 溶性，利于储存;
多处磷酸化酶作 用点，提高效率， 迅速提供能量
2、变位 G-1-P 磷酸葡萄糖变位酶
G-6-P
3、G的生成（只存在于肝、肾中，肌组织中没有此步骤）
G-6-
G
P
葡萄糖-6-磷酸酶
糖原的合成与分解代谢
UDP
Gn+1
Pi
Gn
糖原合酶 分支酶
UDPG
糖原磷酸化酶
Gn
• 酵解途径与糖异生途径多数反应是共有 的，除了酵解途径中3个不可逆反应。 糖异生方向
1.丙酮酸 磷酸烯醇式丙酮酸 2.1,6-双磷酸果糖 6-磷酸果糖 3.6-磷酸葡萄糖 葡萄糖
丙 酮
丙酮酸羧化酶
草 酰 磷酸烯醇式丙酮酸羧化激酶
酸
乙
CO2 ATP ADP+Pi酸 GTP GDP CO2
磷酸 烯醇 式丙 酮酸
3.调节酸碱平衡
长期饥饿时，肾糖异生增加，排氢保钠。 有利于维持酸碱平衡。
谷氨酰胺
谷氨酸
H2O
NH3
+
原尿H+
NH4+
-酮戊二酸 NH3
糖异生
糖异生的调节
1.激素的调节作用
6-磷酸果糖和1,6-双磷酸果糖之间，糖酵解和糖异 生之间
肝脏:胰高血糖素 腺苷酸环化酶
（无活性） 腺苷酸环化酶（活性）
ATP
2 胰高血糖素，主要的升血糖激素。
3 糖皮质激素，可引起血糖升高，肝糖原增加。
4 肾上腺素，强有力的升血糖激素。
• 胰岛素：降低血糖的唯一激素 1、促进G转运入细胞，加强利用 2、增强磷酸二酯酶的活性，降低cAMP水平，
激活糖原合酶，抑制磷酸化酶
糖分解代谢
植物体内的麦芽糖酶通常与淀粉酶同时存在，
并配合使用，从而使淀粉彻底水解成葡萄糖。
Hydrolysis of glycogen and starch by a-amylase and bamylase
2. 淀粉的磷酸解
其中，淀粉磷酸化酶又叫P-酶。
此反应为可逆反应，但在植物体内，由于 （1）[Pi]很高（如施肥）
五. 糖酵解的生物学意义
1. 为生物体提供一定的能量 ；
2. 糖酵解的中间物为生物合成提供原料；
如丙酮酸可转变为氨基酸，磷酸二羟丙酮 可合成甘油。
3. 为糖异生作用提供了基本途径。
六. 糖酵解的调控
在代谢途径中，发生不可逆反应的地方常常是整
个途径的调控部位，而催化这些反应的酶常常要受到
调控，从而影响这些地方的反应速度，进而影响整个 途径的进程。这些酶称该途径的关键酶。
磷酸果糖激酶 ATP、柠檬酸、脂肪酸；
ADP、AMP；
丙酮酸激酶 乙酰CoA、ATP；
ADP、AMP
4. 定位：细胞质 5. 意义：产生少许能量，产生一些中简产物如，丙酮酸 和甘油等
6. 底物水平的磷酸化
四. 糖酵解产物的去路 1. 丙酮酸的去路
(1)在无氧或相对缺氧时 —— 发酵
有两种发酵：酒精发酵、乳酸发酵
在糖酵解中，有三种酶催化的不可逆反应 ——
己糖激酶、PFK、丙酮酸激酶。所以它们是关键酶。 这三种酶都是变构酶。
磷酸解 → 产生磷酸葡萄糖 Nhomakorabea1. 淀粉的水解
参与淀粉水解的酶主要有三种：淀粉酶、脱支酶、 麦芽糖酶
(1)淀粉酶：
淀粉酶是指参与淀粉a-1,4-糖苷键水解的酶。
有a-淀粉酶和b-淀粉酶两种。
26糖原的分解与合成
糖 尿 病 的 代 谢 紊 乱
糖 尿 病 的 糖 代 谢 障 碍
糖尿病的用药 I
一、可选用的西药
1．胰岛素：用于Ⅰ型糖尿病。 2．双胍类降糖药： (1)苯乙双服(降糖灵)：本品常与格列齐特等磺酰服 类口服降糖药合用，但剂量应根据病情作适当调整。 (2)二甲双胍(降糖片) 。 3．磺脲类降糖药： (1)格列齐特(达美康，甲磺毗腮) (2)格列喹酮(糖适平) (3)格列本脲(优降糖)： (4)格列吡嗪(美毗达)： 4．拜糖平
非还原性末端
α-1,6O 糖苷键
CH2 O O CH2OH O OH
非还原性末端
α-1,4糖苷键
还原性末端
二、糖原的生物学意义
糖原是可以储藏能量和易于动员的多糖。肌体能 量不足时，及时动用糖原获得葡萄糖；肌体能量 充足时，能量以糖原形式储藏。 体内葡萄糖浓度过高会导致很多疾病（如糖尿 病），所以要以糖原的形式储藏。 葡萄糖以糖原形式储藏在分解时，几乎不消耗的 ATP，合成时也只消耗1分子ATP.所以以糖原形 式储藏效率很高。
（1）从糖链的非还原端开始
糖原(Gn)+ H3PO4
磷酸化酶
糖原(Gn-1) + G-1-P
（2）磷酸化酶只能分解α-1,4-糖苷键，对α1,6-糖苷键无作用。
4
3 2 1
脱分支：
9 8 7 6 5
4
3
2
1
转移酶
1
12
11
10
9
8
7
6
5
4
3
2
1
α-1,6-糖苷酶
+
12 11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 G
NH2 N N N
3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)试剂盒说明书
货号：MS2205 规格：100管/96样3-磷酸甘油醛脱氢酶(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)试剂盒说明书微量法正式测定前务必取 2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸，是糖酵解途径的关键酶，与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关，在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
测定原理3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3 二磷酸甘油酸。
GAPDH逆向催化 1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD，340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH 活性的高低。
需自备的仪器和用品分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1 瓶，-20℃保存；试剂二：液体 20mL×1 瓶，4℃保存；试剂三：液体×1 支，4℃保存；样本的前处理1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（1）工作液的配制：将试剂二全部倒入试剂一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)预热10分钟；现配现用。
26糖原的分解与合成
糖尿病(Diabetes mellitus)
Insulin缺乏或其受体异常，不能对抗 由肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质 激素等引起的血糖升高作用，产生高血 糖和糖尿。病人的代谢发生障碍，机体 供能不足，表现出典型的多饮、多食、 多尿及体重减少的“三多一少”症状。 严重时还伴随酮血症及酸中毒。
三、糖原的分解
糖原分解需要三种酶参与，即糖原磷酸化酶 （glycogen phosphorylase)，糖原脱支酶(glycogen debranching enzyme)和磷酸葡萄糖变位酶 (phosphoglucomutase)。分步反应：
（1）从糖链的非还原端开始
磷酸化酶
糖原(Gn)+ H3PO4
分步反应：
（1） G
G-1-P
HO CH2
H
H
OH OH
H
ATP ADP P O CH2
O H
H
H
H OH
Mg+
OH OH
OH 葡萄糖激酶
H
HO CH2
O H
H OH
HH
OH OH
OH 磷酸葡萄 H
O H
H OP
OH
G
G-6-P 糖转位酶 G-1-P
（2）尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）的合成
UDPG焦磷 酸化酶
+
G
② G-1-P
磷酸葡萄糖 转位酶
G-6-P
葡萄糖-6-磷酸
酶（肝、肾）
③ G-6-P
G + H3PO4
葡萄糖-6-磷酸酶只存在于肝、肾中，而不存在于肌肉 中，所以只有肝和肾可补充血糖，而肌糖原不能分解为葡 萄糖，不能补充血糖，只能进行糖酵解或有氧氧化。
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货号: QS3602 规格：50管/24样糖原磷酸化酶 b（Glycogen phosphorylase b，GPb）试剂盒说明书
紫外分光光度法
正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定
测定意义：
糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1)）是糖原分解代谢的关键酶，使糖原分子从非还原端逐个断开α-1，4-糖苷键移去葡萄糖基，释放1-磷酸葡萄糖，直至临近糖原分子α-1，6-糖苷键分支点前4个葡萄糖基处。
GP分为有活性的糖原磷酸化酶a（GPa）和无活性的糖原磷酸化酶b（GPb）两种形式。
GPb在一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）存在下可被激活。
测定原理：
GP催化糖原和无机磷产生葡萄糖残基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步依次催化NADP还原生成NADPH，在340nm下测定NADPH上升速率，即可反映GP活性。
添加一定浓度的腺苷酸（5，-AMP）时测定GP（GPa和GPb）活性，未添加腺苷酸（5，-AMP）时测定GPa活性，GP活性－GPa活性得到GPb活性。
自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂的组成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体40 mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1支，-20℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶， -20℃保存；
试剂五：粉剂×1支， -20℃保存；
样本的前处理：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。
8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零；
2、工作液的配制：临用前将试剂二转移到试剂一中混合溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃
保存，禁止反复冻融。
3、试剂三的配制：临用前在试剂三瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装
后-20℃保存，禁止反复冻融。
4、试剂四的配制：临用前在试剂四瓶中加入2.5mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装
后-20℃保存，禁止反复冻融。
5、试剂五的配制：临用前在试剂五管中加入1.25mL蒸馏水充分溶解待用；用不完的试剂分装
后-20℃保存，禁止反复冻融。
6、将工作液、试剂三、试剂四和试剂五置于37℃预热5分钟；
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7、1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三、50μL试剂四、50μL蒸馏水和800μL
工作液，立即混匀，记录340nm处5min后的A1和10min后的吸光值A2，计算ΔAGPa=A2-A1。
8、在1mL石英比色皿中加入50μL样本、50μL试剂三、50μL试剂四、50μL试剂五和800μL
工作液，立即混匀，记录340nm处5min后的A3和10min后的吸光值A4，计算ΔAGP=A4-A3。
注意：由于每个样本需要同时测一个GP（GPa和GPb）活性和一个GPa活性，因此本试剂盒50管测24个样本。
GPb活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPb（nmol/min/mg prot）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反总÷（ε×d）×109]÷(V样×Cpr) ÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷Cpr
（2）按样本鲜重计算
单位定义：每g组织每分钟产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
GPb（nmol/min/g 鲜重）＝[(ΔAGP－ΔAGPa)×V反总÷（ε×d）×109]÷(W ×V样÷V样总)÷T=643×(ΔAGP－ΔAGPa)÷W
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.05 mL；V样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g。
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