临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测
第章细菌药敏试验及其耐药表型检测细菌药敏试验是临床细菌感染治疗中非常重要的检测手段，通过该技术可以检测不同抗生素对细菌的敏感性，进而为合理使用抗生素提供科学的依据。
然而，在临床应用过程中，随着抗生素不合理使用的增加，细菌耐药性也随之快速发展。
因此，针对不同耐药表型的检测越来越受到关注。
一、细菌药敏试验细菌药敏试验是一种用于判断细菌对不同抗生素敏感性的方法。
常见的细菌药敏试验方法包括纸片扩散法、E测试、革兰氏染色法、微量稀释法等。
其中纸片扩散法是最常用的一种方法，其原理是将待检细菌涂在琼脂平板上，然后在板上放置一些含有不同抗菌药物的试纸，细菌耐药性差的部分会被试纸上的抗生素杀灭，出现纯净孔（抑菌圈），通过抑菌圈的直径可以初步判断细菌对抗生素的敏感性或耐药性。
细菌药敏试验有很多应用价值，如能够帮助医生选择合适的抗生素治疗细菌感染，避免了不必要的抗生素使用，同时也可作为科研人员研究细菌抗药机制的工具，为抗菌药物的开发提供依据。
二、耐药表型检测随着细菌抗药性问题的不断加重，对不同耐药表型检测的需求也越来越迫切。
耐药表型是指细菌对特定抗生素的耐药情况。
由于不同的细菌及其不同的菌株对抗生素的敏感程度有所不同，因此抗菌药物在应用过程中会出现不同菌株对不同药物的耐药表型。
目前，针对不同耐药表型检测的方法主要有两种：基于分子生物学技术的方法和基于药敏试验的方法。
1. 基于分子生物学技术的方法基于分子生物学技术的方法是检测细菌耐药性最常用的方法之一。
该方法通过检测细菌中特定的基因或者基因片段，以此确定细菌耐药性的表型。
常见的基于分子生物学技术的方法包括PCR检测、基因芯片技术、实时荧光定量PCR等。
2. 基于药敏试验的方法基于药敏试验的方法是已经成熟的检测方法之一，其通过将药敏试验的结果与临床药物疗效相结合，进而确定细菌耐药性表型。
通过检测不同抗生素对不同菌株的敏感性，可以初步反映出细菌的耐药性状态。
当然，这种方法不仅涉及到耗时、耗材、人力等成本的问题，而且还受到试验条件、条件操作等方面的影响。
clsim100 32药敏试验标准2023中文版
clsim100 32药敏试验标准2023中文版药敏试验是一项评估细菌对抗生素敏感性的重要实验，为制定合理的治疗方案提供了重要依据。
药敏试验的标准在不断变化和更新，其中药敏试验标准2023中文版是根据最新的研究成果和技术进展制定的。
本文将对药敏试验标准2023中文版进行详细的介绍和解读。
药敏试验标准2023中文版的编制目的是为了规范药敏试验的操作流程和结果解读，提高药敏试验的准确性和可靠性。
该标准主要包括实验室设备的要求、试验菌株的选取和保存、试验方法的描述和操作步骤、结果的解读和报告等内容。
标准中明确规定了实验室设备的要求，包括药敏试验仪器的选择和使用，培养基的配制和保存等。
这些要求旨在确保试验条件的一致性和稳定性，减少实验误差和干扰因素的影响。
试验菌株的选取和保存是药敏试验的基础工作。
标准中要求选择代表性的致病菌株进行试验，并建立菌株库进行保存。
菌株的保存要求包括菌株的鉴定、保存条件的规定以及保存时间的限制等。
标准中对试验方法的描述和操作步骤进行了详细的说明。
试验方法包括药物敏感试验和耐药性检测。
药物敏感试验的操作要求包括菌种的培养和接种、药物的选取和制备、药敏试纸的使用、结果的判读和记录等。
耐药性检测的操作要求包括耐药性基因的检测和分析等。
标准中还对结果的解读和报告进行了规定。
试验结果的解读要根据相关的标准和指南进行，包括抗菌药物的敏感性、中度耐药性和严重耐药性等级的定义。
在结果报告方面，标准要求提供明确的结果和建议，包括选择合适的抗菌药物治疗和用药方案的建议。
药敏试验标准2023中文版的发布对于提高药敏试验的质量和可靠性具有重要的指导作用。
通过规范实验操作和结果解读，可以减少实验误差和主观因素的干扰，提高评估结果的准确性和可靠性。
同时，该标准的使用也有助于不同实验室之间的结果比较和共享，促进药敏试验的标准化和一致性。
总之，药敏试验标准2023中文版是一项重要的药敏试验指南，对于规范药敏试验的操作流程和结果解读起到了重要的作用。
实验6：纸片扩散法测定微生物的药敏性
实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro（圆盘滤纸片法disc diffusion test）一、实验目的：1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素，能选择性的抑制或杀死其他微生物。
凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素，如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用，而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效，故青霉素就属于窄谱抗生素。
原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造，产生了许多半合成的青霉素，扩大了原来的抗菌范围，如氨苄青霉素，不但对革兰氏阳性菌有效，而且对革兰氏阴性菌也很有效，对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。
不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同，此外，试剂浓度、作用时间及环境条件不同，其效果也不同。
应用前需进行试验，灵活选择。
三、实验器材1、菌种：培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。
2、培养基和试剂：牛肉膏蛋白胨培养基，大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品：无菌平皿，无菌吸管（1ml），酒精灯，接种环，涂布棒，无菌滤纸片，无菌镊子，记号笔, 消毒棉球和培养箱。
四、实验步骤（以金黄色葡萄球菌操作为例）（1）菌液制备：将待检菌接种于普通营养琼脂平板，37℃培养16～18小时，然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落，悬于3ml生理盐水中，混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景，调整浊度与比浊管（0.5麦氏单位）相同。
（2）倒平板：将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板，注意平皿中培养基厚度均匀，倒3套平板。
（平板厚度均匀，滤纸片大小一致）（3）涂平板：无菌操作，用无菌棉棒儿蘸取菌液（金葡）。
将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出，涂布在MH琼脂平板整个平面三次，每次旋转60度，最后沿周边绕两圈，保证涂均匀。
离体抗菌药物敏感性试验常用的两种检测方法(上)
对于 由致病微 生物 引起 的水生动物疾病 ，采 用抗
菌类水产用兽药 治疗 是养殖 业者常用 的方法 。抗 菌类
（ １ ） 培养基 ：生化 试剂 商店 有售 各种培养 基 。不 同致病微 生物 的药敏试验可选择不 同的培养基 ，如做 嗜水气单胞菌 （ Ａ ｅ ｒ ｏ ｍ ｏ ｎ ａ ｓ ｈ ｙ ｄ ｒ ｏ ｐ ｈ ｉ ］ ａ ） 的药敏试验就 可选择 （ 脑心浸液琼脂） Ｂ Ｈ Ｉ Ａ 培养基 。 （ ２ ） 药 敏纸 片：可 以购 买或 者 自制 。 自制药 敏纸
片时 ，取新华 １ 号定性滤纸 ，用打 孔机打成 ６ ． ０ 毫米 直径 的 圆形 纸片 。取 圆形纸 片 ５ ０ 片放 入清 洁干燥 的
水产 用兽药在控制水 生动物 细菌性传染病 中起到 了非 常重要的作用 。但是 ，由于 养殖 过程 中不科学地 、盲 目地 滥用抗菌药 ，导致很 多致病性 微生物 已经产生 了 较 强的耐药性 ，而各种致病菌耐药 性的产 生使常用抗
一பைடு நூலகம்
准确 。因此 ，药敏纸片 间差和准确度都 一定要达 到标 准 。同时，为 了保持药敏纸片 中的药物活性 ，药敏纸 片 的ｐ Ｈ一般 要求 为 中性 ； 同 时将 其 置 放 低温 条 件
（ 一 １ Ｏ ℃） 下保存 ，避 免潮湿 。盛装药 敏纸片 的容器 白 低温 处取 出 时，应放 置在 室温 条件下 平衡 至少 １ ０ 分 钟后再打开包装容器 ，避免冷凝水影 响到药效 。
围形成 药物浓度梯度 。导致药敏 片周围能抑菌 的药物 浓度 范围内的致病微生物就不能 生长 ，而处于抑菌范 围外 的致病微 生物则可 以生长 ，因此 ，在 药敏 片周 围 形成透 明的抑菌 圈。不同抑菌药物 的抑菌 圈直 径因受 药物在琼脂 中扩 散速度 的影响而可能不 同，抑 菌圈的
药敏试验实验报告讨论(3篇)
第1篇一、引言药敏试验是临床医学中一项重要的微生物学实验，通过对细菌、真菌等病原微生物进行药物敏感性测试，为临床医生提供合理的抗菌药物选择依据，从而提高治疗效果，减少耐药菌的产生。
本文将对药敏试验的原理、方法、结果分析及临床应用等方面进行讨论。
二、药敏试验原理药敏试验的基本原理是利用药物对病原微生物的抑制作用来评估药物的治疗效果。
在体外实验条件下，将抗菌药物与病原微生物共同培养，观察药物的抑菌或杀菌效果。
根据药物抑制病原微生物生长的最低浓度（最小抑菌浓度，MIC）来判断药物对病原微生物的敏感性。
三、药敏试验方法1. 纸条扩散法：将含有不同浓度抗菌药物的纸条贴在琼脂平板上，待细菌生长后观察抑菌圈的大小，以判断药物的敏感性。
2. 稀释法：将抗菌药物按一定比例稀释后，与细菌混合培养，观察药物的抑菌效果。
3. 抗生素浓度梯度法：在琼脂平板上形成不同浓度的抗生素梯度，观察细菌在不同浓度下的生长情况。
4. 自动化技术：利用自动化仪器设备进行药敏试验，提高实验效率和准确性。
四、药敏试验结果分析1. 结果判断标准：根据CLSI（美国临床和实验室标准化协会）标准，将药敏试验结果分为敏感、中介、耐药三种。
（1）敏感：MIC≤某药物敏感阈值，表示该药物对病原微生物具有抑制作用。
（2）中介：某药物敏感阈值<MIC≤某药物耐药阈值，表示该药物对病原微生物的抑制作用较弱，需加大剂量或与其他药物联合使用。
（3）耐药：MIC>某药物耐药阈值，表示该药物对病原微生物无抑制作用。
2. 结果分析：根据药敏试验结果，评估抗菌药物对病原微生物的敏感性，为临床医生提供合理的治疗方案。
五、药敏试验在临床应用1. 抗菌药物选择：根据药敏试验结果，为临床医生提供合适的抗菌药物选择，提高治疗效果。
2. 监测耐药菌：通过药敏试验，及时发现耐药菌的产生，为临床治疗提供参考。
3. 个体化治疗：根据患者的药敏试验结果，制定个体化治疗方案，提高治疗效果。
微量肉汤稀释法药敏检测法
微量肉汤稀释法药敏检测以下实验方法主要适用于需氧菌及部分兼性厌氧菌（以大肠杆菌为例），微需养菌和厌氧菌的培养条件亟待摸索。
本实验方法，虽然操作较为繁琐，但是能够确切的得到细菌临床分离株对某种抗菌药物的MIC 值，以此作为临床用药指导的部分依据。
菌悬液的制备：①菌液培养：取待测菌保存液10µL加入1mLMH肉汤（可根据实际需要做调整），置37℃温箱过夜静止培养12小时左右；② OD600值测定：利用紫外分光光度仪测定OD值，MH 肉汤调整菌液浓度使其OD600值落在0.08-0.1之间，此时菌液浓度约108cfu/mL（大约需将培养菌液稀释7-10倍左右）；③上样菌液稀释：将待测菌液在步骤②所得稀释倍数的基础上再稀释1000倍，此时菌液浓度约105cfu/mL （即7000-10,000倍），此时的菌液即为上样菌悬液；注意：测定OD值所需菌液应在超净台中无菌取样，剩余菌液还需实验。
抗菌药物的制备：抗生素母液配制：参照NCCLS标准上抗菌药物相应的R（抗药）值制备待测抗菌药物（母液浓度要远远大于R值，至少160倍），分装于无菌小管置-20℃备用（附件一.常用抗生素溶液的配制）。
注意：无菌操作，抗菌药物的稀释液均需灭菌，溶解后还应过滤（滤膜孔径为0.22µm）药敏试验的操作：①将待测抗菌药物进行10倍稀释；②无菌96孔板第1-11列加入灭菌MH肉汤100µL（一药一板）；③无菌96孔板第1列加入10倍稀释的药液100µL，逐次倍比稀释至第11列（每孔液体终体积是100µL）；④无菌96孔板的每一孔加入待测菌液100µL，每孔液体终体积是200µL（由于整板都是一种药物，所以96孔板的每一行可进行一种细菌的药敏试验，为了保证实验的可靠性，每株菌进行一次重复，即一株菌做两行，一块板可做四株细菌的药敏试验）；⑤无菌96孔板的第12列上4孔加入200µL/孔灭菌MH肉汤作为阴性对照，第12列下4孔加入200µL/孔菌液（四株菌的菌液）作为阳性对照；⑥药物和菌液上样完毕后，盖好板盖，置37℃温箱培养18-22小时观察结果（结果的判读请参照附件二. 2009年NCCLS抗菌药物敏感性试验解释标准）。
clsim100 32药敏试验标准2023中文版
clsim100 32药敏试验标准2023中文版介绍：药敏试验是一种通过检测细菌或其他微生物对不同抗生素的敏感性来指导临床用药的测试方法。
药敏试验标准是为了确保药敏试验结果的准确性和可比性，临床医生可以根据这些结果来选择合适的抗生素进行治疗。
2023年版的药敏试验标准更新了之前版本的内容，添加了新的试验项目和方法，以更好地适应临床需求。
本文将对2023年版的药敏试验标准进行详细介绍。
一、试验范围：2023年版的药敏试验标准适用于细菌、真菌和其他微生物的药敏试验。
其中包括对常见病原体如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等的药敏试验，以及对罕见病原体如多重耐药菌株、病毒等的药敏试验。
该标准还适用于临床、科研和药品监管等领域。
二、试验项目：2023年版的药敏试验标准包括以下试验项目：1.最小抑菌浓度(MIC)测定：该项目通过测定细菌对抗生素的最低抑制浓度，来评估其对抗生素的敏感性。
MIC测定是药敏试验的核心内容之一。
2.抗生素敏感度测试：该项目通过对不同抗生素的浓度进行渐进性稀释，判断细菌对抗生素的敏感性水平。
3.抗菌圈直径测定：该项目通过测定抗生素在琼脂平板上形成的抗菌圈直径，来评估细菌对抗生素的敏感性。
在临床上，抗菌圈直径的大小通常用来判断细菌对抗生素的敏感性和耐药性。
4.酶联免疫吸附测定(ELISA)：该项目通过检测细菌分泌的特定酶或蛋白质的水平来评估其对抗生素的敏感性。
5.分子生物学检测：该项目通过检测细菌或真菌的特定基因或基因片段的存在与否，来评估其对抗生素的敏感性。
三、试验方法：2023年版的药敏试验标准规定了具体的试验方法，包括实验器材和试剂的准备、试验操作步骤、结果解读等。
标准强调了试验的操作规范和结果的准确性。
四、质量控制：标准强调了药敏试验的质量控制要求。
试验过程中需要使用合适的阳性对照菌株和阴性对照菌株来进行比对和验证。
质控菌株的选取和保存也在标准中有所规定。
五、结果解读和报告：标准对试验结果的解读和报告也进行了明确规定。
抗菌药物敏感性试验
三、浓度梯度纸条扩散法药敏试验
又称E试验（E test），融合了纸片法操 作简单和稀释法可定量的有点，也适用于慢生 长菌。但成本贵。
药敏纸片换成特制的药敏纸条，培养后读 取细菌停止生长处在纸条上相应的药物浓度指 示值，即为该药物对该试验菌的MIC值。
三、浓度梯度纸条扩散法药敏试验
细菌生长区
E test 塑料
一、β-内酰胺酶的检测
2、超光谱β-内酰胺酶的检测
超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）由革兰氏 阴性杆菌产生，质粒编码，活性可被β-内酰 胺酶抑制剂（如克拉维酸）抑制。包括筛查 试验和确认试验。
ESBLs阳性提示该菌可能对青霉素类、头 孢类和单环抗生素耐药。
临床上需常规检测的细菌包括大肠埃希 菌、肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌和奇异变 形杆菌。
二、药敏试验常用抗菌药物 的选择与分组
（一）常用抗菌药物 β-内酰胺类、糖肽类、氨基苷类、大环
内酯类、四环素类、喹诺酮类、磺胺类、甲 氧苄氨嘧啶等。
二、药敏试验常用抗菌药物 的选择与分组
• β-内酰胺类抗生素（β-lactams）系指 化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗 生素，包括青霉素与头孢菌素，碳青霉烯 类和单环类，以及β-内酰胺酶抑制剂 （克拉维酸、舒巴坦和三唑巴坦）的复方 制剂等。抗菌机制是抑制细菌的细胞壁合 成。
• 此类抗生素具有杀菌活性强、毒性低、适 应证广及临床疗效好的优点。
二、药敏试验常用抗菌药物 的选择与分组
青霉素和头孢菌素类的基本结构
二、药敏试验常用抗菌药物 的选择与分组
（二） 抗菌药物的选择原则 1.致病菌的固有耐药特点 革兰氏阴性杆菌对万古霉素均耐药。 革兰氏阳性球菌对氨曲南固有耐药。 2.本地流行株的耐药谱和耐药趋势
药敏试验(扩散法)操作方法
药液的制备（用于商品药的试验）：
按兽药说明书(或标签)上标明的治疗量的10-20倍比例配制药液。 如某药品：100g兑水100kg，表明该药治疗量为1g兑水1L，配制 药液时就是1g加50-100ml水或1L水加10-20g药品，即为配制药敏 片所用的药液浓度。
抗菌药的稀释剂通常用纯化水。
99.5ml
将二液混合，置螺口试管中，放室温暗处保存。用前混匀。有效 期为6个月。
7
1、培养基
MH肉汤（MHB） Mueller-Hinton Broth 用途：用于抗生素敏感试验 配方：（g/L）
牛肉粉
2.0
可溶性淀粉
1.5
酸水解酪蛋白
17.5
pH值 7.4 ± 0.2
25℃
原理：牛肉粉和酸水解酪蛋白提 供氮源、维生素和氨基酸；可溶 性淀粉吸收有毒的代谢产物。
说明：
不同厂家标示成分及含量相同的成品制剂在用成品做成药敏时常出现显著差 异（包括同一厂家生产）
由于在进行成品制作时常加入一定量的辅助成份，其对药敏试验结果常造成 较大影响，所以成品药敏试验结果并不能完全显示成品的真实结果。
不能用单药的药敏结果代替成药进行用药。（标示与真实成份及含量有很大 差别）
简易药敏片的制法
纸片的准备：
1、取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆 形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中， 瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后， 放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。
2、药片吸水量的测定 在上述药片用微量移液器进行滴 加蒸馏水，最可使药片完全浸透又不滴水为宜，最终计 算出每片药片的吸水量。一般常用直经6mm的定性滤纸 药片吸水量为0.01ml。
结核菌药物敏感性测定
结核菌药物敏感性测定标准化操作及质量保证手册国家结核病参比实验室2010年3月前言结核病细菌学检查是结核病控制规划重要的组成部分，随着现代结核病控制策略（DOTS）在我国的广泛实施，以及结核病控制三大目标的全面实现，结核病防治政策与技术策略有了很大的发展，在继续扩展高质量的DOTS的基础上，积极应对耐多药肺结核（MDR-TB）、结核菌/艾滋病病毒（TB/HIV）和其他挑战。
为满足当前结核病防治工作的需要，结核病实验室的工作任务也从之前的以痰涂片镜检发现传染性肺结核病人为重点，扩展到细菌学诊断、耐药结核病诊断等更加广泛的服务领域。
结核分枝杆菌药物敏感性测定（简称）是耐（多）药结核病防治中必不可少的重要工具，其主要作用是诊断耐药结核病、选择和调整耐药结核病治疗方案、开展耐药监测以了解某一地区结核分枝杆菌的耐药水平。
目前耐多药结核病规划性管理（PMDRTB）已在我国部分地区开展了试点，并将以较快的速度在全国扩展。
但在我国公共卫生领域，分枝杆菌药敏试验开展得并不普遍，大部分结核病防治机构的结核病实验室没有相应的经验和技术，缺乏系统的标准化文件，存在标准不一致、操作不规范、质量良莠不齐的问题。
为进一步规范药敏试验的操作，保证工作质量和试验人员安全，国家结核病参比实验室与世界卫生组织合作，编制了本册《结核分枝杆菌药物敏感性测定标准化操作手册》，详细描述结核菌药敏试验各个过程的操作程序。
目前世界卫生组织推荐的药敏试验方法包括比例法、绝对浓度法和液体培养法。
其中比例法为目前我国流行病学监测和耐多药结核病规划管理项目所采用的方法，将在本手册中重点介绍。
绝对浓度法是我国三十多年沿用的药敏试验方法，为目前我国大多数结核病专科医院常规使用的用于临床检测的方法，本手册也有独立章节进行描述，方法引自《中国防痨协会结核病诊断实验室检验规程》。
本手册参考世界卫生组织系列的结核病实验室标准化操作程序（SOP）的主要框架和内容，按照我国结核病规划的实际情况和具体要求进行了调整，并通过在部分省份的试点进一步进行了修改和完善，使之更具有可操作性，供开展药敏试验的实验室使用。
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临床各种属细菌的药敏试验方法和试验条件
1.采用自动化仪器法和梯度扩散法等进行药敏试验需遵照厂家说明书。
自动化仪器法通常只能用于常见细菌，而梯度扩散法可用于苛养菌和少见菌的药敏试验，但需要获得相关管理部门的批件。
2.检测达托霉素时，培养基加入50 mg/L的钙离子；检测磷霉素时，加入25 mg/L的6-磷酸葡萄糖；检测达巴万星和奥利万星时，加入0.002%的聚山梨醇酯-80。
3.纸片扩散法、琼脂稀释法和肉汤稀释法检测苯唑西林和万古霉素的敏感性宜孵育24 h。
纸片扩散法检测头孢西丁的敏感性和凝固酶阴性葡萄球菌对所有抗菌药物的敏感性孵育24 h。
4.检测葡萄球菌属对苯唑西林的敏感性，须在CAMHB加入2%NaCl。
5.嗜血杆菌属若检测甲氧苄啶或磺胺甲噁唑，培养基中加入0.2 IU胸苷磷酸化酶。
HTM 肉汤为CAMHB中加入15 mg/L的β-NAD、15 mg/L的牛血红素或猪血红素、5 g/L的酵母提取物。
6.淋病奈瑟菌可采用CAMHB或pH
7.0 的0.9%的磷酸盐缓冲液配制菌悬液。
纸片扩散法1%的特定生长添加剂不宜含半胱氨酸；琼脂稀释法检测碳青霉烯类和克拉维酸时宜含半胱氨酸；检测其他抗菌药物，是否含有半胱氨酸对检测结果影响不大。
特定生长添加剂配制方法如下：将1.1 g左旋胱氨酸、0.03 g盐酸鸟嘌呤、0.003 g盐酸硫胺素、0.013 g对氨基苯甲酸、0.01 g维生素B12、0.1 g焦磷酸硫胺素、0.25 gNAD、1 g腺嘌呤、10 g左旋谷氨酰胺、100 g葡萄糖、0.02 g硝酸铁和25.9 g左旋半胱氨酸溶于1L无菌去离子水中，搅拌混匀。
7.嗜盐弧菌属采用0.85%NaCl溶液制备0.5 麦氏单位标准菌悬液。
8.幽门螺杆菌采用0.85%NaCl溶液配制成2.0 麦氏浊度单位菌悬液。
9.潜在生物恐怖病原菌送至生物安全II级BSL-2 以上的实验室进行操作。
对极易产生气溶胶的操作在BSL-3 实验室进行。
10.土拉弗朗西斯菌：特定生长添加剂配制方法如下，将25.9 g左旋盐酸半胱氨酸、1.1 g 左旋半胱氨酸、1 g腺嘌呤、0.03 g盐酸鸟嘌呤、0.01 g维生素B12、0.1 g焦磷酸硫胺素、0.25 g烟酰胺腺嘌呤二核苷酸、10 g左旋谷氨酰胺、0.02 g.硝酸铁、100 g葡萄糖、3 mg盐酸硫胺素和13 mg对氨基苯甲酸溶于1L无菌去离子水中，搅拌混匀。