细胞生物学实验教案09级(10-11)范文

2010-2011细胞生物学实验（09级）实验目录

实验一细胞形态结构观察和显微测量

实验二细胞膜的渗透性

实验三线粒体和细胞核的分离

实验四细胞的吞噬活动

实验五细胞内DNA的显示

实验六活体染色是细胞器（液泡系和线粒体）

实验七细胞骨架的观察

试验八细胞凋亡的观察

实验九细胞的凝聚反应

实验一、细胞形态结构的观察

一、实验目的：

1、熟悉动物细胞、植物细胞的基本形态结构，掌握二者之间的区别

2、掌握临时装片的制作方法

3、掌握显微测量的原理和方法

二、实验原理：

细胞是生物体结构功能的基本单位，其形态与功能相适应。不同类型的细胞具有不同的大小、形态和结构，以适应其功能。通过制作临时装片，可以观察很多细胞的结构，并借助测微尺测量细胞直径，进而获得细胞的体积。

三、实验仪器、试剂及材料：

仪器：光学显微镜（24台：台/人），载玻片、盖玻片（4套/人）、剪刀（1把）、镊子（1把）、牙签（50根）、滴管（个/组）

试剂：1%碘液、瑞特染液

材料：洋葱（红辣椒、兰草）、血细胞悬液、口腔上皮细胞

四、实验步骤：

1.洋葱鳞茎表皮细胞的观察（必做）

在载玻片中央滴一滴1%碘液（或清水）用剪刀在洋葱鳞茎叶外表面画一个1mm2的方框用镊子撕下表皮在碘液（清水中铺平）用吸水纸吸去多余碘液（也可帮助排除气泡）显微镜下观察（必须找到细胞内呈紫色的细胞，有核最佳）

质壁分离实验确认细胞壁：从载物台上取下装片，在盖玻片的一侧，滴入0.3g/mL的蔗糖溶液，另一侧用吸水纸重复吸引几次。在高倍镜下观察，可见到本来在各个细胞交界的地方都是紫色的，此时可见在细胞的角落处开始变淡，随着可见液泡变小，颜色变深，慢慢的从边角到四周完全分离开来。

质壁分离复原实验：1处理：取下临时装片，在一侧滴入清水，另一侧再用吸水纸重复几次吸引，以确保洋葱表皮细胞完全浸在几乎是清水中；2观察：先在低倍镜找到一个现象质壁分离比较明显的细胞，然后换用高倍镜观察，可见和刚才相反的现象，中央液泡渐渐变大，颜色变浅，最后原生质层又和细胞壁紧紧地贴在一起。

2.人口腔黏膜上皮细胞的观察

在载玻片中央滴一滴1%碘液用牙签刮取上皮细胞在碘液中搅动分散细胞

染色1分钟盖上盖玻片观察

3.鸡红细胞观察

在载玻片右端滴一滴血细胞稀释液用另一张载玻片以30~45度角（两玻片夹角）推移血液成均匀薄膜滴一滴瑞特染液染色3分钟自来水洗掉染液，晾干

观察

4.显微测量（至少测量一种细胞）

（1）、原理：测微尺由目镜测微尺和镜台测微尺组成，目镜测微尺位于目镜内，为玻璃圆片，有刻度，但不知道每个刻度所代表的数值，这个数值是多少通过镜台测微尺确定）；镜

台测微尺是一块载玻片，中央圆形区域内有一带刻度的直线，长度为1mm,一般分为100格。实验中需要核对一下。无误时每一小格代表10μm。

（2）、测量：

A、将镜台测微尺放入载物台上，转动目镜，使二者平行。选择一处让二者重合，然后向右侧寻找再次重合处，记下二者的数值，并按照目镜测微尺和镜台测微尺的精度关系换算目镜测微尺每小格实际代表的刻度值。

B、将镜台测微尺取下，换上鸡血细胞或其他装片，用目镜测微尺测量出其长度和宽度。

C、应用V= 4/3Πab2（(a为长半径，b为短半径)计算出鸡血细胞的体积。

注意：测量细胞时的放大倍数必须与校正测微尺时的显微镜倍数一致，否则需要重新矫正测微尺的刻度。测量至少需要测量3个以上细胞，取平均值。

五、思考题

1. 结合实验分析细胞形态结构的特点及其与功能的适应性。

2. 如何使用测微尺？你会测量其他细胞如细菌的大小吗？

实验二、细胞膜的渗透性

一、实验目的

1、了解细胞膜的渗透性

2、了解各类物质进入细胞的速度。

二、实验原理：

细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。各种物质出入细胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。将红细胞放在某些等渗盐溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，膜两侧的渗透压平衡会发生改变，也会发生溶血现象。因此，发生溶血现象所需时间长短可作为测量物质进入红细胞速度的一种指标。本实验选用红细胞作为细胞膜透性的实验材料，将其放入不同的介质溶液中，观察红细胞的变化。

三、实验仪器、试剂及材料：

1. 仪器：离心机（一台）、10ml 试管（11只）、试管架（1个）、10ml 移液管（11支）、洗耳球（11个）、eppendorf离心管（一包）、移液枪一套、枪头、滴管（11只）、记号笔等。

2. 试剂

（1）．Alsever 溶液

葡萄糖 2.05g

柠檬酸钠(Na9C6H5O7.2H2O) 0.89g

氯化钠0.42g

蒸馏水100ml

调PH 至7.2，过滤灭菌或高压灭菌10min，置4℃冰箱保存。

（2）、0.128 mol/L NaCl、0.128 mol/L NH4Cl、0.128 mol/L NH4AC、0.128 mol/L NaNO3、

0.09 mol/L Na2SO4、0.09 mol/L 草酸铵、0.32 mol/L 葡萄糖、0.32 mol/L 甘油、

0.32 mol/L 乙醇、0.32 mol/L 正丙醇、蒸馏水