人骨髓间充质干细胞体外分离培养及其生物学特性

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密度梯度离心与贴壁法分离培养免骨髓间充质干细胞及其生物学特性观察

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人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞体外共培养的研究

Ｕｉｒｉ，ｉｎｆｎ５０７Ｃｉ．ｏｒｓｏｄｎｕｏ：ＮｉｂｉＥｍｉｙｎｎ＠１６ｏ）ｎｖｓｙＨｅｏｇａｇ１４０，ｈｎＣｒｐｎｉａｔｒＹｅｔｌｉａｅｇｈｎｅ（－ａｌｉ—ｂ２．ｍ．ｇ：ｃ【ｂｔａｔＯｂｅｔｅＴｂｅｖｈｆｃｓｆＯｃｈｒｏｕｎｂｎｒｗｍｅｅｃｙｌｔｍｌｅｓｆＢＣ）Ａｓｒｃ】ｊｃｉｏｏｓｒｅｔｅｅｆｔｏ — ｕｕｅｆｍａｏｅｍａｒｓｎｈｍａｓｏａｃｌＭＳｓｖｅＣｈｏｒｌｈ
Ｎｅｏｐｔ（ｓｔｔ）ＣＭＳＰＭＣＢｉｎ００１Ｃｉａ２Ｄｎａａｐｔ，ＪｍｕｉｌｉＳｒｒＨｓｉｌＩｔｕ，Ａ，Ｕ，ｅｉ１０４，ｈｎ，ｅｔＨｉｓｃｇｙａｎｉｅｊｇ＂ｌｓａｌｉｓａ
刘春晓吴欢欢马慧雨康宁曹谊林肖苒尹宁北
【要】目的摘
观察人骨髓间充质干细胞（ｕｎｂｎｒｗｍｓｎｈｍｌｔｍａｃｌ，ＢＣ）脐静脉内皮细胞ＨｍａｏｅｍａｒｅｅｃｙａｓｏｌｅｓｈＭＳｓ与ｏｒｌ
组织工程与重建外科杂志
２１０１年４月第７卷第２期
・
６・５
・
论著・
ｄｉ０３６￣ｉｎ１７ — ３４２１．２０ｏ：．９．ｓ．６３０６．００．２１９ｓ１０
人骨髓间充质干细胞与脐静脉内皮细胞体外共培养的研究

人脐带间充质干细胞体外分离、培养、扩增方法及生物学特性研究

ＡＳＲＣＯｂｅｔｅＴｏｅｔｂｉｈａｍｅｈｄｔｅａａｅｍｅｅｃｙｌｓｅｃｌｒｍｕｎＢＴＡＴ：ｊｃｉｖｓａｌｔｏｏｓｐｒｔｓｓｎｈｍａｔｍｅｌｆｏｈｍａｓ
ｕｍｂｌｃ１ｃｄ（ｉｉａｏｒＵＣ＿ＳＣｓｃｌｕｒＣ＿ＳｎｖｉｒＭ），ｕｔｅＵＭＣｓｉｔｏ，ａｔｙｉｓｉｌｉａｃａａｔｒｓｉｓｎｄｓｕｄｔｂｏｏｇｃ１ｈｒｃｅｉｔｃ．ＭｅｈｄＭＳｒｅａａｅｒｍｔｏｓＣｓｗｅｅｓｐｒｔｄｆｏｈｕｍａｍｂｌｃ１ｃｄｗｉｈｔｎｚｍｅｍｅｈｄａｘｎｎｕｉｉａｏｒｔｗｏｅｙｔｏｎｄｅｐａ — ｄｉｕｔｅｎｖｔｏｎｇｃｌｕｒｄｉｉｒ．Ｇｒｗｔｕｒｅｅｌｒｒｗｎａｕｆｃｎｉｅｒｅｅｔｄｗｉｈｏｈｃｖｓｏｆｃｌｓｗｅｅｄａｎｄｓｒａｅａｔｇｎｓｗｅｅｄｔｃｅｔｆｏｗｙｏｍｅｒ．ｔｍｏｒｇｉｉｉｓｏｆｃｌｓｗｅｅｔｓｅｂｓｆｇｒｃｏｎｔｏｄｌｃｔｔｙｕｉｅｃｔｅｅｌｒｅｔｄｙｏｔａａｌｎｉｇｍｅｈ．ＲｅｕｔＴｈｅｓｌｓｍｅｈｓｏｕｔｅａｄｅｐａｉｎｏｆＵＣ＿ＣｓｉｉｒｒｓａｉｈｅｔｏｄｆｃｌｕｒｎｘｎｓｏＭＳｎｖｔｏｗｅｅｅｔｂｌｓｄ．Ａｄｈｓｖｅｃｌｓｗｅｅａ１ｅｉｅｌｒｌｐｉｉｏＳＣ－ｅａｅａｉｅｓ，ｓｈｓＣＤ２９，ＣＤ１５，ＣＤ４４，ａｄＣＤ１ｏｓｔｖｅｆｒＭｒｌｔｄｎｔｇｎｕｃａ０ｎ３，ｂｎｅｔｖｏｕｔｇａｉｅｆｒＣＤ３４，ＣＤ４５，ＣＤ３１，ＣＤ１０６，ａＨＬＡ— ｎｄＤＲ．Ｍｕｈｉｃｔｏｎｏｆｅｌｓ０ｐｉａｉｃｌｓｗａ３ｈｏｕｓＣｅ１ｙｌｒ．ｌｃｃｅ

人骨髓间充质干细胞体外分离培养方法的比较研究

关键词问充质干细胞；髓；胞培养骨细
中图分类号：３１Ｒ３．２
Ａｏｍｐａｒｉｔｃａｔｖｅｓｕｄｙｏｗｏｕｔｅｍｅｈｄｓｏｍａｂｆｔｃｌｕｒｔｏｆｈｕｎｏｎｅｎｌｒｗｅｅｈｙａｔｍｅｌａｒｏｍｓｎｃｍｌｓｅｃｌｓ
南昌，３０６３００）
摘要目的比较Ｆｃｌ密度梯度离心法分离人骨髓间充质干细胞（ｅｅｃｙａｅｅｓＭＳｓｉｏｌｍｓｎｈｍｓｍｃｌ。Ｃ）ｌｔｌ￣全骨髓培养法之间的差异。以
期建立一种简便、用的基于临床移植需要的ＭＳｓ离方法。方法分别应用上述两种方法分离ＭＳｓ比较用两种方法的细实Ｃ分Ｃ。胞形态、Ｃ细胞得率及以及细胞表面标志的差异。结果两种方法均能有效培养出骨髓ＭＳｓ且获得的第二代ＭＳｓ胞形ＭＳｓＣ。Ｃ细态无明显差异。胞形态均一。长梭形或三角形。ｍ骨髓细胞分离培养后。ｉ０细为５ｌＦｃｕ密度梯度离心法获得的ＭＳｓ胞总数显著Ｃ细小于全骨髓培养法（２６９ＰＯ０）ｉｌ密度梯度离心法与全骨髓培养法获得的第二代ＭＣＤ９Ｃ０、Ｄ１５Ｃ３￡．。＜．１。Ｆｃｌ：３ｏＳｓ２、Ｄ１５Ｃ０、Ｄ４阳Ｃ
ＡｂｔｃｂｅｔｅＴｏａｅｄｎｉｒｄｅｔｅｔｆｇｔｎｕｉｇｆｏｎｅｗｏｏｅｍａｒｅｏ８ｏｕｅｓｅｔｅｓａｔｊｃｖｏｃｍｐｒｅｓｙｇｉｎｃｎｉａｏｓｃｌａｄｔｈｌｂｎｒｗｍｔｄａｌｔｒｐｃｖｌｒＯｉｔａｒｕｉｎｉｌｈｅ＇ｏｈｓｓｅｉｙ

isct_间充质干细胞_鉴定标准_理论说明

isct 间充质干细胞鉴定标准理论说明1. 引言1.1 概述在细胞治疗和再生医学领域，间充质干细胞（ISCT）作为一种重要的细胞资源，引起了广泛的关注。

ISCT具有多向分化潜能、免疫调节作用及促进组织修复的能力，被认为是一种理想的干细胞来源。

然而，由于缺乏统一和规范的鉴定标准，在实践应用中存在着不确定性和挑战。

1.2 文章结构本文将对ISCT进行深入探讨，并重点介绍其鉴定标准的理论说明。

文章包括以下几个部分：引言、ISCT间充质干细胞、鉴定标准理论说明、实践应用与挑战以及结论与展望。

1.3 目的本文旨在系统梳理当前关于ISCT鉴定标准的理论知识，并探讨该领域面临的实践应用和挑战。

通过对ISCT表面标记物使用、功能性特征评估方法以及分子生物学检测手段应用等方面原理的介绍，希望能够提供给读者一个全面的理论基础，并展望ISCT鉴定标准未来的发展方向。

同时，对于临床转化前景展望、存在的问题与挑战以及解决方案和研究进展等方面也将进行讨论。

以上是本文“1. 引言”部分的详细内容。

该部分概述了文章的主题和目的，并介绍了本文的结构。

接下来将继续展开描述ISCT间充质干细胞及其鉴定标准相关内容。

2. ISCT间充质干细胞2.1 定义与特征ISCT（国际干细胞治疗学会）定义了间充质干细胞（MSCs）作为一类多潜能的成体干细胞，具有自我更新和多向分化的能力。

这些细胞可以从不同来源获得，包括骨髓、脐带血、脂肪组织等。

ISCT认为，MSCs应满足以下三个基本标准：1) 在培养条件下，MSCs应具备黏附能力；2) MSCs应表达特定的表面标记物，如CD73、CD90和CD105，并且在同时应该缺乏（或仅有极低水平）CD34、CD45、HLA-DR等造血和免疫相关标记物；3) MSCs应能够分化为成骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等不同种类的细胞。

此外，ISCT提出了额外的功能性特点来进一步确认MSCs。

这些功能性特点包括：1) 免疫调节作用：MSCs可以抑制免疫反应，并通过调节T淋巴细胞、B 淋巴细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞的功能来达到免疫调节作用；2) 细胞迁移能力：MSCs具有从注射部位向受损组织迁移的能力；3) 分泌多种生物活性分子：MSCs可以产生多种生长因子、细胞因子和表观遗传调控因子，对损伤修复和组织再生具有重要作用。

人骨髓间充质干细胞体外成软骨诱导研究

ｐ（Ｇ — 。是诱导ＭＳｓ向软骨分化的关键性因素，０。ＴＦｐ）Ｃ１Ｌ是其最佳诱导剂量。
Ｌ组软骨细
胞标志物表达最强。结论：ＭＣ有旺盛的增殖能力。ＭＣ在一定诱导条件下可以向软骨细胞分化，化生长因子ＳｓＳｓ转［关键词］骨髓问充质干细胞；成软骨；转化生长因子ｐ。［中图分类号］Ｒ２．３９２［文献标志码］Ａ［文章编号］１７ —７８（０８０６１７３２０）２—０１０ｌ８— ４
维普资讯
第１８卷第２期
２００８年３月
江苏大学学报（学版）医ＪｕｎｌｏＪｎｓｎｖｒｉ（ｄｃｅＥｉｏ）ｏｒａｆｉｇｕＵｉｅｓｙＭｅｉｉｄｉａｔｎｔｎ
Ｖｏ．８Ｎｏ２１１．
ＹＮＱ—ｉｎＳＥｉｃｅｇ，ＡｏｇｈｉＩｉａｇ，ＨＮＴ．ｎＨＵＮＧＹｎ．ｕ。ｘｅｈ
（．ｃｏｌｆｄｃｎ，ｉｎｓｎｖｒｉ，ｈｎｉｇＪｎｓ１０３２Ｄｐｒｎｆｒｏａｄｃ，ｔｅＡｆｉｔｏｐｔｆｉｇｕＵｉ１ＳｈｏｏｉｅＪｇｕＵｉｓｙＺｅｊｎｉｇｕ２２１；．ｅａｔｔｔｐｅｉｈｆｌｅＨｓｉｌａｓｎ．ＭｅｉａｅｔａａｍｅｏＯｈｓｉａｄａｏＪｎｖｒｔ，ｈｎｉｎｉｇｕ２２０，ｈｎ）ｅｓｙＺｅｊｇＪａｓ１０１Ｃｉａｉａｎ
Ｃｕｔｅａｈｎｄ０ｅｅｉｆｍｅｅｃｍａｔｍｅｌｅｉｅｌｕｒｎｄｃ０ｒｇｎｓｓｏｓｎｈｙｌｓｅｃｌｄｒｖｄｓｆｏｕｍａｎａｒｗｎｖｔｏｒｍｈｎｂｏｅｍｒｏｉｉｒ

再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养

ｔｎｗｓｉｖｓｉａｅｙｇｏｈｃｒｅｉａｎｅｔｔｄｂｒｗｔｕｖ．ＲｅｕｔＡｌａｉｏｄａｘｓａｎｏａｃｕｎｄｓａｄｏｌｒｄｓａｎｗｅｅｐｓ— ｏｇｓｌｓｉｒｎＢｒｅｕｔｉｆｃｌｉｍｏｕｎｉｅｔｉｒｏｉｚ
维普资讯
・
６６・７
Ｉ临床儿科杂志第２６卷第８期２００８年８月ＪＣｉｅｉｒＶ１６Ｎ．ｇ２０ｌＰｄａｏ．ｏ８Ａｕ．０８ｎｔ２
・
论
著・
再生障碍性贫血患儿骨髓间充质干细胞分离及培养
能力减低。结论再障患儿骨髓问充质干细胞存在异常，可能在再障发病机制中起着重要作用。
Ｃ床儿科杂志。Ｏ８２（）６６－９临２０。６ｓ：７－７］６
关键词：再生障碍性贫血；骨髓；间充质干细胞；生长曲线；
ｔｖ．ＩｏａｅｅｌｈｏｄｎｅａｉｅｉｅｓｌｔｄｃｌｓｓｗｅｇｔｖＣＤ３４ａｄｎＣＤ４５，ｐｏｉｉｅＣＤ７ａｄｓｔｖ３ｎＣＤ９０．Ｄｅｒａｅｇｏｈｄｉｇａｅｓｉｌｃｅｓｄｒｗｔｕｒｎｌｔｅｒａｓｂｕｖｔｏｏｇｏｈｕｒｅｕｃｈｉａｉｎｆｒｗｔｃｖｗａｏｓｒｅｉｐｔｅｔ．ＣｏｎｃｕｓｏＩｏａｅｃｌｓ，ｗｈｉｈｓｂｅｖｄｎａｉｎｓｌｉｎｓｓｌｔｄｅｌｃｄｉｅｅｔａｅｉｔｆｒｎｉｔｄｎｏｆ

糖尿病大鼠来源骨髓间充质干细胞体外培养观察及其生物学特性

糖尿病大鼠来源骨髓间充质干细胞体外培养观察及其生物学特性（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）作者：金培峰，张浩，郑亮承，蒋成榜，孙成超【摘要】目的：研究糖尿病是否会导致在体外培养条件下自体骨髓间充质干细胞的增殖、分泌和抗凋亡能力的改变。

方法：利用链脲佐菌素（STZ）诱导制作成年大鼠糖尿病模型（n=6），正常大鼠作为对照组（n=6），分别于体外利用全骨髓贴壁法来扩增和纯化骨髓间充质干细胞后，取生长良好的第2代细胞作为本实验的研究对象。

采用Cell Count kit-8（CCK-8）分别绘制两组细胞的生长曲线来评价增殖能力；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血管内皮生长因子（VEGF）和胰岛素样生长因子-1（IGF-1）的分泌量；应用Hoechst33342染色和膜联蛋白V/PI双染流式细胞术观察细胞在低氧无血清条件下的抗凋亡能力。

结果：来源于糖尿病大鼠的骨髓间充质干细胞的增殖较正常的大鼠显著性减慢（P0.01），在形态学上则表现为较正常的细胞更扁平。

VEGF和IGF-1的分泌量较正常大鼠来源的明显降低，其中VEGF的分泌量为（80.7±13.1）pg/mL和（67.9±12.3）pg/mL（P 0.05），IGF-1的分泌量分别为（374.8±41.2）pg/mL 和（281.8±26.8）pg/mL（P 0.01）。

在低氧无血清条件下，糖尿病来源的干细胞抗凋亡能力显著性降低，两组早期细胞凋亡指数分别为28.7±3.4和37.1±2.42（P 0.01）。

结论：糖尿病大鼠来源的骨髓间充质干细胞可以成功地在体外进行增殖培养，但是其在增殖能力、分泌、抗凋亡能力等一系列生物学性状上有不同程度的损害。

【关键词】糖尿病间充质干细胞VEGF 细胞凋亡增殖大鼠Abstract: Objective: To study the effect of diabetic inner environment on the biological properties of marrow mesenchymal stem cells derived from bone(BMSCs). Methods: BMSCs were harvested from the normal and diabetic rats induced by streptozotocin (STZ). Cell proliferation was evaluated using cell counting kit-8 (CCK-8) assay. The secretory volume of vascular endothelial growth factor (VEGF) and insulin-like growth factor (IGF-1) were measured by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and the anti-apoptosis capacity of the cell under the hypoxia and serum deprivation (hypoxia/SD) was detected by Hoechst33342 staining and annexin V/PI dual-color flow cytometry. Results: BMSCs from the diabetic rats induced by STZ could be successfully harvested and expanded in vitro. However they showed more spread-out and flattened appearance and larger size. The proliferative ability of diabetic rats derived from BMSCs weresignificantly decreased compared with the normal rats (P 0.01). In addition，similar results were also presented in the cytokines (VEGF and IGF-1) release （80.7±13.1 vs 67.9±12.3 pg/mL P 0.05，374.8±41.2 vs 281.8±26.8 pg/mL P 0.01，respectively）and the ability of anti-apoptosis under hypoxia/SD (P 0.01). Conclusion: BMSCs derived from diabtetic rats can be successfully cultured in vitro. The ability of series of a biological properties in proliferation，paracrine and anti-apoptosis have been impaired in different degrees.Key words: diabetes；mesenchymal stem cells；vascular endothelial growth factor；apoptosis；proliferation；rats干细胞治疗心肌梗死已被证实是一种较有前景的治疗方法。

骨髓间充质干细胞膜片的设备制作方法及其应用与设计方案

本技术公开了骨髓间充质干细胞膜片的制备方法及其在治疗心肌缺血再灌注损伤上的应用。

利用密度梯度离心、细胞贴壁和细胞冻存的方法提取扩增细胞，可以获得足够量的未分化的较为单一的MSCs，增殖能力较强，纯度高，可以作为组织工程的种子细胞，为组织工程血管的构建提供依据。

而且较Reyes方法去除了免疫磁珠选择的步骤，在实际应用中减少了昂贵的费用，操作中减少了污染的机会。

权利要求书1.骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1：用20ml注射器吸取10ml骨髓液，将细胞悬液贴壁缓慢注入到预置有等体积密度为1.077kg/L的人淋巴细胞分离液的试管内，使两者间形成清晰的界面；S2：以2500r/min离心20min，吸取中间的乳白色云雾状单核细胞层，PBS漂洗，1500r/min离心10min，弃上清，加入含15％FBSDMEM-LG培养液10ml，制成单细胞悬液；S3：以3×105/cm2密度接种于50ml培养皿内，置入37℃、5％CO2饱和湿度条件下培养，4d后首次半量换液，将未贴壁的细胞全部弃掉，以后每2～3d全量换液一次；S4：待细胞汇合成单层后，以0.25％胰蛋白酶(含0.02％EDTA)消化，即得到原代MSCs悬液，再以1×104/cm2的密度以1：2传代培养以形成细胞膜片；S5：倒置显微镜观察细胞生长；S6：绘制细胞生长曲线；S7：测定贴壁率并绘制贴壁率曲线。

2.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S1中，注射器内含稀释的肝素钠2500U/ml约0.5ml。

3.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S1中，骨髓液的吸取方法为选髂后上棘穿刺点，无菌条件下局部麻醉后骨髓穿刺针穿刺成功后拔出针芯，接含有5ml生理盐水和肝素(100U/ml)的10ml注射器穿刺抽取骨髓10ml。

4.根据权利要求1所述的骨髓间充质干细胞膜片的制备方法，其特征在于，在所述的S2中，用于离心的离心机为台式高速离心机。

骨髓间充质干细胞培养方法大全

一、四种方法简介及优缺点：骨髓间充质干细胞主要有4种体外分离方法：贴壁筛选法，密度梯度离心法，流式细胞仪分离法和免疫磁珠分离法。

贴壁筛选法是利用细胞贴壁时间及贴壁牢固性的不同逐步将非贴壁细胞和其它杂质细胞去除的一种简单易行的培养MSCS的方法。

贴壁分离培养法分离的MSCS能在体外培养条件下生长良好、可连续传代，体外培养扩增能力较强，其缺点是细胞纯度较低。

此方法简便，冲出骨髓直接培养，然后利用骨髓MSCS 贴壁生长特性，更换培养液逐步去处漂浮生长的造血系细胞即可获得较纯化的MSCS；而且骨髓中的造血干细胞能分泌生长因子和促贴壁物质，可促进MSCS 贴壁生长，因此全骨髓贴壁法更为可取。

密度梯度离心法梯度离心法的核心主要是基于密度梯度离心技术。

梯度离心法是根据骨髓中细胞成分的比重不同，使用淋巴细胞分离液提取单个核细胞，再进行贴壁培养，从而达到分离、纯化MSCS的目的。

Pittenger等的研究发现通过密度梯度离心分离培养的间充质干细胞在第一代时纯度可以达到95%。

常用的分离方法免疫磁珠法，是利用免疫学的技术分离MSCS，分离细胞的纯度高。

Phinney 用一种免疫耗损技术精确地将造血细胞系和内皮细胞系从基质细胞中分离出来，提供了一种能高效的分离纯化间充质干细胞的方法，但目前仍未筛选到真正特异性的细胞表面标记;而且，这两种分离方法的操作对细胞活性都有较大影响，造成MSCS损伤，出现增殖缓慢等问题，这些技术问题很大程度上限制了这两种方法的应用。

因此，如何能简便高效地获得均质性的间充质干细胞和细胞群仍需要继续探索。

分离细疫磁珠分离和流式细胞仪筛选的方法，不仅对细胞活性影响较大，而且操作复杂，价格昂贵。

然而，这些纯化间充质干细胞的方法比较复杂，一般仅限于在各自的实验室应用。

二、具体实验流程1. 免疫磁珠法分离纯化骨髓间充质干细胞：1 实验动物Sd大鼠2 试剂和仪器BSA、荧光标记小鼠抗体x、PE磁珠试剂盒、抗生物素磁珠、MiniMACS分离器及MS分离柱。

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成骨细胞分化能力，可作为骨组织工程的种子细胞。【键词】骨髓；问充质干细胞；细胞分化关
ＴｈｓｌｔｏｎａａｔｒｚｔｏｆＨｕａｎａｒｗｅｅｈｍａｔｍｌｓＺｅＩｏａｉｎａｄＣｈｒｃｅｉａｉｎｏｍｎＢｏｅＭｒｏＭｓｎｃｙｌＳｅＣｅｌＨＥＮ
方法分离人ＢＣ，经传代后细胞形态呈梭形，均匀一致。② Ｍ法测定细胞增殖和生长曲线ＭＳｓ分析结果显示ＢＣ在传代后经历潜伏期、ＭＳｓ对数生长期和平台期。流式细胞仪检测显示所获 ③
得的ＢＣ表面抗原标记高度一致。④ ＢＣ细胞周期检测结果为ＭＳｓ０Ｇ期１２．
ｏｍｅｅｃｙｌｔｍｅｌｄｒｖｄｆｍｈｍａｏｅｍａｏｈｆｓｎｈｍａｅｅｌｅｉｅｒｓｓｏｕｎｂｎｌｗ（ＢＭＳｓ）ＳｓｏｐｖｈｗａｏａｃｉｇＴＣ，Ｏａｔａｅｔｅｙｆｒｅｒｈｎｓ
ｔｅｎｗｕｃｆｅｄｃｌｏｅｔｓｅｅｇｎｅｉｇＭｅｈｄＢｎｒｏｒｓｉｄｆｏｉｕｏｈｅｓｒｅｏｅｅｌｉｂｎｓｕｎｉｅｒｎ．ｔｏｓｏｓｓｎｉｏｅｍａｒｗｗｅｅｉｐｒｍｉｍｆｎｅｒｌ
ｄｎｔｒ，ｎｎｃｅｒｅｌｗｅｅｓｌｔｄｂｅｓｔｒｄｅｔｅｔｆｇｔｎａｄｃｈｒｄｉｉｏＴｅｈｇｅｏａｏｓｍｏｏｕｌａｌｒｏａｅｙｄｎｉｇａｉｎｎｆｕａｉｎｕｕｅｖｔ．ｈｉｈｒｃｓｉｙｃｉｏｎｒｐｒｙｏｕｔｆｉＢＭＳｓｒｂａｎｄｂｅｐｎｅｄｅｅｔｅｌｎｍｏａｆｏａｈｒｎｅｌｒｐａｅｌ．３ＣｅｔｉｅｙｋｅｉｇｔｈｒｎｌａｄｒｗｅｏｈａｃｓｅｖｌｎｄｅｅｔｌｅｔｄｙＰｏｎｃｓｅ
％和Ｓ４６。⑤ 微管微丝免疫荧光染色结果显示，培养的ＢＣ具有良好的细胞骨架系统。期．％ＭＳｓ
⑥ 第７的ＢＣ染色体检测结果显示，被测标本有正常染色体数目（ｎ＝４，Ｘ，且未见代ＭＳｓ２６Ｙ）染色体异常。⑦成骨诱导后，Ｖｎｏｓ和茜素红染色均呈阳性。结论ａｓａｋ
国际医药卫生导报２０年第１０１６卷第Ｏ２期
ＩＭＨＧＮ，Ｊｎａｙ２１ａｕｒ００，Ｖ１１Ｎｏ０ｏ．６．２
・
科研课题・
人骨髓问充质干细胞体外分离培养及其生物学特性
郑有华何滔匡世军张志光苏凯
【摘要】目的探讨人骨髓来源ＭＳｓＣ的分离、培养和生物学特性，为骨组织工程提供种子细胞。方法从捐赠者髂骨穿刺收取骨髓细胞，采用密度梯度离心和贴壁培养法进行培养和纯化ＢＣ，ＭＳｓ取生长良好的Ｐ或｝代ＢＳｓ３）４ＭＣ进行检测：① Ｍ．ｒ测定细胞增殖和生长曲线分ｒ法析； ②流式细胞仪检测ＢＣ细胞表面抗原标记和细胞增殖周期；ＭＳｓ ③免疫荧光分析细胞骨架； ④ 细胞染色体核型分析；⑤成骨细胞诱导分化及检测。结果 ① 利用密度梯度离心和贴壁筛选的
从人骨髓中能分离出高
度一致的ＢＣ，这些细胞具有正常细胞骨架结构以及正常的人类染色体数目和形态，具有向ＭＳｓ
ＹｕｈａＨａ．ＫＵＮＣＳｉｎＨＡｈ－ｕｎ．Ｓａｅａｔｎｆｏａｎｏ－ｕＥＴｏＡｈ１ｕ．ＺＮＧＺｉｇａｇＨＵＫＬＤｐｒｍｅｔｏｒｌａｄ
ｏ４ＢＣｐｐｌｉｓｅｅｏｅｔｎａｎｄａｌｗ＠ｄａｉｇｏｔｒｅｆｈＭＳｓｙｒＭＳｏｕｔｎｒｃｌｃｄｄｘｍｉｓｏｏ．ｒｗｎｇｗｈｃｖｅＰａｏｗｌｅａｅｅｆｌａｒｕｏｔＢＣｂ
ｍａｉｌｆｅＭｕｇｅｙＨｏｓｔｌｏｓｏａｏｏｙｌ１ａｔｓｎｘｌｏａｉｓｒｒ，，ａｆｔｍｔｌｇＳｌＶ－ｅＵｎｖｒｉｙＧｕｎｚｏｕ５１０，ｉｐｉＩｉｅｓｔ，ａｇｈ０５５Ｃｈｎａ
【 Ⅺｎｃ】Ｏｊｔｅｏｎｅｔａｅｅｏｓｆｈｏｔｎｃｌａｏｄｈｒｔｉｉ１ｔｂｃｖＴｖｓｇｔｔｔｄｅｓａｏ，ｕｉｔｎｎａｃｒｔｅｉｉｉｅｈｍｈｏｔｉｌｉｔｉａｃａｅｓｃｖ
Ｍｒｒｃｌｒｍｅｒｓａ；ＩａｏｉｔｃａｓｙＴｉｄｔｃｉｇｅｐｅｓｄｔｅｓｒｅｒｅｘｒｓｉｎａｄｔｅｇｏｎｉｌｆｅｅｔｘｒｓｅｌｆｅｍａｋｒｐｅｓｏｎｒｗｉｇｃｒｅａｎｈｌａｅｈｃ