盐酸克伦特罗的检测方法
克伦特罗说明书一步法
盐酸克伦特罗酶联免疫检测试剂盒使用说明书一、概要克伦特罗（clenbμterol，CLE）是一种 －肾上腺受体激动剂，此类药品在临床上用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。
因为该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。
人食用了饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所产生的畜产品后，残留的克伦特罗可导致人体肌肉震颤、心悸、神经过敏、头痛、目眩、恶心、呕吐、发烧、战栗等症状，对消费者的健康造成极大危害。
我国农业部第235号文件规定不得检出。
本试剂盒是应用ELISA技术研发的药物残留检测产品,与仪器分析技术比较，能经济、快速地检测出尿样、肌肉、肝脏及饲料等中的克伦特罗。
二、测定原理本试剂盒是利用竞争ELISA方法，在酶标板微孔上预包被抗克伦特罗抗体。
检测时，加入标准品或样品溶液及克伦特罗酶结合物，他们竞争性地与克伦特罗抗体结合，形成抗原抗体复合物；用TMB底物显色；加入反应终止液后在450nm波长酶标仪下进行检测，样品中的克伦特罗浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成酶标板1块(包被抗克伦特罗抗体)标准液6瓶（1ml/瓶）：0、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb。
酶结合物…………………………7ml显色剂A …………………………7ml显色剂B …………………………7ml终止液…………………………7ml10×浓缩洗涤液…………………50ml说明书……………………………1份四、需要但试剂盒中不提供的器材和试剂（1）设备……微孔板酶标仪(450nm)……振荡器……离心机……微量移液器：20μl～200μl,100μl~1000μl……容量瓶：100ml，500ml，1000ml（2）试剂……三氯乙酸……氢氧化钠……叔丁基甲醚色谱级……浓HCl……氯仿……磷酸……Tris……乙酸乙酯……乙腈五、样本前处理步骤样本处理前须知处理任何样本时，都须注意：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。
盐酸克伦特罗快速检测卡说明书（尿液）
北京百泰克生物技术有限公司百泰克生物电话：400-678-8982 传真：************BioTeke Corporation网址：E-mail：****************盐酸克伦特罗快速检测卡使用说明书（尿液）一、试剂盒组成产品编号产品规格检测卡滴管TC1001 20次 20份 20份TC1002 40次 40份 40份保存和稳定性4-30℃阴凉干燥处保存，不可冷冻，避免阳光直晒，生产日期起12个月内有效。
二、原理盐酸克伦特罗(Clen)快速检测试纸基于竞争法胶体金免疫层析技术，通过检测样品中的Clen与固定在检测线上的Clen-BSA偶联物竞争标记胶体金颗粒的Clen抗体，达到抑制检测线显色的效果。
因此，当样品中的Clen浓度超过一定量后，检测线将不显色；而当样品中Clen浓度低于一定量或者不含Clen时，检测线将显色。
由于质控线由二抗组成，识别并结合Clen抗体，因此无论样本中是否含有Clen，质控线都将显色，以示检测产品有效。
三、灵敏度3ppb四、所需容器塑料尿杯或玻璃容器五、注意事项1.如果购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请在购买处进行更换。
2.所有试纸启封后1小时内使用。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.样品不需要放入冰箱冷藏，避光室温保存即可。
六、检测步骤1.取尿液直接进行测试，如有浑浊请先离心取上清液。
﹡注：尿液必须收集在洁净、干燥不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器内。
2.取出试纸，开封后平放在桌面，用滴管向试纸孔缓慢而准确地逐滴加入3滴检测液。
3.3-5分钟判断结果，10分钟后的结果无效。
七、结果解释阳性：C线显色，T线不显色，判为阳性。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于3ppb。
阴性：C线显色，T线肉眼可见，无论颜色深浅均判为阴性。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3ppb。
无效：C线不显色，无论T线是否显色，该试纸均判为无效。
未出现C线，表明不正确的操作过程或试剂卡已变质失效。
畜产品中盐酸克伦特罗残留检测方法优缺点比较
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ是利用免疫 学抗原抗体特异
性结合反应和酶 的高效催化作用 ， 通过化学方法将植物辣根
作者 简介 ： 王世 山（ １ ９ ６ ３ ￣ ） ， 高级 兽 医师 ， 从 事 畜产品 、 饲料 、
兽 药质 量 监 测 检 验 工 作
过氧化物酶 （ Ｈ Ｒ Ｐ ） 与克伦特罗 （ Ｃ Ｌ ） 结合， 形成酶偶联克伦特
金免疫层 析法 （ Ｇ Ｉ Ｃ Ａ） 因其 不需 要高精仪器 、 操作简便 、 准确 率较高等 ， 适合基层大面积筛查。
１ 检测畜产品中盐酸克伦特 罗残 留采用的主要方法
制了Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ在基层工作 中的应用 。Ｇ Ｉ Ｃ Ａ与 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ相 比不 需 要仪 器设 备 ， 操作 更简单 ， 检测 时 间更 短 ， 试 剂耗 材价值 更 低， 且不需 要高专业 知识 的操 作人员 ， 不仅适 用于基层大 规 模 的检测 活动 ， 也适用于长期 的每次小批量检测活动 。但 是
罗， 将固相载体上已包被的抗体（ 羊抗 兔 Ｉ ｇ Ｇ抗体 ） 与特异性
的抗克伦特罗抗体结合 ， 然后加入待测克伦特罗和酶偶联克
★通讯作者
［ １ 】殷运收． 疏血通注射液 的药理作 用及 临床应用进展［ Ｊ ］ ． 临 床医学工程， ２ ０ １ １ ， ３ ８ （ ３ ） ： ４ ７ ２ — ４ ７ ３ ． 【 ２ 】王萌 ， 等． 疏血通注射液 的质量工艺与用药安全的相关性
有Ｌ Ｃ／ ＭＳ 、 Ｇ Ｃ／ ＭＳ 、 ＨＰ Ｌ Ｃ、 ＣＥ 、 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和 ＧＩ Ｃ Ａ等 ６种检 测方法 的优 缺点 ， 对Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ和 Ｇ Ｉ Ｃ Ａ 实验原 理、 实验 室操
作步骤 、 样品处理方法 、 特点等进行综合 分析 ， 结论是 用 ＧＩ Ｃ Ａ初 筛， 对检 测结果为 阳性 的样 品用 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ进行再次检
高效液相色谱法测定猪组织中盐酸克伦特罗残留量
液： 将储备标准液用超 纯水稀释为 ２０ ｍ 的工作标准液。 ｔ １ ｏ／
１２ 样品处理 称取 经切碎混匀 的样品 １ｇ ５ ｍ 具塞 离心 ０ 于 ０ｌ 试管中 ， ２ｍ １ ％（ ／ ） 加 ０ ０ Ｖ Ｖ 乙醇 ， ６ 用玻棒 （ 角匙 ） 或 搅散样 品， 盖 好管盖 ， 置超声波发生器 上提取 ２ ｎ然后以约 ４０ｒｎｎ的转 ｏ ， ００／ ｆ ｉ 速离 ２ｎｎ 将上清涟穆＾ １５ １ ２ １ ０ ， ， ２ｍ 分涟漏斗 中， 离心试管 中的 残渣加Ａ ０ ６ ％（ ｖ 乙醇， ２ｍ１ ０ ｗ ） 用玻棒搅散残渣， 置超声坡发生 器上抽提 ２１／ 再离心分离 ， ０１ ， １Ｉ ｉ 将上清液移＾ １５ １ 液漏 斗， ２ｍ 分 摇 匀 。用 ８ ａ， ％Ｎ Ｃ Ｈ溶液调 Ｄ Ｈ值 至 ｌ —ｌ， ｌ ２ 分别用 ６ｍ 、 ｒ 乙醚 ０ｌＯｌ ４ａ 萃取两次， 每次振摇 ２ ｉ， ｍ ｎ待分屡后把乙醚屠（ 上层） 通过无承硫 酸钠（ ３ ） 斗放人 １ ｎ ２— ｇ漏 ５ ｄ蒸发皿 中。然 后用少 许乙醚 清洗 ０ 分液漏斗并 淋洗无水硫酸钠 ， 淋洗 液放＾蒸发皿 中。将 蒸发皿 置水浴上 （ ∞℃） 约 挥发蒸干后 ， 再用 印％乙醇溶 液分三 孜将残 留物洗＾定客瓶 中并定窖 ２ ｌ然 后经 ０５ ｎ双层滤膜 离心过 ｍ， ｔ ａ
２ ｏ ＬＮ Ｏ－ ｍ ｌ ａ ｌ溶液碱化，Ｈ调节为 １ ～ｌ ， ／ Ｉ ｐ ｌ ２ 然后用 乙醚萃取 ， 乙 醚层挥干后再 用 ∞％乙醇溶液溶解 残渣并定容 ， ｝ 供 眦 按本处理方法进行色谱分离和回收试验的结果 良好。 ２２ 色谱条件 的选择 根据 文献【 Ｊ并经 丰实验室 Ｇ ３５ ， １１Ａ Ｄ Ｄ二极管 珲列柱飒器进行光谱扫 描证实 ， Ａ ｛ 盐酸 克伦特罗 紫外 吸收特征光谱在 ２０２３和 ２６ ｎ 有三个峰值依孜变低的吸收 １、４ ９ｗ ， 测定 。
盐酸克伦特罗(瘦肉精)
综述盐酸克伦特罗的药理作用、在机体内的残留性及检测技术摘要：由瘦肉精引起的中毒事件屡见不鲜，而品种繁多的瘦肉精中盐酸克伦特罗是使用最普遍的一种，本文从盐酸克伦特罗的理化性质、药理作用、残留性、检测方法等方面详细介绍其对人体的危害，为我们更好的认识和抵制瘦肉精提供参考。
关键词：理化性质；药理作用；毒性；残留性；检测方法瘦肉精是一类药物，而不是某一种特定的药物，任何能够促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的物质都可以叫做“瘦肉精”。
在中国，通常所说的瘦肉精是指克伦特罗，而普通消费者则把此类药物统称为瘦肉精。
当它们以超过治疗剂量5-10倍的用量用于家畜饲养时，即有显著的营养“再分配效应”——促进动物体蛋白质沉积、促进脂肪分解抑制脂肪沉积，能显著提高胴体的瘦肉率、增重和提高饲料转化率，因此曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂、饲料添加剂。
1. 盐酸克伦特罗的理化性质及药理作用1.1 理化性质中文名：瘦肉精；克伦特罗；学名：盐酸克伦特罗(Clenbuterol Hydrochloride)，又称氨哮素、克喘素氨双氯醇胺，化学名称为羟甲叔丁肾上腺素，是一种平喘药。
该药物既不是兽药，也不是饲料添加剂，而是肾上腺类神经兴奋剂。
相对分子量：313.7，分子式：C12-H18-Cl12-N2-O·HCl；图1盐酸克伦特罗结构式盐酸克伦特罗的外观与性状：白色或类白色的结晶粉末，无臭、味苦；熔点：174～175.5°C；溶解性：溶于水、乙醇，微溶于丙酮，不溶于乙醚[1]。
1.2 药理作用20世纪70年代中后期,克伦特罗作为一种伦特罗1000～3000 μg 具有促进新的、选择性的β肾上腺受体激动剂逐步应用于临床试验,它能够引起交感神经兴奋在治疗剂量下,强而持久地松弛支气管平滑肌,口服治疗剂量仅为30～40 μg/d, 对支气管哮喘和伴随有逆性气道梗塞的慢性支气管炎均有良好的效果,能较长时间地增加肺的最高呼气量(PEFR)，用药剂量仅为舒喘宁片的1%, 副作用和对心血管系统的作用不明显。
酶联免疫吸附法(ELISA)检测猪肉中盐酸克伦特罗
从 ６个 乡 镇 的 ｌ ８家 规 模 养 兔 场 随 机 抽 取 了 １ ８ ０ 份 兔 血清 。 １ ． ２诊 断试 剂 兔瘟 抗 体监 测 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ试 剂 ： 购 自深圳 市芬 德 生
式中 ： Ｃ： 稀 释 后样 品提取 液 中盐 酸 克 伦特 罗 含 量（ ｓ ／ Ｌ ） ， Ｄ： 样 品稀释倍 数
后 出现板 孔 干燥 ， 会导 致 标 准 曲线 线 性不 好 。底 物
本试 剂 盒 灵 敏度 为 ０ ． １ ｇ ／ Ｌ ， 样 品 最低 检 测 限
为０ ． ４ ｇ ／ ｋ ｇ ， 回收率 一般 在 ８ ０ ％ １ ０ ０ ％之 间 ， 为 确
溶液如果变蓝表示 已经变质 ， 不能使用。 ０ 号标准溶
液 的吸光 值 ＜０ ． ６时 ， 表 示试 剂 盒 已经 变 质 ， 不 能 使
保 结 果准 确 ， 试 验 过程 中应 注意 以下 问题 ： 试 剂 盒保 存 于 ２～８ ℃， 不能冷冻 ， 未 用 的微 孔 板 放 回原铝 箔袋 密 封后 ２ ８ ℃存 放 ，并 尽快 使 用 。
注： 为获 得 样 品 中盐 酸 克 伦 特 罗 的 实 际 含 量 （ ｇ ／ ｋ ｇ ） ， 从标
３ ． １ ． ２原 因分析
影 响 规 模 养 兔 场 兔 瘟 免 疫 效 果 的 主 要 原 因到
底有 哪些 ？ 通 过调 查 ， 归纳起来主要有以下几个方面：
底 物 溶液 要 避光 保 存 。使 司 ， 诊 断 试 剂 在 有 效 期 内使 用 ； 试 验
严 格按 照诊 断试 剂说 明书 的要求 进行 操作 。
２结 果与 分析 结 果 表 明： 被 检测 的 １ ８ ０份 血清 中 ， ８ １份血 清 的
HPLC法测定盐酸克伦特罗膜中盐酸克伦特罗的含量
取 对 盐酸 克伦 特罗 对照 品液 ，按 上述 色谱 条件 测定 ，重复 进样
２方法与结果
２１色谱条件和系统适应性试验 ．
６ 次，记录其峰面积，计算峰面积平均值为３ ０ １７ ６２ ４ ，其Ｒ Ｄ为０ ％ Ｓ ． ４
（ ：６ ｎ ）。 ２ ． ５重复性试验 取供试 品溶 液 ，按上 述色谱 条件 平行测 定５ ，测得其 平均值为 次 ９． ％，其Ｒ Ｄ＝ ． （ ＝５ ７２ ７ Ｓ ０ ％ ｎ ）。 ４ ２ ． 定性试 验 ６稳
精 密称取 １５ ０ ℃干 燥至恒重 的盐酸 克伦特罗对 照品１ｒｇ ０ ，置２ｍ ａ ５Ｌ 容量瓶 中 ，加 乙醇溶解并稀释 至刻度 ，摇匀 ，精密量 取 ｌ Ｌ １０ Ｌ ｍ 置 ０ｍ 量瓶 中用乙醇稀释 至刻度 ，分别精密 吸取该对照 品液４ 、１、１、 、８ ０ ２ １、２ Ｌ 入高效 液相色谱 仪 ，按上 述色谱 条件测定 ，以盐酸克伦 ６ ０ 注
参考文献 【］ 陈亚． １ 沉香化学成分和质量评价研究【 ］ Ｄ． 广州： 广州中医药大学，
２ ０５ ０ ．
Байду номын сангаас
［】 梅学伟， ２ 刘金成， 纪玲． 中药沉香品种鉴定及探讨鉴别方法［ ． Ｊ 科 ］
技创 新导 报 ， ０（） ２ ． ２ ９１： ８ ０ ２ ［】 胡 广林 ， 维钱 ， 志成 ， ． 种 产地 的沉 香药 材及 水煎 液 中６ ３ 黄 吴 等两 种 矿物 质元 素 的分 布特 征 比较 ［． 分析 计量 ， １，９１： —６ Ｊ化学 】 ２ ０１（） ３２ ． ０ ２
圄睚｜雷—盈同
２１ 年 １ ０ １ Ｏ月第 ９卷 第 ３ 期 ０
表 １ 图谱 鉴定结 果
・
实验研究 ・ ２ ６ ７
动物性食品中盐酸克伦特罗(瘦肉精)残留的检测
阴性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条肉眼可见， 无论颜色深浅均判
人（ 女性） 经口Ｔ Ｌ （ Ｄ ｏ 最低中毒剂量）４６０ ｇｋ 。小鼠静 ： ０ ／ｇ ｎ 脉 Ｌ Ｓ（ Ｄ ０半数致死剂量） ２ ６０ｖ ／ｇ ：７ ０ ｇｋ 。所 以盐酸克伦特 罗早期仅在医学上用于急救和肺科病（ 主要是平喘） 。因副 作用较大已被禁用。 ２ 样品快速判断方法 看该猪肉是否具有脂肪（ 猪油）如该猪肉在皮下就是瘦 ， 肉或仅有少量脂肪， 则该猪肉就存在含有“ 精” 瘦肉 的可能。 喂过“ 瘦肉精” 的瘦肉外观特别鲜红， 后臀较大， 纤维比 较疏松， 切成 ２ 指宽的猪肉比较软， ～３ 不能立于案， 瘦肉与 脂肪间有黄色液体流出， 脂肪特别薄； 而一般健康的瘦猪肉 是淡红色， 肉质弹性好， 瘦肉与脂肪间没有任何液体流出。
为阴性。
对高血压、 心脏病、 甲亢和前列腺肥大等疾病患者危害更
大， 严重的可导致死亡。
１１２ 预防方法 ： ．． 控制源头， 加强法规的宣传， 禁止在饲料
阳性 ： Ｃ线条显色， Ｔ线条不显色， 判为阳性。 无效 ： Ｃ线条不显色 ， 无论 Ｔ线条是否显色， 该试纸均
食 品 质 量 与 安 全
４ ｇ次， 次／ 儿童 ５ ０ ／ ３ 日； ｖ 岁以上 ５ ～２ ｇ次， 次／ ｇ Ｏ ｉ ｂ ／ ３ 日。
达到提高瘦 肉率的效果。它用量大、 使用的时间长、 代谢 慢， 所以在屠宰前到上市， 在猪体内的残留量都很大。这个
残留量通过食物进入人体， 就使人体渐渐地， 积蓄中毒。如 果一次摄入量过大， 就会产生异常生理反应的中毒现象， 因 此而被禁用。国内养猪户不顾农业部的规定， 为了使猪肉 不长肥膘， 在饲料中掺入瘦肉精。猪食用后在代谢过程中 促进蛋白质合成， 加速脂肪的转化和分解， 提高了猪肉的瘦
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
盐酸克伦特罗的检测方法 科技信息职教与成教 盐酸克伦特骂硇楦测方法 河南科技大学林业职业学院刘荣森 [摘要]肉食中的盐酸克伦特罗严重危害人体健康.检测盐酸克伦特罗残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法,高效液相色谱 法,酶标记免疫吸附测定法,毛细管电泳'~--(CE)等,本文分析了各方法的优缺点,指出了今后的研究方向. [关键词]盐酸克伦特罗检测方法研究进展 中央电视台2011年3.15晚会上,曝光了一些地方在动物饲养中滥 用"瘦肉精"的问题."瘦肉精"是盐酸克伦特罗的俗称,通用名称: Clenbuterol(CLB),化学名称:d一[(叔丁氨基)甲基卜4一氨基一3,5一二氯 苯甲醇盐酸盐,分子式:C.:H.C12N20?HC1,结构式: ]}H31. l 盐酸克伦特罗是一种B:一受体激动剂,具有蛋白同化作用,可以减 少脂肪的形成,提高瘦肉和脂肪的比率,因而被滥用于饲养业,造成该 药在动物体内蓄积,尤其是肝脏组织中的浓度较高.人类食用含有克伦 特罗残留的肉品后会出现头晕,心悸,手指震颇等中毒症状.滥用瘦肉 精已成为重大的食品安全问题. 中国严禁盐酸克伦特罗等在动物生产中使用.但目前非法使用情 况仍非常严重.近几年来,接连发生数起人食用有CLB残留的肉品中毒 事件.造成CLB屡禁不止的原因一方面是利益驱使;另一方面是现在 检测CLB的方法,手段还不完善,急需建立宰前监测体系和准确,迅速, 方便,精确的检测方法. 检测CLB残留常用的方法有气相色谱一质谱联用法(GC—MS),高 效液相色谱法(HPLC),酶标记免疫吸附测定法(ELISA),毛细管电泳法 (CE)等. 1.气相色谱一质谱联用法(GC—MS) 气相色谱一质谱联用法是我国CLB测定中的确证性方法 fNY/T468—2001].是最常用的CLB测定方法,能在多种残留物同时存在 情况下对某种特定的残留物进行定性,定量分析.具有灵敏度高,假阳 性率低等特点.测定时一般需要柱前衍生,最常用的衍生试剂是双三甲 基硅基三氟乙酰氨(BSTFA).本办法具有前处理过程烦琐,检测时间 长,需贵重仪器等缺点. 吴银良等建立了同时测定动物肝组织中盐酸克伦特罗和盐酸莱 克多巴胺残留量的固相萃取一气相色谱一质谱分析方法.样品在碱化 条件下经乙酸乙酯和异丙醇混合溶剂提取,浓缩后用乙酸乙酯溶解,经 SCX固相萃取(SPE)柱净化,经氮气吹干后用双三甲基硅基三氟乙酰氨 (BSTFA)衍生,外标法定量.盐酸克伦特罗的检出限为O.301~g/kg.盐酸 克伦特罗添加浓度在1.O～5.01zg/kg范围内,添加回收率为77.4%～ 88.3%;相对标准偏差(RSD)为3.1%～5.1%.胡明友等[21建立了克伦特罗 的测定方法,用甲醇提取,正己烷脱脂净化,然后旋转蒸发冷冻离心浓 缩后加0.1mmol/L的盐酸溶解,加样到净化柱上,用4%氨化乙酸乙酯 洗脱后氮气吹干,甲苯溶解后加BSTFA衍生,用气相色谱一质谱法进行 测定,内标定量.结果表明:添加56~10-9540x10(∞)浓度水平的克伦 特罗,方法回收率在89.3%～107%,相对标准偏差为7.3%～16.5%,线性 相关系数r为0.998,克伦特罗的最低检测限为2.0xl0f∞).PeterBa— tioens等[31用气相色谱一质谱联用法测定了牛,羊,猪粪便中的盐酸克伦 特罗含量,最低检测限为2n. 2.高效液相色谱法(HPLC) 高效液相色谱法是检测CLB残留常见的分析检测手段之一,适合 大批量样品的快速测定.我国已将HPLC法作为检测CLB残留的半确 证法.HPLC法中常用的检测器有电化学检测器,紫外检测器;其优点是 检测精确度高,其最低检测限范围为1～15ng/g,而且假阳性率低,与 GC—MS法相比样品不必衍生;缺点是检测过程繁琐,检测时间长,需贵 重仪器,难于操作,价格昂贵. 吴庆洁等用高效液相色谱法同时测定畜禽组织中盐酸克伦特罗 和4种抗生素(土霉素,四环素,金霉素,氯霉素).用50%的三氯乙酸沉 淀蛋白质,通过固相萃取(sPE)小柱进行活化,进行高效液相色谱分析. 本法对盐酸克伦特罗的最低检出量为1.25ng.盐酸克伦特罗的回收率 85.4%～93.8%.顾国平等用5%HClO超声提取肉样中的盐酸克伦特 罗,80%水浴沉淀杂质,然后用固相萃取柱预分离和富集,用高效液相 色谱法进行测定,以SunfireCl84.6mX150mm,3.9txm分离柱为固定相, 用紫外二极管阵列检测器检测,外标法定量;在该色谱条件下盐酸克伦 特罗在6.3rain左右可达到基线分离.方法的回收率在81.6%～103.7%. 相对标准偏差在4.76%～7.94%.刘志梅等选用7cm的聚丙烯中空纤 维,在样品溶液pH=l1,室温条件下萃取20min后,将有机溶剂在氮气 流下吹干,用151xL甲醇溶解,进行液相色谱分析.结果表明:在优化的 试验条件下,克伦特罗的富集倍数为78倍,线性范围在30～60001~g/kg 之间,线性相关系数O.9995,检出限2.4l~g/kg.将该方法用于猪肉组织 中克伦特罗的测定,低,中,高3种浓度的加标回收率分别为84.9%, 91.4%和95.0%,相对标准偏差(RSD)分别为6.3%,5.8%和4.6%.该方法 操作简便,环境友好,具有较高的灵敏度,适于猪肉中盐酸克伦特罗残 留的检测. 高效液相色谱法也经常和质谱联用,实现分析过程的自动化.毛丽 莎等171通过液相色谱一质谱以MRM方式检测,同时测定了猪肉组织中 沙丁胺醇,莱克多巴胺和克伦特罗.样品用5%高氯酸溶液振荡提取,反 相c18小柱净化浓缩,,以D3一沙丁胺醇为内标定量.测定克伦特罗的 线性范围均为0.1～10.Oe~L,线性相关系数0.9992,定量检出限为 0.5~g/kg,回收率为88-4%～96.2%.该方法简便,灵敏度好,选择性好. 3.酶标记免疫吸附测定法(ELISA) ELBA法是检测盐酸克伦特罗较高效的免疫分析法,测定的基础 是免疫学抗原抗体特异性结合反应和高效的酶促反应.ELISA法检测 限可达0.05r-gs,实际应用中常使用EHSA试剂盒.该方法具有样品不 需前处理或前处理简单,一次可检测样品数多,操作简便,快速等特点. 但假阳性率较高. 杨兴武等8】应用酶联免疫吸附法检测猪尿液中盐酸克仑特罗残留. 结果表明,盐酸克仑特罗的线性范围为200～2000ng/kg,最小检出限为 100n~L,样品不用前处理可直接检测,1个样品的2个平行样测定时间 为45min.该方法回收率在81.9%～106.8%之间,相对标准偏差(RSD)d~ 于9%.李平等(采用直接竞争酶联免疫吸附试验对动物组织中的盐酸 克伦特罗残留量进行了快速检测.将CBL与蛋白质载体偶联制备了 CBL—BSA和HRP—CBL结合物,以CBL—BSA免疫实验兔获得特异性 抗体,并建立了CBL残留直接竞争EHSA检测方法及检测试剂盒.结 果表明,检测线性范围0.1～62.5ng/mL,检测低限为0.10ng/mL,尿,肝, 肉和饲料的加标回收率为60.3%～l15.O%;相对标准偏差fRSD1为 3.4%～7-2%. 4.毛细管电泳法(CE) 毛细管电泳法测定盐酸克伦特罗残留具有重复性好,操作相对简 单,所需样品数量少等特点. 高杨菲等峒毛细管电泳法同步分离检测肉制品中"瘦肉精"及其 替代物法,整个分离在12min内完成.以90mmol/L的柠檬酸三钠 (pH5.6)为电泳缓冲液,8kV分离电压,200nm检测波长,在25~C下可使 克伦特罗,沙丁胺醇,特布他林和莱克多巴胺达到分离,分离度分别为 1.90,2.73和2.17,回收率为92.4%～102.0%,相对标准偏差(RSD)Ib于 3.2%,结果令人满意.王伟宇等…采用小型化毛细管电泳一电化学检测 技术测定了猪尿和猪饲料中的克伦特罗及其替代品莱克多巴胺和沙丁 胺醇,以直径300~m的碳圆盘电极为工作电极,检测电极电位为+0.95V, 在lOOmmol/L的硼酸盐运行缓冲液中,3种组分在7min内实现了分离. 被测物浓度与峰电流在3个数量级范围内呈良好的线性关系,检测限 为1.20x10~-2.06x10-Tg/ml.该方法简单可靠,已成功应用于猪尿和猪饲 料样品中3种B一兴奋剂的测定,是一种有效的食品安全分析检测方 法 5.其他方法 樊晓博等采用时间分辨荧光免疫分析建立了简便,快速,灵敏的 盐酸克伦特罗检测方法.以自制盐酸克伦特罗单克隆抗体包被96孔微 孑L板作为固相抗体,Eu标记抗原与样品中的CBL竞争结合抗体,建 立直接竞争荧光免疫分析体系.实验表明:方法灵敏度为0.021xg/L,样 品回收率为91%～101%,与沙丁胺醇,莱克多巴胺等结构类似物的交叉 反应率均小于1%.方法灵敏度高,特异性强,且操作简单,完全可以满 足现有实际检测需求.曾文芳等【'3l建立了用离子色谱一电化学修饰方法 l钡0定盐酸克仑特罗.采用离子色谱分离,碳纳米管修饰电极,直流安培 检测,DionexAG9一HC保护柱(2mmx50mm),8mmol/L碳酸钠+1O%甲醇 为淋洗液测定盐酸克仑特罗.盐酸克仑特罗的检测限是0.0003mg/L;样 品测定的回收率分别为96%～103%.陈丽莉等【锻计了一种快速检测猪 肉中盐酸克伦特罗的流动注射一化学发光免疫分析方法.采用过氧化脲 作为luminol—CH~I20?Hz0z—HRP化学发光体系氧化剂,联苯硼酸作为 .--—— 207...—— 科技信息.职教与成教 增强剂,流动注射化学发光法检测竞争免疫反应后的上清酶标复合物. 在最优条件下,测定克伦特罗的线性范围0.05～9~zg/L(r=-0.9959),检出限 为0.021~L.该方法已经成功应用于猪肉中克伦特罗残留的检测.胡华 军噪用巯基丁二酸作为表面修饰剂,水相法合成水溶性的CdTe/ZnSe 核壳量子点,然后在N一羟基琥珀酰亚胺(NHS)的作用下,将CdTe/ZnSe 核壳量子点与抗克伦特罗多克隆抗体(Anti—CLBpAb)连接.CdTe/ZnSe— Anti—CLBpAb偶联物能识别克伦特罗一BSA抗原(CLB—BSA).光谱分析 表明,量子点与抗体连接后荧光增强,荧光峰位从628nm红移至635nm.将 合成的CdTe/ZnSe—Anti—CLBpAb偶联物作为指示克伦特罗(CLB)分子 的荧光标记物,制备出一种用于检测CLB的免疫层析试纸条,其最低 检测量可达1Ixg/L. 现常用的盐酸克伦特罗的检测方法各有优缺点,研究更快速,高