克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测
瘦肉精的检测步骤
瘦肉精快速检测卡操作步骤一、【检测原理】本试纸采用竞争抑制免疫层析技术的原理来测定动物尿液、组织和饲料中的盐酸克仑特罗。
试剂含有被预先固定于膜上检测带（T）的盐酸克仑特罗偶联物和被胶体金标记的抗盐酸克仑特罗单克隆抗体。
检测时样品和标记抗体竞争结合偶联物。
检测限为3ng/ml（3ppb）。
二、【样品制备】肉：装入大约4克碎的肉样本（肉泥）于离心管中（酱猪牛肉加2ml水或PBS），盖紧管盖，在80℃左右的水浴锅中水浴10 分钟；吸取煮出的溶液到1.5ml的离心管中。
如有明显黄色浑浊请离心（3000rpm,5min），取上清检测。
如果检测牛肉请吸出肉汤离心(3000rpm,5min)，取上清检测。
三、【操作步骤】1.在进行测试前先仔细阅读使用说明书，使用前将本品和待检样本溶液恢复至室温。
2.从原包装中取出试剂，打开后平放在桌面上，请在1小时内尽快使用。
3.吸取待检样品溶液，缓慢滴加80~100μl(约2~3滴）于加样孔中，加样后开始计时。
4.在5分钟内读取结果，超过5分钟的结果判读无效。
四、【结果判定】阳性：位置C显示出红色条带，位置T无条带或颜色非常模糊时判为阳性。
阴性：位置C显示出红色条带，位置T同时出现红色条带时，判为阴性。
无效：位置C不显示出红色条带，则无论位置T显示出红色条带与否，该试纸卡均判为无效。
【贮存及有效期】冷藏，忌冷冻，有效期12个月。
【注意事项】1.请按照操作步骤进行测试，操作时请勿触摸试纸显示区。
2.如购买时发现过期，破损，污染，无效的产品，请到购买处更换。
3.本品为一次性产品，请勿重复使用。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
5.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
6.由于样品（尿和饲料）的差异，有的检测线可能偏淡或偏暗，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
7.若需直接检测标准品，请用PBS或阴性样品配制。
克伦特罗ELISA快速检测方法
克伦特罗ELISA快速检测方法克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
8.3 当板间差异性大时，可能原因是板与板之间孵育时间相差太大，板与板之间洗涤不一致，移液枪使用不当，温度不同等。
克伦特罗属于-兴奋剂类药物，可以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长。
目前由于多起克伦特罗中毒事件且出现了死亡案例，因此被禁止使用。
克伦特罗ELISA快速检测试剂盒与经典色谱法相比，具有操作过程简单、样品处理快捷，可同时分析多个样品，分析时间短、成本低、灵敏度高且对环境污染小等优点。
1 原理ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗体分子共价结合，此种结合不会改变抗体的免疫学特性，也不影响酶的生物学活性。
此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。
2 试样的准备2.1 对于尿样可直接用于检测，或者样品比较浑浊时，可适当离心。
当尿样冷冻时，应将尿样回温再测。
2.2 饲料样品要按照说明书的处理步骤进行。
当然，为保证样品充分被提取，可适当延长涡旋时间、离心时间及离心转数。
3 试剂的准备3.1 不同批次的试剂盒不能混用，因为抗体和微孔板具有盒与批次的特异性。
3.2 按试剂盒说明书的要求准备实验中需用的试剂。
ELISA中用的蒸馏水或去离子水，包括用于洗涤的应为新鲜的和高质量的。
自配的缓冲液应用pH计测量较正。
3.3 从冰箱中取出的实验用试剂应待温度与室温平衡后使用。
试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
3.4 检测过程中应尽量保持室温20~25℃，避免在通风口操作，温度过低、过热或蒸发都会影响检测数据的准确性。
同样不应再阳光直射下实验，防止过热或蒸发带来影响。
4 加样4.1 在ELISA中一般有4次加样步聚，即加标本或样品、酶结合物、底物、终止液。
加样时应将所加物加在板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可溅出，不可产生气泡，当有气泡时可用干净的枪头小心刺破。
4.2 加标准及样品时一般用微量加样器，按规定的量加入板孔中，每次加标本应更换吸嘴，以免发生交叉污染。
实验一 克伦特罗直接竞争ELISA检测实验指导
实验一克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗（clenbuterol），化学名为4-氨基-α-[ (叔丁胺基)甲基]-3,5-二氯苯甲醇盐酸盐，属于β-兴奋剂（β-Agonist）的一种。
由于克伦特罗能显著降低胴体脂肪含量，提高瘦肉率和增加瘦肉产量（由此得名“瘦肉精”），曾在畜牧业上作为生长促进剂被广泛使用。
克伦特罗有较大的毒性，当人们食用高残留克伦特罗的动物性食品时，会出现心悸、头疼、目眩、恶心、呕吐、发烧、颤栗、神经过敏、血管扩张、心率加快、肌肉震颤等中毒症状。
因此，欧美等国早已禁止克伦特罗在畜牧生产上的应用，我国农业部于1997年3月发布[农牧发(1997)]3号文件，禁止克伦特罗在动物生产中的应用。
1999年再次发布文件，禁止其使用，并规定了在动物组织中的最高限量。
然而，由于经济利益的驱使，克伦特罗违法滥用的现象仍然较为普遍，中毒现象屡屡发生。
图1 克伦特罗分子结构式检测克伦特罗的方法主要有高效液相色谱法（HPLC），气相色谱－质谱法（GC-MS），毛细管区带电泳法（CE）和免疫分析技术（IA）等等。
HPLC法与GC-MS 法是克伦特罗残留检测的确证方法，其优点是检测精确度高，但因其仪器化程度高、检测时间长、过程繁琐、检测费用昂贵等而阻碍其推广应用，而酶联免疫分析（ELISA）快速检测技术因成本低、操作简单、速度快、一次检测样本量大、仪器化程度低，现已成为常用的筛选方法。
1 实验原理在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。
检测原理示意图如下所示：①未包被酶标板②将包被抗原包被在酶标板上③首先将标准品或待检样品加入到包被好的酶标板微空内④然后加入辣根过氧化物酶标记的抗体，孵育期间包被抗原与样品中的被检药物将同时竞争酶标抗体，如果样品中的被检药物含量多则与包被抗原结合的酶标抗体就少，反之就多⑤通过洗涤将反应液中未与包被抗原结合的酶标抗体去除⑥加入底物缓冲液与底物液的混合液，酶标抗体上辣根过氧化物酶将催化底物进行显色反应（由无色变为蓝色）⑦达到显色时间后，加入硫酸溶液终止酶促反应，同时反应溶液由蓝色变为金黄色，此反应液可通过酶标仪在450nm波长下测定吸光度值，从而通过软件计算得到待检药物的浓度2 实验材料（1）克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。
肉原料肉中激素(盐酸克伦特罗、莱克多巴胺)的测定
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.025ng～2. 5ng
2 瘦肉精的测定方法
备注 在检测实验室，确证和定量瘦肉精时，相对于气质联用，更
2 瘦肉精的测定方法
2.2瘦肉精的确证和定量——液相色谱串联质谱法
(1) 原理：试样中的残留物经酶解，用高氯酸调节PH值，沉淀蛋白质后离心， 上清液用异丙醇-丁酸丁酯提取，再用阳离子交换柱净化，液相色谱-串联 质谱法测定，内标法定量。 (2)实验方法与步骤：遵照GB-T22286-2008
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
1 瘦肉精知识概述
早在2002年，农业部、卫生部、国家食品药品监督管理局就 发布公告，明令禁止在饲料和动物饮用水中添加盐酸克仑特罗和 莱克多巴胺等7种 “瘦肉精”。
2008年，最高人民检察院、公安部规定新的刑事案件立案追 诉标准，对使用“瘦肉精”养殖生猪，以及宰杀、销售此类猪肉的， 将以生产、销售有毒、有害食品罪追究刑事责任。
2 瘦肉精的测定方法
2.1筛选是否含有瘦肉精——酶联免疫法（ELISA)
(2)实验方法与步骤：遵照GB-T5009.192-2003 如果采用快速检测卡，则根据检测卡 操作要求开展检测。
备注：
1.适用范围：新鲜或冷冻的畜、禽肉与内脏及其制品中瘦肉精的测定。 也适用于生物材料（人或动物血液、尿液）中克伦特罗的测定
2.本方法检出检出限：0.004ng～0.054ng
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施
瘦肉精三联快速检测卡准确性的因素及对应措施任清丹1，何东伟21.吉林省畜牧总站，吉林长春 130062；2.吉林省辽源市动物疫病预防控制中心，吉林辽源 136200“瘦肉精”属于β- 肾上腺受体激动剂类，包括如莱克多巴胺、克伦特罗、沙丁胺醇、西马特罗等化学物质。
瘦肉精可以增加动物瘦肉率，减少饲料使用，人食用残留瘦肉精的动物制品，会出现呕吐、肌肉颤抖等症状，甚至可危及生命，长期食用，有可能会导致染色体畸变，诱发恶性肿瘤。
因此，快速检测卡的准确性，对瘦肉精的管控工作至关重要。
目前，常用检测卡为三联快速检测卡，具有检测快，易判读的优点，但操作细节一旦被忽视，容易影响检测结果准确性。
1 影响猪尿“瘦肉精”快速检测卡准确性的因素1.1 待检动物的生理情况待检动物饮水量的多少和新陈代谢的快慢，都会影响到动物尿液的排放量，尿液中的“瘦肉精”含量会被浓缩或稀释；动物生病治疗过程中使用的硫酸锌或肾上腺激素类药物等，影响检测结果的准确性。
1.2 环境温度的影响环境温度是影响检测卡准确性的因素之一。
尤其在东北地区冬季，室外温度会在0 ℃以下，即使在室内检测动物尿样，也无法在规定时间进行判断和读取。
环境温度低于5 ℃时，检测线产生较缓慢，容易产生假阳性；当温度达到30 ℃以上或强光直射，会出现假阳性或无效；因此，在20～26 ℃室温条件下操作，检测卡出现假阳性或无效概率会大大降低。
1.3 被检动物尿液理化因素动物尿液pH值、澄清度都是影响瘦肉精检测准确性的重要因素，不同动物的尿液在不同生长阶段、不同饮食、不同时间下，尿液pH值白天在8.03±0.15范围内变化；夜间在8.12±0.18范围内变化。
尿液澄清度增高时，检测线速度快，检测结果准确。
1.4 瘦肉精快速检测卡本身存在不足之处“瘦肉精”快速检测卡常温保存，常温操作，特异性强，反应快速且结果肉眼可见、容易判读，但也存在着一些不足之处。
同一品牌不同批次之间检测效果会存在差异，有的反应快，易判定；有的判定线显色差，不易判定。
瘦肉精快检
一．项目名称瘦肉精(盐酸克仑特罗)快速检测卡——肉及内脏样本检测二．简要说明1.产品概述:本产品是一种只需要简单仪器设备的快速检测卡，对肉及内脏（特别是瘦肉、肝脏、肺脏和肾脏）样本中的瘦肉精（盐酸克仑特罗）进行检测，肉及内脏样本渗出液的检测限为3μg/L。
2.检测原理:应用了竞争抑制免疫层析的原理，样本中的瘦肉精与胶体金标记的特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线上瘦肉精－BSA偶联物的结合。
如果样本渗出液中瘦肉精含量大于3μg/L，检测线不显颜色，结果为阳性。
反之，检测线显色，结果为阴性。
3.试剂仪器：检验样本肉及内脏样本，试剂组成瘦肉精快速检测卡（40块），展开液，一次性塑料吸管，一次性塑料手套，5ml离心管4.其他设施:1.2~1.5米宽的实验台，水浴锅，插线板。
5.快速检测：检验样本的前期处理→密封装入离心管→90℃加热10~15min(推荐方法水浴)→冷却样本渗出液→滴加2滴至检验卡→30s后滴加展开液1~2滴→5min后观察并对照说明书得出结果备注:质控C线显色，检测T线出现红色条带为阴性；质控C线显色，检测T线不出现红色条带为阳性。
质控C线不显色,说明不正确的操作过程或检测卡失效。
总时长2h三．预期效果该产品能快速筛查出肉及内脏样本中的瘦肉精(注意:若要得到较为准确的结果，尚需使用液质联用法或气质联用法等确证方法)四．注意事项1.检测卡在室温下一次性使用。
检测卡从铝箔取出后，应在半小时内使用。
检测时避免阳光直射和电风扇直吹。
2.自来水、蒸馏水或去离子水不能作为阴性对照。
3.由于肉样的差异，有的检测线可能偏淡或颜色偏灰，但只要出现条带，就可判定为阴性结果。
4.出现阳性结果，建议用本卡复查一次。
液质联用法或气质联用法是瘦肉精检测的确证方法。
5.标本收集肉及内脏样本（包括精肉、肝脏、肺脏和肾脏）立即检测或收集在塑料袋中送检。
若不能及时检测，样本在2-8℃冷藏可保存24小时，-20℃冷冻保存1周，冷冻时忌反复冻融。
ProRapiTTM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡 说明书
R-protagenTM0507 Page 1 of 6ProRapiT TM 盐酸克伦特罗(瘦肉精)快速检测试纸卡使用说明书(TM0507 For Cat. No. FS0002)产品明细产品名称包装Cat. No.ProRapiT TM Clenbuterol Rapid Test 40 assays FS0002产品概述盐酸克伦特罗（Clenbuterol, CLE）是一种肾上腺受体激动剂，俗称瘦肉精。
因该药可以提高瘦肉率，减少脂肪沉积和促进动物生长，被一些畜牧养殖户和养殖企业作为养殖促进剂使用。
食用饲喂克伦特罗作为添加剂的动物所生产的禽畜产品后，残留的盐酸克伦特罗可对消费者的健康构成极大危害，由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在多个国家均有报道，牲畜产品中盐酸克伦特罗残留已成为社会各界关注的公众问题。
因此，世界许多国家禁止在饲料中使用克伦特罗来增加动物的瘦肉率。
R‐Protagen Company Tel:512‐62956169 Fax:512‐62956180‐832 www.r‐ email:sales@r‐FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR HUMAN OR DIAGNOSTIC USE.R-Protagen克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡，系采用免疫胶体金技术，能够快速、半定量、特异的检测尿液、组织样品中的克伦特罗，可通过肉眼直接判读结果，检出定量值为3ppb（3ng/ml），且检测结果精确，与其它Beta受体激动剂等无交叉。
适用于现场、快速、大量样本的筛查，检测成本低，适合基层和非专业人士及家庭使用。
检测原理R-Protagen盐酸克伦特罗快速检测试纸卡采用竞争抑制免疫层析的原理设计，当样本中含有克伦特罗时，待测物将和金标垫上的金标克伦特罗抗体结合并一同向上层析迁移，到达固定有抗原的检测线（T）时，抗原将和样本中的克伦特罗竞争结合金标克伦特罗抗体上有限的抗原结合位点。
克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用说明书(组织)(新)
克伦特罗（瘦肉精）快速检测卡使用说明书（组织）（新）克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡使用手册（纸巾、饲料）简介克伦特罗是一种克伦特罗受体。
由于该药能提高瘦肉率，减少脂肪沉积，促进动物生长，因此被一些畜牧业农民和养殖企业用作养殖促进剂。
人们食用以盐酸克仑特罗为添加剂的动物生产的畜产品后，残留的盐酸克仑特罗会对消费者的健康造成极大危害。
由盐酸克伦特罗引起的食物中毒在许多国家都有报道。
畜产品中盐酸克伦特罗的残留已成为社会各界关注的公共问题。
因此，世界上许多国家禁止使用克伦特罗来提高动物的瘦肉率。
结果检测原理安迪斯克伦特罗(瘦肉精)快速检测卡是采用免疫竞争法分析原理结合胶体金标记技术设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测尿液样品中的克伦特罗。
具有简单快速，无需仪器设备等特点，既可以在实验室进行，也可在养猪场、屠宰车间等实地进行测定。
由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查。
检测结果准确，灵敏度为5ppb，准确率在95%以上。
阴性阳性无效试剂盒组成：40次/盒。
1、检测试卡：40个。
2.样品提取物：0.5ml×40瓶。
3.样品稀释液：0.5ml×40瓶。
4.一次性取样滴管：40支。
5.一次性塑料手套：5副。
6.说明：1份。
a：阴性：对照线(c)和样品测试线(t)同时出现，表尿液样本中克伦特罗的浓度小于5ng/ml。
b:阳性：只有对照线(c)，无样品测试线(t)。
表明尿液样本中克伦特罗的浓度大于5ng/ml。
c：无效：对照线(c)和测试线(t)都不出现。
储存条件和保质期1、在4-30℃阴凉避光干燥处储存，忌冷冻。
2、环境温度在4-30℃下使用。
3、有效期见包装盒上。
4.储存期间避免光线、湿度和过热。
样品处理1.称取1g切碎或均质的组织、肉样本、肝脏和制剂合饲料样品，置于含0.5ml样品抽提液管，扭紧管盖，振摇样品１分钟后，100℃水浴10分钟。
2、冷却至室温，取20滴（0.5ml）清亮上清加入含0.5ml样品稀释管，充分混合，取上清液进行检测。
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克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测及百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测摘要：为熟悉盐酸克伦特罗(瘦肉精)的不同检测方法，本实验采用了克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测和盐酸克伦特罗快速检测卡检测两种方法对盐酸克伦特罗阳性样品和阴性样品进行了检测，求出了阳性样品和阴性样品中的盐酸克伦特罗含量。
并对两种盐酸克伦特罗的检测方法进行了简单比较。
结果表明，ELISA检测法具有具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等优点。
而快速检测卡则具有敏感、特异、快速、简便,且无需任何仪器设备等优点。
关键词：盐酸克伦特罗(瘦肉精)、ELISA检测、快速检测卡1前言：盐酸克伦特罗(瘦肉精)又名克喘素、氨哮素、双氯醇胺，化学名为α -［(叔丁氨基）甲基］4 - 氨基- 3 , 5 二氯苯甲醇盐酸盐。
它是一种β肾上腺受体激动剂，是一种白色或类似白色的结晶体粉末，无臭，微苦，化学性质稳定，加热到170℃才能分解。
因此，一般的烹调加热方法不能将猪肉和脏器中残留的“瘦肉精”毒性破坏。
长期摄入盐酸克伦特罗超标的猪肉，会造成人体胃肠道菌群失衡、发生过敏反应和变态反应并产生“三致”作用[1]。
因此必需建立有效的检测方法，完善对畜牧业的监管，以保障食品的质量，让消费者吃得放心。
2材料与方法2.1实验材料与试剂2.1.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测克伦特罗ELISA试剂盒：百睿或其他同类产品。
试剂盒包含如下试剂：酶标记物（绿盖）1瓶3,3’5,5’-四甲基联苯胺（TMB）底物液（黑盖）1瓶底物缓冲液（白盖）1瓶终止液（黄盖）1瓶浓缩洗液（透明白盖）1瓶0μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.3μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶0.9μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶2.7μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶8.1μg/L克伦特罗标准溶液（红盖）1瓶包被偶联抗原的96孔酶标板（12条8孔可拆酶标条）1块塑料封口袋1个内装干燥剂1袋盐酸克伦特罗阳性样品盐酸克伦特罗阴性样品2.1.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测盐酸克伦特罗阳性样品2.2实验仪器2.2.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测微量移液器：100 或 200 μL水浴锅或烘箱：保温，可选。
酶标仪：MK-13或同类仪器。
洗瓶：500 mL，手洗时盛装洗液。
吸水纸：吸干板条残留液体。
样本：尿液或组织样品或饲料样品。
蒸馏水。
洗板机：可选，可用手洗替代。
移液器配套枪头：100或 200 μL规格。
枪头盒。
2.2.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡2.3实验方法2.3.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测（1）取出96孔酶标板，将需用的条板固定于支架，按顺序编号。
1~6号孔为标准品孔，7号孔为阳性样品孔，8为号孔阴性样品孔；（2）在标准品孔中加入50μL标准品，样品孔加入50μL待测样品。
然后每孔加入50μL抗体工作液（加入标品和样品时无时间差的影响），轻拍混匀，盖好。
37℃条件下温育30min；（3）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；（4）每孔加入100μL酶标记物，盖好。
37℃条件下温育20min；（5）倒出孔中的液体，用洗液充入各孔中，轻轻振荡，倒出孔中的液体，在吸水纸上连续拍打3次以上，以保证完全除去孔中的液体，重复操作5遍；（6）每孔加入100μL显色液，轻轻振荡，盖好。
37℃条件下温育10min；（7）每孔加入50μL反应终止液，混匀后在波长450nm（以空气为空白）测定各孔吸光值（必须在加入终止液后60min内读取吸光值。
2.3.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测（1）使用前将待检样本溶液恢复至室温；（2）从原包装袋中取出检测卡，并于一个小时内使用；（3）将检测卡平放，用移液枪吸取待检样品溶液100μL垂直加于加样孔，开始计时；（4）结果应在3~5min读取，其他时间判读无效，根据示意图判定结果。
结果判定：阴性（-）：两条紫红色条带出现。
表示样品中盐酸克伦特罗浓度低于3 ng/mL，或不含有。
阳性（+）：检测T线无显色，则表示样品中盐酸克伦特罗浓度高于 3ng/mL。
无效：未出现质控C线，表明操作过程不正确或检测卡已失效。
3实验结果与分析3.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测图1克伦特罗标准曲线图根据上图计得出盐酸克伦特罗阳性样品与盐酸克伦特罗阴性样品中的克伦特罗含量如下图：表1 样品中克伦特罗的含量样品OD值1OD值2平均OD值相对OD值ln浓度浓度（μg/L）盐酸克伦特罗阳性样品0.3480.3360.34274.754 1.664 5.280盐酸克伦特罗阴性样品1.632 1.885 1.759384.372-1.9490.142实验结果表明，盐酸克伦特罗阳性样品中的克伦特罗含量高于盐酸克伦特罗阴性样品中的克伦特罗含量，结果符合实验规律。
其中，理论上不应检测出克伦特罗的阴性样品中也检测出了微量盐酸克伦特罗，这可能是因为包被抗原和酶标抗体结合的时间或温度不够，包被抗原未能全部与酶标抗体结合，导致检测结果高于理论值。
3.2百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测图2检测卡检测结果实验结果表明，阳性样品显示了一条线，含有盐酸克伦特罗，阴性样品显示了两条线不含盐酸克伦特罗。
结果符合实验规律。
4讨论4.1克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法的原理是什么？在微孔条上预包被偶联抗原；加入样品或标准品，样品或标准品中的克伦特罗与微孔条上预包被的偶联抗原竞争结合酶标记的克伦特罗单克隆抗体，游离的酶标记抗体通过洗涤被除去；再加入显色液，结合的酶标记抗体使无色的显色液转化为蓝色，加入反应终止液后再转变为黄色，在450nm处测量，样品吸光值与样品中克伦特罗含量成负相关，通过标准曲线即可计算出样品中克伦特罗含量。
4.2克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法有什么优缺点？在免疫分析法中，ELISA是一种将抗体、抗原的特异反应与酶底物的高效催化作用相结合起来的高敏感性分析方法，具有特异性强、便于大规模检查及适合现场和基层使用等特点[2]，是临床诊断和免疫检测的常用方法。
但同其他免疫诊断方法一样，酶免试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性显色的问题[3]，导致实验结果不够准确。
4.3如何改进克伦特罗(瘦肉精)直接竞争ELISA检测法？ELISA检测法最主要的问题是非特异性显色，非特异性显色的原因很多，如试剂盒特异性（固相载体的选择、包被物的纯度、包被抗体的效价）、检验标本中含酶标记物的干扰物（内源干扰物及外源干扰物），操作过程中的问题等。
对于试剂盒特异性的问题，可通过对使用的微孔板型号进行认证，评估、提高包被抗原的纯度和选择高亲和力和高特异性的包被抗体来减少非特异性显色；对于含酶标记物的干扰物的问题，可通过控制样品采集、贮存和处理的环境条件，避免样品污染，从而减少非特异性显色；对于操作过程中的问题，可通过锻炼操作人员的实验操作技术或用机器代替操作人员（如使用全自动酶免加样系统处理标本，可较好地避免样品在加样时出现的误差）来减少非特异性显色。
另外，酶标仪应定期进行保养，对滤光片要定期校正; 其次酶标仪波长设置要正确，最好使用双波长，一个检测波长，一个参考波长，以消除微孔板底部划痕、不平、指印或液面高度差异造成的干扰[3]。
4.4百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡检测法的原理是什么？百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡根据竞争抑制免疫层析法设计，由测试端、显色区和手柄端3部分构成。
测试端含有加样纤维层和盐酸克伦特罗金标单抗纤维层;显色区为硝酸纤维素膜层,其上含有判定检测结果的检测印迹和对照印迹, 分别为盐酸克伦特罗-BSA 偶联物和羊抗鼠IgG 多克隆抗体；手柄端内含吸水材料层(图3)。
若待测样品溶液中不含盐酸克伦特罗,当样品溶液进入测试端,盐酸克伦特罗金标单抗在硝酸纤维素膜上层析泳动,被硝酸纤维素膜上检测印迹处的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物拦截形成盐酸克伦特罗-BSA 偶联物—金标盐酸克伦特罗单抗复合物,并在该印迹处形成红色的条带(检测线)；测试端多余的金标盐酸克伦特罗单抗在硝酸纤维素膜上继续层析可被对照印迹羊抗鼠IgG 单克隆抗体捕获形成红色的对照条带(对照线)。
当待测尿样中含有一定量的盐酸克伦特罗时,盐酸克伦特罗与盐酸克伦特罗金标单抗形成复合物,从而与硝酸纤维素膜上的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物形成竞争,抑制了检测印迹处包被的盐酸克伦特罗-BSA 偶联物捕获盐酸克伦特罗金标单抗的量,而不能在检测线形红色印迹或形成颜色较浅的红色印迹,多余的盒标盐酸克伦特罗单抗继续层析在对照印迹处形成对照线[4]。
图3盐酸克伦特罗快速检测卡原理图4.5百睿TM盐酸克伦特罗快速检测卡什么优缺点？对比ELISA检测法，盐酸克伦特罗快速检测卡具有敏感、特异、快速、简便的特点，灵敏度能够达到临床使用的要求,且无需任何仪器设备，在10 min内就能检测出结果，适合现场快速检测和筛选工作[5]。
但检测卡只能判断样品中是否含有克伦特罗，不能准确地检测样品中克伦特罗的含量。
同时检测卡的检测结果受许多因素影响，如采样时间、所留标本时间长短、提供标本者的饮食情况、以及检测时的环境条件, 都将影响检测结果, 尤其是尿液中样本成分复杂, 特别是在含有盐酸克伦特罗结构相近的代谢物时, 都将导致出现假阳性[5]。
参考文献[1] 董昕，王娟. 盐酸克伦特罗的残留与食品安全[J]. 肉类研究. 2006(12): 37-39.[2] 袁利鹏，卢倚群，孙远明，等. 盐酸克伦特罗抗体纯化及直接竞争ELISA方法研究[J]. 食品科学. 2013(14): 227-231.[3] 孔莉娜，李北，李燕红. ELISA非特异性显色原因分析[J]. 中国实用医药. 2011(31): 133-134.[4] 姜艳彬，孙冠如，王海，等. 盐酸克伦特罗胶体金快速检测试纸条的研制[J]. 中国畜牧兽医. 2010(10): 109-113.[5] 谭美英，潘荞，肖安东，等. 盐酸克伦特罗快速检测卡的检测效果评价[J]. 饲料工业. 2007(03): 33-35.。