大鼠白介素10 ELISA试剂盒
大鼠白介素10ELISA试剂盒
产品编号：SEKR-0006
适用于大鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本
仅供研究，不用于临床诊断
目录
背景介绍 (01)
检测原理 (01)
注意事项 (02)
安全提示 (02)
试剂盒组成及储存 (03)
自备实验器材 (03)
样品收集及储存 (03)
试剂准备 (04)
检测步骤 (06)
结果判断 (06)
参数表征 (07)
参考文献 (09)
常见问题分析及解决办法 (10)
背景介绍：
IL-10是一种多效性细胞因子，是α-螺旋细胞因子IL-10家族成员。小鼠、大鼠和人IL-10cDNA序列均含178个氨基酸残基，内有18氨基酸信号肽序列。成熟IL-10分子为160氨基酸残基，小鼠和人IL-10分子中分别含5个和4个半胱氨酸残基，分子量为35～40kDa。在氨基酸水平上，大鼠IL-10与人和小鼠IL-10分别有85％和74％的同源性。IL-10为调控病毒感染、过敏反应、自身免疫炎症的关键分子，促进吞噬摄取和Th2应答，但抑制抗原提呈和促炎症反应应答。IL-10的单核细胞可有效调节单核/巨噬细胞功能。能抑制前列腺素E2和产炎性细胞因子包括TNF- ,IL-1,IL-6和IL-8的产生等。
检测原理：
本ELISA试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗大鼠IL-10单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的大鼠IL-10会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗大鼠IL-10抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的大鼠IL-10发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的大鼠IL-10，则HRP会使无色TMB变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；最后，在λmax=450nm（OD=450nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的大鼠浓度与OD成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中大鼠的浓度。
原理图：
注意事项：
1.试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2.试剂盒未使用时应保存在2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3.试剂盒使用前请在室温恢复30min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4.在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5.为避免交叉污染，请在试验中使用1次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.
6.浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶
7.盖上，使用前请离心处理（5-10S即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
8.除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
9.为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。
安全提示：
试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作大鼠员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。
试剂盒组成及储存：
试剂盒组成规格（96T）规格（48T）保存条件抗体预包被酶标板8*128*62-8℃标准品2支1支-20℃SR1标准品/样本稀释液16ml/瓶8ml/瓶2-8℃浓缩生物素化抗体120ul(100X)60ul(100X)2-8℃SR2生物素化抗体稀释液16ml/瓶8ml/瓶2-8℃浓缩酶结合物（避光）120ul(100X)60ul(100X)2-8℃SR3酶结合物稀释液16ml/瓶8ml/瓶2-8℃浓缩洗涤液（20×）30ml/瓶15ml/瓶2-8℃显色底物（避光）12ml/瓶6ml/瓶2-8℃终止液12ml/瓶6ml/瓶2-8℃封板胶纸4张2张
说明书1份1份
自备实验器材（不提供，可代购）
1．酶标仪（主波长450nm，参考波长630nm）
2．高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3．洗板机或洗瓶
4．37℃孵育箱
5．双蒸水，去离子水，量筒等
6．稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存：
1.细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在4℃条件下1000×g离心10min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。
2.血清样本：
室温血液自然凝固20min后，在4℃条件下1000×g离心10min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3.血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合20min，在4℃条件下1000×g离心10min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。
※注意：血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的最高值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。
试剂准备：
1.试剂回温：首先在实验前30min将试剂盒，待测样本放置于室温下，浓缩洗涤液如出现结晶，请放入
37℃温浴直到结晶全部溶解。
2.配制洗涤液：预先计算好稀释后的洗涤液使用体积，然后用双蒸水或去离子水将20倍浓缩洗涤液稀释
成1倍应用液，未用完的浓缩洗涤液放入4℃冰箱保存。
3.标准品梯度稀释：加入标准品/样本稀释液（SR1）1000 L至冻干标准品中，静置15分钟待其完全溶解后
轻轻混匀(浓度为、2000pg/ml)，按照以下浓度进行2倍稀释：2000、1000、500、250、125、62.5、31.25、0pg/ml进行稀释。2000pg/ml作为标准曲线的最高点浓度，标准品/样本稀释液（SR1）作为标准曲线的零点（0pg/ml）。复溶过的标准品原液（2000pg/ml）未用完的应废弃或根据需要按照一次用量分装，并将其贮存在-20～-80℃冰箱，具体如下图。
4.生物素化抗体工作液：预先计算好试验所需用量，用检测稀释液（SR2）将100倍抗体浓缩液稀释成1倍应用工作液（稀释前充分混匀），请在30分钟内加入到反应孔中。
生物素化抗体工作液具体稀释方法如下：
板条浓缩生物素化抗体（1:100）：μL检测稀释液（SR2）：μL
2201980
4403960
6605940
8807920
101009900
1212011880
4.酶结合物工作液：按每次试验所需用量配制，用酶结合物稀释液（SR3）将100倍浓缩酶结合物稀释成1
倍应用工作液（稀释前离心），请在30分钟内使用。
酶结合物工作液具体稀释方法如下：
板条浓缩酶结合物（1:100）：μL检测稀释液（SR3）：μL
2201980
4403960
6605940
8807920
101009900
1212011880
5.洗涤方法：
●自动洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，注入洗涤液为300ul/孔,注
与吸出间隔为30秒，洗板5次。
●手工洗板：甩尽酶标板孔中液体，在厚迭吸水纸上拍干，用洗瓶加入洗涤液300ul/孔，静止
30秒后甩净酶标板孔中液体，在厚迭的吸水纸上拍干，洗板5次。
检测步骤：
实验前30min,拿出试剂盒，恢复至室温，加入标准品/样本前，请洗板3次并甩干
加入100μl标准品及检测样本至反应孔中,封板后于37℃孵箱孵育90min
拍板&洗板4次
加入100μl生物素化抗体工作液至反应孔中，封板后于37℃孵箱孵育60min
拍板&洗板4次
加入100μl酶结合物工作液至反应孔中，封板后于37℃孵箱孵育30min
拍板&洗板5次
加入100μl显色底物至反应孔中，封板后于37℃避光显色15min
加入50μl终止液，即刻用酶标仪450nm波长下测量OD值（5分钟内）
结果判断：
1.用酶标仪450nm波长测定OD值。选择双波长检测，参考波长为630nm。如不能进行双波长检测，请
用450nm的OD测定值减去630nm的OD测定值。
2.计算标准品、样品的平均OD值：每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值
3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中含量可通过对应OD值由标
准曲线换算出相应的浓度。
4.若标本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。
参数表征：
标准品浓度(pg/ml)OD值1OD值2平均值矫正值
00.0880.0860.087-
31.250.2470.2400.2430.156
62.50.2850.2770.2810.194
1250.4230.4130.4180.331 2500.6720.6550.6640.577 500 1.092 1.064 1.0780.991 1000 1.777 1.733 1.755 1.668 2000 2.896 2.824 2.860 2.773
本图仅供参考，应以当次试验标准品绘制的标准曲线计算大鼠IL-10的样本含量。
2.灵敏度：
最低可检测大鼠浓度达15pg/ml，
20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。
3.特异性：
不与大鼠GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、TNF-α、PDGF-BB、β-NGF
人的IL-10、IL-10R反应。
4.重复性：
板内，板间变异系数<10%。
5.回收率：
IL-10，计算回收率。
样本类型平均回收率（%）范围（%）
血浆
9389－96
细胞培养上清
10390－116
6.线性稀释：
分别在选取的4份健康大鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度大鼠IL-10，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。
稀释比例回收率(%)血浆细胞培养上清
1:2平均回收率（%）
10498范围(%)
98－11086－110
1:4平均回收率（%）
107103范围(%)
99－11591－114
1:8平均回收率（%）
10299范围(%)
90－11493－105
1:16平均回收率（%）
105101范围(%)
93－11694－107
参考文献：
1.Ouyang,W.et al.(2011)Annu.Rev.Immunol.29:71.
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16.Kotenko,S.V.et al.(2000)J.Biol.Chem.276:2725.
17.Hor,S.et al.(2004)J.Biol.Chem.279:33343.
18.Sheppard,P.et al.(2003)Nat.Immunol.4:63.
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20.Gu,Y.et al.(2008)Eur.J.Immunol.38:1807.
常见问题及解决方法：
问题可能原因解决方法
高背景或阴性对照值偏高洗板不充分将洗涤液注入反应孔充分洗涤，彻底拍干孔中液体
酶结合物过量检查酶稀释度，按说明书标识的稀释度稀释
底物污染
加底物前检查底物是否为透明无色，请勿用变蓝的底物，重
新用新的底物试验
阴性对照孔被阳性对照
污染
注意洗涤时不要把洗液溢出孔外，不使阴阳对照孔液体涟接
一起
不同批次试剂混用检查试剂批号，请勿用不同批次试剂
显色信号弱试剂过期检查试剂盒有效期，请勿用过期试剂孵育时间过短按说明书中规定的时间孵育
试剂污染检查试剂是否污染，请勿用污染的试剂酶标仪滤光片不匹配检查酶标仪设置及滤光片是否匹配
试剂盒平衡不充分确保试剂盒试验前平衡至室温
显色时间不够增加底物显色时间
无显色信号检测抗体、酶、或显色
剂漏加
检查试验操作流程，重复试验
酶被叠氮钠污染请使用重新配制的试剂
试剂添加顺序有误检查复核试验添加顺序、流程，重复试验
标曲佳但样品孔无信号样品中靶标物含量低或
样品中无靶标物
设置阳性对照，重复实验样品基质效应影响检测重新稀释样品后复测
标曲佳但样品信号偏高样品中待检物含量超过
标准曲线范围
重新稀释样品后复测
边缘效应孵育温度不均衡孵育时每步均使用新的封板胶纸，避免在环境温度变化大的地方孵育，勿叠放反应板
白介素1β(IL1b)检测试剂盒 SEA563Hu使用说明书
SEA563Hu96T 白介素1β(IL1b)检测试剂盒 (酶联免疫吸附试验法) 适用生物：人 使用说明书 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 第12版（2016年05月修订） [预期应用] 本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL1b含量。 [试剂盒内容] 试剂名称数量试剂名称数量 96孔板（预包被）196孔板覆膜4 标准品2标准品稀释液1×20mL 检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL 检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mL TMB底物1×9mL终止液1×6mL 洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1 [需自备的设备及试剂] 1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道或多道微量移液器及吸头 3、稀释样品的EP管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2 [试剂盒的储存及有效期] 1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶 液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。 2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝 箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。 注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。
白介素8(IL8)检测试剂盒 SEA080Hu使用说明书
SEA080Hu96T 白介素8(IL8)检测试剂盒 (酶联免疫吸附试验法) 适用生物：人 使用说明书 仅供体外研究使用，不用于临床诊断! 第12版（2016年05月修订） [预期应用] 本试剂盒运用双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL8含量。 [试剂盒内容] 试剂名称数量试剂名称数量 96孔板（预包被）196孔板覆膜4 标准品2标准品稀释液1×20mL 检测溶液A1×120μL检测溶液A稀释液1×12mL 检测溶液B1×120μL检测溶液B稀释液1×12mL TMB底物1×9mL终止液1×6mL 洗涤液（30×）1×20mL使用说明书1 [需自备的设备及试剂] 1、450±10nm滤光片的酶标仪（建议仪器使用前提前预热） 2、单道或多道微量移液器及吸头 3、稀释样品的EP管 4、蒸馏水或去离子水 5、吸水纸 6、盛放洗液的容器 7、0.01mol/L（或1×）磷酸缓冲盐(PBS)，pH=7.0-7.2 [试剂盒的储存及有效期] 1、未开封的试剂盒：所有试剂均按试剂瓶标签上所示保存。请注意，收到试剂盒后请尽快将标准品、检测溶 液A、检测溶液B以及96孔板保存于-20o C，其余试剂请置于4o C保存备用。 2、使用后的试剂盒：剩余试剂仍需按照试剂瓶标签所示的温度保存，此外，请将未使用酶标条用包含干燥剂的铝 箔袋装好，并拉紧密封铝箔袋，置于-20o C保存。 注意： 试剂盒内酶标条可拆卸，按实验需求可分多次使用；使用后的剩余试剂盒建议在首次实验后1个月内使用完毕。产品过期时间以盒子上的标签为准，保质期内所有组分都确保是稳定的。 [标本的采集与保存] 1、血清：将收集于血清分离管中的全血标本在室温放置2小时或4o C过夜，然后1,000×g离心20分钟，取上 清即可，将上清置于-20o C或-80o C保存，避免反复冻融。 2、血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8o C1,000×g离心15分钟，
人白介素6IL-6试剂盒使用方法
人白介素6(IL-6)试剂盒使用方法 检测范围：96T 0-8 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP 标记的白介素6(IL-6)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素6(IL-6)浓度。 试剂盒组成 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。
人白介素IL试剂盒的操作说明书
人白介素I L试剂盒的 操作说明书 Document serial number【UU89WT-UU98YT-UU8CB-UUUT-UUT108】
人白介素6（IL-6）试剂盒的操作说明书 人白介素6（IL-6）试剂盒的操作说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 0-8ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6（IL-6）含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6（IL-6）水平。用纯化的人白介素6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6（IL-6），再与HRP标记的白介素6（IL-6）抗体结
合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6（IL-6）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白介素6（IL-6）浓度。 试剂盒组成 130倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2酶标试剂6ml×1瓶8标准品（16ng/L）0.5ml×1瓶 3酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶 4样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融
2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 8ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 4ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 2ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 1ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 0.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
ELISA IL-6(人白介素) 操作流程
人白介素6(IL-6)酶联免疫吸附测定试剂盒 使用说明书 产品编号：1910231 本试剂盒仅供体外研究使用、不用于临床诊断! 预期应用 ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-6含量。 实验原理 用纯化的IL-6抗体包被微孔板，制成固相载体，往微孔中依次加入标本或标准品、生物素化的IL-6抗体、HRP标记的亲和素，经过彻底洗涤后用底物(TMB)显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的IL-6呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（值），计算样品浓度。 试剂盒组成及试剂配制 1、酶标板：一块（96孔） 2、标准品（冻干品）：2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至 1ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为10,000 pg/ml，将其稀释为500 pg/ml后，再做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成500 pg/ml，250 pg/ml，125 pg/ml，62.5 pg/ml，31.2 pg/ml，15.6 pg/ml，7.8 pg/ml，样品稀释液直接作为空白孔0 pg/ml。如配制500 pg/ml标准品：取0.5ml （不要少于 0.5ml ）500 pg/ml的上述标准品加入含有0.5ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即 可，其余浓度以此类推。 3、样品稀释液：1×25ml。 4、人白介素6:1×25ml。 5、HRP,100X：1×150 /瓶（1:100）。临用前以HRP 1:100稀释（如：10 HRP / 990 HRP稀释液），充分混匀，稀释前根据预先计算好的每次实验所需的总量配制（100/
Wistar大鼠EAE模型的制备
Wistar大鼠EAE模型的制备 作者：刘颖刘华辛晋敏马太花梁丽云马存根摘要目的:检测EAE中起关键趋化作用的MCP-1的表达，探讨山西医科大学动物室的Wistar大鼠诱导实验性变态反应脑脊髓炎动物模型。方法:采用免疫诱导方法制备EAE模型并HE染色，同时用原位杂交法检测EAE 大鼠MCP-1的表达。结果:免疫后12d～17d，发病鼠出现EAE临床症状，HE染色，光镜下可见血管周炎性浸润，MCP-1的表达明显增加。结论:山西医科大学Wistar大鼠成功的诱导实验性变态反应脑脊髓模型是可信、可用的。 关键词完全抗原;Wistar大鼠;EAE;MCP-1 多发性硬化（Multiple Sclerosis，MS）是中枢神经系统（CentralNervous System，CNS）的炎性脱髓鞘疾病，多发于20岁～40岁女性，大多数患者的病程为复发和缓解交替，在复发期常出现视力受损、肢体无力、平衡失调、麻木、感觉异常、口齿不清、眩晕、大小便机能失调等症状。MS病因和发病机制复杂，一般认为与免疫、病毒感染、遗传等因素有关。实验性变态反应性脑脊髓炎（ExperimentalAu-toimmune Encephalomyelitis，EAE）的病理变化及发病机制与急性MS极其相似，因此，成功的建立EAE模型对MS的研究有很重要的意义。本实验的研究可为后期的研究工作提供基础。 1 材料与方法 1.1 试验材料Wistar大鼠:购自山西医科大学动物实验室。原位杂交试剂盒:购于武汉博士德生物制品公司。
1.2 方法 1.2.1 完全抗原的制备:取液体石蜡40mL，羊毛脂20g混合、加热并融化制得不完全弗氏佐剂（In-complete Freund'sAdjuvant，IFA），分装入10mL小瓶，高压灭菌后4℃冰箱保存。健康350g～450g左右雌性豚鼠用3%戊巴比妥45mg/kg腹腔注射至四肢瘫软。无菌状态下，剪开胸腔、剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注直至肝脏变白;迅速取其脑脊髓，小心剥离脑脊膜后称重，加入等量生理盐水，制成50%（W/V）匀浆。同时融化IFA，1mL IFA加入约10mg的M.bovisBCG即制得CFA。将CFA与GPSCH等体积混合，用注射器反复抽推，制成油包水乳液，制成完全抗原，放置冰上备用。 1.2.2 模型制备:将健康、雌性Wistar大鼠30只，随机分成正常对照组、佐剂组和EAE组，三组大鼠左后肢足垫皮下分别注射完全抗原0.4mL/只，百日咳原液0.05mL/只（含5.0×10 9 个菌体）。记免疫当日为零天，每天称重，采用双盲法两人进行临床症状评分，取平均值，临床评分2分为发病动物，临床评分采用通用的五分评分法，即:0分无症状，1分动物尾部肌张力降低，2分动物尾部麻痹+后肢肌张力低，3分尾麻痹+后肢肌张力重度低，4分尾麻痹+四肢麻痹，5分频死状态。发病动物只数/实验动物只数为发病率。免疫后12d～17d，3%戊巴比妥钠45mg/kg腹腔注射，至四肢瘫软，无菌状态下，剪开胸腔剥离心包，0.01mol/L PBS左心室灌注至肝脏变白;4%多聚甲醛灌流至尾部僵直，解剖迅速取其大脑视交叉前后2mm组织、小脑和脑桥部、脊髓颈腰膨大处，再用4%多聚甲醛固定半小时，做常规石蜡包埋、切
《临床骨科杂志》投稿攻略发表论文
临床骨科杂志 一、发表说明 本团队专注于论文写作与发表服务，擅长案例分析、编程仿真、图表绘制、理论分析等，论文写作、发表300起，具体价格信息联系： 本团队并非任何杂志编辑中心，本中心是专业代发论文的机构，与各个杂志社具有长期良好的合作关系，也就是我们通过我们的特殊渠道将论文送给杂志社我们特定的内部人处理论文，保证较高的上稿率，以解决投稿人投稿后焦急的等待与石沉大海的结局。通过我们可以较为容易达到发表的目地，当然，论文的质量也是重要的基础。 二、期刊简介如下 本杂志是国内外公开发行的骨科专业学术性期刊，国家科技部中国科技论文统计源期刊。面向临床骨科医生、相关学科医生和研究人员，以临床研究为基石，以新技术、新方法、新思想为引导，普及与提高相结合。本刊注重科学性、创新性、实用性，文章内容翔实、图文并茂、格式规范，可读性强。 临床论著 一期病灶清除植骨融合内固定治疗跳跃性胸腰椎结核实验与临床 兔脂肪干细胞直接修复陈旧性全层兔膝关节软骨缺损综述 肩袖损伤修复技术的研究现状方法与应用 锁定钢板固定治疗老年股骨转子间骨折
临床论著 后路寰枢椎椎弓根钉固定融合治疗寰枢椎不稳或脱位方法与应用 重建钢板结合自体植骨治疗粉碎性锁骨骨折临床论著 保留颈后方韧带复合体对颈椎后路单开门椎板成形术椎板开门角度的影响方法与应用 股骨干骨折内固定术后并发急性感染的外科治疗临床论著 不同方法治疗桡骨远端C型骨折的疗效比较方法与应用 腓骨远端爪型钢板治疗外踝骨折的疗效观察临床论著 锁定加压钢板结合植骨术治疗胫骨平台骨折方法与应用 关节镜下带线锚钉紧缩内侧支持带治疗急性髌骨脱位临床论著 股骨近端外侧锁定钢板治疗Russell-TaylorⅡB型股骨转子下骨折方法与应用 腰椎滑脱症的手术治疗体会临床论著 超关节外固定架结合内固定治疗PilonⅢ型骨折方法与应用 带线锚钉修复跟腱断裂实验与临床 组织工程化凝胶诱导股骨头坏死血管化的实验研究方法与应用 空心加压螺钉内固定治疗锁骨骨折综述 脊柱内固定术后切口深部感染诊断与治疗进展方法与应用 微创内固定系统治疗股骨髁间髁上粉碎性骨折投稿须知 投稿须知 临床论著 一期后路病灶清除植骨融合钉棒固定治疗L5～S1结核方法与应用 DVR解剖型接骨板结合注射型人工骨治疗桡骨远端不稳定性骨折临床论著微创经肌间隙入路结合伤椎固定治疗胸腰椎爆裂骨折方法与应用 带线铆钉结合克氏针多轴固定治疗肩锁关节脱位临床论著
大鼠立体定向图谱解_部分1
de Groot大鼠脑立体定向图谱 参考文献： de Groot J. The rat hypothlamus in stereotaxic coordinates.J Comp Neurol 1959, 113:389-400 使用说明 （一）图谱使用范围 本图谱使用范围主要是下丘脑及其周围结构，也涉及到视前区和中脑上部。选用体重 200-300g英格兰大白鼠的脑，制成冰冻连续切片，片厚50um。在冠状平面，自前而后每隔0.4mm 取一切片，共14张。在矢状平面，中线左侧0.2和1.1mm处各取一切片。全部共16幅平面图。 （二）规定以下各种坐标平面对大鼠下丘脑各结构进行定位 1.水平零平面（H0） 令动物上门齿后缘根部高于两侧颅骨外耳孔中心连线(耳间线)5mm。此时通过上门齿后缘根部所作的水平面（即与定向器框架水平面平行的面)为H0，低于H0者为负值，高于H0者为正值。这样通过耳间线的水平面就比H0平面低5mm，为H-5。按此规定，H0平面正好通过脑的前连合与后连合。 2.冠状零平面（A0） 通过耳间线并与H0平面相垂直的冠状平面为A0。在A0以前的各冠状平面均以正数表示如 A2.8即表示A0以前2.8mm的冠状平面。本图谱所选平面自A2.8到A8.0止。
3.矢状零平面（L0） 通过前囟并与H0 A0两平面均垂直相交的平面称L0。前囟是两侧颅骨、顶骨在正中线的汇合点。前囟位置一般在A0前5.9mm（A5.7-A6.1），H0以上6.3mm(H+6.1-H+6.6)左右。这样，L0就恰好通过矢状缝，而把脑分为左、右对称的两半。本图谱所用L0.2、L1.1两平面分别表示L0外侧0.2mm及1.1mm处的矢状平面。 根据上述各坐标平面，可由图谱查出下丘脑某一结构的坐标读数，并定出其具体空间位置。（三）图谱的表示方法 图谱中核团和脑区的轮廓用虚线表示，纤维束的轮廓用实线表示。各结构的名称用西文缩写。
用ELISA试剂盒检测人白介素6 IL-6的浓度
双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度 人IL-6简介： 白介素6（IL-6）是一类多功能的蛋白，在宿主防御，急性期反应，免疫反应，造血功能，神经系统等方面起到重要的作用。白介素6根据来源不同是分子量从21到28kDa不同的单链蛋白。白介素6在多种细胞中都有表达，如T细胞、巨噬细胞、纤维原细胞、肝细胞、血管内皮细胞等。由于IL-6具有不同的活性，所以IL-6也被称为干扰素β2(IFN-β2)、B细胞刺激因子-2(BSF-2)、杂交瘤细胞生长因子、肝细胞刺激因子、毒性T细胞分化因子、巨噬细胞粒细胞诱导因子(MGI-2A)。白细胞介素6在B-细胞向Ig分泌细胞的转化过程起到重要的作用，参与了淋巴细胞和单核细胞的分化，诱导神经细胞在B-细胞，T-细胞，肝细胞，造血干细胞以及中枢神经系统的分化作用。此外，肌肉 运动收缩作用后白细胞介素6会被释放到血液中，进而能促进脂肪的分解并改善机体的胰岛素耐受性。 检测原理: 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-6的浓度。IL-6捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-6会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-6抗体后，抗人IL-6抗体与IL-6接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-6将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-6浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-6浓度。 标本收集: 1.标本的收集请按下列流程进行操作： A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可； B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液； C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集； D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。 2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂； 3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除； 4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果不准确。 注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。 注意事项: 1.试剂盒请保存在2～8℃。 2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。 3.若标准品复溶后，请在三天内用完。 4.底物请勿接触氧化剂和金属。 5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。 6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。 7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。 8.室温反应，请严格控制在25～28℃。 9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。 10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。 11.加样过程中避免气泡的产生。 12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。 检测前准备工作:
上海中学生命科学创新实验室建设的实践与思考
上海中学生命科学创新实验室建设的实践与思考 一、创新实验室建设理念与目标： 2008年，上海中学获上海市教委批准率先开展“上海中学创新素养培育实验项目”，在“面”上注重整体推进学生的创新素养培育，在“点”上设置科技实验班（以培养学生的科技创新素养为主），力图以“聚焦志趣”为核心，探索出一条创新人才早期培育新路。为匹配“创新素养培育实验项目”，促进学生的志趣聚焦与创新潜能的开发，上海中学建设了包括“生命科学创新实验室”在内的10个创新实验室。 上海中学生命科学创新实验室遵循上海中学创新人才早期培育以“聚焦志趣”为核心的理念，遵循“让每一个学生的潜能得到充分开发”的教学观点，遵循“高立意、高思辨、高互动”的“三高”教学模式，围绕“以德育为核心，创新精神和实践能力为重点”的素质教育要求，着眼于使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，使学生掌握相关的学科思想，具备学科基本素养，锻炼逻辑性思维、批判性思维和创造性思维。 二、创新实验室设备配置和课程设置 1、现代生物化学和分子生物学实验室 现代生物化学和分子生物学实验室 配备了Thermo生物安全柜、苏净超净工 作台、ABI PCR仪、Bio-rad DNA电泳 系统和蛋白质电泳/转移系统、超声细胞 破碎仪、DNA杂交仪、BioTek酶标仪、 Eppendorf 紫外分光光度计等专业设备， 可承担多门基础型课程和拓展型课程的 教学和创新课题的研究工作。 上海中学基础型和拓展型课程注意 发展学生的问题意识、发展性思维和探 索精神，采取“教授与自学相结合、知 识性学习与实践性学习相结合、基础性
学习与研究性学习相结合、母语教学与双语教学相结合”的策略，让学生从被动接受式学习逐渐转变为主动探索式学习。 生命科学学科自20世纪50年代以来发展极其迅速，中学生命科学拓展型课程有必要从学科的前沿性和时代性出发，展示现代生命科学和生物技术发展的成果，使学生了解学科的最新进展，感受学科的未来发展方向，激发学生科技创新的热情。基于这一思考，上海中学除了实施上海课程标准外，增设了“走进基因工程”、“话说基因”、“转基因植物栽培”、“现代生物学基础实验”、“人类基因组与生物信息学”等理论与实验相结合的拓展型课程，给予学生必要的知识铺垫，使学生有可能从中发现问题从而进一步探究（表1）。 表1、现代生物化学和分子生物学分层实验课程的设置（部分） 基础实验课程拓展型课程探究性课题 1.目的基因的克隆（PCR） 2.质粒的抽提、纯化、鉴定和 转化 3.DNA指纹图谱（凝胶电泳） 4.DNA杂交 5.RNA的抽提和cDNA的合成 6.血红蛋白凝胶柱层析 7.蔬果中维生素C含量的测定 8.紫外线抑菌作用的研究 9. ABO血型的鉴定 10. 人外周血淋巴细胞培养及染色体观察 1、转基因大豆的鉴别 2、蚕豆微核实验在环境 监测中的应用 3、固氮菌的作用 4、水生生物对水中N、P 的吸附 5、中药对大型水蚤心率 的影响 6、蔬果抑菌作用的探究 7、精油抑菌作用的探究 8、不同奶品中蛋白质含 量的测定 9、影响酶活性的因素 1、大豆耐盐基因的预测与筛选 2、探讨从原球茎直接提取铁皮石斛原药成 分的可能性 3、铁钼离子浓度对光合细菌产氢效率的影 响和产氢废水的筛选 4、栀子果实根茎叶指纹图谱初探及提取工 艺研究 5、黄柏中高纯度小檗碱提取方法的研究 6、再生纸浆的酶法辅助漂白改性 7、水解乳蛋白替代培养基配方研制 8、免疫金试纸法快速检测“瘦肉精”研究 9、转基因黄芪毛状根培养基的替换 10、PCR鉴定鸟类性别 如表1所示，学生在学校开设的基础型实验课程和拓展型课程（含理论课程与实验课程）的基础上，根据其兴趣提出了创新课题，并在课题立项和实施过程中了解科学研究的一般思路，掌握科学思想方法，磨练意志，为其日后的发展打下坚实基础。 原野、刘文嘉辉、史天泽和陈文朴同学在学习了“质壁分离”相关内容后提出：植物细胞在受盐胁迫时在细胞水平上表现出了原生质层和细胞壁分离的现象，那么在分子水平上植物会表现出怎样的响应特征呢？如果四位同学没有学习和实践过“目的基因的克隆和鉴定”等相关知识，估计他们也问不出这个问题，当然也就不存在“大豆耐盐基因的预测与筛选”课题了。（本项目获得第二十五届Intel上海市青少年科技创新大赛一等奖、生命科学杰出项目专项奖、全国青少年科技创新大赛三等奖。） 创新思维不可能一蹴而就，只能慢慢培养。中学时代的每个学生都有着良好的创新潜能，但对创新潜能的激发需要良好的环境和氛围。因此，培养学生的创
IL-6试剂说明书
人白介素6（IL-6）试剂盒的操作说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围：96T 0-8ng/L 使用目的:本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6（IL-6）含量。 实验原理:本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6（IL-6）水平。用纯化的人白介素6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6（IL-6），再与HRP标记的白介素6（IL-6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6（IL-6）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白介素6（IL-6）浓度。 试剂盒组成 1.30倍浓缩洗涤液20ml×1瓶7终止液6ml×1瓶 2.酶标试剂6ml×1瓶8标准品（16ng/L）0.5ml×1瓶 3.酶标包被板12孔×8条9标准品稀释液1.5ml×1瓶 4.样品稀释液6ml×1瓶10说明书1份 5.显色剂A液6ml×1瓶11封板膜2张 6.显色剂B液6ml×1/瓶12密封袋1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 8ng/L5号标准品150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 4ng/L4号标准品150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 2ng/L3号标准品150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 1ng/L2号标准品150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 0.5ng/L1号标准品150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。
用ELISA试剂盒检测人白介素4 IL-4 方法步骤
双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-4 的浓度 IL-4简介： 白介素4(IL-4)是一种多功能细胞因子，主要是由激活的T淋巴细胞、肥大细胞与骨髓基质细胞表达。IL-4因为糖基化的不同，分子量从15到19kDa不等。 IL-4可以对多种细胞起到调节免疫反应功能的作用。白细胞介素4参与多种B-细胞等此类细胞的激活过程，是DNA 合成的协同刺激分子，它能诱导静息B细胞上II 型MHC (主要组织相容复合体)分子的表达。能增强IgE与 IgG1的分泌以及在细胞表面的表达，还可以调节淋巴细胞和单核细胞上对IgE低亲和Fc受体的表达。IL-4在抗体亚型转换中也起到重要的调节作用，是T辅助前体细胞向Th2细胞分化的重要调节因子，从而间接调节体液免疫以及抗体的生成。此外，白细胞介素4基因在机体中的的遗传变异可导致缺血性中风易感性提高，脑血管意外或脑梗塞等疾病。 检测原理: For personal use only in study and research; not for commercial use 本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法检测样本中IL-4 的浓度。IL-4 捕获抗体已预包被于酶标板上，当加入标本或参考品时，其中的IL-4 会与捕获抗体结合，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。当加入生物素化的抗人IL-4 抗体后，抗人IL-4 抗体与IL-4 接合，形成夹心的免疫复合物，其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。随后加入辣根过氧化物酶标记的亲合素。生物素与亲合素特异性结合，亲合素连接的酶就会与夹心的免疫复合物连接起来；其它游离的成分通过洗涤的过程被除去。最后加入显色剂，若样本中存在IL-4 将会形成免疫复合物，辣根过氧化物酶会催化无色的显色剂氧化成蓝色物质，在加入终止液后呈黄色。通过酶标仪检测，读其450nm处的OD值，IL-4 浓度与OD450值之间呈正比，通过参考品绘制标准曲线，对照未知样本中OD值，即可算出标本中IL-4 浓度。 标本收集: 1.标本的收集请按下列流程进行操作： A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可； B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液； C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集； D. 若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。 2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂； 3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除； 4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。 注：正常人血清或血浆样本请用标本缓冲液做倍比稀释后再检测。 注意事项: 1.试剂盒请保存在2～8℃。 2.浓缩洗涤液因在低温下可能有结晶，请水浴加热使结晶完全溶解后再配制工作液。 3.若标准品复溶后，请在三天内用完。 4.底物请勿接触氧化剂和金属。 5.加样时，请及时更换枪头，避免交叉污染。 6.严禁混用不同批号的试剂盒组份。 7.充分混匀对保证反应结果的准性很重要，在加液后请轻轻叩击边缘以保证混匀。 8.室温反应，请严格控制在25～28℃。 9.洗涤过程是至关重要的，洗涤不充分会使精确度下降并导致结果误差较大。 10.试验中标准品和样本检测时建议作双复孔。 11.加样过程中避免气泡的产生。 12.血清和血浆标本的检测时，检测抗体的孵育时间应适当延长。 检测前准备工作:
人白介素-18(IL-18)ELISA试剂盒说明书
人白细胞介素-18（IL-18）酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 厦门慧嘉生物科技有限公司 本试剂仅供研究使用目的：本试剂盒用于测定人血清，血浆及相关液体样本中白细胞介素18（IL-18）的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白细胞介素-18（IL-18）水平。用纯化的人白细胞介素-18（IL-18）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-18，再与HRP标记的羊抗人抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-18（IL-18）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人白细胞介素-18（IL-18）含量。 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/
分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备 用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标 准品100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为90 ng/L，60 ng/L，30 ng/L，15 ng/L，7.5 ng/L）。 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7.温育：操作同3。 8.洗涤：操作同5。 9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. 10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。 2．浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 3．各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 4．请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计
小鼠白介素ELISA试剂盒说明书,小鼠白介素6(IL-6)酶联分析检测ELISA试剂盒
小鼠白介素ELISA试剂盒说明书,小鼠白介素6（IL-6） 酶联分析检测ELISA试剂盒 国内权威的科研试剂供应商，乔羽生物专业经营进口分装和原装、国产的Elisa试剂盒，品 质保证，技术严格，无效果退款退货。 Elisa kit规格：48孔配置/96孔配置 标准品稀释液：1.5ml×1瓶 酶标试剂：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96） 本试剂仅供研究使用标本：血清或血浆 上海乔羽生物专业供应： 使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆及相关液体样本白介素6（IL-6） 含量。 试验原理： IL-6试剂盒是固相夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）.已知IL-6浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检 测。先将IL-6和生物素标记的抗体同时温育。洗涤后，加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤，去除未结合的酶结合物， 然后加入底物A、B，和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中IL-6的浓度呈比例关系。 试剂盒内容及其配制 试剂盒成份（2-8℃保存）96孔配置48孔配置配制 96/48小鼠份酶标板1块板（96T）半块板（48T）即用型 塑料膜板盖1块半块即用型 标准品：80ng/ml 1瓶（0.6ml）1瓶（0.3ml）按说明书进行稀 稀 空白对照1瓶（1.0ml）1瓶（0.5ml）即用型 标准品稀释缓冲液1瓶（5ml）1瓶（2.5ml）即用型 生物素标记的抗IL-6抗体1瓶（6ml）1瓶（3.0ml）即用型 亲和链酶素-HRP 1瓶（10ml）1瓶（5.0ml）即用型 洗涤缓冲液1瓶（20ml）1瓶（10ml）按说明书进行稀 释 底物A 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 底物B 1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 终止液1瓶（6.0ml）1瓶（3.0ml）即用型 标本稀释液1瓶（12ml）1瓶（6.0ml）即用型 自备材料 1．蒸馏水。 2．加样器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
人白介素6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用方法
人白介素6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用方法 检测范围：96T 0-8 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中白介素6(IL-6)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素6(IL-6)水平。用纯化的人白介素6(IL-6)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白介素6(IL-6)，再与HRP 标记的白介素6(IL-6)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中人白介素6(IL-6)浓度。 试剂盒组成 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用 5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。
人白介素6(IL-6)酶联免疫分析试剂盒使用说明书
人白介素6（IL-6）酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 检测范围：15.6pg/ml-1000pg/ml 最低检测限：3.9pg/ml 特异性：本试剂盒可同时检测天然或重组的人IL-6，且与其他相关蛋白无交叉反应。 有效期：6个月 预期应用：ELISA法定量测定人血清、血浆、细胞培养上清或其它相关生物液体中IL-6含量。 说明 1．试剂盒保存：-20℃（较长时间不用时）；2-8℃（频繁使用时）。 2．浓洗涤液低温保存会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。 3．中、英文说明书可能会有不一致之处，请以英文说明书为准。 4．刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。 概述 白细胞介素或白介素（interleukin，IL）是一组细胞因子（分泌的信号分子）。最早发现在白细胞中表达作为细胞间信号传递的手段。实际上，白细胞介素可以由多种细胞产生。免疫系统的功能，在很大程度上依赖于白细胞介素。一些罕见的白细胞介素缺陷不足都常出现自身免疫性疾病或免疫缺陷。IL-6是一种分子量为26ｋＤ的蛋白质，由184个氨基酸组成。最初人们只发现其在白细胞中合成并在白细胞间发挥作用而命名。随研究的不断进展，人们逐渐发现不仅激活的淋巴细胞、单核巨噬细胞可以合成和分泌IL-6，而且骨髓细胞和部分肿瘤细胞等也可以产生IL-6。其作为一种机体在免疫应答中产生的重要介质,具有多种生物学活性。IL-6是一种多效性细胞因子，能调节多种细胞功能，包括细胞增殖、细胞分化、免疫防御机制及血细胞生成等。IL-6与多种肿瘤发生、发展关系密切，它通过干预细胞的黏附性