植物蛋白质的提取和测定实验

植物蛋白质含量的测定

一、原理

查询资料，得知玉米蛋白质含量较高。再经Tris-HCl缓冲液研磨、离心后，得可溶性蛋白质于上清液中，将沉淀用碱水解则得到非可溶性蛋白质的提取液，将提取液与卡马斯亮蓝溶液反应呈蓝色，在595nm处有最大吸收峰。在一定范围内，蛋白质含量与反应液在595nm 波光的吸收度呈正比，由此可求出蛋白质的含量

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料：玉米粒

（二）仪器设备：

分光光度计；离心机；恒温水浴；研钵；离心管；刻度移液管；微量滴定管；试管等（三）试剂：

100μg／ml牛血清标准蛋白质溶液；0.15mol/L NaCl; 1mol/LNaOH;50mmol/L Tris-HCl提取液、卡马斯亮蓝溶液

三、实验步骤

（一）标准曲线的绘制

编号 0 1 2 3 4 5

标准蛋白（ml) 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Tris-HCl提取液(ml) 1 0.8 0.6 0.4 0.2 0

卡马斯亮蓝溶液(ml) 5 5 5 5 5 5

每管牛血清蛋白含量(ml) 0 20 40 60 80 100

加入表中的试剂，摇匀，室温放置4分钟，以不加标准蛋白的0号管为空白，在595nm波长处测定吸光度。以标准蛋白浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（二）样品的测定

称取鲜样0.5g，加提取液6ml，研磨成匀浆后，在10000r/min,4℃条件下离心20min，上清液即为可溶性蛋白质提取液。沉淀加3ml1mol/L NaOH溶液，在90℃恒温水浴锅中加热20min，在4000r/min，4℃条件下离心10min，上清液为非可溶性蛋白质提取液。取上清液各0.1ml，分别加入Tris-HCl提取液0.9ml，然后再分别加入卡马斯亮蓝溶液5ml，摇匀，于595nm 波长处测定吸光值。根据吸光度查标准曲线，求出样品中的蛋白质含量。

四、结果计算：

样品中蛋白的含量（μg/g）＝查标准曲线值（μg）×提取液总体积（ml）/(样品鲜重（g）×测定时加样量（ml）)

粗蛋白量（％）＝蛋白氮含量×6.2