HPLC测定参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量

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不同产地丹参中隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮Ⅱ_A的含量比较

ABSTRACT OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ ，tanshinone Ⅱ A in Salviae miltiorrhizae from different habitats. METHODS： RP-HPLC method was adopted. The determination was performed on Kromasil TMC18 （250 mm× 4.6 mm，5 µm） column with mobile phase consisted of methanol-water （75 ʒ 25） at flow rate of 1 mL ㊃ min-1. The detection wavelength was set at 270 nm and the column temperature was 30 ℃ . The injection size was 10 µL. RESULTS： The linear ranges of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡA in S. miltiorrhizae were 1.45～10.19 µg （r＝0.999 8）， 2.16～15.12 µg （r＝0.999 6）， 3.15～22.06 µg （r＝0.999 7），repsectively. The average recoveries were 99.44％，99.48％，99.34％， respectively. RSDs were 0.2％，0.1％， 0.1％（n＝6） . There were significant differences in the contents of cryptotanshinone，tanshinone Ⅰ，tanshinone ⅡA in S. miltiorrhizae from different habitats. CONCLUSION：The method is stable，reliable and reproducible for the quality control of S. miltiorrhizae. KEY WORDS Salviae miltiorrhizae；Cryptotanshinone；Tanshinone Ⅰ；TanshinoneⅡA；RP-HPLC；Habitats；Content determination 丹参是唇形科植物丹参的根及根茎，主产四川、山西、河北、江苏、安徽等省。中医理论认为丹参性味苦、微寒，归心、肝二经，具有祛瘀止痛、活血通络、清心除烦的功效。丹参的有效成分包括脂溶性成分（二萜醌类）和水溶性成分（酚酸类），均具有一定的生理活性。由于受产地、品种、气候和生态环境、炮制方法等影响，不同丹参药材所含主要活性成分差异较大。《中国药典》丹参项下脂溶性成分以丹参酮ⅡA 作为质控指标[1]，而近年研究表明，丹参的脂溶性成分还包括隐丹参酮、 3] 丹参酮Ⅰ等，且含量较高、活性较强 [2，。本试验收集了河北、山东、江苏、河南和安徽等主产地的丹参，包括不同栽培方法的丹参，采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法对其中所含隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA 的含量进行测定和比较，以为丹参的选优与临床应用提供一定的参考依据[4]。超声仪器有限公司）； BP211 十万分之一电子分析天平（德国赛多利斯公司）。隐丹参酮（批号： 110852-200305，供含量测定用）、丹参酮 Ⅰ （批号： 0867-200205，供含量测定用）、丹参酮ⅡA （批号： 110766-200417，供含量测定用）均购自中国药品生物制品检定所；丹参购于不同产地（1、 2 号：河北； 3、 4 号：山东； 5、 6 号：江苏； 7、 8 号：河南； 9、 10 号：安徽），均经北京市海淀区药品检验所韩杰副主任中药师鉴定为真品。

HPLC测定128批丹参舒心胶囊_省略_参酮_丹参酮_A的含量及结果分析_张亚中

收率，结果见表5。

表5盐酸托呱酮加样回收率测定结果Tab.5Recovery test result of tropisetronhydrochloride risperidone样品量/g 样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/%平均回收率/%RSD /%0.102412.8012.2425.0199.750.100112.5112.5024.9899.740.101012.6312.4124.9499.230.106316.2912.0925.1798.280.100412.5512.4625.0099.9299.150.570.105013.1312.0525.0799.130.107213.4012.1325.3698.600.105613.2012.0325.1499.250.103012.8812.2324.9199.412.3.11含量测定取2.3.3项下供试品溶液与2.3.5项下盐酸托哌酮浓度为0.25mg /mL 的溶液作为对照品溶液各10μL ，注入高效液相色谱仪，记录色谱图见图3，按外标法以峰面积计算含量，结果见表6。

3讨论本试验试用同一种色谱条件测定4种成分，但表6样品的含量测定结果（n =3）Tab.6Result of sample determination （n =3）批号盐酸托哌酮/（g /g ）RSD /%0903010.1250.880905010.1240.78200902030.1250.61分离效果不理想，且波长不好统一，后选用了较为常用的C 18柱，以甲醇-1%冰醋酸（30ʒ70）为流动相，检测波长为321nm ，测定原儿茶醛与阿魏酸得到良好的分离效果；以甲醇-0.3%冰醋酸（25ʒ75）为流动相，检测波长为261nm ，测定盐酸托哌酮得到良好的分离效果；以甲醇-水（75ʒ25）为流动相，检测波长为270nm ，测定丹参酮ⅡA 得到良好的分离效果。

双参活血胶囊中药成分鉴定与丹参酮ⅡA的测定

时间相同的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间内无
干扰。
紫外检测器及Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ３２色谱数据工作站；日本岛津公司ＵＶ２４０１型紫外一可见分光光度计、ＣＴＯ一１０ＡＳＶＰ柱温箱及ＳＰＤ一１０Ａｖｐ型紫外检测器；美国Ｇ１３１１ＡＡｇｉｌｅｎｔ四
近年来。随着科学技术的发展及新的检验设备应用，尤其是高效液相色谱（ＨＰＬＣ）仪在药品检验方面的推广，提高了实验室的检测水平… 。ＨＰＬＣ具有快速、灵敏的特点，能同时进行定性及定量的测定。中成药的检测较之西
提供，批号：７６６２００２１３；人参皂苷Ｒｅ、人参皂苷Ｒｂｌ、人参皂苷Ｒｇｌ、丹参酮 ⅡＡ、盐酸小苏碱及色谱纯，上海豪申化学试剂有限公司；灭菌蒸馏水，安徽双鹤药业有限责任公司；甲纯为色谱纯，其余均为分析纯。
０．４０ｍｇ／ｍＬ对照品溶液置于１０ｍＬ容量瓶中，分别加入甲醇定容，摇匀后以０．４５ｍ微孔滤膜过滤，分别取２Ｏ进样。按样品处理标准操作，制备标准曲线，以待测物浓度Ｃ为纵坐标，待测物峰面积Ａ为横坐标，回归方程：Ｙ＝
２５０ＤＥ台式数控超声波清洗器；上海天平仪器厂ＴＧ一
双参活血胶囊，中国药品生物检定所
３３２Ａ微量天平。
２．１．６稳定性试验

高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮Ⅱ A含量的方法

高效液相色谱法测定丹参片中丹参酮ⅡA 含量的方法褚晶晶【摘要】　目的　观察采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定的效果。

方法　本研究检测供试品溶液以超声波提取法对丹参片进行制备, 对照品采用丹参酮ⅡA, 测定方法采用高效液相色谱法, 选择合适的色谱柱、流动相以及检测波长, 并控制适宜的流速以及进样量, 测定温度选择为室温。

结果　在0.5126~4.8700 μg/ml 范围内丹参酮ⅡA 与峰面积具有良好的线性关系, 求的回归方程为Y =1425.3X +28.75, r =0.9996, n=5；平均回收率为99.63%, RSD 值为1.46%(n=9)。

结论　采用高效液相色谱法对丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量进行测定具有操作方法简便, 测定结果稳定的优势, 适用于丹参片中的丹参酮ⅡA 的含量控制, 值得推广。

【关键词】　高效液相色谱法；丹参片；丹参酮ⅡA ；含量测定DOI ：10.14164/11-5581/r.2017.12.112作者单位：123000　阜新市药品检验所业务办公室丹参片在2015年版《中国药典》中质量标准只有丹酚酸B 的含量测定, 本文采用高效液相色谱法对丹参片中丹参酮ⅡA 的含量测定方法进行了研究。

1　仪器与材料本研究采用的高效液相色谱仪为美国waters E2695高效液相色谱仪。

丹参片(批号分别为161011, 161012, 161013), 丹参酮ⅡA 对照品(中国药品生物制品检定所, 批号为0766-200201)。

本研究所用甲醇均为色谱纯, 所用水为纯化水。

2　方法与结果2. 1　色谱条件　选择规格为(4.6 mm×250 mm, 5 μm)的waters symmetry C18色谱柱, 以甲醇-水(80∶20)为流动相, 控制流速为1.0 ml/min, 选取270 nm 为检测波长, 并控制适宜的冲柱比例以及进样量。

2. 2　溶液的制备　①对照品溶液：称取20 mg 丹参酮ⅡA 对照品, 将其放于100 ml 棕色量瓶中, 采用甲醇溶解后稀释至刻度。

HPLC法测定加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA的含量

HPLC法测定加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA的含量加味逍遥散是一种传统的中药复方，常用于治疗心悸、失眠等症状。

其中丹参酮ⅡA是其主要有效成分之一，具有血管扩张、抗血小板聚集、抗氧化等多种药理作用。

本文将介绍采用高效液相色谱法（HPLC）测定加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA的含量的方法。

实验仪器和试剂：仪器：高效液相色谱仪（Agilent 1200系列）固定相：YMC C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）流动相：甲醇-0.05%三氟乙酸（70:30）药品：加味逍遥散十味（丹参、白术、茯苓、枳实、黄芩、桂枝、甘草、当归、川芎、知母）标准品：丹参酮ⅡA纯品（药品检定所，纯度≥98%）试样制备：将加味逍遥散（十味）粉末取100g，加入95%乙醇1000ml中浸泡2小时，经过超声处理20分钟，再用95%乙醇使浸液回收至1000ml，过滤后取1ml加入5ml甲醇中超声处理10分钟，离心，取上清液。

HPLC条件：- 流速：1.0ml/min- 柱温：30℃- 进样量：10μl- 检测波长：280nm- 峰宽：0.5min- 程序：甲醇-0.05%三氟乙酸（70:30）梯度洗脱，时间（min） - 0-1：70%甲醇；1-10：70%-40%甲醇；10-30：40%-0%甲醇；30-35：0%甲醇；35-50：70%甲醇。

结果：采用上述条件，得到了丹参酮ⅡA纯品的HPLC图谱和加味逍遥散复方的HPLC图谱，如图1和图2所示。

图1 丹参酮ⅡA纯品的HPLC图谱图2 加味逍遥散复方的HPLC图谱（1：丹参酮ⅡA；2：丹参酮Ⅰ；3：丹参酚B；4：丹酚酸B；5：丹酚酸A；6：丹参素）对于加味逍遥散复方中丹参酮ⅡA的含量测定，将加味逍遥散复方的HPLC图谱和丹参酮ⅡA纯品的峰面积进行比较，得到了丹参酮ⅡA在加味逍遥散复方中的含量为0.021%（以干药计）。

HPLC法测定降脂口服液中丹参酮ⅡA的含量

HPLC法测定降脂口服液中丹参酮ⅡA的含量顾崇梅;张莉敏;王蕙;张建军;杨铖【摘要】目的建立降脂口服液中丹参酮Ⅱ A的含量测定方法.方法采用HPLC法测定丹参中丹参酮Ⅱ A含量.色谱条件为: C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为甲醇-水(85∶15);流速1.0 mL·min-1;检测波长为270 nm.结果丹参酮ⅡA在2～40 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 4),平均回收率99.7%,RSD为0.6%(n＝6).结论所建立的方法准确,重现性好,专属性强,分离效果好,能有效地控制该制剂的质量.【期刊名称】《西北药学杂志》【年(卷),期】2009(024)006【总页数】2页(P439-440)【关键词】降脂口服液;HPLC法;丹参酮ⅡA【作者】顾崇梅;张莉敏;王蕙;张建军;杨铖【作者单位】酒泉市药品检验所,甘肃,酒泉,735000;酒泉市药品检验所,甘肃,酒泉,735000;酒泉市药品检验所,甘肃,酒泉,735000;酒泉市中医院,甘肃,酒泉,735000;酒泉市中医院,甘肃,酒泉,735000【正文语种】中文【中图分类】R927.2降脂口服液是由生山楂、丹参、泽泻、决明子、茵陈、黄连、栀子、莱菔籽、柴胡等16味中药材加水提取制成的复方制剂，具有舒肝利胆、护肝降脂、调和脾胃、活血化瘀的功效，临床主要用于脂肪肝、高脂血症、高血压、糖尿病等病的预防和治疗。

原标准只对丹参和山楂进行定性鉴别[1],不能全面地控制药品质量,本实验根据参考文献[2-4]，在原标准基础上增加了用HPLC法测定该制剂中的丹参酮ⅡA含量,所建立的方法简便、准确、重现性好，能有效地控制该制剂的质量。

1.1 仪器通微BiSepTM-1100高效液相色谱仪；P2000 A泵；UV2000紫外检测器；KQ-100DB型数控超声波清洗器；METTLER AE-240电子天平。

1.2 试药丹参酮ⅡA对照品(批号0766-200112，供含量测定用)，来源于中国药品生物制品检定所；样品和阴性对照品由酒泉市中医院制剂室提供；甲醇为色谱纯；水为超纯水；其它试剂均为分析纯。

HPLC测定冠心丹参胶囊中主成分的含量

HPLC测定冠心丹参胶囊中主成分的含量汤杰;宋冰娜;郑盼;丁梅【摘要】目的:测定冠心丹参胶囊中丹参素、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量.方法:采用高效液相色谱法,以C18柱为色谱柱;流动相为乙腈-0.1％磷酸,梯度洗脱;流速为0.8 mL· min-;检测波长为270、203 nm.结果:丹参素钠和丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA 以及人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1分别在7.1～113.6、11.7 ～187.2、6.6～105.0、6.9～110.2、7.3 ～ 116.0、31.2～499.4、27.1 ～433.7 μg·mL-1呈良好线性关系,平均加样回收率分别是99.51％(RSD =0.91％)、97.73％(RSD=1.35％)、97.20％(RSD =0.78％)、98.47％(RSD =0.69％)、99.12％(RSD =0.31％)、96.64％(RSD =0.86％)和97.98％(RSD=1.02％).结论:本方法简便、准确、重复性好,可作为冠心丹参胶囊中主成分的含量测定方法.【期刊名称】《中国现代中药》【年(卷),期】2015(017)010【总页数】5页(P1078-1082)【关键词】冠心丹参胶囊;高效液相色谱;含量测定【作者】汤杰;宋冰娜;郑盼;丁梅【作者单位】国药集团致君(深圳)制药有限公司,广东深圳518118;国药集团致君(深圳)坪山制药有限公司,广东深圳518118;国药集团致君(深圳)制药有限公司,广东深圳518118;国药集团致君(深圳)制药有限公司,广东深圳518118【正文语种】中文冠心丹参胶囊是由丹参、三七和降香油3味中药组成的复方制剂，具有活血化瘀、理气止痛之功能。

用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷刺痛、心悸气短，是治疗冠心病心绞痛的常用药物。

该制剂临床应用时间长，单用或联合用药疗效确切[1-2]。

通络活血胶囊中丹参酮ⅡA含量测定-孙娟,吴宏丽

68第16卷第6期 2014 年 6 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 16 No. 6 Jun .，2014通络活血胶囊是由某中医院根据多年的临床经验研制而成，由丹参、红花、川芎等8味中药材组成的中药复方制剂，具有活血化瘀、温经通络之功效，临床上用于治疗脑血栓引起的精神呆滞、舌质发硬、活动疼痛、冠心病心绞痛等症，方中的主药丹参具有活血祛瘀、调节心肝的作用[1]，对丹参主要成分丹参酮ⅡA 进行含量测定，能够有效的对通络活血胶囊进行质量控制。

本文采用HPLC 法对方中丹参的有效成分丹参酮ⅡA 进行了含量测定，为制定产品的质量标准提供了实验依据。

1仪器与试药LC-2010系列（岛津）全自动高校液相色谱仪；Hypersil（大连依力特有限公司提供）5 μm，4.6 mm ×250 mm；JAC-500型数控超声波清洗机（山东省济宁市奥波超声电气有限公司）；METTLER TOLEDO 电子天平（梅特勒公司）；丹参酮ⅡA 对照品（供含量测定用，批号：110766-200619）购自中国食品药品检定研究院；乙腈为色谱纯（天津市科密欧化学试剂有限公司）；其它试剂均为分析纯；通络活血胶囊及阴性样品均为烟台天正药业有限公司制备（规格0.41 g/粒）（批号：130201、130203、130205）。

2方法与结果2.1 色谱条件及系统适用性以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（75∶25）[2]为流动相；检测波长为270 nm [2-3]。

理论板数按丹参酮ⅡA 峰计算应不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取丹参酮ⅡA 对照品12.00 mg，置50 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；精密量取2 mL，置25 mL 棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每毫升中含丹参酮ⅡA 19.2 μg）。

2.3 供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，混匀，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

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HPLC测定参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量
目的建立参归胶囊中丹参酮ⅡA的含量测定方法。方法采用高效液相色谱
法，色谱柱为Kromasil C18柱（4.6 mm×150 mm，5 ?m），以甲醇-水（78∶22）
为流动相，流速0.8 mL/min，柱温35 ℃，检测波长为268 nm。结果丹参酮Ⅱ
A在0.069～0.414 ?g范围内线性关系良好（r=0.999 8）。平均回收率为98.99%，
RSD=0.81%（n=6）。结论本方法操作简便，结果可靠，重复性好，可用于参归
胶囊的质量控制。

标签：高效液相色谱法；参归胶囊；丹参酮ⅡA
参归胶囊是由丹参、当归、黄柏、青风藤、车前子、牛膝、杜仲等组成的中
药制剂，具有清热除湿、活血补肾的功效，用于治疗痛风、痛风性关节炎等疾病。
为更好地控制该制剂的质量，我们按新药要求对该制剂的质量标准进行了规范化
研究[1]。本试验采用高效液相色谱法（HPLC）对胶囊中的丹参酮ⅡA进行了含
量测定，为该制剂的进一步开发研究奠定基础。

1 仪器与试药
美国Waters高效液相色谱仪，waters2487检测器， Millennium32色谱工作
站数据处理系统；Kromasil C18柱（5 ?m，4.6 mm×150 mm）；BP211D型电子天
平（德国Sartorius公司）；电热恒温水浴锅（江苏南通县通海电器厂）。

2 方法与结果
2.1 色谱条件
2.2 对照品溶液的制备
2.3 供试品溶液的制备
取本品内容物约3 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，
称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，
滤过，取续滤液，过微孔滤膜（0.45 ?m），即得。

2.4 空白试验
为进一步考察试验设计及含量测定方法的可行性和专属性，取不含丹参药材
的阴性样品制备阴性对照液，在上述色谱条件下测定，结果表明阴性对照液的色
谱图在丹参酮ⅡA相应的保留时间附近无干扰峰，溶剂峰亦无干扰（见图1），
表明本法可行，专属性良好。

2.5 线性关系的考察
2.6 精密度试验
2.7 稳定性试验
取同一批号胶囊10粒，倾出内容物，混匀，取约1 g，精密称定，按“2.3”
项下方法制成供试品溶液并按色谱条件于0、12、24、36、48 h分别测定（n=5），
结果RSD=0.40%，说明稳定性良好。

2.8 重复性试验
2.9 加样回收率试验
2.11 丹参药材的含量测定
按2010年版《中华人民共和国药典》（一部）丹参项下的含量测定方法[2]，
测定3批丹参药材中丹参酮ⅡA的含量，分别为0.38%、0.31%、0.26%。

3 讨论
丹参为复方参归胶囊剂中的君药，其主要脂溶性成分为丹参酮ⅡA。现代药
理学研究表明，丹参酮ⅡA对心肌缺血和心肌梗死具保护作用，能稳定红细胞膜、
耐缺氧、抑制血小板功能和抗血栓形成等[3]，是丹参的活性成分之一。本试验
采用HPLC测定制剂中丹参酮ⅡA的含量，方法快速、简便、准确，可用于参归
胶囊的质量控制。

丹参酮ⅡA遇光不稳定，试验中丹参酮ⅡA对照品溶液的配制采用棕色容量
瓶，供试品溶液应现用现配，且注意低温避光保存[4]。

采用HPLC测定供试品溶液中丹参酮ⅡA的含量时，比较了不同的流动相
[4-5]，包括乙腈-水（65∶35）、甲醇-水（80∶20），但色谱峰与相邻峰的分离效
果均不理想，将后者调节比例为甲醇-水（78∶22），结果分离效果良好。

本试验参考2010年版《中华人民共和国药典》（一部）丹参项下供试品溶液
的制备方法，也曾查阅诸多文献，有以甲醇或乙醇为溶媒进行超声提取的，但有
文献资料表明，对于丹参酮ⅡA的提取方法，加热回流提取法优于超声提取法，
而丹参酮ⅡA易溶于高浓度乙醇，但水溶性成分在醇提时亦有相当部分被提取出
来[6-7]。为避免更多杂质峰的干扰，故本试验采用甲醇加热回流提取，结果表明，
样品中各组分的分离效果较好。

参考文献：
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剂学杂志，2001，7（3）：6-7.
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版社，2010：70.

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的含量[J].中国医院药学杂志，2001，21（6）：345-346.

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