脾阳虚证与线粒体甲状腺素受体的病机相关性研究

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［6］刘柏炎，蔡光先，林琳，等．补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血后神经干细胞影响的初步研究［J ］．中国临床康复，2004，22

（8）：4532 4533

(收稿日期2012－09－10)

*基金项目：广东省普通高校重点实验室中医病机与治法研究实验室开放课题（编号：AAF109111A38）

脾阳虚证与线粒体甲状腺素受体的病机相关性研究*

姬爱冬，宋新红，黄平东，宋雅芳，胡琼芳，许秀玫，周俊合

（广州中医药大学，广东广州510006）

摘要：目的:研究脾阳虚证与线粒体甲状腺素受体的病机相关性。方法:将50只大鼠随机分为正常组、模型组、治疗组、模型对照组、正常对照组，采用苦寒泻下加伤湿法制作脾阳虚证模型，对比正常组与模型组的体能及线粒体P28、P43甲状腺素受体含量，然后采用艾灸对治疗组温灸关元及足三里，1个疗程后对比模型对照组、正常对照组及治疗组大鼠的体能及线粒体P28、P43甲状腺素受体含量。结果:造模成功后模型组的线粒体C28与C43甲状腺素受体明显下降，与正常组相比具有极显著差异(17.95ʃ2.14vs 34.92ʃ3.02，17.95ʃ0.92vs 36.16ʃ2.69，P ＜0.01)，而经过艾灸治疗后，治疗组C28和C43的含量与模型对照组相比，有了极显著提高(27.27ʃ1.67vs 21.57ʃ0.95，25.87ʃ1.83vs 21.49ʃ0.95，P ＜0.01)，但还没有达到正常对照组的水平，而模型对照组线粒体C28与C43甲状腺素受体与正常对照组相比具有极显著差异(21.57ʃ0.95vs 34.32ʃ1.16，21.49ʃ0.95vs 33.39ʃ1.85，P ＜0.01)，自然康复效果很差。艾灸治疗对于大鼠体重、最长悬吊时间、最大牵拉力等体能都有不同程度的改善。结论:脾阳虚证的线粒体C28与C43甲状腺素受体可能存在缺陷，使甲状腺激素的功能无法充分表达，线粒体C28与C43甲状腺素受体的缺陷可能是导致脾阳虚证的机理之一。

关键词：线粒体;甲状腺素受体;脾阳虚证;艾灸中图分类号：R2 03

文献标识码：A

文章编号：1000－3649（2013）01－0051－02

“脾阳虚证”的本质一直是中医病机研究的重要方面，对比发现“脾阳虚证”与甲状腺功能减退症的表现很类似，是否是线粒体甲状腺素受体有缺陷，使甲状腺素功能的表达不充分造成的呢？我们从线粒体P28、P43甲状腺素受体入手，用动物实验探讨了线粒体P28、P43甲状腺素受体与“脾阳虚证”的病机相关性，现报道如下。1资料与方法1.1

实验材料

50只180 220g 成熟Sprague Daw-ley 大鼠，雌雄各半，实验动物质量合格证明：NO0102499，许可证号：

SYXK （粤）

2008 0085，

实验地点：广州中医药大学动物实验中心SPF 级实验室。P28、P43甲状腺素受体测定试剂盒由广州市蓝博生物技术有限公司提供，在黄花岗科技园达辉生物实验室采用ABI PRISM 7000SDS 荧光定量PCR 仪进行指标测定。1.2实验方法1.2.1

实验分组

将50只大鼠随机分为5组，每组

10只，分别为正常组、模型组、治疗组、模型对照组、正常对照组。1.2.2

造模方法

采用苦寒泻下加伤湿造模法：取

模型组、治疗组和模型对照组的30只大鼠以15%大黄粉悬液灌胃。用药量9g /（kg ·d ），连续10日。并且将铺有潮湿碎刨花的鼠笼放于造模箱的隔板上，

箱底部的托盘中装满水，箱顶部通气孔，隔板周边放置冰块，造模箱温度（16ʃ1）ħ，相对湿度95%ʃ3%，持续10天。结果：萎靡、倦卧、毛枯槁、畏寒、消瘦、四肢不收、便溏、活动频度下降为造模成功。1.2.3

实验步骤

（1）

正常组与脾阳虚模型组大

鼠线粒体甲状腺受体P28、P43水平比较：第10日造模成功后，先测定正常组与模型组大鼠的体重、

最大悬吊时间、最大牵拉力等脾阳虚证的辅助指标。最大牵拉力用测力计测定，当大鼠抓住测力计时固定测力计的一端，水平缓慢牵拉其尾部，当大鼠松开测力计时指针的最大读数即为其最大牵拉力的值。最大悬吊时间测定：让大鼠抓住网格并悬吊，开始秒表计时，当大鼠掉落时，其维持时间即为最大悬吊时间。然后将模型组10只大鼠及正常组10只大鼠处死，取肝脏组织，用PCR 方法测定线粒体甲状腺素受体P28、P43的水平。（2）

治疗方法：第10日

开始，治疗组10只大鼠给予艾灸治疗，每日对大鼠关元穴及双侧的足三里穴进行温灸，每次15min ，连续15天为1个疗程。模型对照组不做任何处理，使

其自然康复。正常对照组也不做任何处理。（3）

正

常对照组、模型对照组与艾灸治疗组大鼠线粒体甲状腺素受体P28、P43水平比较：1个疗程的治疗结束后，先测定各组大鼠的体重、最长悬吊时间、最

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15·2013年第31卷第01期Vol．31，No．01，2013

四川中医

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大牵拉力等脾阳虚证的辅助指标，然后将各组大鼠处死，取肝脏组织，用PCR方法测定线粒体甲状腺素受体P28、P43的水平。

1.2.4线粒体甲状腺受体P28、P43的测定方法

采用RT－PCR（sybr－green定量法）方法测定大鼠线粒体甲状腺素受体P28、P43的水平，严格按照试剂盒说明书进行。

1.3数据处理所有数据均采用SPSS11.5for win-dows统计分析软件处理，属于正态分布的计量资料以均数ʃ标准差（x－ʃs）表示，采用单因素方差分析。2实验结果

见表1及表2。

表1各组大鼠体重、最长悬吊时间及最大牵拉力比较（x－ʃs）组别体重（g）最长悬吊时间（s）最大牵拉力（g）正常组235.16ʃ29.199.70ʃ2.00#$151.50ʃ77.24#$模型组218.35ʃ23.23 6.10ʃ2.02*@$45.50ʃ10.65*@治疗组227.44ʃ29.498.30ʃ2.21$91.50ʃ15.46@

正常对照组244.90ʃ43.85$9.90ʃ2.02#$198.50ʃ84.91#$模型对照组214.08ʃ32.56@ 5.70ʃ1.80*@69.00ʃ25.69*@注：*P＜0.01VS正常组，#P＜0.01VS模型组，@P＜0.05VS正常对照组，$P＜0.05VS模型对照组

表2各组大鼠线粒体甲状腺受体P28、P43水平比较（x－ʃs）

组别

P28受体

（拷贝数/μg总RNA）

P43受体

（拷贝数/μg总RNA）

正常组34.92ʃ3.02#@$36.16ʃ2.69#@$

模型组17.95ʃ2.14*@$17.95ʃ0.92*@$

治疗组27.27ʃ1.67*#@$25.87ʃ1.83*#@$

正常对照组34.32ʃ1.16#$33.39ʃ1.85*#$

模型对照组21.57ʃ0.95*#@21.49ʃ0.95*#@

注：*P＜0.01VS正常组，#P＜0.01VS模型组，@P＜0.01VS正常对照组，$P＜0.01VS模型对照组

3讨论

“脾”是中医脾胃学说的核心，科学地阐明“脾阳虚证”的本质，一直是研究脾胃学说的重要方面［1］，本课题探讨了脾阳虚证与线粒体C28与C43甲状腺素受体的相关性。甲状腺素功能和脾阳在生理上、病理上都具有相似性。（1）甲状腺素与脾阳生理功能具有相似性［2］：A、甲状腺素的产热功能与脾阳的温煦及主运化相类似；B、甲状腺素对蛋白质、糖、维生素以及神经肌肉系统的功能与脾主运化水谷，在体合肌肉、主四肢相类似；C、甲状腺素对脂肪代谢、水盐代谢的作用与脾主运化水液的功能类似；D、甲状腺素对生长和发育的影响与脾为后天之本类似。（2）甲状腺功能减退表现出的低基础代谢率症群、粘液性水肿面容、皮肤苍白、精神神经系统症状、肌肉和骨骼松弛无力，心血管系统的心动过缓、心音低弱，消化系统的胃纳不振、厌食、腹胀，呼吸系统的呼吸急促，内分泌系统的Schmidt 综合征，泌尿系统及水电解质代谢紊乱表现出的组织水肿，血液系统的贫血和出血倾向以及最严重的昏迷表现等，都与脾阳虚证同样具有病理相似性［3 4］。

近年发现线粒体内也存在甲状腺激素受体（简称mt－TR），甲状腺素只有与其受体结合才能发挥其生理作用［5 6］。脾阳虚的患者除了少数真正甲减患者外，大部分患者查甲功五项T3、T4、FT3、FT4、TSH是正常的，是什么原因导致了类似甲状腺素功能的表达不充分，从而出现脾阳虚证呢？是否和线粒体甲状腺激素受体的缺陷有关呢？我们的实验结果表明，通过苦寒泻下加伤湿造模后，模型组的线粒体C28与C43甲状腺素受体明显下降，与正常组相比具有极显著差异（17.95ʃ2.14vs34.92ʃ3.02，17.95ʃ0.92vs36.16ʃ2.69，P＜0.01），而治疗组经过了艾灸治疗后，C28和C43的含量与模型对照组相比，有了极显著提高（27.27ʃ1.67vs21.57ʃ0.95，25.87ʃ1.83vs21.49ʃ0.95，P＜0.01），但还没有达到正常对照组的水平，而模型对照组采用了自然康复，没有给予治疗，其线粒体C28与C43甲状腺素受体与正常对照组相比具有极显著差异（21.57ʃ0.95vs34.32ʃ1.16，21.49ʃ0.95vs33.39ʃ1.85，P＜0.01），也就是自然康复效果很差。艾灸治疗对于大鼠体重、对长悬吊时间、最大牵拉力等体能都有不同程度的改善。

因此我们推论，脾阳虚证与线粒体C28与C43甲状腺素受体具有相关性，脾阳虚证的线粒体C28与C43甲状腺素受体可能存在缺陷，使甲状腺激素的功能无法充分表达，导致了脾阳虚证的表现。通过艾灸治疗，可以显著提高线粒体C28与C43甲状腺素受体的含量，可以提高体能，但未恢复到正常水平，而自然康复的效果较差。因此线粒体C28与C43甲状腺素受体的缺陷可能是导致脾阳虚证的机理之一。

参考文献

［1］王建华．王建华论文选［M］．广州：羊城晚报出版社，2000：35 39

［2］陈灏珠．实用内科学［M］．第11版．北京：人民卫生出版社，2001：1130 1163

［3］印会河．中医基础理论［M］．上海：上海科学技术出版社，1984：34 36

［4］邓铁涛．中医诊断学［M］．上海：上海科学技术出版社，1994：116

［5］劳绍贤，赵瞻元，王建华．脾虚证胃肠黏膜线粒体研究及其临床意义［J］．广州中医学院学报，1991，8（4）：264 268［6］斯璐．线粒体甲状腺激素受体［J］．国外医学内分泌分册，2000，6（23）：406 407

(收稿日期2012－09－08)

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2013年第31卷第01期

Vol．31，No．01，2013