关于生物技术综合实验报告

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生物技术实验报告

生物技术实验报告

生物技术实验报告生物技术实验报告引言生物技术是一门涉及生物学和工程学的交叉学科,通过利用生物体的特性和生物分子的相互作用,来解决现实世界中的问题。

本实验旨在探索生物技术在实验室中的应用,以期增进对生物技术的理解和认识。

实验目的本实验的目的是通过使用PCR技术,对特定基因片段进行扩增,并通过凝胶电泳分析扩增产物。

通过这个实验,我们将学习PCR技术的原理和操作步骤,并了解如何使用凝胶电泳进行DNA分析。

实验材料和方法材料:- DNA样本- PCR试剂盒- 扩增引物- DNA电泳仪- 琼脂糖凝胶- DNA标记物方法:1. 准备PCR反应体系:将PCR试剂盒中的反应液与DNA样本、扩增引物混合。

2. 进行PCR扩增:将混合好的反应液放入PCR仪中,按照设定的温度和时间进行扩增。

3. 准备琼脂糖凝胶:将琼脂糖溶解在缓冲液中,倒入电泳仪中,等待凝固。

4. 准备样品:将PCR扩增产物与DNA标记物混合。

5. 进行电泳:将混合好的样品倒入琼脂糖凝胶槽中,进行电泳分析。

6. 分析结果:观察凝胶上的DNA条带,判断扩增是否成功。

实验结果与讨论在进行PCR扩增和凝胶电泳后,我们观察到在琼脂糖凝胶上出现了一些DNA 条带。

这些条带代表了PCR扩增产物的大小和数量。

通过比较这些条带与DNA 标记物的迁移距离,我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在实验中,我们使用了PCR技术对特定基因片段进行扩增。

PCR技术通过利用DNA聚合酶酶的特性,在不断变化的温度条件下,使DNA链的两端进行反复扩增。

这种扩增过程可以快速产生大量目标DNA片段,从而使我们能够对其进行进一步分析。

凝胶电泳是一种常用的DNA分析方法,通过利用DNA的负电荷特性,在电场的作用下,使DNA片段在琼脂糖凝胶中迁移。

由于DNA片段的大小不同,迁移速度也不同,因此在凝胶上形成了不同大小的DNA条带。

通过与DNA标记物的比较,我们可以确定PCR扩增产物的大小。

在本实验中,我们成功地扩增了目标基因片段,并通过凝胶电泳分析得到了相应的结果。

寒假实践报告生物技术(2篇)

寒假实践报告生物技术(2篇)

第1篇一、前言随着科技的飞速发展,生物技术已经成为当今世界最具活力和潜力的领域之一。

为了拓宽自己的知识面,提高实践能力,我在寒假期间选择参加了生物技术方面的实践课程。

以下是我对这次实践活动的总结和反思。

二、实践内容本次实践课程主要包括以下内容:1. 基础生物学知识学习:通过阅读教材、观看视频等方式,学习了细胞生物学、分子生物学、遗传学等基础知识。

2. 实验室操作技能培训:在专业老师的指导下,学习了基本的实验室操作技能,如DNA提取、PCR扩增、电泳分析等。

3. 实验项目研究:选择了“植物基因编辑”作为实验项目,通过基因编辑技术对植物进行改良,提高其抗逆性和产量。

4. 文献阅读与综述撰写:阅读了相关领域的文献,并撰写了综述报告,总结当前生物技术的研究进展和未来发展趋势。

三、实践过程1. 基础学习阶段:通过自学和课堂讲解,掌握了细胞生物学、分子生物学等基础知识。

这一阶段的学习为我后续的实验操作打下了坚实的基础。

2. 实验室操作阶段:在专业老师的指导下,学习了实验室的基本操作规范和安全注意事项。

通过实际操作,掌握了DNA提取、PCR扩增、电泳分析等实验技能。

3. 实验项目研究阶段:在导师的指导下,选择了“植物基因编辑”作为实验项目。

首先,我们了解了基因编辑技术的原理和操作步骤,然后进行了实验设计。

在实验过程中,我们遇到了很多问题,如DNA提取失败、PCR扩增效率低等。

通过查阅文献、请教老师和同学,我们逐步解决了这些问题,最终成功实现了基因编辑。

4. 文献阅读与综述撰写阶段:通过阅读大量文献,了解了当前生物技术的研究进展和未来发展趋势。

在此基础上,我们撰写了综述报告,总结了基因编辑技术在植物改良中的应用前景。

四、实践成果1. 掌握了基本的实验室操作技能:通过本次实践,我学会了DNA提取、PCR扩增、电泳分析等实验技能,为今后的科研工作打下了坚实的基础。

2. 提高了科研能力:在实验过程中,我学会了如何设计实验、分析数据、解决问题。

关于生物技术的实习报告

关于生物技术的实习报告

一、实习背景与目的随着生物技术的飞速发展,生物技术在医学、农业、环境保护等领域的应用日益广泛。

为了深入了解生物技术的实际应用,提高自身的实践能力,我于2023年7月至8月在XX生物技术公司进行了为期一个月的实习。

本次实习旨在:1. 理论联系实际,将所学生物技术知识应用于实际生产中;2. 了解生物技术行业的发展现状及前景;3. 提高自己的动手操作能力和团队协作精神;4. 增强对生物技术的认识和兴趣。

二、实习单位及实习内容实习单位:XX生物技术公司实习地点:XX市实习内容:1. 细胞培养技术:在实验室学习并操作细胞培养技术,包括细胞传代、细胞冻存、细胞裂解等;2. 分子生物学技术:学习并操作PCR、RT-PCR、Western Blot等分子生物学技术;3. 基因工程:学习并操作基因克隆、基因表达、基因编辑等基因工程技术;4. 发酵工程:学习并操作发酵过程、发酵参数控制、发酵产物提取等发酵工程技术;5. 产品质量检测:学习并操作HPLC、GC、LC-MS等分析仪器,进行产品质量检测;6. 参与项目研发:参与公司研发项目,协助完成实验方案设计、实验操作、数据分析等工作。

三、实习过程及体会1. 细胞培养技术:在实验室学习了细胞培养的基本原理和操作流程,掌握了细胞传代、细胞冻存等技能。

通过实际操作,加深了对细胞生物学知识的理解。

2. 分子生物学技术:学习了PCR、RT-PCR、Western Blot等分子生物学技术,掌握了实验原理和操作步骤。

在导师的指导下,独立完成了一系列分子生物学实验,提高了自己的动手操作能力。

3. 基因工程:学习了基因克隆、基因表达、基因编辑等基因工程技术,了解了基因工程在生物技术领域的应用。

通过参与基因编辑实验,对基因编辑技术有了更深入的认识。

4. 发酵工程:学习了发酵过程、发酵参数控制、发酵产物提取等发酵工程技术,了解了发酵工程在生物制药、生物化工等领域的应用。

在导师的指导下,参与了发酵过程控制实验,提高了自己的实验技能。

生物实训报告范文(3篇)

生物实训报告范文(3篇)

第1篇一、实训目的本次生物实训旨在通过实验室操作和理论学习,加深对生物学基础知识的理解,提高实验技能,培养科学探究能力和团队合作精神。

通过实训,使学生能够掌握基本的实验操作流程,了解实验原理,提高分析问题和解决问题的能力。

二、实训时间与地点实训时间:2023年X月X日至X月X日实训地点:XX大学生物实验室三、实训内容本次实训主要包括以下内容:1. 基础生物学实验2. 遗传学实验3. 生态学实验4. 生物化学实验四、实训过程(一)基础生物学实验1. 实验一:显微镜观察实验目的:掌握显微镜的使用方法,观察细胞的基本结构。

实验步骤:(1)调暗显微镜光源;(2)将载玻片放置在载物台上,调整物镜;(3)使用低倍镜观察细胞结构;(4)切换至高倍镜,进一步观察细胞细节。

实验结果:成功观察到细胞核、细胞质等基本结构。

2. 实验二:植物细胞有丝分裂观察实验目的:观察植物细胞有丝分裂的过程。

实验步骤:(1)取洋葱鳞片叶,制作临时装片;(2)用龙胆紫染色,显微镜下观察;(3)记录有丝分裂各个时期的特点。

实验结果:观察到有丝分裂的各个时期,包括前期、中期、后期和末期。

(二)遗传学实验1. 实验三:孟德尔遗传实验实验目的:验证孟德尔的遗传规律。

实验步骤:(1)选择具有明显性状差异的纯合亲本进行杂交;(2)观察F1代和F2代的性状表现;(3)统计各性状的比例。

实验结果:F1代均为显性性状,F2代显性性状与隐性性状比例为3:1,验证了孟德尔的分离定律。

2. 实验四:DNA提取与鉴定实验目的:提取DNA并鉴定其存在。

实验步骤:(1)取新鲜植物叶片,加入缓冲液和蛋白酶;(2)高速离心,收集上清液;(3)加入二苯胺试剂,观察颜色变化。

实验结果:DNA成功提取,溶液呈现蓝色,证明DNA存在。

(三)生态学实验1. 实验五:植物群落调查实验目的:调查植物群落的结构和组成。

实验步骤:(1)选择调查区域,进行样方设置;(2)记录样方内植物的种类、数量和分布;(3)分析植物群落的结构和组成。

生物实验教学实践报告(3篇)

生物实验教学实践报告(3篇)

第1篇一、实验背景随着科技的飞速发展,生物学作为一门基础科学,其重要性日益凸显。

实验教学是生物学科教学的重要组成部分,通过实验,学生可以加深对生物学知识的理解和掌握,培养科学探究能力和实践操作技能。

本实验报告旨在记录和总结在一次生物实验教学过程中的实践经验和收获。

二、实验目的1. 理解并掌握实验原理和方法。

2. 培养学生的实验操作技能和科学思维。

3. 通过实验,加深对生物学知识的理解和应用。

4. 提高团队合作意识和沟通能力。

三、实验内容本次实验选择了“观察植物细胞有丝分裂”和“DNA的粗提取与鉴定”两个实验。

四、实验原理1. 植物细胞有丝分裂:有丝分裂是细胞分裂的一种形式,通过观察有丝分裂过程,可以了解细胞周期和染色体的行为。

2. DNA的粗提取与鉴定:DNA是生物体内的遗传物质,通过提取和鉴定DNA,可以了解DNA的结构和功能。

五、实验步骤1. 观察植物细胞有丝分裂:- 制备洋葱根尖细胞切片。

- 使用显微镜观察细胞有丝分裂过程。

- 记录染色体的行为和细胞分裂阶段。

2. DNA的粗提取与鉴定:- 制备植物细胞匀浆。

- 使用氯化钠溶液提取DNA。

- 使用二苯胺试剂鉴定DNA。

六、实验结果与分析1. 观察植物细胞有丝分裂:- 成功观察到洋葱根尖细胞的有丝分裂过程,包括前期、中期、后期和末期。

- 观察到染色体的排列、分离和移向细胞两极。

2. DNA的粗提取与鉴定:- 成功提取出植物细胞的DNA。

- 使用二苯胺试剂,观察到DNA与试剂反应后的颜色变化,证明DNA的提取成功。

七、实验讨论1. 实验过程中,注意了实验操作的正确性和规范性,保证了实验结果的准确性。

2. 通过实验,加深了对有丝分裂和DNA结构及功能的理解。

3. 实验过程中,遇到了一些问题,如染色质着色不均匀、DNA提取量不足等,通过查阅资料和与同学讨论,找到了解决方法。

八、实验总结1. 通过本次实验,提高了自己的实验操作技能和科学思维。

2. 加深了对生物学知识的理解和应用,为今后的学习打下了坚实的基础。

生物技术综合实验报告

生物技术综合实验报告

一、实验目的1. 熟悉生物技术的基本原理和方法。

2. 学习并掌握PCR技术、基因克隆、蛋白质表达等生物技术操作。

3. 培养学生严谨的实验态度和团队合作精神。

二、实验原理1. PCR技术:聚合酶链反应(PCR)是一种在体外条件下,通过DNA模板、引物和DNA聚合酶等反应体系,在短时间内扩增特定DNA片段的方法。

2. 基因克隆:基因克隆是指将目的基因片段插入载体,使其在宿主细胞中稳定存在和表达的过程。

3. 蛋白质表达:蛋白质表达是指将目的基因导入宿主细胞,使其在宿主细胞中合成并分泌蛋白质的过程。

三、实验材料1. 实验仪器:PCR仪、凝胶成像系统、离心机、超净工作台、恒温培养箱等。

2. 实验试剂:DNA模板、引物、PCR反应试剂、载体、连接酶、DNA聚合酶、抗生素等。

3. 实验材料:大肠杆菌、质粒、琼脂糖、电泳缓冲液、核酸染料等。

四、实验步骤1. 设计并合成引物:根据目的基因序列,设计特异性引物。

2. PCR扩增:将DNA模板、引物、PCR反应试剂混合,进行PCR扩增。

3. 基因克隆:将PCR产物与载体连接,转化大肠杆菌,筛选阳性克隆。

4. 蛋白质表达:将阳性克隆转化宿主细胞,诱导表达目的蛋白。

5. 蛋白质纯化:通过层析等方法,对表达蛋白进行纯化。

6. Western blot检测:将纯化蛋白进行Western blot检测,验证目的蛋白的表达。

五、实验结果与分析1. PCR扩增:通过PCR扩增,成功得到目的基因片段。

2. 基因克隆:通过基因克隆,成功构建了含有目的基因的重组质粒。

3. 蛋白质表达:通过诱导表达,成功在宿主细胞中合成目的蛋白。

4. 蛋白质纯化:通过层析等方法,成功纯化目的蛋白。

5. Western blot检测:通过Western blot检测,成功验证了目的蛋白的表达。

六、实验讨论1. 实验过程中,PCR扩增过程中应注意引物设计、模板浓度、PCR循环条件等因素,以确保扩增效果。

2. 基因克隆过程中,应注意载体与目的基因片段的连接、转化、筛选等步骤,以提高克隆成功率。

生物技术实习报告4篇

生物技术实习报告4篇

生物技术实习报告4篇5、专业讲座、科普训练、学术报告----------专家指导四、实习人员______化学与生物技术学院05级生物技术专业五、实习方式1、以小组为单位轮转到各个点实习,根据指导教师的安排及要求完成各项实习任务。

2、积极主动,充分发挥个人能动性和团队合作精神。

正文实习,是一种期待,是对自己成长的期待,是对自己角色开始转换的期待,更是对自己梦想的期待;实习,也有一份惶恐,有对自己缺乏信心的不安,有对自己无法适应新环境的担忧,更有怕自己会无所适从的焦虑。

带着一份希望和一份茫然来到了来到隶属中国科学院的昆明植物研究所,开始我的实习生涯。

为期一个月的时间我们先后在植物所的苗圃、标本管、植化室、组培室进行了实习。

这次实习让我见识了许多,也收获了许多,不仅仅感受在这的那份自豪与优越,而是感染他们的那份敬业、求实与无私精神以及实习给我带来的种种思考。

一:苗圃苗圃主要负责花卉的培育,植物园的花都是在苗圃先培养到一定程度后,再拿到园内供游客观赏,如秋海棠、千日红、石榴花、一串红等等,都是在苗圃先通过各种方法培养。

一般的步骤有:播种、移植、育苗。

播种方法基本上都是相通的,无非是土,水,光照,温度的管理,根据种子的大小,还有自己的设施条件选择适合自己的。

播种花卉播种一般在保护地区进行,至少应遮雨或适当遮光降温等基础设施,才能达到各种品种出芽所需要的条件,保证其出芽率。

选择疏松透气的土壤(一般选用细粒的泥炭,草炭或腐叶土).装入花盆或播种盘里。

将土壤浇透水(水里配点多菌灵或托布津或百菌清达到土壤消毒的目的,往往配八百倍液),把种子均匀的洒在土层上。

细粒种子(如百里香,矮牵牛,瓜叶菊,海棠种子等)播种,不需要盖土,但要注意保持土壤湿度.用细嘴喷壶喷雾状水来保湿.大水流的话易把种子冲走或者冲到土层深处,细小种子不易顶土出芽.大粒种子则要盖土厚度为种子大小的2-3倍。

另外,覆土的多少,还跟种子出芽的好光性与嫌光性有关,如矮牵牛属好光性种子,播后可不覆土.而三色堇等嫌光性种子,播后必须覆土并不得露出种子.如果种子在未发芽之前,因其它原因,露出土面,则还要补土,直到看不到种子.花种播种后,必须保持土壤潮湿,但不要渍水,在出芽之前不得干水,这对于细粒种子尤其重要。

生物工程综合实训实习报告

生物工程综合实训实习报告

一、前言作为一名生物工程专业的学生,我深知理论知识与实践操作相结合的重要性。

为了更好地将所学知识应用于实际工作,提高自己的专业技能,我在2023年的暑假期间参加了生物工程综合实训实习。

以下是我对这次实习的总结和感悟。

二、实习目的1. 巩固和深化课堂所学理论知识,将理论与实践相结合。

2. 提高实际操作技能,培养动手能力和团队协作精神。

3. 了解生物工程行业的发展现状和前沿技术。

4. 检验自己的专业素养和综合素质,为今后就业打下基础。

三、实习时间与地点实习时间:2023年7月15日至8月15日实习地点:XX生物科技有限公司四、实习内容1. 生物实验室操作在实验室,我学习了细胞培养、分子生物学技术、发酵工程等实验操作。

通过实际操作,我掌握了无菌操作、PCR、电泳等实验技术,提高了自己的实验技能。

2. 发酵工程实训在发酵工程实训环节,我参与了发酵罐的操作,学习了发酵过程控制、发酵产物提取和纯化等知识。

通过实际操作,我了解了发酵工程在生物工程中的应用。

3. 生物制药实训在生物制药实训环节,我学习了药品生产过程中的质量控制、无菌操作、GMP管理等方面的知识。

通过参观生产车间和参与实际操作,我对生物制药行业有了更深入的了解。

4. 企业参观与交流在实习期间,我还参观了XX生物科技有限公司的生产车间和研发中心,与企业技术人员进行了交流。

通过与企业人员的互动,我了解了生物工程行业的实际需求和发展趋势。

五、实习收获1. 技能提升通过这次实习,我掌握了细胞培养、分子生物学技术、发酵工程等实验操作技能,提高了自己的动手能力。

2. 知识拓展实习过程中,我了解了生物工程行业的发展现状和前沿技术,为今后的学习和工作打下了基础。

3. 团队协作在实习过程中,我学会了与团队成员协作,共同完成实验任务,提高了自己的团队协作能力。

4. 职业素养实习期间,我了解了企业文化和职业素养,为今后就业做好了准备。

六、总结与展望通过这次生物工程综合实训实习,我收获颇丰。

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关于生物技术综合实验报告生物技术综合实验甘薯γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)基因的克隆和原核表达学生:学号:同实验者:谷胱甘肽(glutathione, GSH) GSH具有多种重要生理功能, 抗自由基和抗氧化应激作用, 爱惜细胞膜的完整性等。

γ-GCS是植物细胞中GSH生物合成的限速酶, 能够调控GSH的生物合成量。

GSH在生物体抵御冷害、干旱、重金属、真菌等胁迫进程中起着重要作用, 说明γ-GCS也与植物抗逆进程紧密相关。

实验一甘薯叶片RNA提取一、实验目的1. 了解真核生物RNA提取的原理;2. 把握Trizol提取的方式和步骤。

二、实验原理Trizol 试剂是由苯酚和硫氰酸胍配制而成的单相的快速抽提总RNA的试剂,在匀浆和裂解进程中,能在破碎细胞、降解细胞其它成份的同时维持RNA的完整性。

TRIzol 的要紧成份是苯酚。

苯酚的要紧作用是裂解细胞,使细胞中的蛋白,核酸物质解聚取得释放。

苯酚虽可有效地变性蛋白质,但不能完全抑制RNA酶活性,因此TRIzol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase。

%的8-羟基喹啉能够抑制RNase,与氯仿联合利用可增强抑制作用。

异硫氰酸胍属于解偶剂,是一类强力的蛋白质变性剂,可溶解蛋白质并使蛋白质二级结构消失,致使细胞结构降解,核蛋白迅速与核酸分离。

β-巯基乙醇的要紧作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键。

在氯仿抽提、离心分离后,RNA处于水相中,将水相转管后用异丙醇沉淀RNA。

用这种方式取得的总RNA中蛋白质和DNA污染很少。

三、实验材料1. 材料甘薯叶片,品种为徐薯182. 试剂①无RNA酶灭菌水:加入%的DEPC,处置留宿后高压灭菌;②Trizol试剂;③氯仿;④异丙醇、75%乙醇;⑤TBE缓冲液;⑥上样缓冲液3. 仪器高压灭菌锅、微量移液器、台式离心机、超净工作台、电泳仪、电泳槽、凝胶成像系统、塑料离心管、枪头和EP 管架四、实验方式1. 将叶片掏出放入研钵中,加入适量液氮,迅速研磨成粉末,每50-100 mg植物叶片加入1 mL Trizol试剂,室温放置5 min,使样品充割裂解;2. 每1 mL Trizol试剂加入200 μL氯仿,用手猛烈振荡混匀后室温放置3-5 min使其自然分相;3. 4℃12,000 rpm 离心15 min,吸取上层水相转移到新管中;在上清中加入等体积冰凉的异丙醇,室温放置15 min;4. 4℃12,000 rpm 离心10 min,弃上清,RNA沉淀于管底;5. RNA沉淀中加入1 mL 75%的乙醇,温和震荡离心管,悬浮沉淀;4℃8,000 rpm离心2 min,弃上清;6. 室温放置10 min晾干沉淀;7. 沉淀中加入20μL RNase-free ddH2O,轻弹管壁,以充分溶解RNA,-70℃保留;8. 用1%的琼脂糖凝胶电泳进行检测,用EB染色并照相。

五、实验结果1. RNA提取结果依照Trizol 试剂盒方式,提出的RNA较少,此部份未以图或数据显示。

2. RNA后电泳结果如图1. 其中9a为本组实验结果。

由图可知RNA条带超级模糊,拖尾现象严峻,几乎无法分清具体条带,亮度较大。

点样孔周围的红色部份为杂质,在提取进程中并未专门好除去。

图1. RNA提取跑胶结果。

其中1泳道为样品Marker,9a泳道为本小组RNA样品。

与标准对照可见条带模糊,拖尾现象严峻。

六、分析与讨论1. RNA的提取产量并非多,可能是因裂解样品不充分或RNA沉淀未完全溶解所致。

在实验进程中,由于对操作时刻的把握不熟练、操作技术不完善,留上清与弃上清时令RNA损失了部份,使最终RNA产量不睬想。

2. RNA电泳结果有EB存在时,电泳后28S rRNA和18S rRNA在紫外灯下应看得很清楚,另显现条由tRNA,rRNA和5S rRNA 组成的较模糊、迁移较快的带。

若是RNA没有降解,那么28S rRNA的亮度应为18S rRNA 的2倍,且这两条带都无弥散现象发生。

由图1. 9a可知,RNA拖尾现象严峻,说明RNA已大部份被降解;另外点样孔周围显现红色部份杂质,分析可能有并未除尽的蛋白质,一样阻碍RNA电泳结果。

在进行实验时,本小组成员未严格戴上口罩并勤换手套,这可能使外源RNAase进入样品,致使其降解严峻。

另外,提掏出RNA 后本小组未当即将样品放入-70℃保留,也为致使结果不睬想的重要缘故之一。

在最初用氯仿萃取分层的进程中,由于水相吸取过量,搀杂入部份蛋白质杂质而未于后续纯化步骤除尽,RNA条带拖尾严峻可能还受该蛋白质阻碍。

七、总结:本次实验RNA提取超级失败,从跑胶结果可见其降解严峻。

尽管大实验无法幸免试剂交叉污染的可能性,且电泳用胶的质量也会阻碍实验结果,但从图1. 2a,3a,2b等条带较为清楚的小组实验结果可知,琼脂糖凝胶质量和试剂对结果干扰不大。

那么本小组成员在提取进程中的操作必然显现了专门大失误。

第一口罩、手套应该严格按规定佩带,提取进程对移液枪等仪器利用需谨慎认真,尽可能幸免混入杂质。

第二为排除部份杂质阻碍可对RNA样品用紫外线分光光度计测定吸光值查验,将有助于结果分析。

最后,细节决定成败,咱们应汲取教训幸免接下来的实验显现类似问题。

实验二第1链cDNA的合成和模板的验证一、实验目的1. 把握第1链cDNA的合成方式和步骤二、实验原理真核生物基因多为断裂基因,编码区不持续,需经转录后加工才能成为成熟mRNA。

以真核成熟mRNA为模板合成cDNA,进而取得有持续氨基酸编码的DNA序列,无需转录后加工,即可在原核细胞中表达。

真核生物的mRNA都有PolyA尾巴。

引物:Oligo dT。

莫洛尼氏鼠白血病毒逆转录酶以单链RNA为模板,在引物的引发下合成与模板互补的DNA链。

mRNA 反转录生成的cDNA可作为PCR的模板进行扩增称为RT-PCR,RT-PCR比Northern杂交更灵敏,对RNA 的质量要求较低,操作简便,它是在转录水平上检测基因时空表达的经常使用方式。

三、实验材料1. 材料徐薯18叶片RNA样品2. 试剂①dNTP mixture;②Oligo (dT) Primer (10 μM);③Total RNA;④RNase free ddH2O;⑤M-MLV 反转录酶;⑥5×First-strand Buffer;⑦M DTT;⑧Ribonuclease Inhibitor (40 U/μL)3. 仪器10μL 和100μL 的移液枪、的EP管、PCR仪等四、实验方式1. 在RNase free Microtube 管中配制以下混合液:dNTP mixture1 μL*Oligo (dT) Primer (10 μM) 4 μLTotal RNA2 μL生物技术综合实验报告实验一工作液的配制、培育基配制、器皿洗涤及灭菌一、实验目的把握各类工作液配制方式;了解植物培育基的组成及配制方式;把握高温高压灭菌的方式。

二、原理培育基是植物组织培育的大体条件,同时也是关键因素。

湿热条件(121℃的蒸汽,10分钟)能够有效地杀灭附着在玻璃器皿、器具和溶液和培育基中的微生物达到灭菌的目的。

三、器具和试剂灭菌锅,天平,电炉,微波炉,三角瓶,封口膜,移液管,移液器,量筒,烧杯,pH试纸,培育皿,滤纸,Parafilm 封口膜。

琼脂,MS培育基大量元素,无菌水,葡萄糖,2, 4-D,IBA,KT ,1M NaOH及HCl,卡那霉素,头孢霉素,乙酰丁香酮。

四、实验内容PH调剂剂的配制、培育基母液的配制、培育基的配制、各类相关物品的预备培育基的配制步骤一、取个干净烧杯,加入1/3-2/3左右的蒸馏水,用移液管取所需的母液加入烧杯。

二、称取定量的蔗糖加入烧杯中并非断搅拌,直到完全溶解,定容。

3、用NaOH或稀HCL调剂酸碱值。

4、称取定量琼脂糖加入烧杯中,加热煮沸搅拌,待琼脂完全溶解,分装。

五、高压灭菌棉花无菌苗培育基的制备一、取25 ml MS大量元素母液,称取葡萄糖15g、于1升的烧杯中,定容后调pH值为,加入/l 琼脂煮沸。

二、然后将其分装到100毫升的三角瓶中,每瓶40毫升。

3、用封口膜封口后在灭菌锅中灭菌15分钟。

4、灭菌后臵于水平的工作台上冷却即可。

要求:配制1L拟南芥无菌苗培育基的制备一、拟南芥无菌苗培育基:1/2 MS大量元素+蔗糖10g/L,PH值;加入琼脂高温高压灭菌。

二、%琼脂糖:琼脂糖/100ml 蒸馏水;无菌苗培育基和%琼脂糖均121°高压灭菌15分钟。

3、另预备20套9cm培育皿,灭菌。

要求:配制,装1瓶灭菌,灭菌后培育基倒皿。

五、注意事项一、为了尽可能减少人为的误差,必需严格按实验步骤进行操作,严格依照要求的量来配制工作液、母液及培育基。

二、应当把培育基中的各类成份都写在纸上,加进去一个以后即划掉一个。

3、所有装着培育基的试管、玻璃罐、玻璃瓶和培育皿等都应当清楚地做上标记。

4、每小组的操作的具体事项请参照黑板上贴的任务分组。

五、爱惜实验仪器及耗材,警惕利用玻璃器皿,合理灭菌,因为灭菌耗时较长。

实验二无菌苗的制备一、原理化学灭菌:%升汞(Hgcl2)溶液浸泡10分钟能够对棉花种子等外植体进行灭菌,84消毒液浸泡3分钟能够对拟南芥等小种子外植体进行消毒。

物理消毒:紫外灯消毒、酒精灯火焰或高温烧灼5min左右可有效杀死镊子、剪子等不锈钢操作器具的菌类达到消毒的目的。

二、实验材料、器具和试剂棉花品种YZ1;拟南芥col-0野生型灭菌锅,天平,电炉,三角瓶,封口膜,镊子,酒精灯,剪子,移液管,超净工作台。

%升汞溶液,84消毒液,75%酒精三、实验内容拟南芥无菌苗培育基倒皿1. 取上次灭菌好的拟南芥培育基,略微拧松瓶盖,微波炉煮沸,边煮边摇动,至全数融化。

2. 将上次灭菌好的9cm培育皿分开放臵超净工作台上。

3. 将融化好的培育基分装于培育皿中,将皿至于超净台上吹干.。

共培育培育基的配制成份数量成份数量MS大量元素(20倍)50 ml 2,4-D (/ ml)1 mlNH4NO3 (20倍) 50 ml 甘氨酸(1000倍)1 ml微量元素(100倍)10 ml KT(/ml)1 ml铁盐(100倍) 10 ml 葡萄糖30g/L微生素(1000倍) 1 mlPH值肌醇(100倍) 1 ml依次加入上述物质,调PH值,然后分装至2个500ml 蓝盖瓶,每瓶加入4g琼脂,灭菌,灭菌后倒皿。

选择培育基的配制共培育培育基+卡那霉素50mg/L + 头孢霉素400 mg/L灭菌后,待培育基凉至60度左右加入,混匀,倒皿。

棉花无菌苗的制备一、将棉籽用手术剪子去壳。

二、用%的升汞灭菌13分钟。

3、无菌水冲洗三遍,接种于无菌苗培育基中。

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