S4实验四 植物叶片愈伤组织的诱导培养(理论)
第5章 愈伤组织的诱导和植株再生
植株年龄健康情况、外植体的种类、外植
体的年龄等
5.4 影响愈伤诱导和植株再生的因素
3.培养基成分： 激素、矿质元素、有机化合物等：
5.4 影响愈伤诱导和植株再生的因素
4.培养条件：温度、光照、湿度
5.4 影响愈伤诱导和植株再生的因素
5.影响再生的其他因素：愈伤组织的状态
5.4 影响愈伤诱导和植株再生的因素
5.3 愈伤诱导和植株再生的机制
1.愈伤诱导的机理：据研究，CDC2基因是调节细
胞分裂周期的基因，在其作用下细胞分裂可从
G1期转入S期、G2期和M期。该基因的产物为
一个 3kb 的丝氨酸－苏氨酸蛋白激酶 P34cdc2
的磷酸化作用所调节。在分化的细胞中，
P34cdc2 水平降低，说明调节作用已经完成，
第五章 愈伤组织的诱导 和植株再生
愈伤组织的诱导和植株再生
5.1 愈 伤 组 织 的 诱 导 5.2 再 生 途 径 5.3 愈伤 诱导 和植 株再 生的 机制 5.4 影响 愈伤 诱导 和植 株再 生的 因素
5.1 愈伤组织的诱导（callus induction）
1.意义： 2.愈伤诱导的过程： 3.诱导条件： 4.愈伤的继代： 5.愈伤的遗传特点： 6. 长期培养物形态发生潜力的丧失：
素的比例控制器官的分化。
5.3 愈伤诱导和植株再生的机制
4.体细胞胚胎发生的分子机理：外源激素
可以诱导体细胞或愈伤组织分化为胚
性 细 胞 （ 通 过 环 腺 苷 cAMP 和 钙 调 素
CaM），诱导胚性细胞形成极性。
愈伤组织的诱导和植株再生
5.1 愈 伤 组 织 的 诱 导 5.2 再 生 途 径 5.3 愈伤 诱导 和植 株再 生的 机制 5.4 影响 愈伤 诱导 和植 株再 生的 因素
植物愈伤组织培养以及再分化实验原理及步骤
实验二十植物愈伤组织培养以及再分化实验目的了解培养基母液的配制方法和注意事项；掌握培养基的配制和灭菌方法，掌握植物组织培养的一般方法实验原理（一）植物细胞的全能性植物细胞的全能性即是每个植物的本细胞或性细胞都具有该植物的全套遗传基因，因此在一定培养条件下每个细胞都可发育成一个与母体一样的植株。
这个概念虽然在本世纪初已经提出，但在当时的技术条件下，在实践上并没做到，经过几十年来组织培养技术的不断改进，目前细胞的全能性不但在理论上完全被证实，而且为组织培养在实践上的应用奠定了基础。
植物细胞要表现出全能性，须经过几个步骤：成熟细胞→分生细胞→胚状体→完整植株。
成熟细胞→愈伤组织→出根出芽→完整植株。
脱分化也就是已经分化定型的细胞，经过诱导成为重新恢复了分裂能力（也就是成为分生状态）细胞的过程。
不但植物体细胞可以表现全能性，花粉在培养条件下也可能进行脱分化，通过愈伤组织或胚状体发育成单倍体植株。
诱导细胞的脱分化，需要许多外界条件。
任何一个分化的细胞都具有保持分生组织状态的潜势，不过它平常处于受抑制的状态，消除抑制作用就可以使细胞恢复分裂。
在各种外界条件中，外源激素对脱分化起重要作用。
有些植物的外植体仅需加入生长素（IAA"吲哚乙酸"，NAA"萘乙酸"，2，4-D）即可诱导细胞的分裂与生长，如菊苣；有的仅需加入加细胞激动素类，如大豆、萝卜；另一类需加生长素和细胞激动素类，如烟草髓、胡萝卜、马铃薯；还有一类不需加任何激素，如冠瘿组织，烟草肿瘤组织。
（二）组织的分化与器官建成外植体诱导出愈伤组织后，经过继代培养，可以在愈伤组织内部形成一类分生组织（meristemoid）即具有分生能较往年小细胞团，然后，再分化成不同的器官原基。
有些情况下，外植体不经愈伤组织而直接诱导出芽、根。
所以器官发生有两种方式，即直接和间接的。
（1）外植体→器官发生（根、芽或胚状体）→再生植株。
（2）外植体→愈伤组织→类分生组织→根、芽→再生植株。
水稻愈伤组织的诱导实验报告
水稻愈伤组织的诱导实验报告实验目的：本实验旨在探究水稻愈伤组织的诱导方法，为将来的水稻遗传改造研究提供参考。
实验材料和仪器：1. 材料：水稻种子、MS培养基、植物生长调节剂2,4-D、生长调节剂TDZ、无菌器具、琼脂、无菌操作室。
2. 仪器：无菌操作台、显微镜、实验室平衡器等。
实验步骤：1. 生物材料准备：选取幼苗期生长良好、品种鲜明的水稻种子作为材料。
将水稻种子进行表面消毒，处理方法为分别用70%的酒精和5%的次氯酸钠(1:1)混合消毒3-5分钟，然后充分清洗。
2. 建立组织培养体系：将消毒后的水稻种子在无菌操作台上进行分离培养。
将种子取出后，从胚乳中取出胚轴，用剪刀消毒后放入含有MS培养基的无菌培养瓶中，置于无菌操作室中进行培养。
在35-37°C下连续培养3-5天。
3. 筛选愈伤组织：将培养2-3天的胚轴等植物试管苗等组织放置在含有不同浓度的2,4-D和TDZ的培养基中，培养10-15天。
筛选出生长具有愈伤能力的组织，采用显微镜等方法进行观察，并进行相应的分离和培养。
4. 愈伤组织的维持和复壮：将筛选出的愈伤组织维持在含有2,4-D和TDZ的培养基中，定期进行转移或分离。
当愈伤组织增生至一定程度后，将其转移到不含激素的培养基中，进行复壮。
实验结果：在实验过程中，我们选择了4个不同浓度的2,4-D和TDZ进行培养，筛选出了愈伤组织，并进行了维持、修复工作。
经过5次转移和增殖培养，我们成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
结论：本实验采用的方法可行，成功地建立了稳定的水稻愈伤组织体系。
本研究为今后的水稻遗传改造和抗性育种提供了良好的基础。
植物愈伤组织培养的关键技术
植物愈伤组织培养的关键技术在现代农业中，植物愈伤组织培养技术广泛应用于种植业和植物育种中。
该技术通过培养和再生植物愈伤组织，可以实现快速繁殖、基因转化和育种改良等目的。
以下是植物愈伤组织培养中的关键技术：1. 材料准备：选择适宜的植物组织（如茎尖、叶片等）作为外植体，确保其健康和无病虫害。
外植体的选择对成功培养愈伤组织至关重要。
2. 外植体的消毒：使用适当的消毒方法，如漂白剂或酒精处理，以杀灭外植体表面的微生物。
3. 媒体配制：选择适宜的基础培养基，并添加必要的植物生长调节剂（如激素）和营养物质，以提供愈伤组织生长和分化所需的条件。
4. 培养条件控制：为愈伤组织提供适宜的光照、温度和湿度条件，以促进其生长和分化。
光照和温度的合理控制对于植物愈伤组织的培养成功至关重要。
5. 组织诱导和增殖：通过添加适当的激素和营养物质，诱导外植体形成愈伤组织，并通过继代培养，实现愈伤组织的快速增殖。
6. 分化和再生：通过调整培养基的成分和激素的添加量，促进愈伤组织分化为根、茎和叶等不同的组织器官，并进一步培养和培育出整株植物。
7. 病害防治：在愈伤组织培养过程中，要注意病害的防治，如消毒外植体、灭菌培养器具等，以避免病原微生物的侵染。
8. 营养调控：根据不同植物的营养需求和生长阶段的需要，合理调节培养基中的营养物质的含量和比例，以促进愈伤组织的生长和发育。
植物愈伤组织培养技术的成功与否，往往取决于以上关键技术的合理应用和控制。
这些技术的正确操作和调控，能够为植物育种和种植业的发展提供有力支持。
以上是关于植物愈伤组织培养的关键技术的简要介绍。
希望对您有所帮助！。
植物愈伤组织诱导培养基的配制
中 国 海 洋 大 学 实 验 报 告姓名： 马宁 专业年级： 生命基地班2009级 学号：************课程： 植物生理学实验 题目： 植物愈伤组织诱导培养基的配制一 .实验目的1、掌握植物组织培养基母液配制的原则。
2、掌握植物MS 培养基的配制方法。
3、学会使用高压灭菌锅。
学会植物组织含水量、自由水和束缚水含量的测定二 .实验原理概念：1.植物组织培养：将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
2.愈伤组织及脱分化、再分化：植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
培养基配置见下表化合物含量mg/L母 液吸取母液量 ml/L 编号浓度mg/ml称量mg 配制量mlNH 4NO 3 1650 133 16500 500 25KNO 3 1900 38 19000 KH 2PO 4 170 3.4 1700 MgSO 4.7H 2O 370 7.4 3700 CaCl 2.2H 2O4402 8.8440050025三 .主要仪器试剂三蒸水、蔗糖、琼脂、用分析纯试剂：NH4NO3、KNO3、KH2PO4、MgSO4•7H2O 、CaCl2•2H2O 、 ZnSO4•7H2O 、MnSO4•4H2O 、H3BO3预先配制好的不同组分的培养基母液、2-4D 溶液、烧杯、移液管、铁缸子、玻璃棒、手套、加热器等。
四.实验操作步骤1、母液的配制（教师配好） 1）配制母液的好处和原则 （1）好处a.可减少每次配制称量药品的麻烦.b.减少极微量药品在每次称量时造成的误差。
植物培植实验报告范文(3篇)
一、实验目的1. 掌握无菌操作的植物组织培养方法；2. 通过配置MS培养基母液，掌握母液的配置和保存方法；3. 通过诱导植物叶片形成愈伤组织，学习愈伤组织的建立方法；4. 了解植物细胞通过分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整再生植株的过程，加深对植物细胞全能性的理解；5. 探讨不同激素配比对植物愈伤组织形成的影响。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过特定的培养基和条件，使植物细胞或组织在体外条件下生长发育成完整植株的技术。
植物组织培养主要包括脱分化、再分化两个过程。
脱分化是指植物组织在培养条件下，由已分化的细胞重新获得分裂和分化的能力，形成愈伤组织；再分化是指愈伤组织在特定条件下，通过细胞分裂、增殖、分化等过程，形成具有特定形态和功能的器官。
三、实验材料与仪器实验材料：- 植物叶片（如小麦、水稻、玉米等）- MS培养基母液- 乙醇、氯化汞（HgCl2）、次氯酸钠等消毒剂- 琼脂- 烧杯、量筒、培养皿、解剖刀、剪刀、镊子、超净工作台、高压灭菌锅、水浴锅等实验仪器：- 培养室- 电子分析天平- 橡皮筋等四、实验步骤1. 材料预处理：- 将植物叶片用无菌水清洗，去除表面污物；- 用70%乙醇消毒30秒，然后用无菌水冲洗3次；- 用氯化汞（HgCl2）或次氯酸钠消毒5分钟，再用无菌水冲洗3次；- 将消毒后的叶片切成约1cm×1cm大小的块状。
2. 愈伤组织诱导：- 将预处理后的叶片块状接种于MS培养基中；- 在培养室中，将培养皿放置于适宜的温度（25℃左右）和光照条件下； - 观察愈伤组织的形成情况，记录愈伤组织的颜色、质地、大小等特征。
3. 激素配比试验：- 将愈伤组织接种于不同激素配比的MS培养基中；- 观察愈伤组织的生长情况，记录愈伤组织的颜色、质地、大小等特征； - 比较不同激素配比对愈伤组织形成的影响。
4. 再分化培养：- 将愈伤组织接种于含有生长素和细胞分裂素的MS培养基中；- 在培养室中，将培养皿放置于适宜的温度（25℃左右）和光照条件下； - 观察再分化过程，记录芽和根的形成情况。
《植物愈伤组织的诱导 [金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比]》
![《植物愈伤组织的诱导 [金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比]》](https://img.taocdn.com/s3/m/d8bb0796852458fb760b564d.png)
《植物愈伤组织的诱导[金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比]》摘要。
以金线兰根状茎、幼茎、叶片、离体胚为外植体，４种激素２，４－Ｄ、ＮＡＡ、６－ＢＡ、ＺＴ采用Ｌ９（３４）正交表处理，对愈伤组织诱导的条件进行研究。
结果表明，６－ＢＡ和２，４－Ｄ在诱导金线兰愈伤组织中作用极为显著，４种激素对愈伤组织的诱导作用大小依次为，６－ＢＡ＞２，４－Ｄ＞ＮＡＡ＞ＺＴ，初步断定金线兰愈伤组织诱导的最佳激素配比是０.２ｍｇ／Ｌ２，４－Ｄ＋０.９ｍｇ／ＬＮＡＡ＋１.０ｍｇ／Ｌ６－ＢＡ＋０.５０ｍｇ／ＬＺＴ；根状茎和幼茎作为外植体更易诱导愈伤组织形成；暗培养较光暗交替更易诱导愈伤组织生长。
关键词：金线兰；愈伤组织；诱导；条件中图分类号：Ｓ６８２.３１文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）12－2568-03studyontheoptimumhormoneratioinducingcallusofanoectochilusrox burghiiＫｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ；ｃａｌｌｕｓ；inducement；ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ金线兰［Ａｎｏｅｃｔｏｃｈｉｌｕｓｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ（Ｗａｌｌ.）Ｌｉｎｄｌ.］，兰科开唇兰属植物，全草入药，味甘、性平，具有清热凉血、除湿解毒的功效，可治疗肺结核、糖尿病、肾炎、膀胱炎、重症肌无力、遗精、风湿性及类风湿性关节炎、小儿惊风、妇女白带以及毒蛇咬伤等症，是民间珍稀名贵的中草药［１］。
除药用外，由于株型矮小，叶型优美，叶面黑紫色，有金黄色带有绢丝光泽的美丽网脉，是观赏价值极高的室内观叶珍品，具有广阔的开发利用前景。
金线兰种子自然条件下萌发率很低，再加上过度采集，野生资源日益枯竭［２］。
在人工培养条件下诱导愈伤组织生长并使其增殖是实现快繁和分离其次生代谢产物获取金线兰药用成分的重要途径，但目前罕见金线兰愈伤组织诱导的研究报道。
采用正交试验研究了４种激素对诱导愈伤组织生长的影响，为金线兰愈伤组织诱导和细胞培养体系的建立提供依据。
实验二 植物组织培养2-愈伤组织的诱导
中国海洋大学实验报告2015 年 4 月23 日姓名###云年级BBB专业UUUUUU学号HHHHHHHHHHHH课程细胞工程学实验题目植物愈伤组织诱导实验一、实验目的1、掌握植物愈伤组织诱导、继代、器官分化的原理；2、掌握植物组织接种培养的整个无菌操作的过程；3、熟悉超净工作台的使用。
二、实验原理植物组织培养是将植物的器官组织以至单个细胞，应用无菌操作方法，使其在人工条件下，能够分裂、增殖、分化发育成一完整植株的过程。
植物的组织在人工培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，可以重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织，这一过程称为“脱分化作用”。
而已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称为“再分化作用”。
植物激素在“再分化”过程中起着重要作用，生长素和细胞分裂素的比例，决定了根和芽的分化。
超净工作台是一种水平单向流型局部空气净化设备。
三、实验仪器试剂1、仪器：镊子、解剖刀、烧杯、酒精灯、试剂瓶、含有培养基的培养瓶、培养皿、金属盘、记号笔2、用品：胡萝卜、75%酒精、10%次氯酸钠、无菌水四、实验步骤：（1）用70～75%的酒精棉擦拭双手和操作台面，进行常规的无菌操作准备。
（2）将植物体用准备好的自来水冲洗后,用酒精棉擦拭取材部位表面, 于70%酒精中浸沾数秒钟。
（3）将材料放入已灭菌的100ml试剂瓶中，加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡5分钟。
（4）弃次氯酸钠浸泡液，再加入10%的次氯酸钠溶液，浸泡10分钟。
（5）弃次氯酸钠浸泡液，用准备的无菌水浸泡漂洗3～4次，每次1～2分钟，用无菌镊子搅动。
（6）将已灭菌的植物材料置于平板内，按无菌操作要求剥去外皮，用解剖刀切成5mm 厚的薄片，弃去两头的两片，取中间部分的薄片，用镊子将其接种在愈伤组织诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶4～6片，均匀分散。
（7）将瓶口和瓶盖在酒精灯火焰上方一过，拧紧瓶盖。
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实验四植物叶片愈伤组织的诱导培养（理论）一、概念
愈伤组织（callus）
◆自然状况下指植物在受伤后于伤口表面形成的一团薄壁细胞。
◆植物组织培养中，指在人工培养基上由外植体组织增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁细胞。
二、植物愈伤组织及形成过程
外植体形成愈伤组织，标志着植物组织培养的开始。
1、形态结构
◆形状不规则，结构疏松◆有大量的分生中心
◆细胞排列毫无次序◆内有大量的细胞间隙◆颜色不一致
优良的愈伤组织所具备的特性：
A、高度的胚性或再分化能力，以便从愈伤组织得到再生植株
B、易散碎，可建立优良的悬浮体系，并可分离出全能性的原生质体
C、旺盛的自我增殖能力，可建立大规模的愈伤组织无性系
D、经过长期继代保存而不丧失胚性，可进行各种遗传操作
2、愈伤组织形成过程
A、诱导期
◆细胞准备分裂◆合成代谢活动加强◆细胞大小基本不变
诱导期时间长短因植物种类、外植体生理状况及外部因素而异
B、分裂期
◆一分为二，不断增殖◆形态结构与生理生化发生变化
主要表现：
◆数目迅速增加◆细胞平均鲜重下降◆细胞体积小◆核与核仁增至最大
◆ RNA减少，DNA保持不变◆组织总干重、蛋白质与核酸含量增加
◆新细胞壁合成极快
C、形成期
细胞经诱导、分裂形成无序结构愈伤组织的时期。
细胞特点：
◆大而不规则、高度液泡化◆无次生细胞壁与胞间连丝
◆整个组织松散◆表面以下约5~10个细胞生长中心
本时期的愈伤组织是最适合获得单细胞或原生质体的，是建立悬浮体系的最好时期。
D、分化期
停止分裂的细胞发生生理代谢变化，导致形成由不同形态和功能的细胞组成的愈伤组织。
本期愈伤组织特点：
◆细胞分裂部位由表层转变到深层◆分裂方向由单周分裂变为深层局部分化
◆分化组织瘤状结构形成◆维管组织形成
瘤状结构的出现使愈伤组织逐渐形成具有维管组织，呈分散的节状结构形成，出现各类组织细胞。
细胞分裂素对促进维管化组织有重要作用
3、愈伤组织的继代培养
◆长期保存愈伤组织的一种方法◆直径到2~3cm时与外植体分离，单独培养
◆选取其生长迅速的部位作继代培养◆分化与再生植株时，应选生长较慢的愈伤组织
◆每一继代培养时间取决于其生长速度◆一般可在3~6周继代一次
三、植物愈伤组织的遗传变异
1、引起异质性的原因
A、外植体染色体倍数性与遗传组成不同的细胞经诱导后的分裂
B、培养条件引起的不规则性
它们常同时发挥作用
2、初生愈伤组织
接种到培养基上后，细胞核内的变化：
A、正常有丝分裂
B、先核内复制，后有丝分裂
C、先
核碎裂，后有丝分裂
◆初生愈伤组织的异质细胞群体性
反映了外植体中的染色体状况
反映了愈伤组织诱导期间核变异的结果
◆在诱导中，会出现二倍体、多倍体、单倍体、非整倍体与染色体结构变异体等
3、建成愈伤组织
◆选择作用的结果◆只有一种主要核型占优势◆培养基成分和培养类型的影响◆异质群体中细胞间的竞争与互作的影响
四、影响因子及培养条件
1、培养基
2、组织原有的倍数性
3、培养环境的条件
五、愈伤组织的发生方式
发生方式：
1、器官发生
指细胞或愈伤组织通过形成不定芽再生成植株的过程。
其发生顺序：
A、无根的芽或无芽的根
B、先形成芽，再生根
C、先形成根，再生芽
D、芽与根同时生长
2、胚胎发生
◆细胞经脱分化后，持续细胞分裂增殖，经过一系列胚胎发育时期，最终形成成熟的有机体
◆这一过程的胚胎为胚状体
六、植物愈伤组织培养的过程
1、一般愈伤组织培养
2、植物胚性愈伤组织培养
七、愈伤组织培养的应用
a、加快园艺植物新品种和良种繁育速度
b、培养无病毒苗木
c、获得倍性不同的植物
d、克服远缘杂交困难
e、利于种质资源长期保存和远距离运输
f、提供育种中间材料
g、诱发和离体筛选突变体
h、制造人工种子。