不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
输血前检查中不规则抗体筛选
筛选红细胞
试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生 理盐水或 Liss液洗涤后则应该在２４小时 内使用，否则会因污染、抗原（Lewis系 统抗原）丢失导致试验错误。
抗人球蛋白试剂
抗人球蛋白分类：单特异性的抗-IgG，抗C3d，多特异 性的抗IgG+C3d。 抗-IgG、抗IgG+C3d的多特异性抗球蛋白试剂都可用于 抗体检测。 抗IgG+C3d可增加一些补体依赖稀有抗体的检出，如 Kidd血型系统的一些抗体; 与单纯的抗IgG相比，抗 IgG+C3d 与这些需要补体参与反应的抗体可产生更强的 反应。 多特异性抗球蛋白试剂的缺点是容易产生假阳性反应。 使用抗IgG可以避免补体引起的非特异反应，但降低了 补体依赖抗体的检测灵敏度。
微柱凝胶法抗体筛选程序（3）
置抗IgG凝胶卡于37 ±1 ℃孵育箱中孵育15分钟 。 取出凝胶卡，用凝胶卡专用离心机离心： 将卡放入离心机转子上的卡槽中，注意要保持转 子的平衡。 扣上离心机盖板。启动运行按钮。 检查倒计时时间及离心转速符合试验要求。 离心机运转停止且盖板自动打开后取出凝胶卡。
微柱凝胶法抗体筛选程序（4）
凝胶卡试验的缺点
要精确调节红细胞浓度至0.8-1％，这较为麻烦。 将试剂瓶中的细胞加入试管要比加入如此小的凝 胶孔中要容易的多。 缗钱状凝集与不完全的小血块样本也可造成假阳 性。 可以检出大量临床无意义的抗体。
自身对照试验必要性
自身对照：即使用病人自己的血清和自 己红细胞进行抗体检测。 有助于确定抗体筛选阳性结果是同种抗 体还是自身抗体、或是缗钱引起。
抗体筛选技术（酶试验）
原理：蛋白水解酶可破坏红细胞表面的带负电荷的唾液酸 基团，使红细胞表面负电荷减少，降低了红细胞之间的排 斥力，缩短了相邻红细胞之间的距离，使IgG抗体凝集红 细胞。 程序：2滴血清、1滴2-4%红细胞，加入2滴酶，37℃孵育 15分钟，离心看结果。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查之迟辟智美创作不规则抗体检查也称红细胞抗体检查.不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体.ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体.其多为ＩｇＧ抗体.主要是经输血或妊娠等免疫安慰发生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必需通过特殊介质才华使致敏红细胞呈现凝集反应.临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同.如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可招致溶血性输血反应的发生.红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球卵白试验阳性红细胞上抗体的检查.1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果呈现凝集暗示血清中存在不规则抗体.2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 把持步伐3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴.3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀.3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒失落，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体.3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必需重作.3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果.如果凝集散开，暗示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定.4. 筛选Ⅰ号细胞，筛选Ⅱ号细胞，筛选Ⅲ号细胞.对应的细胞反应格局表一张.红细胞血型抗体筛选细胞反应格局表4. 临床意义虽然不规则抗体筛选阳性率仅为0.37%,可是该项阳性的患者一旦输入具有相应抗原的红细胞,抗原、抗体发生免疫性结合,在补体的介入下,使输入的红细胞发生溶解,即发生溶血性输血反应.患者呈现发热、贫血、黄疸和血红卵白尿,严重时甚至危及其生命.因此,在输血中要经常警惕这种输血反应发生的可能性.当不规则抗体筛选阳性时,必需进一步作抗体鉴定,确定其特异性后,再输入无相应抗原的红细胞,才华到达平安输血之目的.新生儿溶血病(ＨＤＮ)也是由于母亲体内存在着与其胎儿红细胞不配合的ＩｇＧ性质的不规则抗体,引起的同种主动免疫性疾病.凡是以ＩｇＧ性质呈现的不规则抗体,理论上都可以引起ＨＤＮ,因为ＩｇＧ性质抗体能通过胎盘进入胎儿血循环,破坏胎儿红细胞,引发胎儿水肿、黄疸、贫血和肝脾肿年夜,甚至并发核黄疸.因此对有输血史或妊娠史的孕妇也应作不规则抗体筛选,若检测出不规则抗体,应作出相应的预防和治疗.Ｒｈ血型中Ｄ抗原的抗原性强于Ｅ抗原的抗原性,因此发生抗Ｄ抗体的几率年夜于抗-Ｅ抗体.抗Ａ1抗体为Ａ亚型中不规则抗体,它的存在提示我们在注意ＡＢＯ血型以外的不规则抗体的同时,也应高度重视ＡＢＯ亚型中的不规则抗体,因为它也是引起溶血性输血反应的一个因素.抗Ｍ抗体为冷凝集素,很少在37℃有活性,一般在体内不能引起溶血反应,但患者处于高温麻醉状态下手术时应注意,因为此类抗体可激活补体.当机体的体温在冷抗体最适反应温度范围内(4～20℃)时,可发生溶血反应.37℃4℃,偶可在37℃查出.抗Ｐ1抗体很少在体内造成溶血,几乎总是ＩｇＭ型抗体,所以不能通过胎盘,不会造成ＨＤＮ.冷凝集素在配血时可忽略.自身抗体在自身溶血性贫血时呈现较多,一直以来是输血的一年夜难题,我们仍遵循一般输血原则.综上所述,不规则抗体是引起溶血性输血反应和新生儿溶血病的主要因素之一, 对输血发生溶血性反应所引起肾衰、死亡病例的诊断有临床意义.因此为了保证输血平安,提高输血疗效,减少或根绝溶血性输血反应的发生,不规则抗体检查必需作为输血前检查的重要项目之一.。
抗体筛选和鉴定操作规程
抗体筛选和鉴定操作规程(一) 抗体筛选1. 抗体筛选的目的血型抗体是体内免疫系统所产生的针对血型抗原发生特异性反应的一类免疫球蛋白类物质。
人体血清内存在的抗体有5种类型：IgG.、 IgM、IgA.、IgD和IgE，其中IgG 和IgM是最重要的2种抗体。
红细胞血型抗体可以分为：①完全抗体：这些抗体能够在盐水介质中凝集相应的红细胞，所以又称为盐水抗体，它们主要是分子量较大的IgM；②不完全抗体：这类抗体主要是分子量较小的IgG，虽然能够结合红细胞上的抗原，但在盐水介质中不能使红细胞凝集。
有临床意义的血型抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，产生溶血性输血反应，轻则影响治疗效果，重则危及患者生命；此外，对孕妇而言，抗体会引起新生儿溶血病，影响新生儿脏器的发育，并使其智力发育受到伤害，严重者则会危及新生儿的生命安全。
因此，抗体筛检是很必要而且必需的。
抗体筛检试验(antibody screening tests)主要筛查与红细胞反应的血型同种抗体。
对受血者的血清和血浆应进行常规的抗体筛选试验，以发现有临床意义的不规则的血型同种抗体。
所谓不规则抗体是指抗A和抗B以外的血型抗体。
抗体筛选试验的原则是让受检者的血清与筛选红细胞反应，以发现在37℃有活性的抗体。
患者接受输血、妇女妊娠都会刺激机体产生抗体。
抗体筛检试验能有效保证临床输血安全，避免新生儿溶血症的发生。
2. 抗体筛选的方法抗体筛选试验可在交叉配血试验之前进行或一起进行，这样有利于对患者抗体的早期确认及鉴定临床上有意义的抗体，避免一些可能的异常情况而造成病情的延误。
抗体筛选和鉴定使用的方法有盐水法、白蛋白介质法、低离子强度介质法(Liss)、聚凝胺法(polybrene)、凝胶法、酶技术、抗球蛋白试验等，可按抗体的血清学行为和试验的具体条件选择，但必须进行抗球蛋白试验。
抗体筛选试验不一定能检出所有有临床意义的抗体，一些抗低频率抗原的抗体或有剂量效应的抗体可能被漏检，这时需安排抗原更完全和特异性更强的筛选细胞进行试验，或用敏感度更高的技术进行检查。
不规则抗体筛选
谢谢
Polybrene法
原理： 原理：聚凝胺是一种多价阳离子聚合物，在溶 液中有多个阳离子集团，能中和红细胞表面的 负电荷，并借助正负电荷的作用，引起红细胞 的非特异性凝聚，这种凝聚是可逆的。当红细 胞与血清在低离子介质中孵育，IgG抗体与红 细胞上相应抗原结合后，在聚凝胺的作用下发 生凝集，凝聚和凝集外表上不能区分，加入枸 橼酸钠重悬液后，枸橼酸根的负电荷中和了聚 凝胺上的正电荷，使红细胞凝聚现象消失，而 真正的凝集不消失。(见图).
混匀后置37℃水浴30分钟后，用生理盐水洗 涤3次（怎么洗）最后1次用吸水纸吸尽盐水， 然后加1滴抗球蛋白血清，混匀后以3400rpm 离心15秒钟，轻摇，观察结果。
结果意义
筛选红细胞1、2、3 自身红细胞 血清中存在的抗体
+ +
— +
同种抗体
自身抗体，或自身抗 体和同种抗体同时存 在
—
+
自身抗体
抗体筛选检查
一、什么叫“抗体筛选”检查 1、不规则抗体的含义：通常把抗A、抗B以 外的所有红细胞血型抗体称为不规则抗体。如 抗D、抗N、抗M、jk-抗体。 2、“抗体筛选”的含义：用具备有临床意 义的血型抗原的O型红细胞，检测病人血清 （含多种抗体）；如果出现聚集现象，则提示 病人有不规则抗体存在，可判为“抗体筛选” 阳性。
2、临床有的病人出现慢性（迟缓性）溶血反应，易忽视或引不起临 床医师重视。 （理论上讲，成年人每输1U的浓缩红细胞，在不丢失、 不被破坏（溶血）的前提下，应能提升Hb5-10g/L (0.5-1g/dl), 保持15-30天。如果输3-4U RBC，病人Hb上升不到10g/L，或几天 后（1周内）Hb仍旧下降到原来水平，甚至更低。这种情况，就要 考虑是否有慢性溶血反应存在。） 3、有利于早期发现和确认具有临床意义的抗体，获得充足的时间来 选择相配合的血，避免由于寻找不到相合的血液而造成患者病情 的延误。
不规则抗体筛查
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。
不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体。
ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。
其多为ＩｇＧ抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。
临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细,或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体,而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生。
红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检；3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3.1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴，加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。
3.2 各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒，然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0.1ml液体。
3.4 轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
不规则抗体筛查及鉴定培训7.27
情况一：抗筛阳性反应强度不一，自身对照阴性
表型与抗体互相验证
情况二：抗筛全部呈阳性反应，反应强度大致相同， 自身对照阳性
情况二：抗筛全部呈阳性反应，反应强度大致相同， 自身对照阳性
3 抗筛阳性输血原则
抗筛阳性患者输血
确认只有不规则抗体
自身（-）、抗体筛选（+）
配血时患者血清中的同种抗体与供 者红细胞上相应抗原起反应。
P 血型 系统抗体
最常见的表型 ：P1、P2 P1 红细胞上有两种不同的 抗原：P1 和 P；P2 红细胞 上只有 P 抗原，可以产生 抗-P1。
不规则抗体种类（其他）
Lewis血型系统抗体： 多为IgM类，属自然产生的抗体，37℃一般不发生反应
Lutheran 血型系统抗体： LU抗原剂量效应，导致混合凝集、临床意义一般不大
结果判读：根据谱细胞的反应格局一般可以鉴定常见的抗体,但有 一定的局限性，有可能漏检常见的组合抗体
排除法：纯合子表达抗原无反应则直接排 除对应的抗体（举例：与5号细胞dCCee、11 号细胞DCCEe、12号细胞DCcEE反应均为阴性， 表明不存在单特异性抗-C）
情况一：抗筛阳性反应强度不一，自身对照阴性
操作:抗体鉴定谱细胞分别与被检血清进行间接抗球 蛋白试验，同时做自身对照
自身细胞检查：确定患者血清内是否有自身抗体或自身抗体与同 种抗体并存，只有是阴性时，才能排除自身抗体或其他凝集素导 致的谱细胞凝集；
使用试剂谱细胞：谱细胞一般是由8～16单人份的已知血型表型的O 型红细胞配套组成，具有各种不同的抗原成分；
聚凝胺介质法
1.红细胞上已有不完全抗体致敏
2.加入聚凝胺，缩短红细胞之间的距离，不完全 抗体同时与两个红细胞结合使其特异性凝集
不规则抗体筛查
不规矩抗体检讨不规矩抗体检讨也称红细胞抗体检讨.不规矩抗体是指抗Ａ.抗Ｂ以外的血型抗体.ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规矩抗体.其多为ＩｇＧ抗体.主如果经输血或怀胎等免疫刺激产生,在盐水介质中不克不及凝集而只能致敏响应抗原的红细胞,必须经由过程特别介质才干使致敏红细胞消失凝集反响.临床上平日所称的“同型血”现实上是指ＡＢＯ血型体系和Ｒｈ血型体系雷同,其它红细胞血型体系未必雷同.假如交叉配血不细心,或者只用盐水介质配血,则有可能检讨不出ＡＢＯ血型体系之外的不规矩抗体,而此抗体与响应抗原产生免疫反响,可导致溶血性输血反响的产生.红细胞血型抗体检讨实用于下列情形：1.ABO血型判定发明受检者血清中有不测抗体时;2.供血者血清抗体筛检;3.输血前受者血清抗体检讨;4.输血后溶血反响疑为由同种抗体引起时;5.妊妇血清的抗体检讨;6.新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检讨;7.直接抗球蛋白实验阳性红细胞上抗体的检讨.1. 道理应用筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）上消失的多种红细胞抗原与被检血清在凝集胺介质中反响,假如消失凝集暗示血清中消失不规矩抗体. 2. 试剂2.1 5%筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）2.2 凝集胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操纵步调3.1 取试管三支,标明Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ并往各管加病人血清（血浆）2滴,加5%筛选细胞（Ⅰ.Ⅱ.Ⅲ）各1滴.3.2 各加LIM0.7ml,混杂平均后,再各加Polybrene 溶液2滴,并混杂平均.3.3 用BASO专用离心计心情1000G离心力,离心10秒,然后把上清液倒失落,不要沥干,让管底残留约0.1ml液体.3.4 轻轻动摇试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重作.3.5 最后参加Resuspending 2滴,轻轻迁移转变试管混归并同时不雅察成果.假如凝集散开,暗示是由Polybrene引起的非特异性集合,抗体筛检成果为阴性;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体联合的特异性反响,抗体筛检成果为阳性,应进一步作抗体判定.4. 筛选Ⅰ号细胞,筛选Ⅱ号细胞,筛选Ⅲ号细胞.对应的细胞反响格式表一张.红细胞血型抗体筛选细胞反响格式表4. 临床意义固然不规矩抗体筛选阳性率仅为0.37%,但是该项阳性的患者一旦输入具有响应抗原的红细胞,抗原.抗体产生免疫性联合,在补体的介入下,使输入的红细胞产生消融,即产生溶血性输血反响.患者消失发烧.贫血.黄疸和血红蛋白尿,轻微时甚至危及其性命.是以,在输血中要经常小心这种输血反响产生的可能性.当不规矩抗体筛选阳性时,必须进一步作抗体判定,肯定其特异性后,再输入无响应抗原的红细胞,才干达到安然输血之目标.新生儿溶血病(ＨＤＮ)也是因为母亲体内消失着与其胎儿红细胞不合营的ＩｇＧ性质的不规矩抗体,引起的同种自动免疫性疾病.凡是以ＩｇＧ性质消失的不规矩抗体,理论上都可以引起ＨＤＮ,因为ＩｇＧ性质抗体能经由过程胎盘进入胎儿血轮回,损坏胎儿红细胞,激发胎儿水肿.黄疸.贫血和肝脾肿大,甚至并发核黄疸.是以对有输血史或怀胎史的妊妇也应作不规矩抗体筛选,若检测出不规矩抗体,应作出响应的预防和治疗.Ｒｈ血型中Ｄ抗原的抗原性强于Ｅ抗原的抗原性,是以产生抗Ｄ抗体的几率大于抗-Ｅ抗体.抗Ａ1抗体为Ａ亚型中不规矩抗体,它的消失提醒我们在留意ＡＢＯ血型以外的不规矩抗体的同时,也应高度看重ＡＢＯ亚型中的不规矩抗体,因为它也是引起溶血性输血反响的一个身分.抗Ｍ抗体为冷凝集素,很少在37℃有活性,一般在体内不克不及引起溶血反响,但患者处于低温麻醉状况下手术时应留意,因为此类抗体可激活补体.当机体的体温在冷抗体最适反响温度规模内(4～20℃)时,可产生溶血反响.37℃4℃,偶可在37℃查出.抗Ｐ1抗体很少在体内造成溶血,几乎老是ＩｇＭ型抗体,所以不克不及经由过程胎盘,不会造成ＨＤＮ.冷凝集素在配血时可疏忽.自身抗体在自身溶血性贫血时消失较多,一向以来是输血的一大难题,我们仍遵守一般输血原则.综上所述,不规矩抗体是引起溶血性输血反响和新生儿溶血病的重要身分之一, 对输血产生溶血性反响所引起肾衰.逝世亡病例的诊断有临床意义.是以为了包管输血安然,进步输血疗效,削减或杜绝溶血性输血反响的产生,不规矩抗体检讨必须作为输血前检讨的重要项目之一.。
不规则抗体筛查【范本模板】
不规则抗体检查不规则抗体检查也称红细胞抗体检查。
不规则抗体是指抗Ａ、抗Ｂ以外的血型抗体。
ＡＢＯ系中的亚型,变异型抗Ａ1或某种抗Ｂ等抗体,也称为不规则抗体。
其多为ＩｇＧ抗体。
主要是经输血或妊娠等免疫刺激产生,在盐水介质中不能凝集而只能致敏相应抗原的红细胞,必须通过特殊介质才能使致敏红细胞出现凝集反应。
临床上通常所称的“同型血”实际上是指ＡＢＯ血型系统和Ｒｈ血型系统相同,其它红细胞血型系统未必相同。
如果交叉配血不仔细，或者只用盐水介质配血,则有可能检查不出ＡＢＯ血型系统之外的不规则抗体，而此抗体与相应抗原发生免疫反应,可导致溶血性输血反应的发生.红细胞血型抗体检查适用于下列情况：1、ABO血型鉴定发现受检者血清中有意外抗体时；2、供血者血清抗体筛检;3、输血前受者血清抗体检查；4、输血后溶血反应疑为由同种抗体引起时；5、孕妇血清的抗体检查；6、新生儿溶液血病婴儿血液中抗体检查；7、直接抗球蛋白试验阳性红细胞上抗体的检查。
1. 原理利用筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）上存在的多种红细胞抗原与被检血清在凝聚胺介质中反应，如果出现凝集表示血清中存在不规则抗体。
2. 试剂2。
1 5％筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ)2.2 凝聚胺试剂2.3 直接抗人球试剂外周血或静脉血3. 操作步骤3。
1 取试管三支，标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ并往各管加病人血清（血浆)2滴,加5%筛选细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）各1滴。
3.2 各加LIM0。
7ml，混合均匀后，再各加Polybrene 溶液2滴，并混合均匀。
3.3 用BASO专用离心机1000G离心力，离心10秒,然后把上清液倒掉，不要沥干，让管底残留约0。
1ml液体。
3.4 轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重作。
3.5 最后加入Resuspending 2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。
如果凝集散开，表示是由Polybrene引起的非特异性聚集，抗体筛检结果为阴性；如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，抗体筛检结果为阳性，应进一步作抗体鉴定。
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不规则抗体筛选和鉴定标准操作规程
1.检验目的
不规则抗体筛选和鉴定可在交叉配合之前进行或一起进行，这样有利于患者抗体的早期确认及鉴定，发现临床上有意义的抗体，避免一些可能的情况而造成病情的延误。
2.检验方法
分盐水介质法、抗球蛋白法和微柱凝胶法。
3.检验原理
让待检者的血清与已知血型的试剂红细胞即筛选红细胞（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套）起反应，以发现在37℃中有反应活性的抗体。
这种抗体可引起新生儿溶血病、溶血性输血反应、或使输入的红细胞存活期缩短等。
当不规则抗体筛选试验阳性后，再进行不规则抗体鉴定，即利用谱红细胞（11套鉴定细胞）与待检者的血清反应，根据反应结果判断机体所产生的同种抗体类别。
4.标本要求
受检者不抗凝静脉血4.0ml，分离血清，48小时内使用
5.试剂
5.1.筛选红细胞：由2或3人份的O型红细胞组成为一套试剂，每套试剂筛选
红细胞中至少有以下常见的抗原：D、C、E、c、e、M、N、S、s、P、Le a、Le b、K、k、Fy a、Fy b、Jk a、Jk b等。
每次用3套试剂（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ）进行抗体筛选，见表1005-1。
5.2.鉴定谱细胞：除包括常见的抗原以外还有：C w、Kp a、Kp b、Js a、Js b、Lu a、
Lu b、Xr/min a等。
每次用11套试剂进行抗体鉴定，见表1005-2。
5.3.抗球蛋白试剂：多特异性抗球蛋白血清（IgG、C3d）。
5.4.致敏红细胞（质控细胞）。
5.5.0.9%生理盐水。
5.6.Coombs微柱凝胶卡。
6.器材
试管、吸管、37℃水浴箱、台式离心机、滤纸、微量加样器等。
7.操作程序
7.1.盐水介质法
7.1.1．取受检者血清2滴于标记有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的3支小试管中。
7.1.2．对应加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套2%～5%筛选红细胞生理盐水悬液1滴，37℃孵育30分钟。
7.1.3.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并记录反应情况于
表1005-1中。
如果抗体筛选试验阳性，继续做以下试验。
表1005-1 红细胞血型筛选细胞反应格局表
注：＋为阳性；0为阴性
7.1.4再取受检者血清2滴于标记有1～11的11支小试管中。
7.1.5.在11支小试管中分别加入11套2%～5%鉴定谱细胞生理盐水悬液1滴，
37℃孵育30分钟。
7.1.6.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中表1005-2 红细胞血型谱细胞反应格局表
注：＋为阳性；0为阴性；W为弱阳性
7.2抗球蛋白法
7.2.1.如果盐水法（1）～（3）抗体筛选试验阴性，继续做以下试验。
7.2.2.再振摇试管，使管底红细胞重新悬浮，用生理盐水洗涤3次。
7.2.3.最后一次洗涤后，弃去全部盐水，将试管边缘盐水用滤纸吸干。
7.2.4.立即加入多特异性抗球蛋白血清1滴，混匀。
7.2.5以3000r/min离心10秒，轻轻悬浮细胞，肉眼观察凝集和溶血情况，
并用显微镜确证，记录结果于表1005-1中。
7.2.6.如果抗体筛选试验阳性，再取受检者血清2滴于标记有1～11的11
支小试管中。
7.2.7.在11支小试管中分别加入11套鉴定谱细胞悬液1滴和多特异性抗球
蛋白血清1滴，37℃孵育30分钟。
7.2.8.以3000r/min离心10秒，观察凝集和溶血情况，并将反应情况记录于表1005-2中。
7.3.微柱凝胶法(强生卡)
7.3.1.在Coombs微柱凝胶卡上标记Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ，分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ套筛选
红细胞40µl和被检血清40µl。
7.3.2.将Coombs微柱凝胶卡置于微柱凝胶孵育器内，孵育15分钟。
7.3.3.取出微柱凝胶卡观察结果，并记录于表1005-1中。
7.3.4.如果抗体筛选试验阳性，将11套鉴定谱细胞对应加入标记有1～11
的微柱凝胶卡中各40µl。
7.3.5.然后，再各加入被检血清40µl。
7.3.6.重复操作7.3.2.和7.3.3，观察结果，并记录于表1005-2中。
8.结果判断
8.1.必须记录观察到的每个细胞样本的凝集强度或溶血现象。
8.2.盐水法和抗球蛋白法以±～＋＋＋＋为阳性凝集结果；微柱凝胶法中抗原抗体复合物浮在微柱凝胶卡表面或胶中，为阳性反应；沉于尖底部为阴性反应，见图1005-1。
图1005-1 微柱凝胶法结果判断
8.3.抗球蛋白法阴性无凝集，应加入致敏红细胞（质控细胞）1滴，混匀后以
1000r/min离心15秒，观察结果，若凝集表示试验结果为阴性；若不凝集，
表示抗球蛋白血清可能失效，试验无意义。
8.4.盐水法和抗球蛋白法判断溶血和凝集的终点必须准确和前后一致，如果溶
血和凝集都存在，离心后要立即观察上清液的情况，然后轻轻地把细胞摇散以观察凝集。
8.5.红细胞血型筛选细胞和谱细胞反应格局见表1005-1和1005-2。
9.注意事项
9.1.每种试验必须做自身对照，即待检者自身血清和自身红细胞反应，无凝集
则试验有效；若有凝集则提示存在自身免疫抗体。
9.2.抗体筛选阳性后，要用生理盐水洗涤红细胞3次，离心后再观察结果，避免假阳性反应。
9.3.根据反应凝集强度±～＋＋＋＋记为阳性结果，表示待检者血清中有不规
则抗体，结合谱细胞反应格局，确定抗体特性；无凝集表示待检者血清中无不规则抗体。
9.4.抗球蛋白法或微柱凝胶法出现凝集，而盐水法无凝集，则提示不规则抗体为IgG性质。
9.5.方法选择：盐水介质检测法和非盐水介质检测法，后者包括抗球蛋白法、聚凝胺法、酶法、低离子介质法、微柱凝胶法等，本试验运用盐水介质、抗球蛋白法和微柱凝胶法。