胶体金法和ELISA法联合检测手足口病肠道病毒71型-最新年文档
不同方法检测肠道病毒71型l9M抗体在手足口病诊断中的意义
不同方法检测肠道病毒71型l9M抗体在手足口病诊断中的意义【摘要】目的：观察分析不同方法检测肠道病毒71型（Human enterovrus 71，EV71）免疫球蛋白M（ImmunoglobuIinM，IgM）抗体在手足口病（HFMD）诊断中的意义。
方法：选取我疾控中心2014年2月～2016年2月收集的80例手足口病儿作为观察组，选取同时期80例非手足口病患儿作为对照组，采用免疫层析法（ICA）、酶联免疫吸附法（ELISA）对肠道病毒71型IgM抗体进行检测。
结果：80例手足口病患儿中，ELISA检出EV71 lgM抗体阳性率20.00％，ICA检出阳性率21.25％，ICA、ELISA在对照组患儿中均未出现阳性（P<0.05）；ICA和ELISA检出阳性率比较差异无统计学意义（P>0.05）。
结论：在手足口病诊断中，可通过ELISA、ICA法对肠道病毒71型IgM抗体检查确诊，但检测结果为阴性者，不能排除手足口病可能性，需密切结合临床表现进行诊断。
【关键词】手足口病；肠道病毒71型；IgM抗体；ELISA；ICA手足口病（HFMD）是儿科临床常见疾病之一，是一种传播速度较快的传染病，其发病原因与肠道病毒有关，常见的肠道病毒为柯萨奇病毒A16型（Cox A16）、肠道病毒71型（EV71）手足口病表现为口痛、低热、厌食、手、足、口腔等出现小疱疹等，治疗不及时或不当，可引起肺水肿、心肌炎、呼吸衰竭等并发症，严重时危及患儿生命[1]。
肠道病毒71型感染是导致手足口病患儿死亡的主要原因之一，对肠道病毒71型进行检测，可帮助临床医师掌握患儿病情，为疾病早期诊断、治疗提供依据，降低并发症发生率[2]。
本文收集了80例手足口病患儿和80例非手足口病患儿临床资料，探讨酶联免疫吸附法（ELISA）、免疫层析法（ICA）对EV71型IgM抗体检测的意义，报道如下。
1资料与方法1.1一般资料收集我中心2014年2月～2016年2月80例手足口病患儿临床资料，将其作为观察组，男性47例，女性33例，年龄6个月～6岁，平均年龄（3.4±0.3）岁；病程1-7d，平均病程（2.5±1.2）d，结合临床症状，符合手足口病诊断标准。
肠道病毒71型检测与VP1基因特征分析
肠道病毒71型检测与VP1基因特征分析摘要】目的分析肠道病毒71型2011年本地流行株VP1基因特征学特征。
方法收集2011年本地手足口病患者临床标本332份，进行EV71荧光定量RT-PCR鉴定，采用RT-PCR对15株分离到的EV71进行VP1编码区基因扩增，并对扩增产物进行核苷酸序列测序和分析。
根据VP1测序结果与国内外报道的各基因型和基因亚型EV71 VP1序列进行同源性和亲缘进化分析。
结果 165份标本鉴定为EV71，分离株的VP1区核苷酸和氨基酸同源性分别是97.5%～99.9%和99.4%～100%。
与C4a亚型的核苷酸和氨基酸最高。
亲缘进化树显示，本地株全部属于C4基因亚型的C4a进化分支。
结论本地区分离的EV71与近几年国内其他地区EV71分离株亲缘关系很近，有共同进化的趋势，属于C4基因亚型的C4a进化分支，并存在多个传播链。
【关键词】肠道病毒71型基因特征遗传进化手足口病（hand，foot and mouth disease， HFMD）是由多种肠道病毒引起的，严重威胁儿童健康的全球性传染病。
临床表现为手、足、口腔等部位的疱疹，伴有发热、咽痛、倦怠乏力等症状，个别重症患儿病情进展快，可发生死亡。
为全面了解本地区手足口病病原学分布的情况，对本市446份手足口病临床诊断标本进行检测，现将结果报告如下。
1 材料和方法1.1 标本来源2009～2010年各医院送检的HFMD临床诊断标本共332份，其中粪便、咽拭子、肛拭子、脑脊液、气管洗液标本各201、72、43、12、4份。
1.2 核酸提取和荧光定量RT-PCR检测采用QIAGEN Reansy Mini Kit试剂盒，操作步骤参照Rneasy Mini kit Handbook。
上海之江生物科技有限公司生产的肠道病毒71型荧光检测试剂盒和柯萨奇病毒A 组16型荧光检测试剂盒。
1.3 EV71 VP1基因扩增将检测为EV71阳性的病毒核酸进行全长VP1编码区的核苷酸序列测定和分析。
手足口病患儿血清肠道EV71病毒抗体快速检测及临床意义
手足口病患儿血清肠道EV71病毒抗体快速检测及临床意义刘常基【摘要】通过分析我院接收的100例患儿,经过几种不同的检验方法确诊是否患有手足口病,通过研究检验结果,分析快速检验对临床治疗的实用意义.使用胶体金卡片法快速检验手足口病,为及时隔离治疗提供了依据,打下了基础,为及时治疗赢得了时间.手足口病可以威胁到儿童健康,传染性、流行性强而且发病较快,病情变化复杂,选用快速易行的检测方式,快速筛查确诊,对临床意义重大.【期刊名称】《现代诊断与治疗》【年(卷),期】2012(023)009【总页数】2页(P1478-1479)【关键词】手足口病;血清;EV71病毒;快速检测【作者】刘常基【作者单位】吉安县人民医院,江西,吉安,343100【正文语种】中文【中图分类】R714手足口病（HFMD），是一种传染病，主要由肠道病毒引起，在儿童多发。
表现为儿童的手、脚以及口腔等部位发生疱疹，严重者引起呼吸系统甚至是神经系统的病变，有一定的死亡率。
引起手足口病的病毒繁多，目前掌握的多达二十余种类型，其中最常见的是柯萨奇病毒A16型，即常说的CA16；另一种是肠道病毒71型，即本文提到的EV71。
据资料分析，人体的肠道病毒71型IgM抗体简称为EV71-IgM，产生于肠道病毒71型急性感染期。
胶体金卡片法作为病毒急性感染的辅助检测，采用了捕获法原理，检测人的血清、血浆以及全血样本中EV71-IgM。
1 资料与方法1.1 一般资料以我院2009年3月～2012年6月收治的100例HFMD患儿为研究对象，其中男68例，女32例；年龄0.5～6（3.4±1.9）岁，症状多为体温升高，伴有手足或口腔周边疱疹或不同程度的溃疡，发病时间2～3d。
1.2 方法使用快速检测方法胶体金卡片法检测，快速检测试剂盒采用万泰生物药业股份有限公司生产的EV71-IgM快速检测试剂盒，采集全血标本100份，每份2ml，进行离心处理，取出15μl进行稀释，等待30min后，得出检测结果。
临床手足口病肠道病毒71型VP1基因分析
ＩＬ－２Ｒａ，ＨＧＦ，ＣＣＬ８，ＩＬ ８ ａｎｄ ＩＬ－１２ｐ７０ ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ Ｈ ＳＣＴ ａｎｄ
ｔｈｅｉｒ ｒｏｌｅ ａｓ ＧＶＨＤ ｂｉｏｍａｒｋｅｒｓ ｉｎ ｐａｅｄｉａｔｒｉｃ ｐａｔｉｅｎｔｓ￣Ｊ］．Ｂｏｎｅ
（昆 明 医科 大 学 附 属 延 安 医 院 检 验 科 ，云 南 昆 明 ６５００５１）
摘 要 ：目的 对 临 床 手 足 Ｅｌ病 （ＨＦＭＤ）的 病 原 体 肠 道 病 毒 ７１型 （ＥＶ７１）分 离 株 ＶＰ１基 因 测 序 分 析 ，从 分 子 水 平
探 究 ＨＦＭＤ的 分 子 遗 传 进 化 变 迁 情 况 。 方 法 收 集 ２０１５年 １月 至 ２０１６年 １２月 期 间 在 延 安 医 院 临 床 就 诊 疑 似
ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ａｆｔｅｒ ａｌｌｏｇｅｎｅｉｃ ｂｏｎｅ ｍ ａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｓ ａｓ ａ
ｍａｒｋｅｒ ｆｏｒ ＧＶＨＤ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ Ｍ ａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，１９９８，２１（１）：
２９．
［１３］Ｎａｋａｍｕｒａ Ｈ，Ｋｏｍａｔｓｕ Ｋ，Ａｙａｋｉ Ｍ ，ｅｔ ａ１．Ｓｅｒｕｍ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｓｏｌｕ
Ｍ ａｒｒｏｗ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ，２０１３，４８（９）：１２３０．
（收 稿 日期 ：２０１７—０６—２Ｏ）
文 章 编 号 ：１００７—４２８７（２０１８）０５—０８１１—０４
刀
Ａ
临床 手 足 口病 肠ｙ 道 病 毒 ７ １型 ＶＰ １基 因分 析
王 杨 ，李 秫 ，彭传梅 ，张 胜 ，陈婉 婷 ，卫 波 ，高 辉
ELISA法与金标法检测分析
Ｃ 脚 ￡ Ｓ ￡ Ｇ ０ Ｍ Ｍ ｌ Ｎ ｔ Ｔ Ｙ Ｄ ０ ｅ Ｔ Ｏ Ｒ Ｓ
Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 与金标法检测 分析
王 秀 琴
１ ０ １ ７ ５例 ， 采集 静脉血。
方法 ， 但是该方法 易受加样 、 反应温度 、 反 应时 间、 洗 涤彻底 性等诸 多 因素 的影 响 ，
Ｅ ｕｓ Ａ法基础 上发 展起来 的一种 检 测技
结果判 断 ： ① 胶体 金试纸 条 ： 试 纸条
在检测 线和对 照线位 置 出现 两条 紫红色
线结果 为阳性 ， 仅在对照线位置 出现紫红
我 国是 乙型 肝 炎 的高 发 地 区 ， 乙肝 病
色线结果为阴性 ， 试纸条上对照线位置未 出现紫红色结果为无效 。② Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 ： 样
漏检率 ３ ． ９ ％ 。我 们 对 １ ０ １ ７ 阳性符 合 率 ９ ３ ％， 阴 性符合率 １ ０ ０ ％， 漏检率 ３ ． ９ ％， 假 阳性率 ７ ． ０ ％， 总符 合率 ９ ９ ． ０ ％。Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ法 与胶 体金试 纸条 比较灵 敏度差异 有显著 性 （ Ｐ
０ ２ ２ １ ５ ０内蒙古大兴安岭林业总医院检验科
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ７—６ １ ４ ｘ ． ２ ０ １ ３
０２． ２０ ７
方法 两种方法 均严 格按照试剂 说明
书进行 操作 。
而且操作步骤较多 ， 整个实验过程至少需 要 ２小时左右 ， 因此不适用 于急诊及 无偿 献 血 现 场筛 查。胶 体 金 试 纸 条 法 是 在
ｓ Ａ ｇ ） 胶体 金法 诊 断试 剂 ， 酶联 免 疫 吸 附
EV71-IgM胶体金法在手足口病早期诊断的价值
EV71-IgM胶体金法在手足口病早期诊断的价值
甘超
【期刊名称】《内蒙古中医药》
【年(卷),期】2013(032)020
【摘要】目的:评价胶体法检测EV71 IgM抗体与RT-PCR法检测EV71病毒核酸在手足口病诊断的优劣.方法:标本选取248例手足口疑似病例,分别采用血清金标法检测EV71肠道病毒IgM抗体,咽拭RT-PCR法检测EV71-RNA.结果:2012年3月～2012年4月对248例疑似病例进行胶体金法检测,EV71阳性率为16.94％(42/248),RT-PCR法检测阳性率为19.35％(48/248).其中2例金标法检测阳性采用RT-PCR法检测为阴性.EV71胶体金法快速检测试剂的特异度为96.15％,灵敏度为83.33％.结论:EV71胶体金法可作为EV71感染的初筛早期快检,在临床诊治和流感爆发疫情处理上具有重要意义.
【总页数】1页(P104)
【作者】甘超
【作者单位】湖北省黄石市中医院检验科,435000
【正文语种】中文
【中图分类】R446.6
【相关文献】
1.免疫层析法与酶联免疫法检测手足口病EV71-IgM抗体的阳性率比较 [J], 张克传
2.溶血、脂血和黄疸对EV71-IgM胶体金法检测的影响 [J], 代春雨
3.EV71-IgM检测在手足口病诊断中的价值 [J], 刘金亭;刘力建
4.ELISA检测血清EV71-IgM诊断手足口病价值的Meta分析 [J], 郑华珍;刘新光;赵炜
5.IgM胶体金法与RT-PCR法对手足口病诊断及随访的价值分析 [J], 朱义芳;孙照华;蔡晶娟;赵云;卢亚陵;谢丽娇
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病毒分离、RT-PCR和实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒71型比较
病毒分离、RT-PCR和实时荧光RT-PCR法检测肠道病毒71型比较评价病毒分离培养、RT-PCR及实时荧光RT-PCR法对于肠道病毒71型的检测效果。
方法分别用病毒分离培养、RT-PCR、实时荧光RT-PCR方法对2009年龙岩市手足口病哨点监测医院送检的153份手足口病患者咽拭子样本进行EV71检测，并对检测结果进行配对卡方检验。
结果3种方法总体符合率为81.0%，3种检测方法对样本中EV71阳性检出率差异无统计学意义（P＞0.05）。
结论病毒分离、RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测方法均适用于EV71的检测，可以作为EV71的日常临床诊断方法。
手足口病是全球性传染病，研究表明，主要由肠道病毒71型（EV71）和柯萨奇病毒A组16型（CA16）引起[1]。
2种病毒基因型相似并且表现类似的临床症状，其中EV71还能引起严重的神经系统疾病，甚至危及生命，因而具有更大的危害性[2，3]。
2008-04/05，通过病毒分离、RT-PCR、实时荧光RT-PCR 3种方法同时对2009年龙岩市手足口病监测哨点医院送检的153份手足口病患者咽拭样本进行EV71检测。
现将检测结果分析如下。
1 材料与方法1.1 样本来源采集龙岩市手足口病监测哨点医院手足口病患者咽拭样本。
样本由专业人员采集，置于保冷箱送检。
所有样本置-70℃保存备用。
1.2 方法1.2.1 样本处理咽拭子在样本保存液中充分搅动（至少40下），以洗下拭子上黏附的病毒及含有病毒的细胞等，然后在4℃条件下，1000r/min离心20min，用上清接种细胞及提取病毒RNA。
1.2.2 病毒分离咽拭子样本经过滤除菌后直接接种人横纹肌癌细胞（RD），每份样本同时接种两管，待管内细胞长满单层时，每管接种0.2mL，置于37℃、5％的二氧化碳培养箱内培养，每日观察细胞病变（CPE），待CPE达到+++以上将培养管置于－20℃保存，即为阳性分离株；如果无CPE，则盲传2代，每代连续观察7d以上，判为阴性株。
ELISA和胶体金法联合筛查检测HIV的临床使用
【 关键词】Ｈ Ｉ ｖ ； 胶体金层析
Ｅ Ｌ ｌ Ｓ Ａ 和胶 体 金法联 合筛 查检 测 Ｈ Ｉ Ｖ 的 临床 使 用
肖向 苑 ， 罗 雪斌 ， 刘 立 民
（ 广 西壮族 自治 区柳州市工人 医院检验科 ， 广西 柳州 ５ ４ ５ ０ ０ １ ）
【 摘 要 】 目的 比较胶体金层析法和Ｅ Ｌ Ｉ ｓ Ａ 在Ｈ Ｉ Ｖ 筛查中的灵敏度和特异性 ， 并分析 两种 方法有无 差异 ， 为实验 室筛查ＨＩ Ｖ － － ￣ － 作提供方
手术 时间长或者病人 消瘦在骶 尾部皮肤 粘贴 ３ Ｍ聚酯泡沫敷料 ， 发生 ， 提高患者满意度 ， 促进手术室护理质量 的可持续发展 。 能减轻局部皮 肤的剪切力 和摩擦力 ， 防止骶尾部皮肤 破损 ， 加快 参 考 文献 ： 皮肤的血 液循环 ， 改善局部充血 ， 能有效预防压疮的发生。 术 中注 ［ １ 】 黄帼琴 ， 许 云 于 术 室截 石 位 安 置 风 险 分 析 及 护 理 对 策 ［ Ｉ ］ ． 北 方 意提醒手 术医生不要靠压患者身体 ， 避免压伤 患者 。 药学， ２ ０ １ ３ ， １ ０ （ ６ ） ： １ ７ ０ ． ２ ， ３ 尽量避免搁脚架 对胭窝动脉的直接压迫 ，胭窝部及膝关节 【 ２ 】 毕迎 月． 手术体位安置不 当的常见并发症及 干预对策卟 现代 中 处 西 医结 合 杂 志 ， ２ ０ １ ０ ， １ ９ （ ５ ） ： ６ １ ０ — ６ １ １ ． 置软垫 ， 约束带 固定于关节上方 ， 松紧适度 固定 ， 尽量避开关 ［ ３ 】 张信 霞， 殷 艳． 膀胱 截石位 并发症预 防的护理进展 【 Ｊ ］ ． 临床 护 理 节， 从而 防止血管 内皮损伤导致 的血栓和小腿筋膜高压综合症。 杂 志２ ０ １ ３ ， １ ２ （ ２ ） ： ６ ５ — ６ ７ ． ２ ． ４ 先安置一侧下肢 ， 待患者适应后再 安置 另一侧下肢 ， 手术结
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胶体金法和ELISA法联合检测手足口病肠道病毒71型
手足口病（HFMD）是一种由多种肠道病毒感染引起的儿童常见的传染性疾病，传染性强，在世界范围内包括我国多省市都出现过多次暴发与流行。
鉴于我国目前手足口病发病的严峻形势，2008年5月HFMD被列入法定丙类传染病，要求各级卫生部门做到早发现、早报告、早隔离、早治疗。
引发手足口病的肠道病毒有20多种，其中以柯萨奇病毒A16型（CAl6）和肠道病毒71型（EV71）最为常见。
与其他肠道病毒引起的手足口病相比，由EV71型感染引起的疾病发生重症比例较大，病死率较高，且最易导致流行。
国内的数次暴发流行经卫生部证实均为EV7l引起的[1]。
我院每年收治手足口病患儿数百例。
为贯彻落实省政府要求的“四早”措施，建立手足口病流行动态监测与应急性检测方法具有非常重要的意义。
对EV71的早期诊断、早期治疗成为治愈该病的关键。
我科同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，结合两者优势，能够快速、准确的检测EV71型病毒。
1 材料与方法
1.1 一般资料
患者为我院儿科2012年3月至2013年3月收治的疑似HFMD 患者，男132例，女89例，年龄4月～12岁。
1.2 试剂与方法
试剂由北京万泰生物药业XX公司生产：胶体金法（国食药监械（准）字2011第3401197号，京药监械生产许20040097号）；ELISA法（国食药监械（准）字2010第3400526号，京药监械生产许20040097号）。
标本为患者静脉血2mL，肝素钠抗凝。
当日标本采用胶体金法进行快速检测，检测完标本保存，第二日再采用ELISA法集中批量检测，操作均按试剂盒要求严格进行检测。
1.3 统计学分析
采用Spss 19.0统计软件进行数据处理。
2 结果
同时采用胶体金法和ELISA法检测EV71型病毒IgM抗体，胶体金法阳性率为27.15%（60/221），ELISA法阳性率28.05%（62/221），共同阳性标本60例，总符合率96.79% ，Kappa值为0.92。
经统计学分析，P>0.05，两种方法结果无显著性差异。
3 讨论
1957年新西兰首次报导手足口病后，世界大部分地区如美国、澳大利亚、意大利、法国等均有手足口病的流行报导[2]。
目前手足口病的的流行在亚太地区呈上升趋势，我国自1981年在上海首次发现本病，以后北京、河北、山东等十几个省（市）均有暴发流行的报导[3]。
经卫生部证实均为EV7l引起的。
EV71感染患儿主要临床表现以发热和手、足、口腔和臀部
等部位出现皮疹为主，部分病例可无发热。
绝大多数患者预后良好。
但病毒可以侵犯呼吸系统、中枢系统、心血管系统等引起病毒性脑炎、病毒性脑脊髓膜炎、心肌炎、肺水肿、肺出血、弛缓性麻痹等症状，出现临床预后较严重的神经系统综合征及心肺功能衰竭综合征，个别危重患儿可因多种原因导致死亡。
EV71型手足口病是一类严重危害儿童健康的疾病，因此建立EV71快速、准确的检测通道尤为重要。
病毒培养是EV71的检测的金标准，但是费时、费力，对人员操作及设备要求高，不宜于基层医院开展。
目前实验室开展的EV71检测方法有PCR、ELASA法和胶体金法3种。
PCR法虽然检出率高，特异性强，但对实验条件、人员、设备要求高，操作繁琐，且仍然存在时间长、速度慢等缺点，而临床病例多为散发急诊发烧患儿，早诊断、早治疗对挽救重症患儿的生命极其重要。
我院地处市中心，门诊量大，就诊患儿多，既要保证检测结果快速，又要确保结果的准确性，结合我科设备及人员上的优势，于是采用了胶体金法和ELISA法检测EV71型IgM抗体。
利用胶体金法操作最为简便、快速的特点进行初步诊断，再结合ELISA法灵敏度高、特异性强的特点进行确证。
结合两者优势，达到快速、准确的检测EV71型病毒的目的。
胶体金法检测EV71型病毒利用免疫层析技术检测EV71-IgM 抗体，优点是操作简便，30分钟内观察结果，可单份检测、便于保存、不需特殊设备，肉眼可以直接观察结果，非常适合门/
急诊病人的检测，较好地满足基层防控一线需求。
缺点是需要较高浓度的标记物，灵敏度受限制，可能造成假阴性。
ELISA法检测EV71型采用酶联免疫吸附试验原理检测
EV71-IgM抗体。
优点是灵敏度高，漏检度低，特异性强，重复性好，可进行定量和半定量测定，可以在酶免疫分析仪上作批量检测。
缺点是存在假阳性率，检测时间需要2小时左右，操作复杂，步骤多。
受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响，不适用于急诊及现场的筛查。
综上所述，同时采用胶体金法和ELISA法联合检测肠道病毒71型，经统计学分析，结果无显著性差异。
所以采取这两种方法的联合检测，可有效的避免单一检测方法的缺点，既能缩短了诊断时间，减少了患儿等待时间，又能得到初步确诊结果，避免漏诊，提高确诊率。
符合我院门诊量大，急诊病人多的实际情况，为HFMD患儿的及时治疗提供帮助。