HBV对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响
中性粒细胞胞外诱捕网及其在肺部炎症性疾病中的作用研究进展
种杀菌方式，即中性粒细胞胞外诱捕网（ＮＥＴｓ）。ＮＥＴｓ 主要由组蛋白、ＤＮＡ 和弹性蛋白酶以及髓过氧化物酶
（ＭＰＯ）等酶类构成，其形成和降解受多种因素的影响，形成过程受多种信号通路的调控。ＮＥＴｓ 是把“双刃剑”，其
形成和降解失衡可影响疾病的最终转归。异常形成的ＮＥＴｓ 参与急性肺损伤／ 急性呼吸窘迫综合征、慢性阻塞性肺
及髓过氧化物酶（ＭＰＯ）等酶类构成，在机体抗感染 １ ＮＥＴｓ 的形成、降解与信号通路
防御过程中发挥至关重要的作用［１］。当机体受到 １． １ ＮＥＴｓ 的形成与降解 ＮＥＴｓ 的形成与降解过
病原微生物入侵时，ＮＥＴｓ 可以借助于其特殊的以 程复杂，目前仍未完全阐明。研究发现，诸多因素可
ＤＮＡ 为主体的纤维丝网状结构来快速、有效的捕获 以诱导中性粒细胞形成ＮＥＴｓ，如病原微生物（细菌、
病原体，限制炎症扩散，发挥强大的免疫防御等功 病毒等）、１２十四酸佛波酯１３乙酸盐（ＰＭＡ）、脂多
能［２］。最新研究发现，ＮＥＴｓ 与炎症相关性疾病、自 糖（ＬＰＳ）、白细胞介素８（ＩＬ８）、高迁移率族蛋白Ｂ１
身免疫性疾病、肿瘤等的发生发展过程密切相关，已 （ＨＭＧＢ１）等［６～８］。最新研究发现，血清淀粉样蛋白
ｕｌｉｎ ｉｎ ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｄｕｒｉｎｇ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｗｏｕｎｄ
［］ ， ， （）： ｈｅａｌｉｎｇ Ｊ ． Ｉｎｖｅｓｔ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ Ｖｉｓ Ｓｃｉ ２０１２ ５３ ４ ２４１４． ［ ］ ， ， ， ２５ Ｖａｌｌｉèｒｅｓ Ｎ Ｂａｒｒｅｔｔｅ Ｂ Ｗａｎｇ ＬＸ ｅｔ ａｌ． Ｂｅｔａｃｅｌｌｕｌｉｎ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ
［］ ， ， （ ）： ＴＧＦα Ｊ ． Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｐｈｙｓ Ｒｅｓ Ｃｏｍｍｕｎ ２０１１ ４１２ １ １０９
中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长
·92·中性粒细胞胞外诱捕网促进肿瘤局部生长夏 杰，倪 浩，汤 静，胡 倩( 黄冈职业技术学院 医药学院，湖北 黄冈 438002)摘 要：中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）的释放是新发现的中性粒细胞天然免疫手段。
近年来发现NETs 不仅执行针对病原体的免疫作用，还参与机体的某些其他病理过程，特别是在肿瘤的生长过程中发挥着重要作用。
NETs 的成分除了染色质DNA 外，还有包括各种组蛋白和胞内颗粒释放蛋白，许多研究证实这些蛋白质与肿瘤的发生、发展有关，如中性粒细胞弹性蛋白酶、基质金属蛋白酶9、白细胞介素8、粒细胞集落刺激因子等可通过降解胰岛素受体底物-1，促进血管内皮生长因子释放，启动NETosis 等多种途径促进肿瘤的局部生长。
关键词：中性粒细胞；细胞外诱捕网；肿瘤局部生长；免疫作用 中图分类号：R73-35+4 文献标志码：A 文章编号：1672-1047（2020）02-0092-04DOI:10.3969/j.issn.1672-1047.2020.02.22收稿日期：2020-03-06基金项目：黄冈职业技术学院科研项目“中性粒细胞胞外诱捕网在癌症病理过程中的作用”（2018C2022127）。
作者简介：夏 杰，男，湖北黄冈人，硕士，主治医师，讲师。
研究方向：生物化学、免疫学。
中性粒细胞是人体防御机制的第一道防线，是机体发挥天然免疫功能的主要细胞。
中性粒细胞缺乏的患者免疫功能严重缺失，往往在年轻时死于细菌或真菌感染。
然而中性粒细胞过度活化可导致大量活性氧和促炎细胞因子等细胞毒性介质的释放，可直接或间接损伤内皮细胞，导致细胞死亡[1]。
2004年，Brinkmann V [2]等发现了一种新的中性粒细胞防御机制，当病原体入侵时，中性粒细胞释放出网状结构的物质，将病原体捕获并杀灭。
这种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps ，NETs)，其化学组成主要是染色质DNA 和蛋白质。
中性粒细胞胞外诱捕网在急性心肌梗死中的研究进展
中性粒细胞胞外诱捕网在急性心肌梗死中的研究进展 作者：蔡福生 胡允兆 来源：《中国医学创新》2021年第09期
【摘要】 急性心肌梗死的发病过程与炎症及血栓形成的途径密切相关。中性粒细胞作为炎症反应的主要效应细胞之一，已被证明在许多心血管疾病的病理生理过程中起着重要的作用。尤其是中性粒细胞在炎症的刺激下，可以通过释放中性粒细胞胞外诱捕网，刺激纤维蛋白沉积促进血栓形成，在急性心肌梗死的過程中起着重要的作用。然而，中性粒细胞胞外诱捕网在急性心肌梗死中的作用还未完全阐明。本文将围绕最近的研究，结合中性粒细胞胞外诱捕网在动脉粥样硬化斑块的作用，及其在急性心肌梗死中的作用、对预后的影响、治疗的意义做一综述。
【关键词】 中性粒细胞胞外陷阱 动脉粥样硬化 急性心肌梗死 血栓 [Abstract] The pathogenesis of acute myocardial infarction is closely related to inflammation and thrombosis. As one of the main effector cells of inflammatory response， neutrophils have been proved to play an important role in the pathophysiological process of many cardiovascular diseases. In particular， neutrophils play an important role in the process of acute myocardial infarction by releasing neutrophil extracellular traps， stimulating fibrin deposition and promoting thrombosis under the stimulation of inflammation. However，the role of neutrophil extracellular traps in acute myocardial infarction has not been fully elucidated. This article focused on the recent research， combined with the role of neutrophil extracellular traps in atherosclerotic plaque， and its role in acute myocardial infarction，the impact on prognosis，and the significance of treatment.
211001950_中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染中的作用研究进展
畜牧兽医学报 2023,54(3):889-899A c t aV e t e r i n a r i a e tZ o o t e c h n i c aS i n i c ad o i :10.11843/j.i s s n .0366-6964.2023.03.004开放科学(资源服务)标识码(O S I D ):中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染中的作用研究进展姜慧华1,李 宁1,徐 磊2,郭抗抗1*(1.西北农林科技大学动物医学院,杨凌712100;2.西北农林科技大学生命科学学院,杨凌712100)摘 要:中性粒细胞约占哺乳动物白细胞总数的50%~70%,是机体应对病原体入侵的第一道防线之一㊂中性粒细胞在动物机体先天免疫应答中发挥重要作用,通过吞噬㊁脱颗粒㊁形成胞外诱捕网等方式抑制或清除多种侵入的病原体㊂中性粒细胞胞外诱捕网(n e u t r o p h i l e x t r a c e l l u l a r t r a p s ,N E T s )是中性粒细胞受包括病原体在内的激活剂刺激后向胞外分泌的由D N A ㊁颗粒蛋白和组蛋白等构成的纤维网状结构㊂最初,研究者们发现N E T s 在抗细菌感染中发挥重要作用,可将细菌局限在感染部位,抑制或杀死细菌㊂随着研究的逐渐深入和发展,发现N E T s 除了在细菌感染方面发挥抗菌作用外,在真菌㊁寄生虫和病毒的感染过程中也有重要的抵御作用㊂但是,病原体会进化出各种逃避策略,抑制N E T s 的抗性㊂甚至有些病原体还利用N E T s 促进感染,导致病患难以恢复健康㊂本文重点对病原感染过程中N E T s 的形成㊁诱导因素和作用等进行论述,以期为病原感染机制的研究提供新的思路,也为各种病原体感染的防控提供新的途径㊂关键词:中性粒细胞;胞外诱捕网;病原感染中图分类号:Q 256 文献标志码:A 文章编号:0366-6964(2023)03-0889-11收稿日期:2022-03-07基金项目:国家自然科学基金(31672580)作者简介:姜慧华(1997-),女,壮族,广西贵港人,硕士生,主要从事分子病原学与免疫学研究,E -m a i l :3462350283@q q .c o m *通信作者:郭抗抗,主要从事分子病原学与免疫学研究,E -m a i l :gu o k k 2007@n w s u a f .e d u .c n R e s e a r c hP r o g r e s s o n t h eR o l e o fN e u t r o ph i l E x t r a c e l l u l a r T r a p s i nP a t h o ge n i c I nf e c t i o n J I A N G H u i h u a 1,L IN i ng 1,X U L e i 2,G U O K a n g k a n g1*(1.C o l l e g e o f V e t e r i n a r y M e d i c i n e ,N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y ,Y a n g l i n g 712100,C h i n a ;2.C o l l e g e o f L i f eS c i e n c e s ,N o r t h w e s t A&F U n i v e r s i t y ,Y a n g l i n g 712100,C h i n a )A b s t r a c t :N e u t r o p h i l sm a k eu p a p p r o x i m a t e l y 50%~70%o f a l lm a m m a l i a nl e u k o c yt e sa n da r e c o n s i d e r e d a p a r t o f t h eb o d y s f i r s t l i n eo f d e f e n s e a g a i n s t p a t h o g e n i n v a s i o n .N e u t r o p h i l s p l a ya n i m p o r t a n t r o l e i n t h e i n n a t e i m m u n e r e s p o n s e o f t h e a n i m a lb o d y ,s u p p r e s s i n g o r e l i m i n a t i n g av a r i e t y o f i n v a d i n gp a t h o g e n s t h r o u g h p h a g o c y t o s i s ,d e gr a n u l a t i o n a n d t h e f o r m a t i o no f e x t r a c e l -l u l a r t r a p s .N e u t r o p h i l e x t r a c e l l u l a r t r a p s (N E T s )a r e f i b r o u sn e t w o r kc o n s i s t o fD N A ,gr a n u -l i n s a n dh i s t o n e s t h a t a r es e c r e t e de x t r a c e l l u l a r l y b y n e u t r o p h i l sa f t e rs t i m u l a t e db y a c t i v a t o r s ,i n c l u d i n gp a t h o g e n s .I n i t i a l l y ,r e s e a r c h e r s f o u n d t h a tN E T s p l a y e da n i m p o r t a n t r o l e i n f i g h t i n g b a c t e r i a l i n f e c t i o n s b y c o n f i n i n g b a c t e r i a t o t h e s i t e o f i n f e c t i o n a n d i n h i b i t i n g o r k i l l i n gt h e m.A s r e s e a r c h g r a d u a l l yp r o g r e s s e d a n dd e v e l o p e d ,i t i s f o u n d t h a tN E T s n o t o n l yp l a ye d a n a n t i b a c t e -r i a l r o l e i nb a c t e r i a l i nf e c t i o n s ,b u t a l s oh a d a n i m p o r t a n t r o l e i nd e f e n d i ng a g a i n s t f u n g a l ,pa r a -s i t i c a n dv i r a l i n f e c t i o n s .H o w e v e r ,p a t h o g e n sh a v ee v o l v e dv a r i o u s e v a s i o ns t r a t e gi e s t o i n h i b i t Copyright ©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷t h e r e s i s t a n c e o fN E T s.S o m e p a t h o g e n s e v e nu t i l i z eN E T s t o p r o m o t e i n f e c t i o n,m a k i n g i t d i f f i-c u l t f o r p a t i e n t s t o r e c o v e r.T h i s r e v i e w f o c u s e s o n t h e f o r m a t i o n o fN E T s,i n d u c i n g f a c t o r s a n d r o l e s o fN E T sd u r i n g p a t h o g e n i c i n f e c t i o n s,w i t h a v i e w t o p r o v i d i n g n e w i d e a s f o r t h e s t u d y o f p a t h o g e n i c i n-f e c t i o nm e c h a n i s m s a n dn e ww a y s t o p r e v e n t a n d c o n t r o l i n f e c t i o n s b y v a r i o u s p a t h o g e n s.K e y w o r d s:n e u t r o p h i l s;e x t r a c e l l u l a r t r a p s;p a t h o g e n i c i n f e c t i o n*C o r r e s p o n d i n g a u t h o r:G U O K a n g k a n g,E-m a i l:g u o k k2007@n w s u a f.e d u.c n中性粒细胞来源于粒细胞-单核细胞祖细胞,是哺乳动物外周血中含量最丰富的白细胞㊂中性粒细胞作为动物机体固有免疫系统和获得性免疫系统抵御入侵病原体的第一道防线,通过吞噬㊁脱颗粒和产生活性氧起到宿主防御作用㊂特别是在机体发生感染时,中性粒细胞可向炎症部位趋化游走,与细菌相遇后被激活,将细菌吞噬形成吞噬体,活性氧在吞噬体膜上形成,细胞脱颗粒,颗粒与吞噬体融合,释放抗菌肽和酶,在吞噬体内高浓度的活性氧和抗菌肽负责清除细菌㊂对抗体积较小的病原微生物如细菌时,中性粒细胞优先发挥吞噬作用,而在对抗积较大的病原微生物如真菌菌丝时则似乎倾向于形成中性粒细胞胞外诱捕网[1]㊂大多数研究表明,中性粒细胞胞外诱捕网在细菌㊁真菌㊁寄生虫和病毒感染中都能发挥一定的抵御作用,防止病原体的进一步传播和生存㊂但是,越来越多的证据表明,有些病原体可进化出生存策略,甚至一些研究发现,N E T s起到了促进疾病发生发展的负面作用㊂本文就中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染方面的研究进展进行综述㊂1N E T s的发现和基本组成成分1996年,T a k e i等[2]用十四烷酸佛波醇酯(p h o r b o lm y r i s t a t e a c e t a t e,P MA)刺激人中性粒细胞后,发现细胞出现与凋亡和坏死完全不同的快速死亡现象,表现为中粒细胞的分叶核退缩㊁扩散,继而核膜破裂,核内成分释放到细胞质,细胞膜破裂,导致中性粒细胞最终死亡㊂2004年,B r i n k m a n n 等[3]研究发现,活化的中性粒细胞胞外形成的物理性屏障可杀灭其中的细菌,并首次将之定义为中性粒细胞胞外诱捕网(n e u t r o p h i l e x t r a c e l l u l a r t r a p s, N E T s)㊂2007年,F u c h s等[4-5]认为N E T s的形成是一种新的不同于细胞坏死和细胞凋亡的细胞死亡程序所控制的,可将中性粒细胞产生和释放N E T s 的过程定义为N E T o s i s㊂进一步研究发现,N E T s 的形成并不一定会导致中性粒细胞死亡,2018年细胞死亡命名委员会(N o m e n c l a t u r eC o m m i t t e eo n C e l lD e a t h,N C C D)建议用N E T s或N E T形成来描述这种现象[6]㊂除中性粒细胞能够产生这种胞外结构之外,肥大细胞[7]㊁嗜酸性粒细胞[8]和巨噬细胞[9]等也可以产生,因此对类似中性粒细胞胞外诱捕网这样的胞外结构更广泛的定义是胞外诱捕网(e x-t r a c e l l u l a r t r a p s,E T s)[10]㊂对N E T s的组成成分分析表明,其中主要包括细胞D N A㊁组蛋白和颗粒蛋白等㊂D N A是N E T s 的骨干部分,其他蛋白成分附着于D N A骨干结构上㊂D N A主要是核源D N A,线粒体D N A也可能是N E T s的成分[11]㊂组蛋白主要有H1㊁H2A㊁H2B㊁H3和H4等5种㊂颗粒蛋白主要包括中性粒细胞弹性酶(n e u t r o p h i l e l a s t a s e,N E)㊁髓过氧化物酶(m y e l o p e r o x i d a s e,M P O)㊁组织蛋白酶G㊁乳铁蛋白和明胶酶等㊂通过高分辨率扫描电子显微镜观察发现,N E T s呈现无膜包被的纤维网状结构,由直径为15~17n m的D N A纤维和直径约为25n m的球形蛋白质结构域组成,该结构非常脆弱,难以提取和纯化[3]㊂大多数文章描述N E T s的形状为纤维网状结构,也有文章表述为云雾状结构[12]㊂目前在针对N E T s的组成成分进行研究的过程中,主要针对蛋白(如M P O和N E等),使用了诸多方法如免疫荧光㊁免疫组织化学㊁免疫印迹㊁活细胞成像㊁活体显微镜㊁D N A插入染色技术等[13]㊂2诱导N E T s形成的因素诱导N E T s产生的因素较多,根据现有的诱导剂自身是否具有生命特征,大体上可分为生物性和非生物性诱导因素㊂生物性诱导因素主要包括细菌㊁支原体㊁螺旋体㊁真菌㊁病毒㊁寄生虫等的感染,细菌和真菌感染与N E T s的形成研究报道较多,其他如支原体㊁螺旋体㊁寄生虫和病毒的研究报道则较少㊂非生物性诱导因素如P MA㊁脂多糖(l i p o p o-l y s a c c h a r i d e,L P S)和白介素-8(i n t e r l e u k i n,I L-8)等,这些因素可能参与到中性粒细胞产生N E T s的生物学事件中,例如可能与染色质的解聚存在关系㊂098Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期姜慧华等:中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染中的作用研究进展S t r a n d i n等[14]认为,普马拉汉坦病毒直接诱导N E T s形成的证据不足,但是体外试验证明,中性粒细胞是由被汉坦病毒感染的内皮细胞激活的㊂因此,这些诱导因素可能是直接或间接诱导N E T s形成的,目前常见的诱导因素如表1所示㊂表1可诱导N E T s形成的因素汇总T a b l e1S u m m a r y o f t h e f a c t o r s t h a t c a n i n d u c e t h e f o r m a t i o no fN E T s类别C a t e g o r i e s诱导因素I n d u c i n g f a c t o r s研究报道的具体诱导物S p e c i f i c i n d u c e r s r e p o r t e d i n s t u d i e s生物性B i o l o g i c a l细菌B a c t e r i a伤寒沙门菌㊁弗氏志贺菌㊁金黄色葡萄球菌[3]㊁大肠杆菌[15]㊁结核分枝杆菌[16]㊁霍乱弧菌[17]㊁铜绿假单胞菌[18]㊁肺炎链球菌[19]㊁猪链球菌[20]等支原体M y c o p l a s m a肺炎支原体[21]㊁牛支原体[22]㊁无乳支原体[23]等螺旋体S p i r o c h e t e s伯氏疏螺旋体[24]等真菌F u n g u s白色念珠菌[25]㊁烟曲霉菌[26]㊁巴西副囊球菌[27]㊁新生隐球菌[28]等寄生虫P a r a s i t e s利什曼原虫[29]㊁弓形虫[12]㊁日本血吸虫[30]㊁捻转血矛线虫[31]㊁粪类圆线虫[32]等病毒V i r u s艾滋病病毒[33]㊁白血病病毒[34]㊁乙型肝炎病毒[35]㊁鼻病毒[36]㊁呼吸道合胞病毒[37]㊁登革热病毒[38]㊁流感病毒[19]㊁汉坦病毒[14]㊁新型冠状病毒[39]等非生物性N o n-b i o l o g i c a l P MA㊁L P S㊁I L-8[3]㊁粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子㊁T o l l样受体4[40]㊁补体因子5a[11]等3N E T s的形成过程N E T s的形成是一个复杂的动态过程,依赖于多种信号分子和信号通路,目前对于其形成机制的描述众说纷纭㊂在N E T s形成过程中,中性粒细胞的形态发生了一系列的变化㊂F u c h s等[4]以20n m o l㊃L-1的P MA刺激人中性粒细胞60m i n 后,发现细胞核小叶开始消失,染色质开始解致密,此时核膜仍保持完整,但内外核膜间隙扩张;在120m i n时,核膜形成明显囊泡;180m i n时,核膜分解成许多小泡,染色质解致密,大部分颗粒消失㊂T a b r i z i等[41]认为,N E T s形成的生物学步骤主要包括核膜破裂㊁染色质逐步解凝㊁中性粒细胞弹性酶转移㊁组蛋白加工,最终形成N E T s㊂根据中性粒细胞在N E T s形成过程中是否会发生死亡,可将N E T s 形成分为自杀型N E T s形成和活性型N E T s形成㊂但目前对于N E T s形成机制还没有形成系统的理论或学说,自杀型N E T s的形成机制是最早被描述的㊂研究表明,活性氧(r e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s, R O S)的产生有利于N E T s的形成㊂一些活性氧如单线态氧(1O2)㊁H O C l㊁H2O2等可以诱导中性粒细胞产生N E T s[42-43]㊂P MA等可促进烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(n i c o t i n a m i d ea d e n i n ed i n u-c l e o t i d e p h o s p h a t e o x i d a s e,N O X)在吞噬体膜或细胞质上的组装和激活,诱导R O S的产生[4]㊂研究表明,R a f-M E K-E R K通路位于N O X的上游,调控R O S的产生[44]㊂但也存在不依赖于N O X的线粒体R O S,可由线粒体D N A诱导产生[45-46]㊂R O S损伤分泌颗粒和溶酶体的膜,导致N E从嗜蓝颗粒中释放㊂N E首先转移至细胞核,切割部分特定的组蛋白,促进染色质解聚㊂随后,M P O也从嗜蓝颗粒从释放,与N E协同驱动促进染色质解凝[47]㊂P MA 与蛋白激酶C(p r o t e i nk i n a s eC,P K C)结合[2],诱导胞内钙离子释放,进而激活肽精氨酸脱亚胺酶4 (p e p t i d y l a r g i n i n ed e i m i n a s e,P A D4)㊂P A D4又称为P A D I4或P A D V,首次在人白血病细胞H L-60中被发现,在外周血中性粒细胞中高表达[48-49]㊂P A D4可使组蛋白H2A㊁H3和H4的精氨酸残基脱亚氨基形成瓜氨酸残基,正电荷减少,与D N A的静电结合力减弱,染色质从而解凝[50]㊂可见,N E T s 形成过程中的核心过程是染色质解凝,需要R O S㊁N E㊁M P O以及P A D4等的参与;之后细胞核膜破裂,解聚的染色质被释放至胞质,并与胞质中的其他198Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷物质如M P O和N E等颗粒蛋白一起通过G a s d e r-m i nD(G S D M D)孔或由G S D M D驱动的膜撕裂排放到胞外空间,并导致了中性粒细胞的死亡[51]㊂N E T s的形成机制如图1所示㊂图1N E T s的形成机制示意图F i g.1T h e s c h e m a t i c d i a g r a mo f t h e f o r m a t i o nm e c h a n i s mo fN E T s大多数观点认为,R O S㊁P A D4在N E T s的形成过程中是不可或缺的,在N E T s形成中使用它们的抑制剂时可以抑制N E T s的形成㊂N O X抑制剂如二苯基碘铵(d i p h e n y l i o d o n i u m,D P I)和罗布宁在以利什曼原虫或P MA作为刺激物刺激中性粒细胞时可使N E T s的产生减少[52]㊂慢性肉芽肿病患者由于缺乏N O X-2,其中性粒细胞无法产生R O S,在P MA应答时不会形成N E T s[53]㊂但也有研究认为R O S并不是不可或缺的,R o c h a e l等[52]将利什曼原虫前鞭毛体与人中性粒细胞共孵育10m i n后产生N E T s,认为N E T s形成的早期/快速机制依赖于N E活性,不依赖于R O S的释放㊂其他的刺激物如活化的血小板㊁白色念珠菌㊁肿瘤坏死因子-α及免疫复合物等亦可产生上述类似的R O S非依赖诱导N E T s形成的作用[54]㊂P A D4选择性可逆抑制剂G S K484预处理中性粒细胞,再以P MA刺激,发现能消除组蛋白H3的瓜氨酸化,抑制N E T s形成[43,55]㊂4N E T s在病原感染中的作用N E T s可捕获㊁抑制或杀灭细菌㊁真菌㊁寄生虫和病毒等多种病原体,诱导机体产生抗感染免疫,形成宿主防御㊂但是病原体可能会通过形成N E T s抑制因子和N E T s降解因子等,阻断或抑制N E T s形成所依赖的某些细胞信号通路等,逃脱N E T s的作用㊂此外,N E T s在病原感染中可能会被利用以进一步增强感染,或者介导组织损伤,加重疾病的严重程度㊂4.1N E T s在细菌感染中的作用细菌感染时中性粒细胞会形成N E T s来捕获细菌㊁支原体和螺旋体,N E T s的多个组分如D N A㊁N E和组蛋白等可通过破坏细菌细胞膜完整性或降解毒力因子等方式杀死部分细菌㊂胞外D N A具有快速杀菌活性,螯合表面结合的阳离子,可破坏细菌细胞膜完整性和溶解细菌[18]㊂N E可降解革兰阴性菌的毒力因子,可杀死金黄色葡萄球菌和弗氏杆菌㊂纯化的组蛋白H2A能够杀死弗氏志贺菌㊁鼠伤寒沙门菌和金黄色葡萄球菌[3]㊂然而细菌会进化形成逃避策略,目前已知部分细菌如马链球菌㊁肺炎支原体和牛支原体等可通过分泌胞外核酸酶降解N E T s的D N A骨干等,以逃脱N E T s的杀菌作用㊂马链球菌分泌的胞外核酸酶E N u c和5N u c通过降解N E T s的D N A骨干并产生脱氧腺苷,损害巨噬细胞的吞噬活性而避免被清除[56]㊂肺炎支原体分泌的核酸酶M p n491可降解N E T s,造成肺炎支原体的持续感染[21]㊂牛支原298Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期姜慧华等:中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染中的作用研究进展体的核酸酶抑制了N E T s的形成,添加的乙二胺四乙酸能螯合核酸酶活性所依赖的钙离子,从而显著提升N E T s存在下对牛支原体的杀伤力[22]㊂除牛支原体外,一些细菌的胞外核酸酶活性可能与多种金属离子有关,李琦等[57]发现,有些金属离子对猪霍乱沙门菌胞外核酸酶活性有促进作用㊂或许,通过减少金属离子抑制胞外核酸酶活性,从而提升N E T s的杀伤力不失为一种良策㊂部分证据显示,细菌可能通过杀死或抑制吞噬细胞,或降解N E T s作为生长因子来增强细菌感染㊂B h a t t a c h a r y a等[58]认为,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜通过释放杀白细胞素和γ-溶血素A B 诱导N E T s的形成,但是这两种毒力因子导致与N E T s相关的中性粒细胞死亡,阻止中性粒细胞清除生物膜细菌,N E T s的杀菌活性失效,这提示N E T s可能会无意中增强细菌的持续感染,使慢性感染的预后复杂化㊂此外,细菌会劫持宿主成分如D N A等来形成生物膜,因此N E T s可能参与细菌生物膜的形成[59]㊂同样地,d eB u h r等[60]认为胸膜肺炎放线菌不仅利用宿主核酸酶D N a s e1或其他共感染细菌如猪链球菌的核酸酶降解N E T s来逃避N E T s的抗菌作用,还利用降解的N E T s作为它自身生长所需因子即烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的来源㊂4.2N E T s在真菌感染中的作用N E T s对真菌感染也具有抑制作用,通过分泌颗粒蛋白,如钙卫蛋白等螯合真菌生长所需的金属离子,或者以其网状物理屏障帮助捕获和固定真菌以限制其扩散传播从而抑制或杀死真菌㊂U r b a n 等[25]通过试验证明,白色念珠菌可诱导N E T s的产生,N E T s分泌的颗粒蛋白介导部分真菌在细胞外杀伤㊂N E T s的组分钙卫蛋白通过螯合真菌生长所需的锌离子,在低浓度下可逆抑制曲霉菌的生长,在高浓度下导致不可逆的曲霉菌生长受抑制,从而减少曲霉菌病感染[26]㊂巴西副囊球菌与人中性粒细胞的模式识别受体d e c t i n-1受体结合诱导N E T s的产生,N E T s负责捕获酵母细胞,促进其固定以防止感染传播,并有助于细胞外杀伤[27]㊂同样地,真菌也能进化形成逃逸机制,一些真菌可通过抑制或阻断某些细胞信号通路使N E T s生成减少或不能生成㊂新生隐球菌的荚膜成分葡萄糖醛酸多糖通过抑制活性氧的产生导致人中性粒细胞产生N E T s减少,帮助真菌的扩散传播和加重疾病[28]㊂白色念珠菌生物膜的细胞外基质中存在调节N E T s抗性的甘露聚糖基因,与抑制中性粒细胞产生R O S相关,损害了N E T s的释放,从而允许真菌存活和传播[61]㊂同样地,光滑念珠菌生物膜的形成涉及富含多糖的细胞外基质的产生,这些基质中特有的多糖与N E T s的受损有关,可导致N E T s释放延迟,从而抵抗吞噬细胞的攻击[62]㊂N E T s的存在可能会增加某些真菌性疾病的易感性,或者被利用以增加真菌的感染能力㊂许向华等[63]利用烟曲霉对患有2型糖尿病小鼠和无糖尿病小鼠进行气道感染,在患病小鼠上发现,其真菌负荷㊁炎症水平以及肺部的组蛋白3的水平显著高于对照组,这提示由于N O X异常导致的N E T s释放增多可能会增加糖尿病小鼠易感侵袭性曲霉菌病㊂还有研究认为,N E T s的蛋白质成分如N E和M P O 等几种蛋白质混合物黏附在白色念珠菌细胞表面,并与真菌细胞壁蛋白如凝集素样序列蛋白家族A l s3的黏附素㊁烯醇化酶㊁糖异构酶和磷酸甘油酸突变酶相互作用,大大增加了病原体对人类上皮细胞的破坏能力,影响N E T s的诱捕效果,增加真菌在宿主上的进一步定植[64]㊂4.3N E T s在寄生虫感染中的作用在寄生虫感染中N E T s可发挥其物理屏障作用,以其纤维网状结构诱捕寄生虫,通过与其他免疫细胞协同杀死寄生虫,或者通过分泌其组分如组蛋白和颗粒酶等使寄生虫的存活率或入侵率降低㊂粪圆线虫幼虫可以触发中性粒细胞和巨噬细胞释放E T s,被E T s诱捕,但不能被E T s杀死,可能是中性粒细胞与其他免疫细胞如巨噬细胞协同作用导致这种大型且高度运动的线虫死亡[32]㊂R o c h a e l等[52]用富含N E T s的上清液处理利什曼原虫前鞭毛体,发现寄生虫的存活率降低40%左右,G u i m a rãe s-C o s t a等[29]在电子显微镜下观察到利什曼原虫被N E T s诱捕,在中性粒细胞-利什曼原虫前鞭毛体上清液中添加抗组蛋白抗体后,利什曼原虫杀灭作用被抑制,纯化组蛋白可杀死部分利什曼原虫前鞭毛体,表明寄生虫杀灭可能依赖N E T s成分组蛋白㊂驴中性粒细胞和刚地弓形虫速殖子在体外共孵育, N E T s可物理捕获速殖子,其分泌的N E可能通过杀微生物激肽和外壁蛋白水解起到抗寄生虫作用,使弓形虫速殖子入侵宿主细胞的入侵率降低[12]㊂在寄生虫感染中,部分寄生虫也能产生逃避策略,可利用其自身所具有的毒力因子等对抗N E T s 的抗寄生虫作用㊂G a b r i e l等[65]的研究表明,杜氏398Copyright©博看网. All Rights Reserved.畜牧兽医学报54卷利什曼原虫前鞭毛体可以刺激人中性粒细胞触发N E T s的产生,N E T s会诱捕寄生虫,可能有助于将寄生虫限制在感染部位,促进单核吞噬细胞的吞噬㊂但是杜氏利什曼原虫可能利用其前鞭毛体的主要表面毒力因子脂磷多糖(l i p o p h o s p h o g l y c a n,L P G)和糖蛋白G P63拮抗N E T s的杀伤作用㊂L P G通过一种不同寻常的糖基磷脂酰肌醇锚定在前鞭毛体膜上,可以保护杜氏利什曼原虫前鞭毛体免受N E T s 的杀伤作用㊂G P63可能也是通过这种作用保护杜氏利什曼原虫前鞭毛体㊂N E T s对介导组织损伤㊁产生病理变化和促进寄生虫感染具有一部分 功劳 ㊂S e r c u n d e s等[66]在由伯氏疟原虫引起的急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的小鼠上发现,其肺部有大量中性粒细胞浸润,且与未发生肺部并发症小鼠相比,产生了过多的M P O㊁R O S和中性粒细胞吸引趋化因子㊂在使用一些N E T s抑制剂或降解剂如AM D3100㊁P u l-m o z y m e㊁S i v e l e s t a t后,降低了急性肺损伤和急性呼吸窘迫综合征的发展,显著增加了小鼠的生存率㊂K n a c k s t e d t等[67]的数据直接表明,在由疟原虫感染引起的疟疾中,由血红素刺激诱导产生N E T s,但D N a s e1降解N E T s产生离散的片段,这些N E T s 片段在血管炎症传播和促进寄生虫黏附细胞中发挥重要的作用㊂4.4N E T s在病毒感染中的作用N E T s可发挥抗病毒作用,抗病毒免疫机制可能包括对病毒颗粒的固定㊁N E T s相关蛋白对病毒的抑制或诱导浆细胞样树突状细胞产生I型干扰素等㊂部分研究已经指出,病毒可产生对抗N E T s的诱捕和杀伤的免疫逃避作用,抵消N E T s的宿主防御功能㊂也有部分研究证明N E T s没有抗病毒作用,反而对疾病的发生发展具有促进作用㊂此外,一些研究认为N E T s在适量浓度下可以发挥抗病毒作用,但是过度的N E T s反应可能会促进炎症因子形成,放大炎症级联反应或促进栓塞形成等,不利于疾病的治愈㊂然而,目前关于N E T s在病毒感染中的作用研究报道不是很多,基本上集中在人类病毒感染方面㊂在病毒感染中,N E T s能以其物理屏障捕获和固定病毒粒子,通过分泌颗粒成分㊁诱导其他免疫细胞产生抗病毒因子或与N E T s相关蛋白互作发挥抗病毒作用㊂人类免疫缺陷病毒(h u m a n i m m u n o d-e f i c i e n c y v i r u s,H I V)刺激人中性粒细胞产生N E T s,导致病毒颗粒被捕获和消除㊂可能的机制是中性粒细胞通过T o l l样受体T L R7和T L R8检测并识别H I V-1,诱导R O S产生,触发N E T s形成,表达M P O和α-防御素导致H I V-1被清除[33]㊂此外还有证据表明,女性生殖器中性粒细胞不同于血液中性粒细胞,具有不同的表型和功能,B a r r等[68]发现粒细胞可刺激H I V病毒样颗粒快速产生N E T s,捕获和灭活H I V,防止H I V易感细胞的后续感染㊂由于病毒暴露后,生殖器中性粒细胞产生N E T s仅需几分钟,不太可能产生组织损伤,且H I V刺激后的前3h时内生殖器树突状细胞不产生I L-10,N E T s形成没有被抵消㊂因此,N E T s可能是一种性接触后防止黏膜感染H I V的有效机制㊂同样地,病毒也会产生免疫逃避机制来抵御N E T s的抗病毒作用㊂虽然N E T s在一定程度上可以消除H I V-1,但是H I V-1可通过诱导树突状细胞产生c型凝集素C D209依赖的I L-10抑制T L R7和T L R8信号通路来抵消N E T s的抗病毒反应,帮助病毒实现免疫逃避[33]㊂不过在艾滋病患者体内实现N E T s消除H I V是存在困难的,因为随着病程的进展,患者体内的中性粒细胞数量逐渐减少,免疫屏障和免疫功能也遭到破坏,N E T s形成受阻或不足都无法发挥完全的抗病毒作用㊂有些研究表明,N E T s的生成非但没有抗病毒作用,反而会加重疾病的严重程度,它可作为一种炎症介质,介导组织损伤,对患病机体的健康有害㊂V e r a s等[39]认为,在新型冠状病毒(s e v e r e a c u t e r e-s p i r a t o r y s y n d r o m ec o r o n a v i r u s2,S A R S-C O V-2)感染中,4种分子机制即血管紧张素转换酶2㊁丝氨酸蛋白酶㊁P A D4以及病毒复制,参与到诱导N E T s 的生成㊂在患者的血浆㊁气管抽吸物和肺部组织均能检测到高水平的N E T s,S A R S-C o V-2激活的中性粒细胞释放的N E T s在体外促进肺上皮细胞死亡㊂N E T s是炎症性疾病组织损伤的重要介质,可能参与介导新冠肺炎的病理生理过程,因此,作者提出抑制N E T s的释放可能是一种治疗新型冠状肺炎疾病的潜在手段㊂A k k等[69]明确表示,小鼠副流感病毒I型仙台病毒(S e n d a i v i r u s,S e v)感染急性期释放的N E T s诱发了气道炎症,导致炎症细胞因子进一步招募和激活免疫细胞,促进最终的慢性哮喘表型㊂一种由中性粒细胞衍生的与N E㊁组织蛋白酶G和蛋白酶3等表达相关的半胱氨酸蛋白酶二肽基肽酶I(d i p e p t i d y l p e p t i d a s e I,D P P I)缺失可498Copyright©博看网. All Rights Reserved.3期姜慧华等:中性粒细胞胞外诱捕网在病原感染中的作用研究进展显著降低S e v诱导的N E T形成,抑制了急性肺部炎症反应和随后的哮喘表型㊂此外,同时给予D N a s e1或抑制P A D4,可抑制S e v感染的早期炎症反应[69]㊂因此,缺失D P P I㊁给予D N a s e1或抑制P A D4可能对S e v感染导致的炎症反应的减少有一定帮助㊂也有一些研究认为,N E T s在适量条件下是具有抗病毒作用的,过度的N E T s生成可能会加重疾病严重程度㊂呼吸道合胞病毒(r e s p i r a t o r y s y n c y t i-a l v i r u s,R S V)颗粒及其融合蛋白可通过T L R4的激活㊁N O X衍生的R O S㊁E R K㊁p38MA P K磷酸化等途径刺激人中性粒细胞产生N E T s[37]㊂N E T s具有抗人呼吸道合胞病毒(h u m a nr e s p i r a t o r y s y n c y-t i a l v i r u s,h R S V)活性,可捕获病毒颗粒[70],体外试验证明,低浓度的N E T s抗h R S V活性较为良好,可减少H e p-2细胞损伤和合胞体的合成,降低病毒感染的传播率㊂可能的抗病毒机制是h R S V的包膜F蛋白与N E T s相关蛋白即杀菌渗透增强蛋白的互作,抑制细胞-细胞融合和合胞体的形成,影响病毒的黏附和内化等早期步骤,促进病毒中和作用[71]㊂但同时,F u n c h a l等[37]不仅在患有严重的R S V引起的下呼吸道疾病的人类婴儿和小牛支气管肺泡灌洗液和肺组织切片中观察到N E T s的存在,而且对感染了R S V的小牛组织进行病理学检查显示,在阻塞气道的致密堵塞物中存在广泛的网状结构㊂该网状物中存在大量的D N A,黏液黏度高㊂这表明过多的N E T s会导致气道阻塞,N E T s在R S V感染期间积极参与气道阻塞,而局部d o r n a s e α治疗可通过降解D N A主干显著减少N E T s引起的气道阻塞[72]㊂5展望自N E T s被发现和描述以来,对其组成成分的分析和检测方法一直在不断探索和完善中㊂N E T s 大致由D N A㊁组蛋白和各种颗粒酶组成㊂其中, D N A是N E T s必不可少的主干部分,对D N A进行降解将会导致N E T s的完整性遭到破坏㊂大多数细菌也正是利用这一点,分泌核酸酶降解D N A,以此逃脱N E T s的抗菌效应㊂Y o u s e f i等[11]发现组成N E T s的D N A是线粒体D N A,且形成的N E T s不需要中性粒细胞死亡㊂这或许是N E T s可根据中性粒细胞死亡与否区分为活性型N E T s和自杀型N E T s的证据㊂由于N E T s发生在胞外空间,但是其他活动如细胞外囊泡的分泌或者细胞坏死等可能也会导致D N A释放在胞外空间,那么如果针对D N A进行检测,可能难以区分㊂这或许是目前大多数的检测方法以颗粒酶作为N E T s的检测指标之一的原因㊂由此可见,针对N E T s的检测方法亟待进一步发展㊂关于N E T s形成的分子机制,目前存在众多说法,尚未形成系统的论述㊂在自杀型N E T s的形成机制中,R O S的产生对N E T s的形成来说是十分重要的㊂除了R a f-M E K-E R K通路是调控R O S的上游细胞信号通路,还存在其他的细胞信号通路如T L R信号通路等,这是有待深入研究N E T s形成机制的其中一个方面㊂N E T s在病原感染中具有双重效应,一方面具有抵御多种病原体的作用,另一方面也会介导多种疾病,促进其发生发展㊂现有的研究表明,N E T s在病原体感染中能发挥抗病原体效应,但是其作用有限,并不能完全杀死病原体㊂对有些病原体而言, N E T s只是起到诱捕作用㊂在疾病的发生发展中, N E T s可能会起到负面作用,可作为炎症介质,可能会放大炎症级联反应,介导组织损伤,阻碍疾病的康复㊂针对N E T s对病原体的杀灭或毒性作用,病原体本身可通过启动一些逃避机制如表达降解N E T s 因子来降解N E T s的核心组分或抑制某些激活途径等来抵御N E T s的作用,促进在机体中的感染传播㊂因此,在开发N E T s相关的药物方面具有巨大的市场潜力,针对性地发掘治疗药物如N E T s抑制剂或N E T s碎片促进剂等,通过抑制N E T s的形成可能对疾病的治愈有一定帮助㊂N E T s在病原体感染中并不能产生完全的抵御效应,这意味着中性粒细胞在病原体感染中不可能单打独斗,可能与其他的细胞存在一定的联系,或许在抗病原体反应中发挥协同作用㊂除了N E T s以外,目前已经发现其他的细胞如肥大细胞㊁嗜酸性粒细胞和巨噬细胞等也会被诱导产生E T s㊂这些能形成E T s的细胞是固有免疫细胞,这表明形成的E T s 与先天免疫系统可能存在密不可分的联系㊂那么,这些细胞产生的E T s与N E T s存在哪些差异呢?这也值得研究者深入地挖掘和研究㊂参考文献(R e f e r e n c e s):[1] B R A N Z K N,L U B O J E M S K A A,HA R D I S O NSE,e ta l.N e u t r o p h i l s s e n s e m i c r ob e s i z e a n d s e l ec t i v e l y598Copyright©博看网. 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中性粒细胞外诱捕网在肝细胞癌转移中的作用机制及应用价值研究进展
中性粒细胞外诱捕网在肝细胞癌转移中的作用机制及应用价值
研究进展
吴颖升;梁向娟;彭嘉敏;黄晶晶;[哈萨克斯坦]RASSUL
【期刊名称】《陕西医学杂志》
【年(卷),期】2024(53)3
【摘要】肝癌是常见恶性肿瘤之一,肝细胞肝癌(HCC)是原发性肝癌(PLC)中最常见的类型。
转移是HCC复发和患者5年生存率持续较低的重要原因。
中性粒细胞介导的炎症反应在HCC转移中的作用受到重视。
随着研究的深入,证实中性粒细胞外诱捕网(NETs)与肿瘤进展及转移有关。
现就NETs在HCC转移中的作用机制及应用价值进行阐述,期望为HCC转移这一治疗难题提供新的干预靶点。
【总页数】6页(P419-424)
【作者】吴颖升;梁向娟;彭嘉敏;黄晶晶;[哈萨克斯坦]RASSUL
【作者单位】广西中医药大学;广西中医药大学第一附属医院;陕西中医药大学【正文语种】中文
【中图分类】R735.7
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中性粒细胞胞外诱捕网在胃肠道中的应用
胃肠病学和肝病学杂志2019年6月第28卷第6期Chin J GtRcenm/1Heptol,Jun2019,VO28,No6-693-doR10.3969/j.Rw.1006-5709.2019.06.021中性粒细胞胞外诱捕网在胃肠道中的应用李虹萱，许张轩，吴清云，邹小明哈尔滨医科大学附属第二医院：肠外科，黑龙江哈尔滨150086【摘要】中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extraceLu/r traps,NETs)在感染过程中具有重要作用，它可以帮助中性粒细胞捕获和杀死病原体。
然而，越来越多的证据表明，不受控制或过量的NETs与炎症的加剧和自身免疫的发展、癌症转移以及不适当的血栓形成有关。
并进一步阐述NETs在胃肠系统中的作用，概述它们的保护机制和病理作用，讨论NETs形成的最新机制，微生物和NETs 之间的相互作用以及中性粒细胞亚型与它们功能之间的关系。
此外，NETs相关分子，包括游离DNA和超瓜氨酸化组蛋白等，可作为生物标志物和胃肠道疾病治疗干预的靶点。
【关键词】中性粒细胞胞外诱捕网；胃肠道系统；癌症进展中图分类号：R57文献标识码：A文章编号：1006-5709(2019)06-0693-04收稿日期：2018-06-21Neutrophii extraccllular traps in gastrointestinal systemLI Hongxuan,XU Zhangxuan,WU Qingyun,ZOU XixominyDepartment of Gastrointestinal Su///,th-Sacand AAiRated Hospital of Harbin Medicsl University,Harbin 150086,Chino*Abstract]Neut/phii extrocallulor traps(NETs)ploy an important/la in th-process of infaction by helping neutrophils csptura and kR i pathogens.Howvvvr,uncontrolled or excessive production of NETs is related to th-exxearbation of inRammation and th-d-vv/pment of autoimmunity,esnear metastasis and inapp/p/ato thrombosis.Th-/la of extracellular Rapping nets of neutrophils in yasRointesWnai system was furthar elaborated.Their p/tvetivv machanism and patho/gRsi/la we/summarized.Th-latest machanism of NETs formation,th-interaction between mRrooraanisms and NETs,and th-relationship between th-subtypas of neutrophils and their inctions we/discussed.In addition, NETswelated molvculvs,including Rev DNA and hypercitrul/nated histonas,can ba used as biomarkerr and therapeutic ta//tr ir yasRointesWnai dRexsas.*Key words]NeuWophii extracallular traps;Gastromtestinal system；D-vvlopment of esnear中性粒细胞已被认为是先天免疫应答的主要影响因素之一(它们具有多种免疫功能,包括吞噬作用、活性氧物种(ROS)产生和脱颗粒，以及由中性粒细胞胞外诱捕器的解聚染色质丝组成的黏性网状结构的形成和释放［1-。
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版
脓毒症时中性粒细胞胞外诱捕网的研究进展完整版脓毒症（sepsis）是由感染引起的全身炎症反应，严重时可导致多器官功能衰竭、脓毒性休克，甚至死亡。
当前，脓毒症的发病率和病死率仍然居高不下，在美国，脓毒症在危重患者致死因素中居首位，每年有75 万新增脓毒症患者，而其中又有21 万患者因脓毒症而死亡。
脓毒症的发病机制十分复杂，至今仍未完全阐明，脓毒症早期，感染部位招募大量中性粒细胞，通过吞噬病原菌、脱颗粒释放蛋白酶等物质来达到杀菌的作用。
此外，中性粒细胞还具有另外一个特殊的效应机制，即“中性粒细胞胞外诱捕网”（NETs），使得中性粒细胞在胞外仍然具有有效的捕获及杀伤病原菌的能力，从而对机体产生重要的保护作用。
但是近年来的研究表明，脓毒症时NETs 的产生也可以导致病情加重。
现对NETs 的形成、结构、杀菌机制及其对脓毒症的作用进行系统阐述，以进一步探讨脓毒症的发病机制，为脓毒症的治疗提供新的思路和方向。
1 NETs 的形成2004 年，Brinkmann 等首次报道了中性粒细胞特有的杀菌机制——NETs。
NETs 的产生是中性粒细胞特殊的细胞死亡过程，这种过程称作NETosis ［9］。
NETs 主要由成熟的中性粒细胞产生，未成熟的中性粒细胞因为缺少了对刺激信号的反应能力而不能形成NETs ［10］。
研究表明，革兰阴性菌、革兰阳性菌以及真菌等均可以引发中性粒细胞产生NETs。
脓毒症时，在多种刺激物的作用下中性粒细胞活化，通过还原型辅酶Ⅱ（NADPH）氧化酶途径产生大量活性氧簇（ROS），进而启动NETosis ［11］。
中性粒细胞内嗜天青颗粒中储存的中性粒细胞弹性蛋白酶（NE）、髓过氧化物酶（MPO）转位至细胞核内，NE 降解接头蛋白H1 及核心组蛋白（histone），MPO 则对此过程具有促进作用。
此外，在精氨酸脱亚氨酶4（PAD4）的作用下，组蛋白H3 精氨酸残基瓜氨酸化，组蛋白H3 构象改变。
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展
中性粒细胞外诱捕网检测方法的研究进展①马雪妮程龙许慧梅杨一蕃张德奎（兰州大学第二医院消化内科，兰州730030）中图分类号R392-3文献标志码A文章编号1000-484X（2021）24-3056-06［摘要］中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）是中性粒细胞受到刺激后产生的以DNA为骨架，其间镶嵌多种颗粒蛋白、蛋白水解酶、抗菌肽、组蛋白等的网状结构。
研究表明，NETs在宿主稳态中发挥双重作用，既能保护宿主免受病原体的侵袭，也参与多种自身免疫/炎症性疾病、代谢性疾病、血栓、肿瘤等的病理生理过程。
因其组成部分的复杂性、释放类型的差异性及释放过程中的易降解性，准确检测NETs存在一定的困难。
本文就目前NETs在体内、体外及原位检测方法的研究进展进行综述。
［关键词］中性粒细胞外诱捕网；检测方法；进展Advances in detection of neutrophil extracellular trapsMA Xue-Ni，CHENG Long，XU Hui-Mei，YANG Yi-Fan，ZHANG De-Kui.Department of Gastroenterology，the Second Hospital of Lanzhou University，Lanzhou730030，China［Abstract］Neutrophil extracellular traps（NETs）is a kind of DNA-based skeleton released by neutrophils to the outside of cell，in which a variety of granular proteins，proteolytic enzymes，antibacterial peptides，histones and other network structures are em⁃bedded.Studies have shown that NETs play a dual role in host homeostasis，not only protecting the host from pathogens，but also par⁃ticipating in various autoimmune/inflammatory diseases，metabolic diseases，thrombosis，tumors and other pathophysiological pro⁃cesses.Due to the complexity of its composition，the difference of the types，and the uncertainty of the release process，there are cer⁃tain difficulties to detect NETs accurately.This article focuses on the current methods to detect NETs in vivo，in vitro，and in situ.［Key words］Neutrophil extracellular traps；Detection；Progress中性粒细胞是人外周血中最丰富的白细胞，约占白细胞总数的50%~70%，在先天免疫系统中扮演重要角色，是机体应对病原体入侵时的第一道防线，可通过吞噬作用、脱颗粒、产生活性氧等多种途径抵御外界病原体的入侵［1］。
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HBV对中性粒细胞胞外诱捕网形成的影响中性粒细胞是人体重要免疫细胞,是机体抵御病原体第一道防线的重要组成部分。
2004年Brinkmann等首先发现中性粒细胞活化后会在胞外形成一种网状结构-中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellar traps,NETs),为其重要防御机制之一。
形态上,NETs主要由网状纤维及其许多附着颗粒构成;特异性荧光分析显示NETs由双链DNA(ds DNA)网状纤维和附着成分髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、组蛋白和中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)等组成。
研究发现病原微生物、促炎因子(IL-8、TNF-α)、活化血小板、内皮细胞和乙酸肉豆蔻佛波酯(phorbolmyristate acetate,PMA)等多种生物、化学因子可以刺激中性粒细胞NETs形成。
中性粒细胞受刺激后活化生成NETs,捕获限制病原微生物,加速机体对其的吞噬清除,增强机体的抗感染免疫。
乙肝病毒HBV感染是引起肝脏疾病的常见原因之一,多数慢性乙肝持续感染的病人肝细胞内发现肝炎病毒高复制率,会导致肝纤维化、肝衰竭,最终转变为肝癌的风险很高。
慢性乙型肝炎是HBV持续性感染引起的常见传染病,机体免疫系统不能有效清除病毒是HBV持续性感染形成的主要机制。
研究亦发现HBV可感染中性粒细胞形成肝外潜伏或隐匿感染,能抑制中性粒细胞的迁移,乙肝病人还存在中性粒细胞结构改变和功能障碍,提示HBV感染可能影响中性粒细胞抗感染免疫,免疫功能的异常可能是HBV持续感染的重要机制,而中性粒细胞关键抗菌结构NETs有可能参与了HBV对中性粒细胞的影响。
目的1.通过对HBV持续感染者与非HBV正常对照的外周血中性粒细胞NETs
形成释放能力的对比研究,探讨HBV感染对中性粒细胞NETs释放能力的影响;2.通过对HBV血清学标志物与其中性粒细胞NETs释放能力的相关性研究,探讨HBV 病毒组分对中性粒细胞NETs释放能力的影响;3.通过对HBV持续感染组的
HBV-DNA载量与其中性粒细胞NETs释放能力的相关性研究,探讨HBV复制程度对中性粒细胞NETs释放能力的影响;方法1.分别收集促凝的HBV持续感染患者和正常对照组外周血各50例,离心吸取血清,化学发光微粒子免疫检测法行血清HBV血清标志物定量检测;2.分别收集EDTA-K2抗凝的HBV持续感染患者和正常对照组外周血各50例,离心吸取血浆,PCR-荧光探针法行血浆HBV-DNA定量检测;3.分别收集EDTA-K2抗凝的HBV持续感染患者和正常对照组外周血各50例,密度梯度离心法分离外周血中性粒细胞;4.分离的外周血中性粒细胞,+/-PMA刺激后产生NETs,MNase酶解后收集上清,DNA荧光定量方法测定上清中中性粒细胞释放NETs-DNA量,NETs形成能力以PMA刺激和未刺激细胞释放的NETs-DNA比值表示;结果1.PMA刺激和未刺激的中性粒细胞释放的NETs-DNA比值,HBV持续感染组为1.266+0.2066,而正常对照组为1.460+0.4049,其差别有统计学意义
(P<0.05);2.HBV病毒组分中,HBs Ag、HBe Ag、HBc Ab水平与中性粒细胞NETs 形成能力呈负相关(r<0,p<0.05);HBs Ab水平与中性粒细胞NETs形成能力呈正相关(r>0,p<0.05),而HBe Ab水平与中性粒细胞NETs形成能力无明显相关性(p>0.05);3.HBV-DNA载量与中性粒细胞NETs形成能力无明显相关性(p>0.05)。
结论1.HBV对中性粒细胞NETs的释放起抑制作用;2.HBV病毒组分HBs、HBe和HBc可能参与了HBV对中性粒细胞NETs释放的负调控;。