医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法
洁净室(区)沉降菌检测操作规程
XXXXXXXX有限公司质量控制管理制度1 目的：规范质量检验人员对沉降菌检验的操作，特制定本规程。
2 范围：适用于沉降菌的监测。
3 责任：质量检验人员。
4 内容：4.1菌落：细菌培养后，由一个或几个细菌繁殖而形成的一细菌集落，简称CFU。
通常用个数表示。
4.2测试方法：沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经3天培养，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室的洁净度。
4.3所用的仪器和设备：4.3.1 高压消毒锅：使用时参照文件《JSZB01-015》《JSZB01-051》进行操作。
4.3.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱进行检定。
4.3.3 培养皿：一般采用Φ90m m×15 mm的硼硅酸玻璃培养皿；使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌15min。
4.3.4 培养基：将胰酪大豆胨琼脂培养基加热熔化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15-20ml。
4.3.5 制备好的培养基平皿宜在2℃~8℃的环境中存放。
4.4 测试步骤：4.4.1采样方法：将已制备好的培养皿，按洁净室沉降菌采样点布置图的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露4小时，再将培养皿盖盖上后倒置。
洁净室（区）采样点布置4.4.2培养：全部采样结束后，将培养皿倒置于30℃~35℃恒温培养箱中培养3天。
每批培养基要有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定2只培养皿作对照培养。
4.4.3菌落计数：用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点记。
然后用5-10倍放大镜检查，是否遗漏。
若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
4.4.4 用计数方法得出各个培养皿的菌落数，平均菌落数的计算见下式：M1＋M2＋……M n平均菌落数M＝————————n式中M为平均菌落数；M1为1号培养皿菌落数；M2为2号培养皿菌落数；M n为n号培养皿菌落数；n为培养皿总数。
沉降菌测试标准操作规程
1.1目的：建立沉降菌测试的标准操作规程。
1.2范围：本标准规定了医药工业洁净室和洁净区中沉降菌的测试条件，测试方法。
本标准适用于医药工业洁净室和洁净区，无菌室或无菌区域(包括洁净工作台)的沉降菌的测试和环境验证。
1.3责任人：检验员、化验室负责人。
2、引用标准：GB/T16294－2010 ，新版GMP3、定义：本标准采用下列定义：3.1沉降菌：用本标准提及的方法收集空气中的活微生物粒子，通过专门的培养基，在适宜的生长条件下繁殖到可见的菌落数3.2沉降菌菌落数：规定时间内每个平板培养皿收集到空气中沉降菌的数目，以个/皿表示。
4、测试方法：4.1 方法概述：本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2 人员的职责及培训：洁净室(区)的测试人员应进行本专业的培训并获得相应资格后才能履行对洁净室（区）测试的职责，其中包含涉及的卫生知识和基本微生物知识。
洁净室(区)的测试人员应选择与生产操作的空气洁净度级别要求相适应的穿戴方式，外面的衣服不能带进100000级以上的区域。
4.3仪器：4.3.1培养皿：一般采用￠90mm×15mm 规格的培养皿。
4.3.2培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）或沙氏培养基（SDA）或用户认可并经验证了的培养基。
其配制方法见附录B。
4.3.3恒温培养箱：必须定期对恒温培养箱进行校验。
4.3.4高压蒸汽灭菌器：使用时应严格按照仪器说明书操作。
4.4 测试步骤：4.4.1 测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.2将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
4.43.3静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
洁净区沉降菌测试操作规程
范围：洁净区
职责：质量部、生产车间对本规程的实施负责
正文：
1.试剂及仪器、器皿
1.1试剂
——营养琼脂培养基
1.2仪器及器皿
1.3生化培养箱，Φ90mm培养皿、锥形瓶、胶塞、灭菌锅、烧杯等。
2.测试前准备
2.1培养基的配制
——按SOP-QM-424《培养基配制标准操作规程》进行。
2.2培养基平皿的制备
2.2.1将Φ90mm培养皿置于121℃湿热灭菌20分钟或180℃干热灭菌2小时。
2.2.2将培养基加热溶化，冷至45℃时，于无菌检查操作间将培养基注入平皿，每皿约15ml。
2.2.3待琼脂凝固后，将培养基平皿倒置于30℃-35℃生化培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用。
3.采样
3.1采样点的数目及采样点的布置
3.1.2.1采样点的布置力求均匀,避免采样点在某局部区域过于集中或过于稀疏，关键区域可增加采样点。
3.1.2.2采样点位置离地0.8-1.5米左右（略高于工作台面）
3.2采样方法：按3.1的要求放置平皿数，打开培养皿盖，使培养皿暴露30分钟，再将培养皿盖盖上。
4.培养
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所有采样结束后，将平皿倒置在30ºC—35ºC的生化培养箱中培养48小时。
5.操作结果的评价
5.1用肉眼直接计数并记录。
5.2结果计算
式中 M—平均菌落数（CFU）
M i—1，2，3……号平皿菌落数
n—平皿总数
5.3结果评价标准见下表：
测试结果均须合格。
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微生物室洁净区沉降菌测定操作规程
微生物室洁净区沉降菌测定操作规程一、目的建立微生物室洁净区沉降菌测试的标准操作规程，为沉降菌测试人员提供正确的标准操作方法。
二、范围适用于本公司微生物室洁净区沉降菌测试的全过程。
三、责任微生物室负责人：监督检查检验员执行本操作规程。
微生物室检验员：负责对本规程的实施。
四、内容：1.1 测试方法:通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
1.2测试仪器：培养皿、培养基、隔水培养箱、高压蒸汽灭菌器。
1.2.1 培养皿：一般采用90mm×15mm规格的培养皿。
1.2.2 培养基：胰酪大豆胨琼脂培养基。
1.3 测试前的要求：1.3.1 测试状态：1.3.1.1 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）的温湿度须达到规定的要求，静压差、换气次数、空气流速必须控制在规定值内。
洁净室（区）的温度和相对湿度应与检验要求相适应（无特殊要求时，温度在18℃～26℃，相对湿度在45%～65%之间为宜），同时应满足测试仪器的使用范围。
1.3.1.2 沉降菌测试前，被测试洁净室（区）已经过消毒。
1.3.1.3 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合检验的要求，并在报告中注明测试状态，微生物室洁净区沉降菌测试均在动态下监测。
1.3.1.4 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上，动态测试时，培养皿暴露时间为不大于4h。
1.3.2 测试人员：1.3.2.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
1.3.2.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
1.3.3 测试时间：1.3.3.1 对单向流，如A级净化房间及层流工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min后开始。
1.3.3.2 对非单向流，如B级、B级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
沉降菌检测操作规程
沉降菌检测操作规程受控状态文件编号 ZHSS03—09—01版环境监测沉降菌检测操作规程(试行本)编制:审核:批准:发布日期: 实施日期:北京京中宏塞思生物技术有限公司北京中宏赛思生物技术有限公司受控状态沉降菌检测操作规程文件编号 ZHSS03—09—01版1. 目的规范检测人员对有洁净要求的洁净区域的沉降菌指标进行检测的操作方法的行为。
2. 范围适用于本工厂内洁净生产车间、微生物实验室和百级工作台等洁净区域。
3. 职责质量控制负责人、微生物检验员对本标准的实施负责。
4. 检测方法4.1 检测依据引用标准《医药工业洁净厂房设计规范》标准号 GB50457—2008执行标准《医药工业洁净室(区)沉降菌的检测方法》标准号 GB/T1629—20104.2 仪器设备立式压力蒸汽灭菌器、恒温培养箱、百级工作台4.3 玻璃仪器Φ90mm培养皿、三角烧杯4.3 检测药品大豆酪蛋白琼脂、纯化水4.4 培养基制备4.4.1 将大豆酪蛋白琼脂按照比例加水配置，并加热溶解。
4.4.2 将溶解后的培养基置于立式蒸汽压力灭菌器中，121?灭菌20min。
4.4.3 将灭菌合格的培养基，冷却至60?左右，移入百级工作台，以每皿约20ml 的量分装在平皿中，待凝固备用。
4.5 采样4.5.1 测试前培养皿表面严格消毒。
4.5.2 将制备好的培养皿按照采样布点图的位置放好，然后由里到外逐个打开，使培养基表面完全暴露在空气中。
4.5.3 静态测试时，培养皿暴露时间为30min以上;动态监测时，培养皿暴露时间不大于4h。
4.5.4 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中进行培养。
4.6 培养:采用大豆酪蛋白琼脂培养基采样结束后，在30?~35?培养箱中培养不少于2d。
4.7 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否有污染。
每批做3个对照培养。
4.8 菌落计数4.8.1 用肉眼对培养皿上所有的菌落计数，然后用5~10倍放大镜检查，是否有遗漏。
洁净区沉降菌测定操作规程
文件制修订记录一、目的：建立洁净区沉降菌测定操作规程，使操作标准化，规范化。
二、范围：各生产车间、化验室。
三、责任人：质控部检验员。
四、管理内容：1 标准依据：ISO14644-1,新版《药品生产质量管理规范》。
2 微生物监测的标准：为评估无菌生产的微生物状况，应对微生物进行动态监测，监测方法有沉降菌法、定量空气浮游菌采样法和表面取样法（如：棉签擦拭法和接触碟法）等。
动态取样应避免对洁净区造成不良影响，对表面和操作人员的监测，应在关键操作完成后进行。
在正常的生产操作监测外，可在系统验证、清洁或消毒等操作完成后增加微生物监测。
2.1 微生物监测的动态标准洁净区微生物监测的动态标准如下：（2）单个沉降碟的暴露时间可以少于4小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。
3 测试方法3.1 方法概述本测试方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室（区）的洁净度。
3.2 所用的仪器和设备3.2.1 高压消毒锅使用时应严格按照仪器标准操作维修保养规程。
3.2.2 恒温培养箱定期对培养箱进行检定。
3.2.3 培养皿一般采用 90mm×15mm的硼硅酸玻璃培养皿。
3.2.4 培养基普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。
其配制方法见附录A（标准的附录）。
3.3 测试步骤3.3.1 采样方法将已制备好的培养皿按4.4.1的要求放置，打开培养皿盖，使培养基表面暴露0.5h，再将培养皿盖盖上后倒置。
3.3.2 培养3.3.2.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。
3.3.2.2 在30℃～35℃培养箱中培养，时间不少于48h。
3.3.2.3 每批培养基应有对照试验，检验培养基本身是否污染。
可每批选定3只培养皿作对照培养。
3.3.3 菌落计数3.3.3.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不得遗漏。
沉降菌测试操作规程
1.0 目的通过监测发现问题及时采取措施予以解决，确保环境洁净度符合生产工艺要求。
2.0 适用范围适用于我公司净化车间十万级、万级和局部百级洁净区域。
3.0 职责3.1质量部负责净化车间环境检测。
4.0 工作程序4.1 原理4.1.1参照中华人民共和国国家标准GB/T 16294-2010《医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法》进行。
本方法采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物性粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数，以平板培养皿中的菌落数来判定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净室(区)的洁净度。
4.2测试状态4.2.1 沉降菌测试前被测试洁净室已经过消毒。
4.2.2 测试状态有静态和动态两种，测试状态的选择必须符合生产的要求，并在报告中（原始记录）中注明测试状态。
4.3 测试人员4.3.1 测试人员必须穿戴符合环境洁净度级别的工作服。
4.3.2 静态测试时，室内测试人员不得多于2人。
4.4 培养基4.4.1 培养基用大豆酪蛋白琼脂培养基或沙氏培养基。
4.4.2 培养皿一般采用Ф90mm×15mm规格的培养皿。
测试前培养皿表面必须严格消毒。
4.4.3 将培养基按要求配制加热熔化后，分装、灭菌。
冷却至60℃时，在无菌操作要求下倾注约20ml至无菌平皿中。
加盖后在室温放至凝固。
4.4.4 制备好的培养基平皿在 2～8 ℃保存，一般以一周为宜。
4.5 测试时间测试应在净化空调系统正常运行不少于30min以后开始。
4.6 测试点和记录4.6.1 测试点按附录《沉降菌测试点分布图》。
4.6.2 测试点（采样点）的位置离地面 0.8米左右（略高于工作面）。
4.6.3 在测试报告中应记录房间温度、相对湿度、测试状态。
4.6.4 用计数方法得出各个培养皿的菌落数。
4.6.5不同面积的最少采样点数目见表1表14.6.6最少培养皿数：在满足最少采样点数目的同时，还应满足最少培养皿数，见表2 表24.6.7采样次数：每个采样点一般采样一次 4.7 平均菌落数的计算：平均菌落数NM M M M n21 ++＝ (1)式中： M 代表平均菌落数 M n 代表n 号培养皿的菌落数 N 代表培养皿总数 4.8 测试步骤4.8.1 将已制备好的培养皿按采样点布置图逐个放置，然后从里到外逐个打开培养皿盖，使培养基表面暴露在空气中。
沉降菌检测标准操作规程ok
沉降菌检查原则操作规程1.目旳本文献规定了干净室（区）中沉降菌检查旳操作措施，保证检查人员操作规范化、原则化，保证干净室干净度。
2.范畴原则规定了医药工业干净区中沉降菌旳测试条件、测试措施。
本原则合用于医药工业干净室（区），无菌室（区）（涉及干净工作台）旳沉降菌测定。
我司规定对万级净化实验室沉降菌检测项目进行一星期/次旳检查。
3．职责QC操作人员、QC管理人员严格按照此规程执行；有关使用人员做好干净室清洁维护工作。
4.内容4.1. 定义4.1.1.干净室（区）对尘埃及微生物污染规定需进行环境控制旳房间或区域。
其建筑构造、装备及其使用均具有减少对区域内污染源旳介入、产生和滞留旳功能。
4.1.2.干净工作台一种工作台或者与之类似旳一种封闭围档工作区。
其特点是自身可以供应通过过滤旳空气或气体，垂直层流罩、水平层流罩、垂直层流干净工作、水平层流干净工作台、自净器等。
4.1.3.干净度干净环境内单位体积空气中含不小于或等于某一粒径旳悬浮粒子旳容许记录数。
4.1.4.菌落细菌培养后，由一种或几种细菌系列而形成旳一细菌集落，简称CFU。
一般用个数表达。
4.1.5.沉降菌用本原则提及旳措施收集到旳活微生物粒子，通过专用旳培养基，在合适旳生长条件下繁殖到可见菌落数。
4.1.6.静态测试干净室（区）净化空气调节系统已处在正常运营状态，工艺设备已安装，干净室（区）内没有生产人员旳状况下进行旳测试。
4.1.7.动态测试干净室（区）已处在正常状态下进行旳测试。
4.2. 测试措施4.2.1.措施概述采用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中旳生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在合适旳条件下让其繁殖到可见旳菌落进行计数，以平板培养皿中旳菌落数来鉴定干净环境内旳活微生物数，并以此来评估干净室（区）旳干净度。
4.2.2.测试仪器和设备高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、培养皿。
4.2.3.培养基营养琼脂培养基：培养基旳准备及灭菌根据培养基配制及敏捷度测试原则操作规程准备。
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医药工业洁净室(区)沉降菌的测试方法
医药工业洁净室（区）的沉降菌的测试方法被用于收集洁净室（区）内的空气微生物
和评估空气微生物活动水平。
沉降菌指的是通过重力和空气流动, 可以从空气中悬浮物中
归集在底部，其中包括灰尘以及其他悬浮物。
沉降菌微生物检测方法已被广泛应用于医药
行业的生物洁净室（区）的清洁度评估和风险评估中，其中包括药品研发，生产，包装和
测试等诸多阶段，对空气中悬浮微生物的活动水平进行检测。
沉降菌测试的步骤包括:
1、现场采样：设置采样点，确定采样时间和时间跨度，并在整个洁净室（区）空间
内建立分布均匀的采样点，在此期间进行空气样本采集，以此来采集有代表性的空气悬浮物。
2、室内空气样品保存及处理：在空气样品采集完毕后，应采用乙醚、尼龙膜或其它
能够有效保存样��微生物活性的特殊材料进行封装，然后将封装后的样品放置在4℃-8℃的低温下保存，减少空气样品中的细菌的活动，以防止空气样品的污染，同时能够有效地
延长样品的保存周期。
3、室内空气样品富集：将保存室内空气样品，采用自然富集法进行富集，以便按照
正规的检测流程操作，以便获取更加准确的测试结果。
4、室内空气样品检测：采用可用于室内空气悬浮物检测的干式微生物快速检测技术（例如TBDT荧光PCR，
快速真菌检测，快速测菌等），在空气中检测洁净室（区）悬浮微生物的活动水平。
以上就是医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法，包括现场采样、室内空气样品保
存和处理和测试等步骤，步骤之间紧密耦合，保证了检测结果的准确性。
另外，此测试方
法可同时检测洁净室（区）内悬浮菌的种类和数量，以及分析洁净室（区）不同位置悬浮
菌数量的分布，以便进一步评估洁净室（区）的清洁度情况。
同时，由于洁净室（区）的清洁度要求不断提高，因此审核计划的定期监督应是一个
不可或缺的环节，根据前期审核数据对现有控制系统进行去除和定期检查，以确保实验室
和洁净室（区）空气微生物活性水平在一定范围内稳定。