壳寡糖分新检测的研究进展

１ ９。 Ｏ
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阴 离 子 交 换柱 和 电化 学 检 测 器 配 合 使 用 也 是 壳 寡糖 检测 的 一种 常 用 方 法 ， 该 方 法 灵 敏 度 高 ，样 品 用量 少 ， 但 仪 器 昂 贵，操作条件 比较严格 。刘庆生等 “ 通过高效 阴离子交换色 谱 一 冲 安 培 检 测 （Ｐ Ｅ — Ａ ） 合 使 用 ，直 接 进 行 检 测 低 浓 脉 ＨＡＣＰＤ 联 度 壳 寡 糖 的 定 量 分 析 ，分 析 了 聚 合度 为 卜６ 壳寡 糖 ，并 且 得 的 到 清 晰 的 分 离 峰 。这 种 方 法 不 需 要 预 先衍 生就 能分 析 壳 寡 糖 ， 不 仅 节 约 了 大 量 的 时 间 和 金 钱 ，而 且 避 免 了一 些 有 毒 的衍 生 试 剂 的 使 用 ， 减少 了环 境 污 染 ， 在 组 成 结 构 大 小 上 非 常 相 近 的 单 糖 也 可 得 到 很 好 的分 离 ，且 灵 敏度 很 高 ， 检 测 限 量 可 达 到几 十 个 ｐ ／ 水 平 。 ｇＬ 高效 液相 色 谱 法 虽 然 效 果 好 ，但 是它 需要 大 型 的仪 器 ， 流动 相和 标 准 品 花 费 昂贵 ，对 于 一 般 的 实验 室 来 说 ，初 期筛 选 不 宜使 用 高 效 液 相 色 谱 法 。
【 中图 分 类 号 】Ｔ １ Ｑ９ ７ 【 献 标 识 码 】Ａ 文 【 章编 号 】 １０ —１５ （ｏ １ ５ ０ ０ — ２ 文 ０ ８ １ １ １ ） — １９ ０ ２ ｏ 采 用 浸 渍 法 显 色 。 陈 小 娥 ，方 旭 波 等 通 过 系 统研 究 ，建 立 了 壳 低 聚 糖 的 薄 层一 比色 分 析 法 ，展 开 剂 为 正丁 醇 ： ： 水 乙酸 ： 氨 水 ＝ ０：１ １ ２ 展 开 温 度 为 ２ ℃ ， 为 壳低 聚 糖 的生 产 ２ ０： ０： ； ５ 和 应 用 提 供 了一 种 经 济 、 简 便 的 分 析 方 法 。 王 晓 燕 ，许 牡 丹 等 建立 的壳 低 聚糖 的薄 层 比色 分析 方法 是展 开剂 为 乙酸 乙 酯 ： 水 乙醇 ： ： 水 ＝ ５： ４： ． ５ 无 水 氨 ５： ０ ４ ，采 用 苯 胺 一 苯 二 胺一 磷酸显色 ，点样 量为２ａ ／ Ｌ ，可分 开单糖至低聚 七糖 各 ｌｇ 组 分 ，斑 点 圆 形 、 清 晰 、 无 拖 尾 ，分 离效 果 好 。 薄 层 层 析 法 虽 然 可 以分 析 壳 寡 糖 ，价 格 低 廉 ，但 此 方 法
１ Ｌ 李 曙 光 等 用 Ｓ ｏ ｅ Ｈ ｐ ５ Ｅ 基 柱 ，蒸 发 光 散射 检 。 ｈ ｄ ｘ Ｎ ２ 一 ０４ 氨 测 器 ，使壳寡 糖按照聚合度顺 序依次被洗 脱 ，检测到 的壳寡 糖 的 聚 合 度 范 围 可 达 ｌ糖 。 杨 菊 林 等 通 过 Ｈ Ｌ 对 不 同脱 乙 酰 ５ ＰＣ 度 的壳聚糖底物 经壳聚糖酶 酶解后得到 的壳寡糖进行分析 ， 条 件 是 ： Ｋ ２ ０ 柱 ， 洗 脱 液 ０ ０ １ｏ ／ 含 ００ ％（ 量 分 数 ） Ｓ８ １ ． ０ ｍ ｌＬ ． ２ 质
在 初 步 分 析 壳 寡 糖 时 多 采 用 比色 法 。 邬 建 敏 通 过 ３ ５ 二 ，－ 硝 基 水 杨 酸 （Ｎ ） 色 ， 定 了 甲壳 低 聚 糖 平 均 聚 合 度 及 平 均 ＤＳ显 确 相 对 分 子 质 量 。刘 琳 等 利 用 分 光 光 度 法 测 定 壳 寡 糖 平 均 聚 合 度 ，此 方 法 经 凝 胶 渗 透 色 谱 验 证 ， 能 较 为 准 确 地 判 断 壳 寡 糖 的平 均 聚 合 度 。虽 然 比 色 法 技 术 简 单 ，对 设 备 要 求 不 高 ， 成 本 较 低 ，但 由于 其 准 确 性 不 高 ， 因 此 有 必 要 开 发 一 种 新 的 可 准确测定壳寡糖 的分析方法。 ２色谱法 ． ・ ． （ ）薄 层 色 谱 法 １ － 薄 层 色 谱 法 是 在纸 层 析 法 的基 础 上 发 展 起 来 的 ，其 分 辨 效 率 高 ， 分 离 效 果 好 ， 简 便 易行 ， 重 现 性 好 ， 在 同一 块 薄 板 上 可 同 时 分 析 多 个 样 品 。 孟 显 丽 ， 陈 国华 等 通 过 实 验 建 立 了 薄 层 色 谱 （ Ｌ ）分 析 壳 寡糖 的 条 件 即 最 佳 的展 开 剂 是 乙 酸 乙 ＴＣ 酯 ： 乙醇 ： ： 水＝ ５： 水 氨 ５： ０ ３ ４： ． ，样 品上 行 展 距 为 ８ｍ ｃ，
（ 西分析 测试研 究中心 ，广西 南宁 ５ ０ ２ ） 广 ３ ０ ２
【 摘 要 】壳寡糖是 壳聚糖 降解后 产生的一类 可溶 于水的氨 基糖类化合物 ，聚合度 一般 在 ２ ０之 间，文 中对 壳寡糖分析 —１ 检测方法进行 了综述 ，主要 包括 比 色法 ，色谱 法，质谱 法，电泳法等 。 【 关键词 】壳寡糖 ；比色法；色谱 法 ；质谱法 ；电泳法
Ｍ Ｍ ｎ ｉａ 等通过Ｍ Ｌ Ｉ ＴＦ Ｍ 对 壳聚糖降解产物的分析得 ． ｅ ｇ ｒ ｂ Ａ Ｄ — Ｏ －Ｓ 出壳聚糖酶的作用位 点，进而推理壳寡糖的结构 。陈勉，朱 希强等利用Ｍ Ｌ ＩＴ Ｆ Ｍ 方法 可以直接检测到壳寡糖的精细 ＡＤ－Ｏ－Ｓ
结 构 ，聚 合 度 ， 乙酰 基 的 数 量 及 其 剖 面 图 ，从 而 鉴 定 壳 寡糖 的 质 量 ，为 其 从 健 康 食 品 朝 病 人所 需 的 药 品方 向发 展 做 出 了
（ ３）气 相色 谱 （ Ｃ Ｇ）
的结构 。李艾华 等 用Ｎ ｃ ｌｔ Ｆ － Ｒ ３０ 红外光谱仪记录 ｉ ｏｅ Ｔ Ｉ ６ 红 外 光 谱 ， 基 体 辅 助 激 光 解 吸 电 离 飞 行 时 间 质 谱 （Ａ Ｄ — Ｏ —Ｓ 分析壳寡糖，得到 了聚合度３ ６ Ｍ Ｌ ＩＴ Ｆ Ｍ ） — 的甲壳寡糖。
【 稿 日期 】２ １ — ２ ２ 收 ０ １０ — ５
高效液相色谱 法 （ Ｐ Ｃ Ｈ Ｌ ）是定量分析低 聚糖类及其他糖 类 最 常用 的 方 法 ，具 有 方 便 、快 速 、分 离 效 果 好 、分 辨 率 高 、 重现 性 好 和 不 破 坏 样 品 等 优 点 ，该 方 法 必 须 有 标 准 品作 参 照 。 由于 糖 类 物 质 在 紫 外 光 区 问没 有 吸 收 ，故 无 法 使 用 紫 外 检 测 器 ， 早 期 多 采 用 示 差 检 测 器 来 检 测 糖 类 物 质 ， 但 是 示 差 检 测 器 无 法 进 行 梯 度 洗 脱 ，所 以检 测 的聚 合度 多 在 ８ 以下 ，现 在 多 采 用 蒸 发 光 散 射 检 测 器 或 电化 学 检 测 器 （ 冲 安 培 检 测 器 ）， 脉 分 离 柱 常 用 氨 基 柱 或 阴离 子 交 换 柱 。纪 莹 等 通 过 Ｈ Ｌ 法 分 析 ＰＣ 检 测 壳寡 糖 组 分 ， 用Ｔ Ｋ Ｇ ｌ ｍ ｄ 一 ０ ，示 差 检 测 器 检 测 ， Ｓ — ｅ ｉ ｅ ８ 柱 Ａ 流 动 相 为 乙 腈 ： ＝３ ６ ，ｐ 为４ ０ 水 ７： ３ Ｈ ． ，柱 温 为２ ￣ 上样 量 ５ Ｃ，
极 强 的 吸湿 保 湿 性 ；抑 制肿 瘤 细 胞 （ 合 度 为 ６ ８ 活 性 最 聚 ～ 时
高 ） ： 诱 发 植 物 的诱 导 抗 病 性 等 ， 使 其 在 食 品 、 医 药 、化 妆
用 于 壳 寡 糖 常 规 检 验 。但 是 ， 要 大 规 模 地 对 壳 寡 糖 分 离 分 析
贡献。
４ 电泳法 （ｌｃ ｒ ｐ ｏ ｅ ｉ ） ． Ｅ ｅ ｔｏ ｈ ｒ ｓｓ
气 相 色 谱 法 检 测 壳 寡糖 的 文 献 相 对 较 少 ，朱 晓 兰 ，夏 文 水 等 采 用 毛 细 管气 相 色 谱法 （ Ｇ ）测 定 了Ｄ ｃＣ 一氨 基 葡 萄 糖 盐 酸 盐 （Ａ ） ＧＪ ，测 定 结 果 较 比色 法 准 确 ，但 分 析 步骤 比较 多且 对 ｛ 设备要求较高。 （ ）凝 胶 渗 透 色 谱 （Ｐ ） ４ Ｇ Ｃ 凝胶渗 透色谱法是利用流动相与控制孔径 分布 的固定相 接 触 从 而 使 溶 质 按 分 子 体 积 大 小 分 离 的色 谱 方 法 。 １６ 年 ， ９４ Ｍ ｏ ｅ 先 发 表 了使 用 Ｇ Ｃ 法 来 测 量 高 聚 物 的 分子 量 分 布 ， ｏｒ首 Ｐ方 该 方 法 速 度 快 、 复 性 好 。利用 Ｇ Ｃ 据 还 可 以计 算 Ｍ 、 ｎ 和 重 Ｐ数 ｗ Ｍ Ｍ 等 平 均 分 子 量 。这 些 优 点使 Ｇ Ｃ 为 测 定 分 子 量 分 布 的主 ｚ Ｐ成 要 方 法 。Ｇ Ｃ 测 定 壳 寡 糖 的 分 子 量 可 以认 为 是 一 个 相 对 值 。 Ｐ
操 作 时 间 长 ，只 能 进 行 微 量 生产 ，无 法 定 量 ，薄 层 一 比色 法 可
（ ）引言 一
功 能性低聚 糖是 由２ １个相 同或不 同的 单糖 以糖苷键 ～ Ｏ 聚 合 而 成 ，具 有 糖 类 某 些 共 同 的特 性 ，但 不 会 被 胃酸 等 降 解 ， 不 在 小 肠 吸 收 直 接 到 达 大肠 ，具 有 促 进 人 体 双 歧 杆 菌 的增 殖 等 生 理 功 能 ，所 以功 能性 低 聚 糖 又 被 称 为 双 歧 因子 。 壳 寡 糖 （ ｈ ｔ ｏ ｉｏ ａ ｃ ａ ｉ ｅ Ｏ ）又 称 低 聚 葡 萄 糖 ｃ ｉ ｏ ｌ ｇ ｓ ｃ ｈ ｒ ｄ ，Ｃ Ｓ 胺 ，低 聚氨 基 葡 萄 糖 等 ， 是 功 能 性 低 聚 糖 的 一 种 ，是 壳聚 糖 降 解 后 的产 物 ，聚 合 度 一 般 在 ２ １之 间 ，是 目前 自然 界 中仅 ～ ０ 知 的唯 一 的 碱 性 寡 糖 ， 具 有 独 特 的 生 物 活 性 ， 如 抗 茵 抑 菌 ；
２１ ０ １年 第 ５期 （ 第 １ １期 ） 总 ４
大 众 科 技
ＤＡ ＺＨｏ ＮＧ ＫＥ Ｊ
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ห้องสมุดไป่ตู้
（ ｍｕａｉ ｌ Ｎ ． １ Ｃｕ ｌｔ ｅｙ ｏ１ ） ｖ ４