小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp20细胞凋亡.
异丙肾上腺素通过诱导心肌线粒体氧化应激在小鼠心律失常中的作用
论著异丙肾上腺素通过诱导心肌线粒体氧化应激在小鼠心律失常中的作用刘婷，罗弦，刘竹，许丹迪，刘蕾颖，谭晓秋，李涛1.西南医科大学心血管医学研究所（泸州646000）；2.西南医科大学四川省心血管疾病防治协同创新中心（泸州646000）【摘要】目的探讨异丙肾上腺素（ISO）通过诱导心肌线粒体氧化应激诱发小鼠心律失常的机制。
方法小鼠腹腔注射异丙肾上腺素前后分别记录心电图。
提取小鼠心肌组织，检测线粒体呼吸链复合物I、ATP、ROS的变化水平。
光标测技术检测心脏动作电位的变化情况。
结果注射ISO后，小鼠的心率明显增加，起搏诱发心律失常的机率增加。
ATP含量和线粒体呼吸链复合物I浓度降低，ROS含量增加。
光标测结果显示心肌动作电位时程缩短。
结论异丙肾上腺素通过影响心肌线粒体氧化应激诱导心律失常的发生。
【关键词】异丙肾上腺素心律失常氧化应激线粒体【中图分类号】R3文献标志码A DOI：10.3969/j.issn.2096-3351.2021.06.007 Isoproterenol triggers arrhythmia by inducing oxidative stress of myocardialmitochondria in miceLIU Ting，LUO Xian，LIU Zu，XU Dan-di，LIU Lei-ying，TAN Xiao-qiu，LI Tao1.Institute of Cardiovascular Research,Southwest Medical University,Luzhou646000，China；2.Collaborative Inno⁃vation Center for Prevention and Treatment of Cardiovascular Disease of Sichuan Province，Southwest Medical Univer⁃sity,Luzhou646000，China【Abstract】Objective To study the mechanism of isoproterenol triggering arrhythmia through myocardial mi⁃tochondrial oxidative stress in mice.Methods An electrocardiogram was recorded before and after intraperitoneal in⁃jection of isoproterenol.Myocardial tissues were extracted from the mice to measure the changes in the levels of mito⁃chondrial respiratory chain complex I,adenosine triphosphate(ATP),and reactive oxygen species(ROS).The cardi⁃ac action potential was measured by optical mapping.Results After isoproterenol injection,the mice had a signifi⁃cantly increased heart rate,significantly more frequent arrhythmia triggered by pacing,significantly decreased levels of ATP and mitochondrial respiratory chain complex I,a significantly increased ROS level,and a significantly short⁃ened cardiac action potential duration.Conclusion Isoproterenol induces oxidative stress in myocardial mitochon⁃dria to trigger arrhythmia.【Key words】Isoproterenol Arrhythmia Oxidative stress Mitochondria基金项目：国家自然科学基金（31900813）；四川省科技厅项目（2020JDJQ0047）；泸州市-西南医科大学联合项目（2020LZXNYDJ09）第一作者简介：刘婷，硕士。
人教版2019高中生物选择性必修3 生物技术与工程 第2章动物细胞融合技术与单克隆抗体 同步练习2
2.2.2 动物细胞融合技术与单克隆抗体一、单选题1．单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞融合后，要用特定的培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活、增殖的细胞是（）①B淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A．①②③⑤B．①③⑤C．②③④D．①②③④2．如图为动物细胞融合技术过程图，相关叙述错误的是（）A．图中①过程发生了细胞膜的融合，体现了细胞膜的选择透过性B．图中C为灭活的病毒，此外还可用物理或化学方法诱导动物细胞融合C．图中②过程表示细胞核融合形成杂种细胞D．动物细胞融合技术可用于制备单克隆抗体3．在生产癌胚抗原(CEA)单克隆抗体的过程中，首先将纯品CEA多次注射到小鼠体内，两周后分离小鼠脾脏细胞，与小鼠SP20骨髓细胞融合，筛选出所需的杂交细胞，再将筛选出的杂交细胞与生理盐水一起注入到小鼠腹腔，一段时间后，提取单克隆抗体。
下列相关叙述错误的是（）A．杂交瘤细胞生产的单克降抗体和人体内的天然癌胚抗原抗体的结构可能有差别B．将CEA多次注射到小鼠腹腔的目的是增强免疫，增加体内记忆细胞和T细胞数目C．杂交细胞至少需经过两次筛选，选择CEA抗体阳性的细胞用于进行克隆化培养D．单克隆抗体可以用来检测人体内癌胚抗原的有无，从而判断肿瘤等疾病是否发生4．阿霉素是一种抗肿瘤药，活化后可抑制DNA和RNA合成。
科学家研制一种活化阿霉素的“生物导弹”，作用机理如图。
下列叙述错误．．的是（）A．碱性磷酸酶为阿霉素活化提供反应所需的活化能B．活化阿霉素主要在肿瘤细胞细胞核中起作用C．机体主要依靠蛋白酶清除未与肿瘤细胞结合的“生物导弹”D．单克隆抗体与肿瘤细胞表面抗原特异性结合，有利于减轻阿霉素的副作用5．图1为细胞毒性T细胞通过表面受体（TCR）识别抗原递呈细胞呈递的信号分子后被激活，进而攻击肿瘤细胞的示意图。
图2为肿瘤细胞的一种免疫逃逸机制示意图。
小鼠心血管疾病模型的构建及应用
小鼠心血管疾病模型的构建及应用小鼠是目前广泛应用于生物医学研究中的动物模型，它们与人类有很多相似之处，比如感官、生理和病理学等方面。
近年来，随着对心血管疾病的深入研究，小鼠心血管疾病模型也成为了心血管疾病研究领域的重要内容之一。
构建小鼠心血管疾病模型，可以加深我们对心血管疾病发生的了解，帮助开发新的预防和治疗方法。
一、小鼠心血管疾病模型的构建方法1、遗传模型遗传模型是指通过改变小鼠基因表达和遗传背景等方式来构建心血管疾病模型。
这种方法的优势在于可以模拟一些遗传疾病，且具有较高的复制性和稳定性。
目前研究中最广泛应用的心血管疾病遗传模型是高胆固醇饮食诱导的动脉粥样硬化模型。
研究者通过给小鼠高胆固醇饮食，使其血脂升高，从而诱导动脉粥样硬化，同时可以在这种模型中研究各种血管炎、血栓行为等相关机制。
2、药物模型药物模型是指通过给小鼠注射某些化合物，如亚硝酸、藜芦醇、甘草甜素等来加速心血管疾病的进程。
这种方法常用于研究小鼠心血管炎、冠心病、心肌梗死、静脉曲张等疾病，通常情况下，通过长期的静脉注射这些化合物，可以表现出类似于人类心血管疾病的临床症状。
3、手术模型手术模型是指通过手术方式对小鼠的心血管系统进行操作，从而构建心血管疾病模型。
这种方法常用于研究心脏瓣膜疾病、心肌缺血、动脉瘤等疾病。
例如，在小鼠的冠状动脉上放置缩窄的丝线或手术在小鼠心肌内注射一定量的凝血酶或血凝素，可以诱导冠状动脉狭窄和心肌缺血等疾病。
4、遗传与环境因素结合模型此种模型是指将遗传模型和环境因素相结合，以产生更真实的小鼠心血管疾病模型，人类心血管疾病的形成往往与遗传和环境因素的相互作用有关。
例如，将小鼠饲喂高脂饮食或缺乏运动的环境下，将其转基因为高胆固醇饮食，从而产生心血管疾病的模型。
二、小鼠心血管疾病模型的应用1、疾病的预防和治疗高胆固醇饮食诱导动脉粥样硬化模型能够有效地复制人类动脉粥样硬化模型，并用来筛选新型治疗高胆固醇血症的药物，如洛伐他汀、普拉伐他汀、阿托伐他汀甚至是一些中药方剂等。
小鼠抗人肿瘤抑制素2(ST2)单克隆抗体的制备及应用
1026细胞与分子免疫学杂志(Chin J Cell Mol Immunol)2021,37(11) .论著•文章编号:1007-8738(2021)11-1026-06小鼠抗人肿瘤抑制素2(ST2)单克隆抗体的制备及应用马菁昌J武书文S王玉玲J李娜'，周耿瑶J徐雪雪S程坤'，金伯泉'，张圆S庄然3**c空军军医大学基础医学院免疫学教研室，陕西西安710032；'西北工业大学医学研究院，陕西西安710068)［摘要］目的制备针对人肿瘤抑制素2(ST2)的小鼠源性单克隆抗体，并进行功能和应用的初步鉴定。
方法用真核表达的重组人ST2分子免疫BALB/c小鼠，利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗ST2单克隆抗体，并鉴定其在Western blot法、免疫组织化学染色和流式细胞术中的应用价值；建立检测可溶性ST2的夹心ELISA,检测热射病患者血清ST2水平；建立ST2萤光素酶报告基因检测系统，检测特异性抗体的中和活性。
结果获得38株分泌小鼠抗人ST2单克隆抗体的杂交瘤细胞株，克隆号分别命名XA325.1~XA325.38。
初步筛选鉴定发现可以用于Western blot法、免疫组织化学染色，识别重组表达的纯化蛋白和细胞中表达的ST2；有2株可以应用于流式细胞术，识别细胞表面外源性转染表达的ST2；采用单抗XA325.16包被，搭配 XA325.5标记生物素，可以建立检测血清中可溶性ST2的ELISA试剂盒，发现热射病患者血清ST2水平显著升高；XA325.5具有中和活性，可以阻断白细胞介素33(IL-33)的生物学效应。
结论制备小鼠抗人ST2的单克隆抗体，可用于多种免疫学检测技术，XA325.5中和活性抗体具有潜在的临床应用价值。
［关键词］肿瘤抑制素2(ST2)；单克隆抗体(mAb)；中和抗体；免疫学检验方法［中图分类号］Q813.2,R392,R392.12,R446.61［文献标志码］APreparation and identiHcation of mouse-derived monoclonal antibodies to human ST2moleculeMA Jingchang1,WU Shuwen2,WANG Yuling',LI Na1,ZHOU gengyao1,XU Xuexue2,CHENG Kun1, JIN Boquan1,ZHANG Yuan2,ZHUANG Ran1'2*1Department of Immunology,School of Basic Medicine,Air Force Medical University,Xi'an710032；2Medical Research Institute of Northwestern Polytechnical University,Xi'an710068,China*Corresponding author,E-mail:fmmuzhr@［Abstract］Objective To prepare mouse-derived monoclonal antibody against human suppression of tumorigenicity2 (ST2)molecule and make initial identification.Methods BALB/c mice were immunized with the recombinant human ST2molecule, and the conventional B-cell hybridoma tech n o l ogy was used to prepare the an t i-ST2monoclonal an t ibodies(m A bs).Their application in western blotting,immunohistochemistry,and flow cytometry were evaluated.The sandwich ELISA detecting soluble ST2was established to test the serum levels of ST2in patients with heat stroke.And the ST2luciferase reporter gene detection system was established to detect their neutralization activity.Results Thirty-eight hybridoma cell lines secreting mouse anti-human ST2mAb were obtained and named from XA325.1to XA325.38.Preliminary screening and identification of them showed that they can be used to identify the purified recombinant ST2proteins and cellular expressed ST2using western blotting and immunohistochemistry.Two of them can be used for flow cytometry to identify the exogenously transfected ST2 molecule on the cell ing XA325.16mAb coating,combined with XA325.5-labeled biotin,an ELISA kit detecting soluble ST2in serum was established.It was found that the serum levels of ST2in patie n ts with heat stroke in c reased significantly.Moreover,XA325.5was found with neutralizing activity which can block the biological effect of IL-33.Conclusion A set of mouse an t i-huma n ST2mAbs was prepared,which can be used in a variety of immuno l ogical detecti o n tech n iq u es. Besides,XA325.5neutralizing antibody has a potential value in clinical application.［Key words］suppression of tumorigenicity2(ST2)；monoclonal antibody(mAb)；neutralizing antibody；immunological detection tech n ique收稿日期：2021-06-23；接受日期：2021-10-07基金项目：国家自然科学基金(81871258)；后勤保障部项目(18QNP026)作者简介：马菁昌(1996-),男，山东淄博人，硕士研究生Tel：187****6895；E-mail:********************.cn*通讯作者，庄然,E-mail:fmmuzhr@11期马菁昌，等.小鼠抗人肿瘤抑制素2(ST2)单克隆抗体的制备及应用1027肿瘤抑制素2(suppression of tumorigenicity2,ST2),是白细胞介素33(interleukin-33,IL-33)的特异性受体，主要表达于肥大细胞、活化的2型辅助T(T helper type2,Th2)细胞、巨噬细胞和心肌细胞等[1-2]o ST2具有两种亚型：一种是跨膜型ST2即ST2配体(ST2ligand,ST2L),被IL-33激活后，增强肥大细胞、Th2细胞及2型固有淋巴细胞的功能；另一种是可溶型ST2(soluble ST2,sST2),其作为“诱骗受体”，竞争性结合游离的IL-33,阻断IL-33/ST2L 信号转导3)。
心肌梗死(MI)小鼠模型具体方法及步骤
心肌梗死(MI)小鼠模型具体方法及步骤原型物种人来源结扎左冠状动脉前降支（LAD）法致心梗模式动物品系SPF级Balb/c小鼠，雄性，周龄为6w~8w，体重为23g~27g。
实验分组实验分三组：模型组（10只），对照组（10只），空白组（10只）。
实验周期0h、3h、6h、12h、24h、72h建模方法1. 3%戊巴比妥钠80mg/kg腹腔注射麻醉，用小鼠剃毛器剃除小鼠胸部及腋下毛发（充分暴露手术区），用碘酒和75％乙醇手术区消毒。
2.气管插管：麻醉后，夹趾检测无反应即可进行MI手术。
打开外置光源、显微镜开关，打开呼吸机，设置好各参数（呼吸频率110bpm），将气管插管沿声门插入气管，取下小鼠接上呼吸机，观察小鼠呼吸状况，胸廓起伏与呼吸机频率一致表示插管成功，即可进行MI手术。
3.小鼠采用右侧卧位，用眼科剪在左前肢腋下，用显微剪于三、四肋间打开胸腔充分暴露心脏，显微直镊轻轻夹起少量心包并于左心耳下撕开少许心包，充分暴露左冠状动脉前降支（LAD）或所在区域。
4. 结扎冠状动脉：于显微镜下找到LAD走向或可能所在位置,持针器持取7-0带针缝合线，于左心耳下缘2mm处进针，缝线穿过LAD，以完全阻断LAD 血流。
5. 关胸：结扎完成后，6-0缝线完全缝合胸腔开口（保证无缝隙、无错位）关闭胸腔，由内向外逐层缝合各层肌肉和皮肤。
6.术后管理：术后密切关注小鼠状态，有无呼吸异常等。
待小鼠自然苏醒后将小鼠从呼吸机上取下并取下气管插管，正常饲养。
模型评价1.心脏功能评价由Laplace定理可知：S=Pr/2h，P为心室内压，r为心腔内径，h为心壁厚度。
在心脏压力负荷过重的情况下，为适应心脏做功增加，室壁厚度增加，左室室壁应力增加，提高心脏收缩功能起到早期代偿的机制；但持续的压力超负荷，可促进心肌肥厚，导致心肌细胞的坏死及凋亡，心脏的收缩和/或舒张功能受到损害，最终发展为慢性心力衰竭甚或心源性猝死。
可通过超声或血流动力学检测来评价心功能。
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法
分离小鼠骨髓间充质干细胞的方法一、分离方法说明及图例A.Ⅰ.取新鲜抗凝血液或脐带血与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；Ⅱ.取新鲜抗凝骨髓，加入一份细胞洗涤液（Cat#：2010X1118），混匀后以400g（约1500转/分）离心5分钟，弃去上清。
沉淀与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混合，37℃反应5-10分钟（5ml以下样本反应5分钟，5ml以上样本反应10分钟）；B.加入为步骤A中所得混合液1/2体积的全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）混匀20℃-30℃自然沉降20-30分钟，吸取上清备用；C.向步骤B中所得上清液中加入为其一倍以上体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）混匀，以500g（约1800转/分）离心15分钟（半径15cm水平转子），弃去上清保留沉淀细胞；D.向细胞沉淀中加入全血及组织稀释液（Cat#：2010C1119）调整细胞浓度为2×108—1×109个/ml，小心叠加于细胞分离液之液面上（混合液：分离液=2:1）；（本实验采用天津灏洋TBD生物实验室的分离液）E.以400g（约1500转/分）离心20分钟（半径15cm水平转子）；第三层；为透明分离液层。
第四层；为极少数红细胞层。
收集第二层细胞放入约为其5-10倍体积的细胞洗涤液（Cat#：2010X1118）中，充分混匀后以500g（约1800转/分）离心1 5分钟。
沉淀经反复洗涤2次既得所需干细胞。
F.为获得纯度更高的干细胞，在步骤E中离心完成后可吸取第二层干细胞层再与羟乙基淀粉550（Cat#：HES-TBD550）按1:1比例混匀，20℃-30℃自然沉降20-30分钟，收集上清加入细胞洗涤液500g（约1800转/分）离心15分钟。
丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用
［文章编号］ １６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０６－１１２９－０６［收稿日期］ ２０１２－０５－０２［基金项目］ 河北省自然科学基金资助课题（Ｈ２０１２４０１０３０）［作者简介］ 甄永占（１９７０－），女，河北省唐山市人，副教授，医学博士，主要从事肿瘤分子药理学研究。
［通信作者］ 甄永占（Ｔｅｌ：０３１５－３７２５７５４，Ｅ－ｍａｉｌ：ｙｏｎｇｚｈａｎｚｈｅｎ＠１２６．ｃｏｍ）丝裂原活化蛋白激酶在力达霉素抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用甄永占１，章广玲１，赵毓芳１，闫 丰２，刘学军２，吕翠平１，徐爱军１（１．河北联合大学基础医学院组织学与胚胎学教研室，河北唐山０６３０００；２．河北联合大学附属医院肿瘤科，河北唐山０６３０００）［摘 要］ 目的：研究力达霉素（ＬＤＭ）对鼠骨髓瘤细胞丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫｓ）信号传导通路的影响及ＭＡＰＫｓ在ＬＤＭ抑制鼠骨髓瘤细胞增殖和诱导凋亡中的作用，为ＬＤＭ治疗人多发性骨髓瘤的研究提供依据。
方法：选取处于对数生长期鼠骨髓瘤细胞株ＳＰ２／０，随机分为空白对照组、４种不同浓度ＬＤＭ组，采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ方法检测各组细胞４８ｈ后ＭＡＰＫ家族的三个主要成员ｃ－Ｊｕｎ氨基末端激酶（ＪＮＫ）、细胞外信号调节激酶（ＥＲＫ）和ｐ３８ＭＡＰＫ的表达水平。
选取处于对数生长期ＳＰ２／０，随机分为对照组、ＬＤＭ组、ＳＰ６００１２５组（ＪＮＫ抑制剂）、ＳＢ２０３５８０组（ｐ３８抑制剂）、Ｕ０１２６组（ＥＲＫ抑制剂）、ＬＤＭ＋ＳＰ６００１２５组、ＬＤＭ＋ＳＢ２０３５８０组和ＬＤＭ＋Ｕ０１２６组，采用ＭＴＳ法和流式细胞术分别检测各组细胞增殖和凋亡情况。
结果：细胞培养４８ｈ后，不同浓度ＬＤＭ组ＪＮＫ、ＥＲＫ和ｐ３８ＭＡＰＫ的表达水平高于空白对照组（Ｐ＜０．０５）；各抑制剂组细胞增殖率和细胞凋亡率与空白对照组比较差异无统计学意义（Ｐ＞０．０５），即对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均不明显；但ＬＤＭ＋ＳＰ６００１２５组、ＬＤＭ＋ＳＢ２０３５８０组ＬＤＭ对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用均降低（Ｐ＜０．０５），而ＬＤＭ＋Ｕ０１２６组ＬＤＭ对细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用则增强（Ｐ＜０．０５）。
小鼠癌症检测实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 掌握小鼠癌症模型建立的方法；2. 熟悉小鼠癌症检测的相关技术；3. 分析小鼠癌症模型的病理特征，为癌症的早期诊断和治疗提供依据。
二、实验原理癌症是一种常见的恶性肿瘤，其发生与基因突变、DNA损伤修复、细胞周期调控等多种因素有关。
本实验采用化学物质诱导小鼠建立癌症模型，通过观察小鼠的病理变化，检测相关肿瘤标志物，以评估癌症的发生和进展。
三、实验材料1. 实验动物：C57BL/6小鼠；2. 试剂：苯并芘（BaP）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、细胞角蛋白19（CK19）抗体、免疫组化试剂盒；3. 仪器：显微镜、凝胶成像系统、酶标仪等。
四、实验方法1. 建立小鼠癌症模型（1）将C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组，每组10只；（2）实验组小鼠每天给予苯并芘（BaP）溶液灌胃，对照组给予等体积生理盐水；（3）连续灌胃30天后，观察小鼠的生存状态，选取癌症发生的小鼠进行后续实验。
2. 小鼠病理学检测（1）取实验组小鼠的肿瘤组织，进行石蜡包埋、切片；（2）利用显微镜观察肿瘤组织的形态学变化；（3）利用免疫组化技术检测肿瘤组织中TNF-α和CK19的表达情况。
3. 肿瘤标志物检测（1）收集实验组小鼠的血清，进行肿瘤标志物检测；（2）利用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测血清中TNF-α和CK19的含量。
五、实验结果1. 小鼠病理学检测结果显微镜观察发现，实验组小鼠的肿瘤组织呈现出明显的异型性、浸润性生长，与对照组相比，实验组小鼠的肿瘤组织具有更高的肿瘤分期。
2. 免疫组化检测结果实验组小鼠的肿瘤组织中TNF-α和CK19的表达水平均显著高于对照组，提示TNF-α和CK19可能参与小鼠癌症的发生和发展。
3. 肿瘤标志物检测结果ELISA检测结果显示，实验组小鼠的血清中TNF-α和CK19含量均显著高于对照组，提示TNF-α和CK19可作为小鼠癌症的早期诊断指标。
六、实验讨论本实验成功建立了小鼠癌症模型，并通过病理学、免疫组化和肿瘤标志物检测等方法，证实了TNF-α和CK19在癌症发生和发展过程中的重要作用。
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小鼠心肌组织裂解上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细
胞凋亡
作者：王玮，张文艳，吴建军，类延花，金晶，方草晖，胡勇，王
明丽
【关键词】心肌上清液
Apoptosis of mouse myeloma Sp2/0 cells induced by supernatant
of mouse cardiac muscle lysate
【Abstract】 AIM: To study the roles of mouse cardiac muscle
lysate supernatant in inducing the apoptosis of mouse myeloma Sp2/0 cells. METHODS: Various concentrations (1∶6, 1∶12, 1∶24) of mouse cardiac muscle lysate supernatant and cyclophosphamide were added into the Sp2/0 cell culture wells. After 24 h, microscope was used to observe the morphological changes of Sp2/0 cells and
apoptosis rate was determined by flow cytometry after 48 h. Morphological changes of Sp2/0 cells cocultured with mouse cardiac muscle cells were observed after 10 h. The apoptosis of Sp2/0, Hela, Hep2 and Ver o cells was induced with various concentrations (1∶5,
1∶10, 1∶20 and 1∶40) of mouse cardiac muscle lysate supernatant, liver lysate supernatant, thymus lysate supernatant and cyclophosphamide, and then the difference of apoptotic rate among
them was compared. RESULTS: Mouse cardiac muscle lysate supernatant could induce the apoptosis of the Sp2/0 cells and the apoptotic rate increased in a concentrationdependent manner, but
there was no difference between mouse cardiac muscle lysate supernatant group and cyclophosphamide group. After a 10hour
coculture with mouse cardiac muscle cell lysate, the apoptosis of a few Sp2/0 cells was seen. The mouse cardiac muscle lysate supernatant, liver lysate supernatant and thymus lysate supernatant could all induce apoptosis of the Sp2/0, HeLa, Hep2 and Vero cells. But the effect of the mouse cardiac muscle lysate supernatant was more
obvious and permanent. CONCLUSION: The mouse cardiac muscle lysate supernatant can significantly induce apoptosis of mouse myeloma Sp2/0 cells.
【Keywords】 cardiac muscle lysate supernatant; apoptosis; mouse myeloma Sp2/0 cell
【摘要】目的: 研究小鼠心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用. 方法：在Sp2/0细胞培养孔中，分别加入不同稀释度(1∶6, 1∶12,
1∶24)的小鼠心肌上清液和环磷酰胺， 24 h后镜下观察细胞形态，并于48 h
后流式细胞仪检测凋亡细胞的比率；同时，Sp2/0细胞和小鼠心肌细胞共培
养，10 h后观察Sp2/0细胞形态学变化；并用不同稀释度（1∶5, 1∶10,
1∶20, 1∶40）小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液及环
磷酰胺诱导Sp2/0, HeLa, Hep2和Vero细胞凋亡，并比较其差异. 结果: 不
同稀释度的心肌裂解上清液均可诱导Sp2/0细胞的凋亡，尤以高稀释度更明显；小鼠心肌细胞与Sp2/0细胞共培养10 h后,少部分Sp2/0细胞出现凋亡；小鼠心肌裂解上清液、肝脏裂解上清液、胸腺裂解上清液均可引起Sp2/0, HeLa, Hep2和Vero细胞发生凋亡，但小鼠心肌裂解上清液作用明显，且作用
时间持久. 结论: 小鼠心肌组织裂解上清液具有明显诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡的作用.
【关键词】心肌上清液；细胞凋亡；小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞
0引言
细胞凋亡与肿瘤的发生发展密切相关，已成为研究热点［1］，许多预防治疗肿瘤的药物、细胞因子等抑制肿瘤细胞生长的机制之一是诱导肿瘤细胞凋亡. 我们从细胞凋亡的角度探讨心肌上清液诱导小鼠骨髓瘤Sp2/0细胞凋亡.
1材料和方法
1.1材料
Balb/c 20只8周龄小鼠，雌雄各半，体质量约250 g，由安徽安科生物工程股份有限公司动物室提供；环磷酰胺(2 g/L)由湖北科利药业股份有限公司生产; DMEM液由美国生命技术公司生产；胎牛血清由杭州四季青公司提供；流式细胞仪（日本产）；Leica荧光显微镜(德国Leica公司)；CO2温箱(美国产)；紫外分光光度计（上海产）. Sp2/0, HeLa, Hep2和Vero细胞株均来源于中国预防科学院病毒所，均以100 mL/L胎牛血清＋DMEM液为培养液，按本室
常规方法在CO2温箱中培养；乳鼠心肌细胞培养：取Balb/c新生红皮乳鼠20只，在无菌操作下取出心脏，用PBS冲洗3遍，以眼科剪剪成1 mm3碎块，洗涤，后加2.5 g/L胰蛋白酶液37℃消化20 min，吹打3次，吸取上层细胞悬液，以同样的方法消化3次，直到组织块完全消化为止，以1500 r/m。