重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性

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转基因红花中角质细胞生长因子KGF1的表达

６．ＢＡ＋０．５ｍｇ・Ｌ一１１．２．７
性对照。用ＫｐｎｌｌＢｇｌＩＩ酶切总ＤＮＡ，并以ＰＣＲ扩增获得的ＫＧＦ－１片段为探针．４２。Ｃ杂交过夜，显色，分析杂交信号。
ＲＴ．ＰＣＲ检测
取潮霉素抗性苗及ＰＣＲ多次鉴定为阳性植株的新鲜叶片约２００ｍｇ，采用改进的异硫氰酸胍法（１ｉＰＴｄｚｏｌ法）提取红花总ＲＮＡ。总ＲＮＡ样品浓度用ＮａｎｏＤｒｏｐ２０００超微量分光光度计（购自Ｔｈｅｒｍｏ公司）测定。将ＲＮＡ反转录成ｃＤＮＡ（详见Ｒｅｖｅｒｓｅ
Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅ
ｃｕｔｔｉｎｇｓｉｔｅＰ１Ｋｐｎｌ
ＤＮＡ连接酶、ＤＮＡＭａｒｋｅｒ和
ｅ吣瓯ＧＣＡＡＣＧⅪ瓯Ｇ吣
ＴＣＣＡＰ２
Ｐｌｕｓ等均购自日本ＴａＫａＲａ公司。ＤＮＡＧｅＩＫｉｔ和质粒小提试剂盒等购自北京艾德莱
Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ
ＡＧＴＡＧＡＴＣＴＴＣⅡ：△ＡＧ
ＴＡＡＴＡＧＣＣＡＴｌ．ＧＧ
ｐＬ。ＰＣＲ反应程
序为：９４。Ｃ预变性５分钟：９４。Ｃ变性４５秒，６４。Ｃ退火４５秒，７２。Ｃ延伸４５秒，３０个循环；７２。Ｃ延伸１０分钟。ＰＣＲ扩增产物经１％核酸琼脂糖凝胶电泳后，在ＤＮＲ
ＢｉｏＩｍａｇｉｎｇ
１６。Ｃ过夜连
Ｓｙｓｔｅｍｓ（购自以色歹ＩＪＤＮＲ成像系统有
接。连接产物采用热激法转化Ｅ裂解法提取质粒（Ｓａｍｂｒｏｏｋ
ｅｔ
ａ１．，２００９），其药代动力学与药效学实验
结果与美国利用大肠杆菌表达胰岛素基因生产的重组ＤＮＡ人胰岛素基本相同。２０１０年，ＳｅｍｂｉｏＳｙｓ公司向美国ＦＤＡ提出做川期临床的申请。通过转基因红花生产胰岛素工艺简单、成本低且产量高，可为糖尿病患者提供廉价的胰岛素来源（徐铮奎，２０１０）。

碱性成纤维细胞生长因子

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）神经再生1975年Gospodarowicz首先报道运用理化方法从牛的大脑和垂体中分离纯化出碱性成纤维细胞生长因子（Basic Fibroblast Growth Factor，bFGF）。

80年代，bFGF的氨基酸序列得到澄清。

90年代，国内外相继运用基因工程方法成功获得重组bFGF，有力推动了关于bFGF的研究。

系列研究证实，bFGF能刺激和调节血管内皮细胞、上皮细胞、成肌细胞、成骨细胞和神经胶质细胞等多种起源于中胚层、神经外胚层的细胞分化增殖，在胚胎发育、组织愈合中起重要作用。

神经方面，关于bFGF的研究集中在中枢神经，发现其神经活性广泛，能保护神经元，促进突起增生，提示在周围神经再生方面的研究意义。

现参考近年来bFGF与神经再生的相关文献作一综述。

一、内源性bFGF正常情况下的表达和神经损伤后的变化(一)中枢神经：正常情况下，内源性bFGF以微量分布于脑、垂体和下丘脑等器官，已证实星形胶质细胞、垂体滤泡及部分神经细胞能分泌bFGF，在海马皮质、中脑、纹状体和小脑颗粒细胞均有其受体。

神经损伤后，早期就能观察到内源性bFGF表达增多，是神经损伤后早期反应之一。

叶诸榕用原代培养的大鼠大脑星形胶质细胞作成机械损伤模型，观察发现bFGF在损伤后2小时开始表达，12小时达高峰，2天后开始回落，星形胶质细胞胞体肥大，突起粗大。

崔建忠运用Northern杂交、组织学方法动态观察大鼠颅脑弥漫性损伤后bFGF的基因表达和组织学改变，结果发现轻度损伤后12小时，重度损伤后4小时，bFGF基因表达增加，均于第3天达到高峰。

Grothe〔1〕研究脊髓神经节bFGF及其Ⅰ型受体（FGFR-1)的表达时发现，正常情况下，bFGF和FGFR-1的mRNA在脊神经节均有表达，原位杂交显示星形胶质细胞产生bFGF，而感觉神经元表达FGFR-1，提示旁分泌作用；坐骨神经损伤后，L4～6感觉神经元bFGF的表达在1天内即上调，7天达高峰，28天后恢复，FGFR-1的变化则不明显。

白介2研究进展（2）

白细胞介素－ 2 的研究进展白细胞介素-2 （interleukin-2 ，IL-2 ）是T 淋巴细胞所产生的一类重要的淋巴因子，具有广泛的生物学活性，不仅可以促进T 、B 淋巴细胞、NK 细胞、单核细胞的分裂增殖，还可以促进其它细胞因子如干扰素等的分泌，增强抗原提呈作用，是调节机体免疫的重要细胞因子，在抗肿瘤、抗毒素及感染性疾病的治疗中也具有重要用自白细胞介素-2 发现以来，许多学者对其展开研究，对白细胞介素-2 的结构、分泌、调节、种属特异性、生物学活性、受体等方面有了较深的认识，本文就白细胞介素－2 的研究进展作一综述IL-2 的发现及命名●当时分别称之为“ 淋巴细胞丝裂原因子” （ lymphocyte mitogenicfactor ）、“ 致母细胞性因子” （ blastogenic factor ）、“ T 细胞激活因子” （ T cell activating factor ）。

1976 年， Morgan等发现，将 T 细胞上世纪60 年代，一些学者发现多种来源于植物的外源凝集素（lectin ）可在体外刺激淋巴细胞转化及增殖。

这些外源凝集素如植物血凝素（Phytohemagglutinin ，PHA ），刀豆蛋白A （Concanavalin A ，Con A ）对淋巴细胞起着有丝分裂原的作用。

在丝裂原刺激的淋巴细胞培养上清中具有可溶性丝裂原因子1◆丝裂原（ PHA ）刺激的人外周血淋巴细胞培养上清加入体外培养的人白血病细胞或骨髓细胞之后，该上清可导致上述细胞的体外增殖，作者当时将种上清称为“ 条件培养基” （condition medium ，CM ）。

表型分析及功能测定均证实，CM 诱导生长的细胞为正常T 细胞群体。

Gills 和Smith3等利用ConA 刺激的大鼠及小鼠CM 先后在体外建立了小鼠细胞毒性T 细胞（Cytotoxic TLymphocyte ，CTL ）和辅助性T 细胞（helpT cell ，Th ）克隆。

表皮生长因子研究进展

表皮生长因子对动物胃肠道发育影响的研究进展摘要：1962年，Cohen等首次发现了表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)，它是一种广泛存在于人或其它动物体内的由53个氨基酸组成小分子多肽。

EGF通过与细胞膜上的表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor ，EGFR)结合，共同调控细胞分化、分裂和增殖等重要的生物学过程。

关键词：EGF；EGFR；胃肠道1 EGF的发现1962年，美国纳什维尔市范德比特大学医学院Steanley-Cohen等首次在小鼠颌下腺中发现了一种小分子蛋白，将其注入新生鼠，可使之眼脸早开、牙齿早萌、体重减轻和毛发生长延迟，将其加入培养液中培养表皮细胞时，发现其可直接促进表皮细胞的生长与分化，因此将其命名为表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF) [1]。

1975年Gregor从人尿中提取出人表皮生长因子（hEGF），由于其可抑制胃酸分泌，又称抑胃素[2]。

迄今为止，发现了许多与EGF同源的蛋白，包括EGF家族成员与EGF结构相似的蛋白，后者能结合EGF受体、表现出相似的生物学功能。

EGF家族包括TGF-α、HB-EGF（heparin-binding EGF-like growth factor）、AR(amphiregulin)、NRG(neuroregulin)、EPR(epiregulin)、HRG(heregulin)、BTC(Betacellulin)。

现在还发现，在许多蛋白质分子中存在着类似EGF的结构域，即大小在50个氨基酸残基左右，内部具有完全保守的3对二硫键[3]。

这类分子从低等动物到哺乳动物均有发现。

凝血系统中的凝血因子Ⅵ、Ⅸ、Ⅹ和ⅩⅡ中都含有3个典型的类EGF结构域[4,5]。

2 EGF的化学结构及分布人EGF是由53个氨基酸组成的多肽，链内含有3对二硫键，定位于4号染色体长臂。

表皮生长因子

结构
❖ hEGF（ homo sapien，EGF ,人EGF）和 mEGF(mouse EGF，鼠EGF)为具有53个氨基酸残基、3个二硫键的单链多肽。二硫键为其生物活性所必需，活性中心位于48— 53个氨基酸残基之间。一级结构不含丙氨酸、苯丙氨酸和赖氨酸；
❖ 二级结构排列紧密，稳定性强，相对分子质量为6 045，等电点为4．6。
表皮生长因子 epidermal growth
factor, EGF
SWIBC
❖ 1962年美国柯恩教授(Stanley Cohen)和意大利李维蒙塔西妮教授(Rita Levi-Montalcini)在小老鼠的頷下
腺發現了一种可以促使新生小鼠眼见早开，牙齿早
萌的活性成分。这一活性成分在加入培养皮肤表皮
❖ 化妆品：表皮生长因子具有延缓皮肤细胞衰老、促使人皮细胞的修复和生长的作用，使皮肤光滑丰润。
EGF的加入化妆品方法
❖ 是采用微量稀释法，先将叩级的具有生物活性的hEGF干冻粉，在室温下用蒸馏水稀释到 10PPm备用，面制时，按配方用量在5060C时加入水相。
❖ 科学证实EGF具有如下作用： 1、修复表皮促进受损表皮的修复与再生，对烧伤、烫伤、光疗、等多种表皮创伤的修复的功效十分显著。在医学上还用在修复肠胃道、肝脏和眼角膜的损伤等。 2、抗皱除皱 EGF能促进表皮细胞组织内多种细胞的生长分裂，使表皮细胞变得饱满；它还可以促使胶原蛋白生长能力，修复老化断裂的胶原弹性纤维。胶原蛋白丰富，则皮肤显得饱满、有弹性，皱纹自然就减少了，使得肌肤恢复年轻活力状态。 3、收缩毛孔促进皮下胶原蛋白合成，增加皮肤弹性，从而促使毛孔收缩，并使肌肤具有青春活力。 4、淡化色斑 EGF通过改变皮肤中新老细胞的比例，，同时可降低了皮肤中黑色素和有色细胞含量，使面部的色斑逐渐淡化、消失。 5、滋润肌肤 EGF能促进细胞外透明质酸、粘多糖等合成和分泌，维持真皮内的水分，使表皮内角质层水分保持能力增强，让肌肤滋润散发活力。 EGF护肤品作为新一代护肤品，在市场上开始崭露头角。但是优质的 EGF护肤品必须符合一些特定的条件，其中最重要的一点是：它不仅应当含有EGF，而且要让EGF真正产生持久效果。

人表皮细胞生长因子及其在皮肤科中的应用

人表皮细胞生长因子及其在皮肤科中的应用张秀丽;张理涛【摘要】人表皮生长因子(hEGF)是一种广泛存在于人类皮肤细胞的小分子蛋白,是使用重组技术人工合成的可促进多类细胞生长的多肽类物质,广泛用于皮肤科和美容领域,综述人表皮细胞生长因子的简介、生物学作用、临床应用进展等.【期刊名称】《中国中西医结合皮肤性病学杂志》【年(卷),期】2016(015)005【总页数】4页(P318-321)【关键词】人表皮生长因子;皮肤;临床;应用【作者】张秀丽;张理涛【作者单位】天津医学高等专科学校,天津300222;天津市中医药研究院附属医院,天津300120【正文语种】中文【中图分类】R622.1表皮生长因子（Epidermal growth factor，EGF）是一种体内活性物质，最初由Cohen[1]从1962年首次提取和分离的颌下腺小鼠中发现，在1975年，人们发现了在人的尿液中有表皮生长因子EGF的存在。

1979年，Carpenter等[2]报道了EGF的氨基酸残基组成等。

同年，Gregory发现了人类尿液中的胃抑素可以抑制胃酸分泌，实际上与EGF的物质相同。

1986年，Cohen由于在EGF的突出贡献获得了诺贝尔医学与生理学奖[3]。

人表皮生长因子（Humanepidermalgrowthfactor，hEGF）是一种广泛存在于人类皮肤细胞的小分子蛋白质，分子质量为6．2 ku，由53个氨基酸活性肽。

hEGF 是利用重组技术合成的多肽物质，可以促进多种细胞生长，其结构和生物活性天然产物高度一致[4]。

hEGF作为强大的细胞分裂促进因子，其生物效应包括：①活化糖酵解作用以增加呼吸代谢，激活磷酸果糖激酶；②促进低分子质量化合物从细胞外到细胞内，增加细胞营养；③活化RNA和蛋白质合成；④刺激细胞外大分子合成，如透明质酸和糖蛋白；⑤促进细胞增殖，促进身体的一些材料如果酸、前列腺素的合成等；⑥促进DNA合成[5]。

人角质细胞生长因子-1在水稻中的表达

ｅｘｐｒｓｅｎｔｏｔａｇｅｃｒｃｓｅｓｄｉｗｒｎｓｎｉｉｅ．
Ｋｅｒｓｋｒｔｎｃｔｒｗｔａｔｒ１；ｒｃｅｅｉｒｎｆｒｔｏ；ｅｅｅｐｅｓｏｙｗｏｄ：ｅａｉｏｙｅｇｏｈｆｃｏ－ｉｅｇｎｔｔａｓｏｍａｉｎｇｎｘｒｓｉｎｃ
１引言
角质细胞生长因子（ｅｔｏｙｒｗｈａｔ，Ｇ）ＫｒｉｃｔｇｔｆｏＫＦ是成纤维细胞生长因子（ｂｏｌｔｒｔｆｔｓａｎｅｏｃｒｉｆｒｂｓｇｏｈａｏ，ａｗｃｒ
ＦＦ）超家族中的成员，目前在人类组织中分离到两种角质细胞生长因子，ＫＦ１（ＧｓＧ－亦称成ＦＦ７Ｇ一）和ＫＦ２（Ｇ．亦称成ＦＦｌ）Ｇ — ，两种蛋白因子间具有５％的同源性【研究表明两种细胞因子具有很多重要的生ｏ７ＪＪ．物学功能，参与并调控多种组织和器官的形成和分化【Ｊ２，同时在组织的损伤修复中发ｊｎ３３０，ｈｎ）ｎｖｒｉ，ｈｎｚｏ，ｕｉ６００Ｃｉａｔａ
ＡｂｔａｔＫｅａｉｏｙｅｇｏｔａｔｒ（ｓｒｃ：ｒｔｃｔｒｗｈｆｃｏＫＧＦｌｓａｍｐｒａｔｒｌｉｔｅｔｓｅｄｍａｅｒｐｉＰａｔｅｌｎ）ｐａｎｉｏｔｎｏｅｎｈｉｕａｇｅａｒｌｎｌｙｓ．ｃ
ｂｏｅｃｏｓａｌｗｏｔａｄｓｆｒｔｉｒｄｃｉｎｓｓｅｉｒａｔｒｉｏｃｓｎａｅｐｏｅｎｐｏｕｔｙｔｍ．ＨｕｏｍａｎＫＧＦ１ｇｎｓｔａｓｏｍｅｎｏｒｃｙ－ｅｅｗａｒｎｆｒｄｉｔｉｅｂＡｇｏａｔｒｕｍｅｉｔｄｍｅｈｄａｄａｔｔｌｏ８ｐｔｔｅｔａｓｅｉｉｅｐａｔｒｂｉｔｄＴｈｅｕｔｆｒｂｃｅｉｍ— ｄａｅｔｏｎｏａｆ３ｕａｉｒｎｇｎｃｒｃｌｎｓｗｅｅｏａｎｅ．ｅｒｓｌｓｏｖｓｕｈｒｌｔｉｇａｄＲＴＰｏｔｅｎｂｏｔｎｎ－ＣＲｓａｈｗｅｈｔＫＧＦ－ｇｎｓｉｔｇａｅｎｏｔｅｒｃｅｏｎａｓｙｓｏｄｔａ・ｅｅｗａｎｅｒｔｄｉｔｈｉｅｇｎｍｅａｄＫＧＦ・１－１ｇｎｓｔａｓｒｂｄｉａｔｏｈｕａｉｅｔａｓｏｍｅｉｅ．ｅｔｒｌｔｉｇｒｓｌｓｓｏｄｔａｅｅｗａｒｎｃｉｅｎｐｒｆｔｅｐｔｔｖｒｎｆｒｄｒｃｓＷｓｅｎｂｏｔｎｅｕｔｈｗｅｈｔＫＧＦ１ｗａ一ｓ

重组人表皮生长因子凝胶对点阵激光术后皮肤修复作用的临床评价

重组人表皮生长因子凝胶对点阵激光术后皮肤修复作用的临床评价卢寅【摘要】目的:探讨重组人表皮生长因子凝胶对点阵激光术后皮肤修复的临床效果.方法:选取某院皮肤科行点阵超脉冲CO2激光治疗皮肤问题的患者100人,根据患者接受治疗的方法不同将患者分为点阵超脉冲CO2激光治疗组(对照组)和点阵超脉冲CO2激光联合重组人表皮生长因子治疗组(观察组).于激光治疗开始前、结束后第1,3,7天对治疗区域进行拍照,对治疗部位的红斑指数及经皮水分丢失进行测定,对比2组患者治疗后的相关副反应发生情况、结痂时间、创面愈合时间及结痂脱落时间,比较2组患者经过治疗后的总有效率.结果:观察组相较于对照组治疗总有效率显著升高(P<0.05);治疗后的结痂时间、创面愈合时间及结痂脱落时间观察组较对照组低;同对照组比较,观察组患者的相关副反应如皮肤红肿、水疱、色素沉着及复发率差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的EI值于治疗后第1,3和第7天较对照组明显下降(P<0.05),经皮水分丢失(TEWL)经过治疗后在第1及第7天观察组低于对照组,2组比较,差异有统计学意义(P<0.05,0.01).结论:联合使用重组人表皮生长因子可以缓解激光术后部分不良症状,重组人表皮生长因子可以作为点阵激光术后的重要辅助治疗手段之一,适合在临床上进行推广应用.【期刊名称】《淮海医药》【年(卷),期】2017(035)006【总页数】4页(P633-636)【关键词】重组人表皮生长因子;点阵超脉冲CO2激光治疗;创面愈合【作者】卢寅【作者单位】江苏省南京市浦口区中心医院皮肤科,211800【正文语种】中文【中图分类】R75随着医疗技术的进步整形技术经历了从传统皮肤磨削术至整形外科手术到目前的微创手术的发展历程，虽然目前点阵超脉冲CO2激光等新的治疗手段已研发及应用于临床使这些皮肤性的问题得到了更积极更有价值的治疗，并在显著改善患者术后不良反应的同时，也减少了患者休息时间和经济负担[1-3]。

重组人表皮生长因子iii型

重组人表皮生长因子iii型
表皮生长因子III型（Epidermal Growth Factor III, EGF III）是一种蛋白质，它与细胞生长、分化和组织修复等生物学过程密切相关。

在一些情况下，可能存在对表皮生长因子III型的基因工程或蛋白重组的研究。

重组表皮生长因子III型通常是通过基因工程技术来制备的，包括以下步骤：
1.基因克隆：从源生物体（通常是人体细胞）中提取表
皮生长因子III型基因，并进行克隆。

这个基因编码了表皮生长
因子III型的氨基酸序列。

2.表达载体构建：将表皮生长因子III型基因插入表达载
体中，以便在宿主细胞中进行表达。

这个表达载体通常包含有
助于基因表达的调控元件，如启动子、激活子等。

3.细胞转染：将构建好的表达载体导入宿主细胞中，通
常采用细胞转染技术，使细胞能够表达表皮生长因子III型基因。

4.蛋白表达：在宿主细胞内，表皮生长因子III型基因被
转录和翻译成蛋白质，即重组表皮生长因子III型。

5.纯化与验证：通过蛋白质纯化技术，将重组表皮生长
因子III型从细胞提取物中纯化出来。

然后通过各种实验手段验
证其结构和功能的一致性。

这样得到的重组表皮生长因子III型可以用于科研、医药研发等领域。

在医学上，表皮生长因子III型可能用于促进伤口愈合、治疗皮肤疾病等。

需要注意的是，这些研究和应用必须符合伦理规范和法规。

重组人表皮生长因子联合舒宁乳膏对黄褐斑皮损及皮肤屏障的修复作用

fibroblasts cultured within contracted collagen lattices[J].J Dermatol Sci, 2008,51(1):70-73.[29]Wang P,Zhang L,Lei S,et tent Demodex infection contributesto intense pulsed light aggravated rosacea: cases serial[J].J Cosmet Laser Ther,2019,21(3):163-165.[30]Kawana S,Ochiai H,Tachihara R.Objective evaluation of theeffect of intense pulsed light on rosacea and solar lentigines by spectrophotometric analysis of skin color[J].Dermatol Surg, 2007,33(4):449-454.[31]张蕾,赵凤梅,芝佳.强脉冲光联合微波凝固治疗酒渣鼻30例疗效观察[J]. 中国激光医学杂志,2013,22(5):58-59,66.[32]刘丽红,樊昕,王聪敏,等.强脉冲光治疗痤疮印迹1 036例回顾性分析[J]. 实用皮肤病学杂志,2011,4(2):44-46.[33]Lim HS,Lee SC,Won YH,et al.The efficacy of intense pulsed lightfor treating erythematotelangiectatic rosacea is related to severity and age[J].Ann Dermatol,2014,26(4):491-495.[34]Schroeter CA,Haaf-von Below S,Neumann HA.Effective treatmentof rosacea using intense pulsed light systems[J].Dermatol Surg, 2005,31(10):1285-1289.[35]殷剑波,何俭,刘晓夏.强脉冲光治疗面部毛细血管扩张症108例疗效分析[J].中国美容医学,2014,23(11):899-901.[收稿日期]2020-03-13本文引用格式: 张剑虹,吴岚曦,周楠,等.强脉冲光治疗蠕形螨阳性玫瑰痤疮后期皮损回顾性分析[J].中国美容医学,2021,30(4):36-41.重组人表皮生长因子联合舒宁乳膏对黄褐斑皮损及皮肤屏障的修复作用唐小清，魏红（陆军军医大学第一附属医院整形科重庆 400038）[摘要]目的：观察重组人表皮生长因子(rhEGF)联合舒宁乳膏对黄褐斑皮损及皮肤屏障修复的作用。

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关键词：重组角质细胞生长因子一（ｈＧ．）２ｒＦ２；高密度培养；柱层析；转受体ＦＦ２ｍｂＫＧＲ一；
ＢＦａ３细胞株；生物活性
中图分类号：７Ｑ８
文献标志码ｉＡ
文章编号：６１５８（０１０ —１００１７ —４９２１）６１５ —７
宿主细胞中获得表达菌株．通过流加补料方式和发酵条件的控制，进行高密度培养，并通过
ＩＴＰＧ诱导获得可溶性表达的目的产物．结果表明：目的蛋白占菌体总蛋白的３．％以上；经００
阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的ｒＫＦ２纯度高于９．％．建立了利ｈＧ一９０用转受体ＦＦ２ Ⅲｂ的ＢＦＧＲ一ａ３细胞株进行ｒＫＦ２促增殖作用的活性测定方法，活性测定结ｈＧ一果呈典型的Ｓ型曲线，并在一定范围内具有剂量依赖性．
ｏＴＰＲ．ＴｅｈＣｒｄｃｅｅｉｅｔｄｉｔｐＴｔａｗｓｔｎｆｍｅｎｏＢ２（Ｅ）ｈｓｆ —ＣＲｈｎｔｅＰＲｐｏｕｔｗｒｎｒｎｏＥ３ｈｔａｒｓｒｄｉｔＬ１Ｄ３ｏｔｓｓｅＣａｏ
ｃｌｓｅｌ，ｗｈｃｗａｉｄｃｄｏｉｈｓｎｕｅｔｄｅｅｏｓｌｂｌｙｒｔｉｐｏｕｔ．Ｈｉｈｄｎｉｙｕｔｒｗａｃｎｃｅｉｖｌｐｏｕｉｉｐｏｅｎｒｄｃｓｔｇ — ｅｓｔｃｌｅｕｓｏｄｕｔｄｎｆｄｂｔｈｍｏｅｕｄｒｔｅｅｎｒｌｏｒｎｔｔｎｃｎｉｏｓＰｕｉｃｔｎｗａａｒｅｕｙｃｔｎｅｃａｇｅ。ａｃｄｎｅｈｏｔｏｆｆｍｅａｉｏｄｔｎ．ｅｏｉｒｆａｉｓｃｒｉｄｏｔｂａｉｘｈｎｅｉｏｏｃｒｍａｏｒｐｙａｄｈｐａｉｆｎｔｈｏｔｇａｈｈｏｔｇａｈｎｅｒｎａｉｃｒｍａｏｒｐｙ．ＡｎｄｔｅｅｆｃｆｒＫＧＦ一ｏｒｌｆｒｔｖｃｉｉｓｉｙｈｆｅｔｏｈ２ｎｐｏｉｅａｉｅａｔｖｔｗａｙ
ＧｅｅＣｌｎｎｏｅ，ＥｘｒｓｉｎａｄＩｓＢｉｌｇｃｌＡｃｉｉｙｏｐｅｓｏｎｔｏｏｉａｔｖｔｆ
ＫｅａｉｏｙｅＧｒｗｔｃｏ．ｒｔｎｃｔｏｈＦａｔｒ．２
ＴＩＡＮｉｓａ，ＴＨａ —ｈｎ’ ＡＮＧｕＬ。
重组人角质细胞生长因子－因的２基克隆、表达及活性
田海山，唐禄王晓杰王艳芳官丽莉李校垫，，，，
（．吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心，长春１０１；１３１８２．温州医学院药学院，江温州３５３）浙２０５
Ａｂｔａｔｓｒｃ：ＷｅｅｔｃｅｏａＲＮｒｍｕｎｅｒｏｉｕｇｆｒｂａｔｃｌｎｂａｎｄｃｘｒｔｄｔｔｌａＡｆｏｈｍａｍｂｙｎｃｌｎｂｏｌｓｅｌａｄｏｔｉｅＤＮＡｂａｓｉｓｙｍｅｎ
ｔｓｄｖａｔｎｆｒｉｇｒｃｐｏＧＦ２ｍｆｔｅＢＦｅｌ．ＷｅｃｎｔｕｔｄｇｎｎｉｅｒｇｂｃｅｉｆｅｔｉｒｓｒｎｅｅｔｒＦＲ一ｂｏｈａ３ｃｌｅａｅｓｏｓｃｅｅｅｅｇｎｅｉａｔｒｏｒｎａ
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ＷＡＧＸａｅ，ＮｉｊＷＡＧＹｎｆｇ，ＵＮＬ— ＬｉｏｋｎｏｉＮａ — ｎＧＡｉｉ，Ｉａ —ｕａｌＸ
（．ＥｇｎｅｉｅａｃｅｔｉｅｃｒｎｈｒａｅｔａｅｅｐｅｔＭｉｉｒｄｃｔｎ１ｎｉｒｇＲｓｒＣｎｒｆＢｏａｔｄＰａｍｃｕｉｌｖｌｍｎ，ｎｓｙｏＥｕａｉ，ｅｎｅｈｅｏｒｏａｃＤｏｔｆｏ
第ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ ９卷
第６期
吉林大学学报（理学版）
ＪｕｎｌｆｉｎＵｉｒｔＳｉｃｄｉ）ｏｒａｏＪｉｎｖｓｙ（ｃｎｅＥｉｏｌｅｉｅｔｎ
Ｖｏ．Ｎｏ．１４９６ＮＯ２１Ｖ０１
２１年１月０１１
摘要：从人胚肺成纤维细胞中提取总ＲＡ，利用Ｒ —Ｃ法获得人角质细胞生长因子－ＮＴＰＲ２（ＫＦ２ｃＮ并通过ＰＲ方法扩增，与原核表达载体ｐＴｃ接后转化至Ｂ２１Ｄ３ｈＧ－）ＤＡ，Ｃ再Ｅ３连Ｉ（Ｅ）
ＪｌｇｉｌｒｌＵｉｅｓｙ，Ｃｈｎｃｕ０８，ＣｉａｉｎＡｒｃｔａｎｖｒｉｉｕｕｔａｇｈｎ１１３１ｈｎ；
２ｃｏｌｈｒａｙｅｚｏｄｃｌｏｅｅＷｅｚｏ２０５ＺｅａｇＰｏｉｅＣｉ）．ＳｈｏｏＰａｍｃ，ＷｎｈｕＭｅｉｌｇ，ｎｈｕ３５３，ｈｎｒｎ，ｈｎｆａＣｌｉｆｖｃａ