上海市猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及其耐药性分析
牛羊巴氏杆菌病的诊断与防治措施
牛羊巴氏杆菌病的诊断与防治措施摘要：多杀性巴氏杆菌可引起牦牛出血性败血症，简称“牛出败”，其临床特征主要表现为发热、寒颤、流涎、咳嗽、呼吸困难、食欲废绝等，慢性经过表现为皮下组织、关节及各脏器化脓性炎症。
该病多呈散发性或地方流行性特点，主要发生在牦牛饲养集中的高寒缺氧地区，一年四季均可发生，但秋冬季节发病较多。
基于此，本篇文章对牛羊巴氏杆菌病的诊断与防治措施进行研究，以供参考。
关键词：牛羊巴氏杆菌病；诊断；防治措施引言牦牛养殖产业在当地的畜牧养殖结构中扮演着十分重要的角色。
当前基层的大部分农牧民群众都会选择牦牛养殖增加自身的经济收入，但随着养殖数量的不断增加以及养殖方式比较落后，牛群在生长过程中经常会面临各种传染性疾病的危险，其中牦牛羊巴氏杆菌病就是一种危害较为严重的常发病和高发病。
该类细菌性传染性疾病具有传染性强，发病较急的特征，可以在任何年龄阶段发生流行，其中以冬春季节发生流行率最高，常常呈地方流行或者爆发流行，一旦没有做出有效的诊断和预防，没有对患病牛做出有效的治疗，将会造成疫情迅速扩展，对一个地区的牦牛养殖业构成毁灭性的打击，影响到畜牧养殖业的安全。
作为基层的畜牧兽医人员应该对牦牛羊巴氏杆菌病的危害有所认知，在掌握牛羊巴氏杆菌病流行病学的基础上，及时发现患病病例，并做好发病养殖场的紧急隔离工作，加强疾病的有效诊断，对患病牛实时紧急治疗，确保在短时间内缓解患病牦牛的临床特征，尽量降低死亡率，为养殖户挽回重要的经济损失。
1牛羊巴氏杆菌病病原及发生原因当多杀性巴氏杆菌侵入牛体内后，就会引发巴氏杆菌疾病。
多杀性巴氏杆菌属革兰氏染色阴性菌，形状为卵圆形，多呈分散状态，不存在芽孢和鞭毛，没有运动能力。
多杀性巴氏杆菌抵抗能力不强，通常将其置于干燥环境下48～72h即可死亡；常存活于动物排泄物、分泌物和血液中，一般存活时间不超过10h。
患病牛即使死亡，体内仍携带病菌，并且病菌可持续存活30～90d，因此，养殖户要用消毒药物对病牛舍全面消杀，对病死牛进行无害化处理。
猪肺疫的中西药治疗方法
张燕芳/河南省鹤壁市淇县农业农村局 456750摘 要：猪巴氏杆菌病又名猪肺疫，是由多杀性巴氏杆菌感染引起的一种细菌性疫病，各日龄猪均可发病。
患猪肺疫的病猪临床症状以呼吸障碍为主，最急性可未表现任何症状死亡，猪病死率最高可达100%，对猪养经济可造成巨大损失。
在猪肺疫的治疗过程中，西药中的磺胺类和抗生素类药物，多种中药组方均可用于该病的治疗，且在同群猪预防性治疗也可取得较好的效果。
本文方面进行综述讨论，为猪肺疫的防控工作提供参考。
猪肺疫；巴氏杆菌；中西药；治疗；防控巴氏杆菌属的细菌在猪舍和猪呼吸道内广泛存在，在猪患其他疾病或免疫力降低时可感染猪出现以呼吸障碍为主的猪巴氏杆菌病（也叫猪肺疫）。
猪肺疫主要由多杀性巴氏杆菌感染引起，该菌可感染多种家禽家畜，也可感染人出现呼吸道症状和伤口感染。
所有日龄的猪都可感染多杀性巴氏杆菌，临床主要表现为猪出现呼吸障碍，如咳嗽、肺炎等，耐过的猪生产性能下降，免疫力低下，易患其他疾病。
猪肺疫常用的治疗药物有抗生素、清热止咳的中药组方等，临床上可单独使用西药或中药进行治疗，也可采用中西药结合的方式治疗猪肺疫且效果更佳。
接种猪巴氏杆菌疫苗，日常加强对猪巴氏杆菌的携带和传播等方面进行控制，加强猪饲养管理工作，可有效防止猪肺疫的发生和传播。
1 猪肺疫的病原多杀性巴氏杆菌是一种革兰氏染色阳性菌，呈现椭圆形，不运动，有夹膜，不会产生芽孢。
许多动物都可能感染多杀性巴氏杆菌，猪是易感的动物，任何年龄和品种的猪都能染病。
当养殖场的卫生条件和饲养管理条件差会造成猪群的整体抗病能力下降，给病原微生物的入侵提供了可能性。
猪肺疫主要通过呼吸道和消化道传染，也可能通过受伤的黏膜和皮肤传染。
该病没有明显的季节性特点，一年四季都能发生，并且呈现地方流行性的特点，在潮湿闷热和高温的环境下容易发展，有些地区呈现散发性的特点，发病之后可能迅速的扩散和蔓延，给养殖场带来很大的经济损失。
2 猪肺疫的发病原因2.1 猪肺疫的病原 猪肺疫的发病主要是由于多杀性巴氏杆菌感染引起的，该菌可存在于猪舍、猪呼吸道等，健康猪抗病能力较强不会感染该菌发病，但猪抗病能力下降时该菌可在呼吸道器官内迅速增殖引发疾病。
猪源D型产毒素多杀性巴氏杆菌毒素基因的原核表达
菌 与 支 气 管 败 血 波 氏 杆 菌 （ ｏｄ ｔ ｌ ｒｎｈｓ ｔａ， Ｂ ｒ ｅ ｌ ｂｏｃｉ ｐ ｉ ｅａ ｅ ｃ
关键词 ： 源 【 型产 毒素 多杀 巴氏杆 菌 ； 素基 因 ； 猪 ） Ｉ 毒 原核表 达
中 图 分 类号 ：８ ２ ６ ２ Ｑ ８ ￥５．１； ７ ６ 文献 标 识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （００ １—０ ４０ １ ０—０ ８ ２ １） ２０ ６ —５
产毒 素 多 杀 性 巴 氏杆 菌 （ｂ ｉ ｅｉ Ｐ ｓ ｕｅ ａ ＇ ｘ ｇ ｎ ａｔ ｒｌ ｌ ｎ ｃ ｅ ｌ
Ｂ） ｂ 感染 猪后损害其 呼吸道 ， 机体抵 抗力下 降 ， 使 并可
继 发感染支原体 、 嗜血杆 菌 、 猪流感 病毒 、 猪繁殖 与 呼 吸综合 征病毒 ， 增加 了猪 的病 死率口 。多 杀性 巴氏杆 ］
菌毒素 （ ａｔ ｒｌ ｌ ｃ ａｔｘｎ Ｐ ） Ｐ Ｐ ｓ ｕｅ ａｍｕｔ ｉ ｉ， ＭＴ 为 ＡＲ的 ｅ ｌ ｏｄ ｏ
Ｓ ｌ Ｉ为宝生 物 工 程 （ ａ 大连 ） 限公 司产 品 ； 根 过 有 辣 氧化 物酶标 记 羊 抗 猪 ＩＧ、 苄 青 霉 素 为 Ｓｇ ｇ 氨 ｉｍａ公 司产 品 ； 回收试剂盒 、 量质粒 提取试 剂盒 为上 海 胶 小 华舜 生物 工 程 有 限 公 司 产 品 ； — Ａ 蛋 白纯 化 树 Ｎｉ ＮＴ
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一株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定
一株牛源A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定作者：唐光凤来源：《畜牧兽医科学》 2019年第3期唐光凤（重庆市大足区龙水镇畜牧兽医站，重庆 402360）摘要：对重庆市某牛场运输后的牛的鼻拭子进行病原分离，对其进行培养形态及染色、动物致病性情况观察及16SrRNA序列分析，初步鉴定为牛多杀性巴氏杆菌（PM）。
利用PM种特异性引物及荚膜血清特异性引物进行PCR扩增，均得到目的基因条带。
由此确定分离菌株为牛荚膜A型巴氏杆菌。
关键词：牛A型巴氏杆菌；分离鉴定；LD50；耐药性中图分类号：S852.61文献标识码：Bdoi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.03.0070 引言多杀性巴氏杆菌是引起多种动物巴氏杆菌病（又称出血性败血症）的病原菌，属于革兰氏阴性菌。
根据其荚膜抗原不同分为A、B、D、E、F 5种血清型，A型主要引起牛呼吸道系统疾病，导致牛肺炎，也有称船运热或运输热等，给养殖业带来了严重的经济损失。
从重庆某牛场运输回来的健康牛，由于高温、暴雨的不断交替，一头牛表现出体温升高，呼吸困难，少食，胸部叩诊呈浊音，有疼感，肺部听诊有支气管呼吸音及水泡性杂音。
采集该牛的鼻拭子，采用常规多杀性巴氏杆菌分离鉴定方法，并结合16SrRNA及种特异性基因Kmt1扩增分析，确定分离菌，进一步采用荚膜血清型特异性基因扩增分析，确认分离菌血清，从一头健康牛的鼻拭子分离得到A型多杀性巴氏杆菌。
1 材料1.1 病料采集无菌采集重庆市某牛场运输后的鼻拭子。
1.2 试验动物体重18～22 g昆明鼠购自重庆中药研究所。
1.3 试剂与材料医用无菌棉签购自重庆市宏冠医疗设备有限公司，马丁氏肉汤购自青岛高科技工业园海博生物技术有限公司，琼脂粉购自成都市科龙化工试剂厂，药敏片购自杭州微生物试剂有限公司，Proteinase K、细菌基因组DNA快速提取试剂盒，购自天根生物科技有限公司；L2000DNA Marker购自宝生（大连）工程有限公司，16SrRNA购自上海生工生物技术有限公司。
一例猪圆环病毒Ⅱ型和巴氏杆菌混合感染的诊断
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《 海畜牧 兽 医通讯 》 ２ １ 上 ０ ２年 第 ５期
阴性 ； 酶 、 化 酶 试 验 结 果 均 为 阳 性 。 触 氧
书进 行 ： 总 Ｒ Ａ １ 取 Ｎ ７ ，加 入 ２ １ 转 录 体 系 中 ，包 括 Ｏ 反 ４“反 转 录 溶 液 （ ０ ｍ ｌＬ ｐ ． ｒ — ＨＣ ，７ ｍｏ Ｉ ｌ ５ ｍｏ 、 Ｈ ８ ３Ｔ ｉ ／ ｓ １ ５ｍ ｌ ／
ｌ ｌ 游 引物 （ Ｏ ｐ ｌＩ ， ｌ 转 录 酶 （ ０ ＞）和 １ ｌ 下 ５ ｍｏ／ １ 反 ） ２ ０Ｕ／ Ｉ Ｒ ａ ｅＩ ｈｂｔｒ（ Ｏ Ｕ／ ） Ｎ ｓ ｎ ｉｉ ｏ ４ ｔ ，用 Ｄ Ｐ 水 补 至 ２ ｌ ２℃ Ａ Ｅ Ｃ Ｏ ，４
水 浴 １ｈ ９ ，５℃ ５ｍｉ ｎ后 ， 浴 ５ｍｉ， 一 ２ ℃ 备 用 。 ５ １ 冰 ｎ置 ｏ ｏ“ 体 系 ： 馏 水 ３ ． ｌ１ Ｃ ｕｆｒ５ １反 转 录 产 物 蒸 ７ ５ 、 ０Ｘ Ｐ Ｒ Ｂ ｆ 、 ｅ
《 海畜牧 兽 医通讯 》 ２ １ 上 ０ ２年 第 ５期
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一
例 猪 圆环 病 毒 Ⅱ型 和 巴 氏杆菌 混 合 感 染 的诊 断
张 林 吉 任 士 飞 迟 兰
（徐 州 生 物 工 程 职 业 技 术 学 院 ２ １０ ２ ０ ６）
【 要 】徐 州 某猪 场发 生 以 猪 高 热 、 微 咳 喘 ， 分 猪 鼻 孔 有 血 泡 为 临 床 症 状 ， 分 仔 猪 甚 至 死 亡 的 疫 情 。 采 集 摘 轻 部 部
病毒 ２型 和 巴 氏杆 菌 的 混合 感 染 。
关 键 词 ： 圆环 病 毒 ２型 ；巴 氏杆 菌 ；混合 感 染 ； 断 猪 诊
牛多杀性巴氏杆菌未知型的分离鉴定及防治
现代农业科技2023年第6期动物科学牛多杀性巴氏杆菌未知型的分离鉴定及防治汪阳1马艳荣2仲荣3金映红4李威2薛晶4汪萍4陈古丽4颜成旭2马丽梅2夏俊4*（1新疆农业大学，新疆乌鲁木齐830000；2新疆维吾尔自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐830000；3阿勒泰地区畜牧工作站，新疆阿勒泰836500；4新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心），新疆乌鲁木齐830000）摘要以病死牛病变肺脏组织为研究对象，通过革兰氏染色和PCR鉴定确定多杀性巴氏杆菌分离株的血清型，进行分离菌株的小鼠致病性试验和药敏试验。
结果表明：该分离菌株为未知型多杀性巴氏杆菌，对硫酸阿米卡星、左氧氟沙星、硫酸庆大霉素、乳酸环丙沙星高度敏感；小鼠多杀性巴氏杆菌最小致死量为1.2×108CFU/mL。
关键词牛；多杀性巴氏杆菌；分离鉴定；防治中图分类号S858.23文献标识码A文章编号1007-5739（2023）06-0176-03DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2023.06.045开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Isolation,Identification and Control of Unknown Type of Pasteurella multocida in Cattle WANG Yang1MA Yanrong2ZHONG Rong3JIN Yinghong4LI Wei2XUE Jing4WANG Ping4CHEN Guli4YAN Chengxu2MA Limei2XIA Jun4*(1Xinjiang Agricultural University,Urumqi Xinjiang830000;2Xinjiang Uygur Autonomous Region Animal Health Supervision Institute,Urumqi Xinjiang830000;3Altay Prefecture Animal Husbandry Workstation,Altay Xinjiang836500;4Institute of Veterinary Medicine,Xinjiang Academy of Animal Science(Animal Clinical Medical Research Center,Xinjiang Academy of Animal Science),Urumqi Xinjiang830000)Abstract In this paper,diseased lung tissue of dead cattle was taken as the research object.The serotype of Pas-teurella multocida isolated strain was determined by Gram′s stain and PCR identification,and then pathogenicity test and drug sensitivity test of the isolated strain were carried out in mice.The results showed that the isolated strain was Pasteurella multocida of unknown type,which was highly sensitive to amikacin sulfate,levofloxacin,gentamycin sulfate and ciprofloxacin lactate.The minimum lethal dose of Pasteurella multocida in mice was1.2×108CFU/mL.Keywords cattle;Pasteurella multocida;isolation and identification;control基金项目新疆维吾尔自治区区域协同创新专项（科技援疆计划）（2021E02032）；2022年新疆维吾尔自治区中央引导地方项目（ZYYD2022B16）；新疆维吾尔自治区重大科技专项“新疆畜禽疫病防控体系质量提升工程”（2022273334）；新疆维吾尔自治区天山英才青年科技拔尖人才项目（青年科技创新人才培养）“牛羊幼畜群发病防控关键技术研究”（2022196128）。
牛巴氏杆菌病的感染因素与防治
牛巴氏杆菌病的感染因素与防治孔祥芬陕西省榆林市榆阳区芹河区域畜牧兽医工作站，陕西榆林 719000摘要牛巴氏杆菌病也称牛出血性败血症，主要通过接触性传播，以病牛和带菌动物为传染源，感染牛群的消化道，引起大规模患病，是养牛业中常见的细菌性传染性疾病。
病牛临床表现为发烧、肺炎、胃肠炎，剖检可见内脏大出血等，严重影响牛群的健康发展。
目前，疫苗接种是该病最有效的预防措施，可使用市售巴氏杆菌病灭活疫苗皮下或肌肉注射进行预防。
治疗方面，可采用抗菌类西药或清热解毒类中药针对治疗，减少牛巴氏杆菌病的发病率，推动养牛产业的积极健康发展。
关键词牛；巴氏杆菌病；感染因素；防治方法1980年初期，巴氏杆菌被路易斯·巴斯德在病鸡中分离而得，并以其名字加以命名。
目前，牛巴氏杆菌病已遍布全球各地，在各个国家均有病例报道。
我国牛巴氏杆菌病多呈散发病例。
袁敏明[1]调查结果显示，2020年我国青海省牦牛巴氏杆菌病发病率约为7.89%，发病率较2019年呈上升趋势；该病发生时，多数牛会迅速发病，急性病症牛可在24 h 内死亡。
此外，该病传播速度较快，若无法及时治疗，在牛群中会呈现群发感染、混合感染和交叉感染趋势，大大提升了牛群的患病率与病死率[2]。
若此时，养殖户对该病的认识不到位，无法采取有效防控措施阻断疾病传播，将会造成严重的经济损失。
因此，明晰该病的感染途径、发病原因以及防治方法，进而进行全面防控十分重要。
1 病原学牛巴氏杆菌病，是由多杀性巴氏杆菌引起的急性传染病。
多杀性巴氏杆菌是1种两端钝圆、中央微突的短杆菌或球杆菌，长0.6~2.5 μm，宽0.25~ 0.60 μm，没有芽孢，无鞭毛。
此外，巴氏杆菌可引起动物的多种巴氏杆菌疾病，对动物有较强的致病力。
目前，巴氏杆菌可分为A型、B型、D型、E型和F型，共5个血清型，不同的血清型对动物的致病力不尽相同。
而在我国，常见的血清型主要是A型与B型，A型主要导致牛纤维素肺炎，B型则多引发牛出血型败血症。
一例白羽半番鸭巴氏杆菌病的诊治
4552023因是:(1)雏鸭、雏鹅混养,朱某首次从事养殖,缺乏疫病防控意识,将30羽雏鸭和此批雏鹅混养。
由于鸭对鸭疫里默氏菌更易感,雏鸭发病后再传染给同舍的雏鹅。
因此鸭、鹅不可混养,采取全进全出的饲养模式能有效减少该病的发生。
(2)初春时节雨水多、湿度大,育雏密度过大,没有良好的通风,育雏舍低温、高湿,导致该病的发生。
因此,应加强育雏的饲养管理,保持适宜的温度、湿度,适当降低养殖密度,尽量减少环境变化、转群、接种等应激因素的影响。
2)养殖场应制定合理的卫生消毒和生物安全制度。
在发生疫病时,做好养殖场所的消毒灭源工作,及时隔离、淘汰病死鹅并进行无害化处理,可有效切断传播途径,降低疫病传播机会。
3)疫苗免疫接种是控制鹅传染性浆膜炎发生的主要方法之一。
雏鹅在7~10日龄免疫接种传染性浆膜炎二价灭活疫苗,每羽肌注0.3m L,1周后再进行1次加强免疫,每羽肌注0.5m L,具有较好的预防效果[2]。
4)有条件的养殖场可以通过药敏试验选择几种高敏感药物交替使用,能缩短病程和降低病死率[3]。
参考文献:[1]邵延福.鹅传染性浆膜炎的流行病学、临床表现、诊断与防控[J].现代畜牧科技,2021(7):155-156.[2]叶健毅.一例太湖鹅传染性浆膜炎的诊治报告[J].福建畜牧兽医,2023,45(3):104-105.[3]蔡丙严,王涛,吴植,等.鸭疫里默氏杆菌血清型鉴定及耐药性分析[J].江苏农业科学,2014,42(1):168-169.一例白羽半番鸭巴氏杆菌病的诊治刘水珠福建省南平市建阳区崇阳街道社区发展中心福建南平354200摘要鸭巴氏杆菌病是一种急性败血性传染病,鸭群一旦发病,可使养鸭户蒙受重大经济损失。
该文通过一例白羽半番鸭的发病情况、临床症状、剖检病变、实验室检查结果进行诊断,采取中西兽医相结合治疗和综合防控措施,有效控制了病情。
关键词白羽半番鸭巴氏杆菌病诊治防控文献标识码:B文章编号:1003-4331(2023)05-0118-02鸭巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起鸭的一种急性败血性传染病[1-3],又称鸭霍乱或鸭出血性败血症(简称鸭出败)[4]。
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中国动物传染病学报２０１６，２４（６）：１９—２３ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆＡｎｉｍａｌ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ Ｄｉｓｅａｓｅｓ ・研究论文・ 上海市猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定及其耐药性分析 刘东良 ，钟登科 ，李蓓蓓。，赵秋华 ，张克龙 ，石坤。，魏建超。 （１．湖南省冷水江市畜牧水产局，冷水江４１７５００；２．上海农林职业技术学院，上海２０１６００；３．中国农业科学 院上海兽医研究所，上海２００２４１；４．上海市闵行区动物疫病预防控制中心，上海２０１１０９）
摘要：本研究旨在调查上海市猪源多杀性巴氏杆茵对临床常用抗茵药的耐药情况，为该病的药物预防与治疗提供科学依据。 ２０１４～２０１５年在上海市ｌ１个规模化养猪场采集疑似多杀性巴氏杆菌感染的病料共计ｌ１６份，采用细菌分离培养７ｋ．．ＰＣＲ方法，分离 鉴定出２０株多杀性巴氏杆菌。采用纸片法测定了分离菌株对２０种临床常用抗茵药的敏感性，结果表明，所有菌株对阿莫西林克 拉维酸、头孢曲松、恩诺沙星、氟苯尼考、阿奇霉素和多黏菌素Ｂ敏感，这６种药物可作为本地区控制本病的首选药物。然而， 超过５０％的菌株对青霉素（６５．０％）、复方新诺明（６５．０％）、氨苄西林（６０．０％）、链霉素（６０．０％）、四环素（６０．０％）耐 药。耐药谱分析显示，８５．０％的茵株对４—７种抗茵药耐药。本研究结果表明上海市猪源多杀性巴氏杆菌对临床常用抗茵药物耐 药较严重，应加强养殖场猪多杀性巴氏杆菌的耐药性监测与防控。 关键词：多杀性巴氏杆菌；分离；耐药；猪 中图分类号：￥８５２．６１２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１６７４．６４２２（２０１６）０６—００１９．０５
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２０１６－０６－２８ 上海市生猪产业技术体系建设项目（沪农科产字２０１５第６号）；上海市科技兴农重点攻关项目（沪农科攻字（２０１３） 第５－６号） 刘东良，男，兽医师，主要从事动物细菌疫病研究 魏建超，Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｉａｎｃｈａｏｗｅｉ＠ｓｈｖｒｉ．ａｃ．ｃａ 中国动物传染病学报 ２０１６年１２月 多杀性巴氏杆菌（Ｐａｓｔｅ ｍｕｌｔｏｃｉｄａ，砌） 是巴氏杆菌科巴氏杆菌属的一种革兰阴性短小杆 菌，也是一种重要的具有广泛宿主范围的病原菌， 对多种动物和人均有致病性，主要引起动物发生出 血性败血症或传染性肺炎。猪是多杀性巴氏杆菌 的易感动物之一，猪群中流行的多杀性巴氏杆菌 血清型多为Ａ型和Ｄ型，主要引发猪肺疫（ｐｏｒｃｉｎｅ ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌｏｓｉｓ）和猪萎缩性鼻炎（ａｔｒｏｐｈｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ， ＡＲ） 胁广泛分布于世界各地，正常存在于多种健 康动物的口腔和咽部黏膜。当动物处于应激状态、 机体抵抗力低下时，Ｐ埘易大量繁殖，发生内源性传 染 。近年来猪巴氏杆菌病在集约化猪场内发病率 呈明显上升趋势，主要引起猪死亡、生长缓慢，饲 料利用率降低等问题，尤其是砌】与其他病毒和细菌 的混合感染和继发感染 ，给养猪业带来巨大经济 损失。目前猪巴氏杆菌病的控制主要依靠使用抗菌 药，但临床上抗菌药的盲目使用，使得Ｐ力 对其已产 生不同程度的耐药，这给该病的防控带来了极大的 挑战。近年来，上海市部分规模化猪场多杀性巴氏 杆菌的感染呈逐年上升趋势，为此，本研究对上海 市】１个规模化猪场进行猪多杀性巴氏杆菌的分离、 ＰＣＲ鉴定和耐药性分析，为该病的防治提供理论 依据。 １材料与方法 １．１培养基与试剂胰蛋白大豆琼脂培养基（ｔｒｙｐｔｉｃ ｓｏｙ ａｇａｒ，ＴＳＡ）、胰蛋白大豆肉汤培养基（ｔｒｙｐｔｉｃ ｓｏｙ ｂｒｏｔｈ，ＴＳＢ）培养基购自英国Ｏｘｏｉｄ公司； 新生牛血清购自浙江天杭生物科技有限公司；烟 酰胺腺嘌呤二核苷酸（ＮＡＤ）购自美国Ｓｉｇｍａ公 司；２×ＴａｑＰＣＲ Ｍａｓｔｅｒ Ｍｉｘ、ＤＮＡ Ｍａｒｋｅｒ和细 菌基因组提取试剂盒购自天根生化科技（北京） 有限公司；革兰氏染色液和瑞氏染色液均购自 杭州天和微生物试剂有限公司；细菌药敏试纸 购自英国Ｏｘｏｉｄ公司，包括青霉素（ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ， ＰＥＮ）、氨苄西林（ａｍｐｉｃｉｌｌｉｎ，ＡＭＰ）、阿莫 西林克拉维酸（ａｍｏｘｉｃｉｌｌｉｎ—ｃｌａｖｕｌａｎｉｃ ａｃｉｄ， ＡＭＣ）、头孢噻呋（ｃｅｆｔｉｏｆｕｒ，ＣＥＦ）、头孢曲 松（ｃｅｆｔｒｉａｘｏｎｅ，ＣＲＯ）、恩诺沙星（ｅｎｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ， ＥＮＯ）、环丙沙星（ｃｉｐｒｏｆｌｏｘａｃｉｎ，ＣＩＰ）、复方 新诺明（ｓｕｌｆａｍｅｔｈｏｘａｚｏｌｅ，ＳＭＺ）、克林霉素 （ｃｌｉｎｄａｍｙｃｉｎ，ＣＬＩ）、氟苯尼考（ｆｌｏｒｆｅｎｉｃｏｌ， ＦＦＣ）、链霉素（ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ，ＳＴＲ）、庆大霉素 （ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ，ＧＥＮ）、卡那霉素（ｋａｎａｍｙｃｉｎ， ＫＡＮ）、阿米卡星（ａｍｉｋａｃｉｎ，ＡＭＫ）、红霉素 （ｅｒｙｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ＥＲＹ）、替米考星（ｔｉｌｍｉｃｏｓｉｎ， ＴＩＬ）、阿奇霉素（ａｚｉｔｈｒｏｍｙｃｉｎ，ＡＺＭ）、四环素 （ｔｅｔｒａｃｙｃｌｉｎｅ，ＴＥＴ）、强力霉素（ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ， ＤＯＸ）和多黏菌素Ｂ（ｐｏｌｙｍｙｘｉｎ Ｂ，ＰＢ）共２０种临 床上常用的抗细菌药物。 １．２样品来源２０１４～２０１５年在上海市ｌ１个规模化养 猪场，采集疑似多杀性巴氏杆菌感染的病死猪肺脏 组织，共计１１６份。 １．３细菌的分离培养无菌采取的肺脏病变组织，划 线接种于含５％新生牛血清和１０ ｍｇ／Ｌ ＮＡＤ的ＴＳＡ平 板，３７℃培养ｌ８—２４ ｈ后观察菌落形态，挑取可疑 单菌落进行传代纯化培养，取纯培养的单个典型菌 落进行革兰氏染色和瑞氏染色，镜检观察细菌的形 态和染色特点。 １．４ ＰＣＲ鉴定将上述初步鉴定后纯化的细菌按试剂 盒说明书提取细菌基因组ＤＮＡ为ＰＣＲ模板，根据文 献【５】中方法进一步做ＰＣＲ鉴定，同时对分离菌株进 行１６Ｓ ｒＤＮＡ￣Ｉ］序。针对砌的Ｋｍｔｌ基因设计检测引 物（Ｐｍ—Ｆ和Ｐ脚一Ｒ）和ｌ６ Ｓ ｒＤＮＡ的通用引物（２７ Ｆ 和１４９２ Ｒ）见表１，由上海英骏生物技术有限公司 合成。 １．５药敏试验按照常规的纸片法操作对上述２０株多 杀性巴氏杆菌进行药敏试验，通过测量各纸片的抑 菌圈（ｍｍ）大小，参照美国国家临床实验室标准委 员会（ＮＣＣＬＳ）提供的判断标准 ，确定这些多杀 性巴氏杆菌分离株的耐药谱。
２结果 ２．１病原菌的分离培养与镜检从采集的１１６份病料 中分离到２０株疑似多杀性巴氏杆菌的病原菌，分别 编号为Ｐｍ一１～胁一２０，它们在ＴＳＡ平板上长成边缘 整齐、表面光滑、湿润、直径ｌ～２ ｍｍ的露珠状菌