绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法的建立与优化
羊感染羊痘病毒的诊治
养殖与饲料2020年第02期后，发病羊要立即隔离治疗，早期症状较轻的病羊可以对症治疗，局部皮肤涂抹0.1%高锰酸钾溶液消毒，同时肌肉注射0.05mg/L 菌痘杀星。
病死羊需要消毒和无害化处理，圈舍要彻底消毒，对羊舍的墙壁、地面、饮食饮水用具和垫草都要彻底消毒。
健康羊群需要紧急接种疫苗，发病羊需要至少隔离2个月。
禁止羊对外运输，对发病羊场需要隔离封锁。
羊痘发生后严重影响羊的生产性能和养殖经济效益，预防羊痘发生应该做好疫苗的免疫接种，加强饲养管理，提高羊群抗病能力，保持羊舍的光照充足和通风良好，阴暗潮湿的环境会增加羊痘发生的风险[5]。
羊痘一年四季都可以发病，春季和秋季高发，对羊痘应该做到早发现，早隔离，早诊治，在疫苗免疫过程中应该规范操作，避免漏免和免疫剂量不足的现象，确保疫苗免疫效果，防止发生免疫不全现象，提高群体免疫力。
总之，只有加强羊痘病毒的防控，采取综合防控措施，才能促进养羊业健康发展。
参考文献[1]邱光野.羊痘病的流行病学、实验室诊断及其防控[J].现代畜牧科技，2019（10）：131-132.[2]张志成，陈丽华，陆静静，等.羊痘病毒PCR 检测方法的建立和试剂盒的研制[J].中国动物检疫，2011，28（2）：44-46.[3]宋爽，赵柏林，曲萍，等.小反刍兽疫、蓝舌病、羊痘一步法多重PCR 检测方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医，2017（13）：182-184.[4]安维雪，庞方圆，王艳杰，等.羊痘病毒实时荧光定量PCR 检测方法的建立[J].中国兽医学报，2016，36（4）：572-578.[5]李宏丽.羊痘病的综合防控措施[J].今日畜牧兽医，2019，35（5）：36.【责任编辑：胡敏】羊感染羊痘病毒的诊治李彩英青海省大通回族土族自治县种鸡场，青海大通810100摘要羊痘病毒是主要感染羊的病毒性传染病，可分为绵羊痘病毒和山羊痘病毒，是危害养羊业健康发展的主要病毒性传染病。
山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立王芳;雷震;于力【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2009(031)012【摘要】为了建立山羊痘病毒(GPV)抗体快速检测方法,本研究通过人工合成密码子优化的GPV p32基因,并在大肠杆菌中进行截短表达(p32-opti).表达的重组p32-opti蛋白主要以包涵体形式存在,Western blot分析表明,p32-opti与GPV 标准阳性血清具有良好的抗原性.以纯化的重组p32-opti蛋白作为ELISA包被抗原,建立间接ELISA抗体检测方法.该方法检测小反刍兽疫、蓝舌病和口蹄疫阳性血清均无交叉反应;与中和试验(VNT)比较,两者的符合率为95.7%;ELISA批内和批间重复性试验显示,OD值的变异系数小于10%.上述结果表明.该ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.对来自黑龙江、内蒙古和新疆自治区的390份山羊和绵羊血清进行检测,抗体阳性率为80.2%,表明这些地区的山羊和绵羊群普遍存在羊痘病毒抗体.本研究建立的间接ELISA方法可用于GPV感染的流行病学调查以及疫苗接种动物的抗体水平监测.【总页数】4页(P945-948)【作者】王芳;雷震;于力【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室,黑龙江,哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S854.4【相关文献】1.非洲猪瘟病毒p54基因的原核表达及其抗体的间接ELISA检测方法的建立 [J], 曹琛福;梁云浩;陶虹;花群义;曾少灵;杨俊兴;陈兵;张桂红;吕建强2.山羊副流感病毒3型N蛋白原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 [J], 王咪;李文良;郝飞;毛立;杨蕾蕾;张纹纹;江杰元3.牛白血病病毒env(gp51)基因的克隆和原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 [J], 周毅;吴玉石;段宏安;张睿;周祖涛;毕丁仁;石德时4.非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 [J], 吴竞;王西西;吴映彤;任肖;郭晓宇5.非洲猪瘟病毒p30基因的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立 [J], 吴继阳因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
羊痘病毒PCR检测方法的建立和试剂盒的研制
羊痘病毒PCR检测方法的建立和试剂盒的研制张志成;陈丽华;陆静静;张大淦;戴薇;陈钟鸣【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2011(28)2【摘要】根据GenBank上已发表的羊瘟病毒(CPV)的全基因序列,设计并合成了一对能特异性扩增羊痘病毒的引物,扩增产物大小约为445bp.通过对PCR方法的优化,建立了检测羊瘟病毒的PCR方法,并研制出检测试剂盒.同时对试剂盒的敏感性,特异性和稳定性进行了研究.实验结果表明,该试剂盒具有良好的敏感性和特异性,稳定性在-20℃至少可以保存一年.【总页数】3页(P44-46)【作者】张志成;陈丽华;陆静静;张大淦;戴薇;陈钟鸣【作者单位】金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038;金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038;金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038;金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038;金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038;金陵科技学院动物科学与技术学院,江苏南京,210038【正文语种】中文【中图分类】S852.654【相关文献】1.鸽疱疹病毒PCR检测方法的建立及试剂盒的研制 [J], 薛媚;庄林林;戴鼎震;张志成2.Ⅱ型猪圆环病毒PCR检测方法的建立及试剂盒的研制 [J], 姜焱;王凯民;张常印3.绵羊痘病毒、山羊痘病毒及羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立和应用 [J], 何亚鹏;张琪;史怀平;付明哲;许信刚4.绵羊痘病毒和山羊痘病毒双重PCR检测方法的建立及应用 [J], 肖雯;聂福平;王昱;肖进文;周雪梅;丁森;周庆;李应国;刘力5.山羊痘病毒与小反刍兽疫病毒双重PCR检测方法的建立 [J], 王璐瑶; 宫英阑; 郝雪飘; 王建昌; 张若曦; 袁万哲因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
绵羊痘的PCR检测与诊断
绵羊痘的PCR检测与诊断王鋆【摘要】绵羊痘是痘病的其中之一,也是世界动物卫生组织通报和跨界的重要羊病之一,给世界养羊业带来巨大的经济损失.绵羊痘的主要特征是在绵羊的皮肤和黏膜上形成痘疹.本研究根据数据库中最新发表的绵羊痘病毒P32基因序列,设计并合成了1对能特异性扩增绵羊痘病毒基因片段的特异性引物序列,建立了检测与诊断绵羊痘的PCR方法,扩增产物大小为500 bp.结果显示,绵羊痘均能扩增出条带,其他健康羊只均不能扩增出条带.应用本研究建立的方法对临床样本进行检测与诊断,10份临床疑是病料中6份均可扩增出500 bp的绵羊痘病毒特异性片段.该方法可用来绵羊痘的诊断、检测、预防控制及流行病学调查.【期刊名称】《现代畜牧兽医》【年(卷),期】2018(000)008【总页数】3页(P5-7)【关键词】羊痘;检测;PCR【作者】王鋆【作者单位】河南省平顶山市叶县畜牧局,河南叶县 467200【正文语种】中文【中图分类】S858.26对于困扰国内哺乳动物的天花疾病，绵羊痘是导致自然死亡率最高和临床病理状况最严重的疾病[1-3]。
本病主要经呼吸道、损伤的皮肤或黏膜感染[4-6]，羊对痘病毒易感性较强，尤其是绵羊，所有绵羊无论大小羊只对痘病毒全都有易感性，羔羊免疫力低下对羊痘的抵抗力较低，羔羊感染后病死率也高，所以比成年羊易感。
羊痘根据临床症状一般不难诊断，但确诊还需要做实验室检测。
必要时可取病变组织做切片，检查感染细胞中的细胞质包涵体，或电镜观察病毒颗粒；或应用琼脂扩散试验，以抗绵羊痘高免血清检查皮肤结节或结痂中的抗原。
本研究根据数据库中最新发表的绵羊痘病毒P32基因序列，设计并合成了1对能特异性扩增绵羊痘的特异性引物序列，通过分子诊断，建立了检测与诊断绵羊痘的PCR方法。
该方法可用来绵羊痘的诊断、检测、预防控制与流行病学调查。
1 材料与方法1.1 材料病料采自河南病羊的痂皮及羊血。
采取痂皮0.01 g，用液氮在无菌研钵中研磨，研磨后PBS液（pH 7.0）0.5 mL，15 000 r/min离心5 min，小心取出离心管用移液枪取上清于-80℃保存。
绵羊痘的防治技术及处理方法 - 养羊技术
绵羊痘的防治技术及处理方法-养羊技术绵羊痘也叫做绵羊天花，是感染绵羊痘病毒所致一种热性、急性传染病，发病率和死亡率都较高，尤其是羔羊死亡率可达100％，妊娠母羊患病后容易发生流产，严重损害养羊业的经济效益。
检疫人员在屠宰检疫时必须按照宰前、宰后检疫程序操作，方可有效防止疫情的蔓延和发生。
下面我们一起来看看绵羊痘的防治技术及处理方法。
1、宰前检疫群体检疫。
根据羊群的产地、种类以及入场时间来分批分圈，然后进行检查。
首先对羊群进行静态检查，即检疫员进入到圈舍内，在不会影响羊群的情况下对其进行仔细观察，如立卧姿势、反刍、呼吸以及机体对外界刺激的反应能力等状态，并观察看是否存在流涎、气喘、咳嗽等症状。
接着要对羊群进行动态检查，即在轰赶圈内羊群或者卸载后驱赶到饲养圈内的过程中，对机体的运动状态进行观察，看是否存在走动困难、步态不稳等情况。
最后是对羊群进行状态检查，即在采食过程中，观察是否存在吞咽困难、贪饮、少食或者停食等症状，还要观察粪尿颜色、气味、形态存在异常。
个体检疫。
通过群体检疫将弱羊以及疑似病羊隔离，然后逐只进行个体检疫。
主要采取视诊、触诊以及听诊等方式，如有需要还可采取微生物学、实验室检查。
检查被毛、皮肤，观察被毛是否光滑、平顺或者杂乱不整、发生脱落等，皮肤是否存在红肿、瘢痕、溃烂等。
检查五官，即观察眼和结膜是否存在潮红、苍白、黄疸、发绀、肿胀、溃疡、出血以及结节等症状；鼻镜湿润、光滑与否，鼻腔内是否存在异常分泌物，鼻黏膜是否发生肿胀、破溃；口腔是否散发异味，口腔以及舌黏膜是否发生肿胀、破溃等。
疫病症状。
发病初期，羊群中只有少数羊出现发病，接着快速蔓延至全群。
病羊的主要特征是体温明显升高，能够达到大约41℃，脉搏、呼吸加快，有时会出现呼吸困难的现象，精神沉郁，采食量下降或者完全废绝，往往呈俯卧状。
眼结膜肿胀、潮红，有黏性鼻液从鼻孑L流出，症状较严重时会在眼角处堆积有乳白色的脓样分泌物，羞明流泪，角膜变得混浊，视力下降，有浆液性、黏液性和脓性鼻液流出，部分甚至在唇部也出现水泡，严重时唇上的水泡会发生溃烂，出现上述症状经过1一4天就会在机体少毛或者无毛处开始出现圆形的红色斑点，如上下唇、眼睑、鼻孔、胸腹部、尾根部、外阴部、乳房以及周围等；部分已经形成如同黄豆或者蚕豆大小的丘疹，用手指按压褪色，且触感较硬。
羊口疮病毒PMA-PCR检测方法的建立
羊口疮病毒PMA-PCR检测方法的建立梁倩;包涛涛;鲜思美;杨倩;李鹏飞;顾庆林;郑维豪;杜鹏;青成欣【期刊名称】《中国畜牧兽医》【年(卷),期】2022(49)4【摘要】【目的】为快速有效评估宿主动物体内及周围环境中的羊口疮病毒(Orf virus,OrfV)是否失活,本研究应用核酸染料叠氮溴化丙锭(propidium monoazide,PMA)联合PCR扩增技术,以F1L基因为靶向检测对象,旨在建立一种针对具有感染活性OrfV的PMA-PCR检测方法。
【方法】将病毒悬液经不同温度相同时间的水浴处理,通过PCR确定病毒样本最佳的热灭活温度;分别设置PMA曝光时间梯度及浓度梯度,进一步对PMA的曝光时间和工作浓度等因素进行优化,确定有效区分具有感染活性OrfV和失活OrfV的PMA最佳处理条件;对所建立PMA-PCR方法进行特异性试验验证,并通过对不同数量比例的热灭活OrfV、活OrfV混合病毒悬液样本进行检测来验证该方法的敏感性。
【结果】OrfV样本经60℃热水浴处理10 min即可被完全灭活;PMA与失活OrfV的DNA共价结合且溶液中游离PMA光解的最佳曝光时间为15 min;热灭活OrfV基因组扩增被完全抑制的最小PMA浓度为20μmol/L,活OrfV基因组扩增不受抑制的最大PMA浓度为35μmol/L;特异性试验结果表明,该方法检测活OrfV时出现阳性条带,而口蹄疫病毒(FMDV)、绵羊痘病毒(SPPV)、山羊痘病毒(GTPV)的扩增结果均呈阴性;经PMA处理后,在不同数量比例的活、热灭活OrfV病毒悬液中检测到活OrfV的灵敏度为10^(-1.68)TCID_(50)/0.1 mL。
【结论】本试验成功建立了针对活OrfV 的PMA-PCR检测技术,该方法特异性强、敏感度高,可为相关工作领域评估OrfV 致病性提供技术参考。
【总页数】8页(P1524-1531)【作者】梁倩;包涛涛;鲜思美;杨倩;李鹏飞;顾庆林;郑维豪;杜鹏;青成欣【作者单位】贵州大学动物科学学院;贵州省动物疫病研究所;贵州省黔东南州农业农村局【正文语种】中文【中图分类】S852.654【相关文献】1.绵羊痘病毒、山羊痘病毒及羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立和应用2.羊口疮病毒及山羊痘病毒双重PCR检测方法的建立3.山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用4.羊口疮病毒间接免疫荧光检测方法的建立5.羊痘病毒和羊口疮病毒二重PCR鉴别检测方法的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
绵羊痘山羊痘防治技术规范
绵羊痘/山羊痘防治技术规范绵羊痘（Sheep pox）和山羊痘（Goat pox）分别是由痘病毒科羊痘病毒属的绵羊痘病毒、山羊痘病毒引起的绵羊和山羊的急性热性接触性传染病。
世界动物卫生组织（OIE）将其列为必须报告的动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。
为预防、控制和消灭绵羊痘和山羊痘，依据《中华人民共和国动物防疫法》和其它相关法律法规，制定本规范。
1 适用范围本规范规定了绵羊痘和山羊痘的诊断、疫情报告、疫情处理、预防措施和控制标准。
本规范适用于中华人民共和国境内一切从事羊的饲养、经营及其产品生产、经营的单位和个人，以及从事动物防疫活动的单位和个人。
2 诊断根据流行病学特点、临床症状和病理变化等可做出诊断，必要时进行实验室诊断。
2.1 流行特点病羊是主要的传染源，主要通过呼吸道感染，也可通过损伤的皮肤或黏膜侵入机体。
饲养和管理人员，以及被污染的饲料、垫草、用具、皮毛产品和体外寄生虫等均可成为传播媒介。
在自然条件下，绵羊痘病毒只能使绵羊发病，山羊痘病毒只能使山羊发病。
本病传播快、发病率高，不同品种、性别和年龄的羊均可感染，羔羊较成年羊易感,细毛羊较其它品种的羊易感，粗毛羊和土种羊有一定的抵抗力。
本病一年四季均可发生，我国多发于冬春季节。
该病一旦传播到无本病地区，易造成流行。
2.2 临床症状本规范规定本病的潜伏期为21 天。
2.2.1 典型病例：病羊体温升至40℃以上，2～5天后在皮肤上可见明显的局灶性充血斑点，随后在腹股沟、腋下和会阴等部位，甚至全身，出现红斑、丘疹、结节、水泡，严重的可形成脓胞。
欧洲某些品种的绵羊在皮肤出现病变前可发生急性死亡；某些品种的山羊可见大面积出血性痘疹和大面积丘疹，可引起死亡。
2.2.2 非典型病例：一过型羊痘仅表现轻微症状，不出现或仅出现少量痘疹，呈良性经过。
2.3 病理学诊断2.3.1 剖检变化：咽喉、气管、肺、胃等部位有特征性痘疹，严重的可形成溃疡和出血性炎症。
2.3.2 组织学变化：真皮充血，浆液性水肿和细胞浸润。
基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立
基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立孟卫芹;王金良;吴信明;唐娜;李通;石竞楠;董帅;沈志强【期刊名称】《畜牧与兽医》【年(卷),期】2024(56)4【摘要】为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法,试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后获得了重组蛋白,纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。
以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记,通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条,并对其性能进行评价。
结果:该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应;阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性,敏感性较高;批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好;与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。
综上,本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。
【总页数】6页(P89-94)【作者】孟卫芹;王金良;吴信明;唐娜;李通;石竞楠;董帅;沈志强【作者单位】山东省滨州畜牧兽医研究院;青岛农业大学动物医学院;内蒙古民族大学生命科学与食品学院;河北工程大学生命科学与食品工程学院【正文语种】中文【中图分类】S852.65【相关文献】1.山羊痘病毒p32基因原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立2.重组羊痘病毒P32蛋白的真核表达与间接ELISA检测方法的建立3.川东北经济区发展困境及对策探析——基于融入成渝地区双城经济圈的视角4.山羊痘病毒和绵羊痘病毒荧光PCR检测方法的建立与应用5.基于0507蛋白的山羊支原体山羊肺炎亚种抗体间接ELISA检测方法的建立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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绵羊痘病毒和山羊痘病毒通用RPA检测方法的建立与优化
周峰;王志宇;张梅;康新华;高军军;豆玲;王雪莹;康文彪
【期刊名称】《中国兽医科学》
【年(卷),期】2022(52)7
【摘 要】根据选择的靶基因RPO35基因序列,使用Oligo 7软件设计并筛选合适
的引物与探针,在37℃下通过反应时间和反应体系的优化,结合胶体金试纸条检测,
建立了一种检测绵羊痘病毒/山羊痘病毒的重组酶聚合酶扩增(recombinase
polymerase amplification,RPA)方法,对其敏感性和重复性进行了检验,并将其用
于临床样品的检测,将检测结果与普通PCR检测结果进行了比较。试验结果显示,病
毒核酸阳性样品能够在试纸条上显示出阳性条带,阴性样品不显示,试验具有良好的
重复性、敏感性(达到620 fg/μL),与普通PCR方法相当。使用本方法,对PCR方法
确定的绵羊痘病毒核酸阳性的5份样品和随机抽取的5份临床样品进行了检测,结
果显示,绵羊痘病毒核酸阳性的5份样品全部为阳性;5份临床样品中1份为阳性,4
份为阴性,检测结果与普通PCR检测结果完全(100%)符合。上述结果表明,本研究
建立的RPA技术适用于绵羊痘病毒/山羊痘病毒的快速检测,为绵羊痘和山羊痘的
临床诊断提供了新的选择。
【总页数】7页(P830-836)
【作 者】周峰;王志宇;张梅;康新华;高军军;豆玲;王雪莹;康文彪
【作者单位】甘肃省动物疫病预防控制中心;英科新创(苏州)生物科技有限公司
【正文语种】中 文
【中图分类】S852.659.1
【相关文献】
1.两种用于鉴别山羊痘病毒和绵羊痘病毒方法的应用与比较研究2.绵羊痘病毒、山
羊痘病毒及羊口疮病毒多重PCR检测方法的建立和应用3.绵羊痘病毒TaqMan-
MGB荧光定量PCR快速检测方法的建立4.绵羊痘病毒和山羊痘病毒双重PCR检
测方法的建立及应用5.绵羊痘病毒A11R基因的优化表达及抗体间接ELISA方法
的建立
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