菠萝蛋白酶药效学研究概况
菠萝蛋白酶酶活力测定
菠萝蛋白酶酶活力测定实验二菠萝蛋白酶酶活力测定及米氏常数测定一、实验目的酶的活力测定是研究和工业生产中常用的实验技术，掌握酶活力测定实验的设计原则和注意事项；学习利用Folin酚试剂测定蛋白酶活力的原理和操作技巧；学习蛋白酶米氏常数K M值的测定方法和计算方法。
二、实验原理菠萝蛋白酶（bromelain）指一类来源于凤梨科植物的巯基蛋白酶，在菠萝中含量非常丰富，菠萝的茎、叶、芽和果实当中都含有菠萝蛋白酶，以茎和果实中的含量最高，叶和芽中的含量较少，一般包括两种主要的酶：茎菠萝蛋白酶（EC 3.4.22.32）和果菠萝蛋白酶（EC 3.4.22.33）。
菠萝蛋白酶的活力测定：菠萝蛋白酶的活力测定的原理是：在最适反应条件下（37℃，pH7），菠萝蛋白酶水解酪蛋白生成多肽混合物，其中酪氨酸可以与Folin酚试剂发生氧化还原反应生成蓝色的钨蓝和钼蓝，蓝色物质的量与酶水解蛋白所生成酪氨酸的量成正比，通过测定680nm处的光吸收，测定酪氨酸的生成量，并进而计算菠萝蛋白酶的活力，以每分钟水解酪蛋白生成1 ug/mL 酪氨酸为1个活力单位。
双倒数作图法测定菠萝蛋白酶的米氏常数KM：米氏方程（Michaelis-Menten equation）表示一个酶促反应的起始速度与底物浓度关系的速度方程。
其表达式为：此表达式取倒数则可得到如下方程：以1/[S]为横坐标，以1/v为纵坐标，可得到如下图：其中，直线的斜率为KM/Vmax，纵轴截距为1/Vmax，横轴截距为-1/KM，由此可计算出菠萝蛋白酶的KM和Vmax。
三、仪器与试剂1.试剂和材料：0.1 mg/mL酪氨酸溶液，茎菠萝蛋白酶（粗酶），茎菠萝蛋白酶（纯酶），0.2M磷酸缓冲液（PBS，pH 7），0.1 mg/mL酪氨酸，0.55 mol/L Na2CO3，Folin酚试剂（1 N），1% 酪蛋白（用pH 7磷酸缓冲液配制），15%三氯乙酸（TCA），考马斯亮蓝G250溶液，0.25 mg/mL牛血清白蛋白（BSA）溶液2.仪器：（1）可见光分光光度计（2）分析天平（精确到0.01g）（3）具塞刻度试管20支（4）小烧杯（50mL和100mL）、塑料滴管、玻璃棒（5）移液器（5mL，1mL，0.2mL，及配套吸头）四、实验步骤1.酪氨酸（Tyr）标准曲线绘制按下表配制标准曲线各管，标准曲线与酶反应液都配制好后，依次加入4 mL 0.55 mol/L Na2CO3，再加入0.5 mL Folin酚试剂，立即颠倒混匀，室温放置30分钟后，680nm处测定吸光度值。
菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶的应用
三、菠萝蛋白酶的应用前景
菠萝蛋白酶的应用已有很长的历史,其安全性已受 到时间的考验,对当前危害人类健康的疾病,如心血管疾 病、癌症等,菠萝蛋白酶已表现出其应用潜力。值得一 提的是,菠萝蛋白酶制品大多数是各种成分的混合物,而 且,其组成会因不同的品种、产地及提取方法而产生一 定的差异,因此,有必要进一步确定真正起作用的具体成 份,选择适当的提取工艺,得到专一性更强的药物。此 外,菠萝蛋白酶作为生物活性物质,易受有关因素的影响 而失活,如何在生产、储存、运输中保存所需酶的活 性,如何提高菠萝蛋白酶的生物利用度,这些都是需要进 一步研究的课题。
菠萝蛋白酶的应用
一些含菠萝蛋白酶的药物
菠萝蛋白酶的应用
二、菠萝蛋白酶在食品领域的应用
在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂, 能分解蛋白质、肽、酯和酰胺等, 可用于肉质嫩化、 水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。菠萝蛋白酶对 含酪氨酸较多的蛋白质有很强的水解能力, 用于牛肉 加工中的嫩化过程, 抑制血小板聚集,加速纤维蛋白原的分解 菠萝蛋白酶能抑制血小板聚集引起的心脏病发 作和中风,缓解心绞痛症状,缓和动脉收缩,加速纤维 蛋白原的分解。因此,它作为蛋白水解酶对心血管疾 病的防治也是有益的。Metzig等(1999)研究结果表 明,菠萝蛋白酶在体外可以减少人体血小板聚集,减 少血小板在牛内皮细胞的吸附和大鼠体内血栓的形 成。这些结果解释了临床上使用菠萝蛋白酶治疗血 栓及相关疾病的效果。
菠萝蛋白酶常见的工业提取方法
3.超滤法浓缩有机溶剂提取 工艺流程：
菠萝蛋白酶常见的工业提取方法
超滤法浓缩有机溶剂提取生产工艺和操作比上述 两种方法复杂,超滤膜的使用、清洗、保护操作技术 含量高,对工人素质要求高;设备一次性投资大, 生产 成本上升。但超滤透过液可作饮料添加剂,有机溶剂 可回收再生产,基本上没有废物排放,可以达到清洁生 产的要求;加上酶质量好、纯度高、回收率高、产品 酶活力高,达到医药级,综合经济效益分析与高岭土吸 附法相当,但酶质量远优于后者。
菠萝蛋白酶的研究与应用进展
菠萝蛋白酶的研究与应用进展章佩芬1,郭 勇1,罗焕敏21.华南理工大学生物工程系,广东广州5106412.暨南大学药学院,广东广州510632提 要:综述了菠萝蛋白酶在抑制肿瘤和心血管疾病防治方面的研究及应用进展。
关键词:菠萝蛋白酶;抑制;作用中图分类号:Q550文献标识码:B文章编号:1006-0103(2002)02-0128-02菠萝蛋白酶是存在于菠萝植株中的蛋白质水解酶,菠萝的果、茎、柄和叶片中都含有菠萝蛋白酶。
早在1891年,Marcano就提出菠萝汁中含有蛋白酶。
随后,人们对菠萝蛋白酶进行了一系列研究,发现这些蛋白酶不是单一的成分,而是由多种不同分子量和分子结构的酶系组。
粗菠萝蛋白酶是各种成分的混合物,除了蛋白水解酶系外,有的还含磷酸酯酶、过氧化物酶、纤维素酶、其它糖苷酶及非蛋白物质。
过去在临床上,大多数使用的是非单一成分的酶。
虽然目前尚不能明确阐述各组分所起的作用,但它在临床应用的潜力正不断被挖掘。
1 抑制肿瘤细胞的生长口服菠萝蛋白酶用于治疗各种癌症的研究起源于70年代。
体外研究已证明菠萝蛋白酶具有某些细胞毒素的潜能。
在Maurer和Batkin等人所作研究之前,菠萝蛋白酶的抗肿瘤活性主要被解释为其纤溶活性和抑制血小板聚合的作用,认为菠萝蛋白酶干扰了血纤维和肿瘤细胞的凝结[1]。
1990年,Dess er等发现菠萝蛋白酶在体外血液单核细胞培养中刺激产生 肿瘤坏死因子。
免疫调控,特别是细胞素(cytokines)的释放,被认为是产生菠萝蛋白酶治疗潜力的原因。
一些专利提到了菠萝蛋白酶在治疗癌症方面的用途。
US5223406认为菠萝蛋白酶能够诱导肿瘤坏死因子(TNF),而DE4302060认为菠萝蛋白酶能够通过肿瘤表面蛋白C D44的结构修饰防止转移。
W O-A-9600082公开了粗制菠萝蛋白酶能够干涉对生长起重要作用的信号传导途径,尤其是生长因子如白细胞介素-2(IL-2),血小板衍生的生长因子(PDGF)和胰岛素样生长因子(IGF)产生的信号传导途径。
菠萝蛋白酶说明书
菠萝蛋白酶说明书
【别名】菠萝蛋白酶,菠萝酶
【药理作用】本品是从菠萝液汁中提出的蛋白水解酶，临床上可用作抗水肿和抗炎药口服后能加强体内纤维蛋白的水解作用，将阻塞于组织的纤维蛋白及血凝块溶解，从而改善体液的局部循环，导致炎症和水肿的消除。
与抗生素、化疗药物并用，能促进药物对病灶的渗透和扩散。
它的优点是：分解纤维蛋白的分子，但不破坏凝血所必需的纤维蛋白原。
【适应症】可用于各种原因所致的炎症、水肿、血肿、血栓症如支气管炎、支气管哮喘、急性肺炎、产后*** 充血、乳腺炎、产后血栓静脉炎、视网膜炎等，与抗菌药物合并治疗关节炎、关节周围炎、蜂窝织炎、小腿溃疡等，均有效。
【用法用量】（1）口服 1日3～4次，1次10万单位（2片）。
（2）外用 0.1％～0.2％生理盐水溶液外敷,1日1～2次。
【不良反应】口服可引起恶心呕吐、腹泻、胃痛、胃酸增、胃溃疡等消化道反应，极少可引起鼻出血、月经过多、痛经和子宫出血等。
严重肝肾病患者或血液凝固功能不全患者忌用。
【注意事项】（1）胃肠道溃疡、严重肝肾疾病或血液凝固功能不全的患者忌用。
（2）遇胃蛋白酶被破坏，故片剂宜吞服，不要嚼碎。
【规格】片剂：每片5万单位。
菠萝蛋白酶的制备及活力测定
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菠萝蛋白酶的生物学特征
三、储运特性 库房通风低温干燥 所需灭火剂：水,泡沫 沙土,二氧化碳 干粉 所需灭火剂： 泡沫,沙土 二氧化碳,干粉 泡沫 沙土 二氧化碳 四、物理性质 白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水， 白色至浅棕黄色无定形粉末。溶于水，水溶液无色至淡黄 有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。 色，有时有乳白光，不溶于乙醇、氯仿和乙醚。属糖蛋白。 主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。 主要作用原理：使多肽类水解为低分子量的肽类。尚有水 解酰胺基键和酯类的作用。 解酰胺基键和酯类的作用。 分子量： 分子量：约33000DA 等电点pH值 等电点 值：9.35 最适pH值 最适 值：7 最适温度： ℃ 最适温度：45℃
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实验仪器与试剂
1、仪器：压榨机、吸附槽、虹吸管、盐析槽、离心 仪器：压榨机、吸附槽、虹吸管、盐析槽、 溶解罐、玻璃棒、烧杯、漏斗、抽滤机、 机、溶解罐、玻璃棒、烧杯、漏斗、抽滤机、电子 天平等 2、试剂：菠萝、0.05%苯甲酸钠溶液、4%高岭土、 试剂：菠萝、0.05%苯甲酸钠溶液、4%高岭土、 苯甲酸钠溶液 高岭土 16%氢氧化钠溶液 质量分数7% 9%的食盐 盐酸、 氢氧化钠溶液、 7%— 的食盐、 16%氢氧化钠溶液、质量分数7%—9%的食盐、盐酸、 质量分数为25 硫酸铵、体积分数1 25﹪ 质量分数为25﹪硫酸铵、体积分数1：3的盐酸等
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2、吸附
将汁液移人吸附槽中 将汁液移人吸附槽中 搅拌 ，同时加入 4 吸附槽 高岭土， ％的高岭土，搅拌约 20 min，在 10℃吸附 ， ℃ 30～60 min，用虹吸排掉上清液收集高岭土 ～ ， 吸附物
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菠萝蛋白酶应用的性质研究
Abstract This paper studies the effect of several factors on bromelain. The results show that the optimal pH value for reaction is 7. 1, and the optimal temperature is 55 . The enzyme is stable relatively in the pH range from 3. 9 to 4. 2, NaCl and kCl don t obviously affect enzyme activ ity , MgCl2. CaCl2 of higher concentration inhibit the enzyme activity, with lower concentration hasn t distinctness inhibition. Within the cer tain range of concentration, Cysteine can promote the reaction. EDTA do esn t stimulate the bromelain, it can reduce the enzyme activity by chelating the metal ion needed for the reaction of enzyme.
表 2 EDTA、半胱氨酸盐酸盐存在下酶反应速度与对照速度之比率
浓度( g/ ml )
5 10- 5 5 10- 4 5 10- 3
EDTA 存在下的比值( % )
99. 0
100
73. 7
半胱氨酸盐酸盐存 在下的比值( % )
菠萝蛋白酶与健康
菠萝蛋白酶很多人对菠萝蛋白酶的了解来自于菠萝蛋白酶在消化方面的帮助。
研究证实食用菠萝可以降低炎症反应，帮助消化，对于皮肤擦伤和抑制有害细菌，降低癌症风险都有帮助。
其中最关键的活性成分就是菠萝蛋白酶。
菠萝不能过度食用，因为其中含有大量果糖，如果摄入过量，会对身体造成不利影响。
因为使用菠萝蛋白酶提取物，用更简单的方法来获得相应的益处，成为一个更合理的选择。
其实菠萝蛋白酶在医药、保健品领域有更为广泛的应用，而且很多都经过了临床验证。
菠萝蛋白酶是目前在欧美国家非常流行的保健食品，由于菠萝蛋白酶具有抗发炎，增加免疫力及溶解血栓的三大功效，使用者反应菠萝蛋白酶可以缓解酸痛，促进血液循环，预防心血管疾病，预防中风，预防癌症，保护头脑，防止老人痴呆症的发生及增加抵抗力等。
同时它具有强力的抗炎及消化蛋白质的特性，能帮助身体吸收食物及补充品中的养份，是绝佳的助消化剂。
菠萝蛋白酶能够：•抑制肿瘤细胞生长－－研究证实当癌细胞接触菠萝蛋白酶后，生长延迟，开始凋亡。
在一项乳腺癌研究中，菠萝蛋白酶在24小时之内对肿瘤起到了明显的抑制作用。
发表在植物药物杂志上的一项动物实验证明，在癌症治疗上，菠萝蛋白酶的治疗效果优于常用化疗药物5-氟尿嘧啶（已经在临床使用了近40年）。
与对照组相比，菠萝蛋白酶治疗组的生存指数约为263%，而且没有任何化疗药物那样的副作用。
•在各种组织中能有效的治疗炎症－－菠萝蛋白酶首度应用于临床是1957年，它成功地阻隔了导致炎症反应的代谢产物的产生，因此对于运动伤害、外伤、关节炎，与其他种类的红肿有不错的效果。
•能减少肺部炎症反应，有效缓解哮喘、肺气肿、支气管炎等。
•能促进其他营养物质的吸收•防治心血管疾病。
菠萝蛋白酶的提取和活力测定
• 效应; 菠萝蛋白酶能增进药物的吸收, 与各种抗生 素联用能提高其疗效, 并能促进营养物质的吸收。 菠萝蛋白酶在医药领域还有其他一些作用, 有待于 进一步论证。菠萝蛋白酶的应用已有很长的历史, 动物试验和人体试验表明, 有部分菠萝蛋白酶能够 被人体完整吸收。一般认为, 菠萝蛋白酶无毒、无 副作用, 少数人对其有过敏反应及轻微的肠胃反应。 菠萝蛋白酶对当前危害人类健康的心血管疾病、 癌症等已表现出其应用潜力, 但目前菠萝蛋白酶制 品大多数是各种成分的混合物, 其组成因不同的品 种、产地及提取方法等而产生一定的差异。因此, 有必要进一步确定真正起作用的具体成分, 研究更 适当的提取工艺,得到专一性更强的药物。
离 心
澄清液
2000r/min，7min离心 加Vc,0.2%单宁溶液 搅拌15min,静置40min 4200r/min,5min离心 沉淀物
上清液
加100ml0.1%EDTA溶液， 200ml1.5%氯化钠液 4200r/min,5min离心
钠加 溶适 液量 ，
1.5% 氯 化
酶复合物
4000r/min,7min
菠萝蛋白酶的应用前景
• 菠萝蛋白酶作为生物活性物质, 决定了其易受到外 部环境的影响而失活。因此, 在生产、储存、运输 过程中保持所需的酶活至关重要, 这就要求酶的固 定化技术、酶制品的微胶囊化技术等要有所突破。 目前, 我国年需菠萝蛋白酶千吨以上, 而国内生产 量不足 10%, 因此, 如何用低成本提取高活性的菠 萝蛋白酶, 是需要进一步研究的课题
菠萝蛋白酶在食品领域的应用
• 在食品工业中菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂,能 分解蛋白质、肽、酯和酰胺等, 可用于肉质嫩化、 水解蛋白、啤酒澄清、干酪生产等。菠萝蛋白酶 对含酪氨酸较多的蛋白质有很强的水解能力, 用于 牛肉加工中的嫩化过程, 可缩短时间、提高牛肉的 适口感。Melendo[17]等人于 1995 年研究了菠萝 蛋白酶对香肠的嫩化作用, 菠萝蛋白酶以不同的浓 度加入到一种干燥的西班牙口利左香肠中, 结果表 明, 菠萝蛋白酶对肌浆球蛋白和其他的肌原纤维蛋 白有明显的
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菠萝蛋白酶药效学研究概况摘要：菠萝蛋白酶是从凤梨属植物菠萝中提取的一组复合巯基蛋白水解酶。
已有大量的研究证实，菠萝蛋白酶具有抗炎、抗血栓、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等作用，与其它药物配合使用时具有增效作用，在治疗各种炎症、心脑血管疾病、癌症、烧伤及呼吸道疾病等方面，有广阔的应用前景。
作者综述了历年来国外菠萝蛋白酶的主要药效学研究成果，旨在为菠萝蛋白酶制剂的开发应用提供参考。
关键词：菠萝蛋白酶；药学研究引言菠萝蛋白酶(Bromelain，以下简称BR)是从菠萝[Ananas comosus (L.) Merr.]植株中提取的一类蛋白水解酶的总称。
1876年Peckold等在巴西菠萝中发现含有蛋白酶，Chittenden 于1891从菠萝汁中分离出BR，直至Heinecke于1957年在菠萝的茎中发现含有更多的BR后，BR始得以商业化规模生产。
从菠萝的果实中提取的称为果菠萝蛋白酶(Fruit Bromelain)，从菠萝的茎中提取的称为茎菠萝蛋白酶(Stem Bromelain)。
BR的分子量约为 33000，是典型的巯基蛋白酶，能分解蛋白质，肽，酯，酰胺，因而在医药和食品领域有很高的应用价值。
我国于上世纪80年代将BR制剂作为药物正式用于临床，并正式纳入药品标准。
国内外的研究发现，BR不仅具有抗炎作用，抗血栓、抗肿瘤、抗病毒等作用，还有免疫调节功能，可用于治疗各种炎症、皮肤烧伤、上呼吸道感染和心血管疾病，并能抑制肿瘤细胞生长。
近期的研究表明，BR在治疗CoVID-19方面也有一定发展前景。
本文仅对BR的药效学研究概况作一综述，以期能对BR制剂的开发提供参考。
1、抗炎作用动物试验表明，BR具有抗炎作用。
Laura P. Hale等报导，BR可能通过多种机制发挥抗炎作用，包括改变白细胞的迁移和激活。
David J等人也证实，在3种不同的白细胞迁移到发炎的腹膜腔的小鼠模型中，BR均能有效地减少中性粒细胞向急性炎症部位的迁移，从而减少对炎症刺激的急性反应。
Bakare Ahmed O的研究表明， BR还可对抗促炎介质（Pro-inflammatory mediators），显著改善结扎Wistar大鼠神经病理性疼痛(NP )的基本体征。
其临床应用研究方面，MAURER在BR增加中性粒细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的能力研究的基础上，公开了BR治疗炎性疾病和用于伤口愈合过程辅助治疗的用途发明专利。
KLING [7]采用蛋白酶组合物调节存在于伤口和炎症部位的蛋白质的水平和活性，并促进受损组织的修复。
Michelini S等的研究表明，受试者服用BR、香豆素和芦丁对临床控制I和II阶段的原发和继发性淋巴水肿和控制与慢性炎症方面均有帮助，且无副作用，肝功能参数也无改变。
Naeem Hira等采用BR+醋氯芬酸治疗腰椎骨性关节炎(low back pain，LBP)，与单独使用标准药物醋氯芬酸作为对照，使用酶补充剂6周可产生有益的延滞效应（carry-over effects），而对骨髓指数（bone marrow index）和生命体征无影响，生活质量明显改善。
MIZUNO HIROYUK将BR 作为抗炎酶与镇咳、袪痰药、支气管扩张剂、抗组胺药或植物成分药等若干种药物组合在一起，用于治疗普通感冒，改善症状。
KASTKE, FLOYD A将槲皮素与BR混合作为主要活性成分，治疗非细菌性前列腺炎，可有效增加肠道透壁吸收，显著地提高了槲皮素的生物利用度。
Wittenborg A等的流行病学研究也表明，在治疗关节疾病、脊柱疾病、风湿性软组织疾病等方面，含BR、胰蛋白酶、芸香苷的组合物比类固醇消炎药的疗效和安全性更好。
2、免疫调节作用Christian R. Engwerda研究证实，BR在体外可以激活小鼠巨噬细胞和自然杀伤细胞(Natural Killer Cells,NK)。
实验中还观察到，BR可增加NK细胞对白细胞介素-2（IL-2）和白细胞介素-12（IL-12）介导的Ⅱ型干扰素(IFN-γ)的产生，还可以增强IFN-γ介导的一氧化氮和巨噬细胞对肿瘤坏死因子(TNFα)的产生，其作用与内毒素受体的激活和IFN-γ受体的调节无关。
因此，BR有可能在免疫缺陷的情况下激活炎症反应。
他们在脾细胞培养中体内外的研究结果还表明, BR可以通过对辅助细胞(accessory cell)的刺激和对T细胞的直接抑制,增强和抑制T细胞的免疫反应。
Hale等观察到，BR作为植物蛋白酶活性抗原，可以通过多次刺激系统和粘膜的免疫反应，而这种免疫反应的机制，可能有助于开发新的口服疫苗的佐剂。
Brakebush 等也报道BR具有免疫刺激特性，是一种促进吞噬、呼吸破裂和被人类粒细胞和单核细胞杀死白念珠菌的加速剂，恶性免疫淋球蛋白血症(XLA)患者的吞噬细胞似乎特别容易受到这种刺激。
BR还可减少炎性疾病的发作和持续时间，并改善伤口愈合过程中的状况。
其抗炎作用主要是由于免疫系统细胞的分泌增加，白细胞介素-8（IL-8）分泌刺激炎症区域的免疫反应，并通过趋化过程将免疫细胞吸引到该区域。
3、防治心血管疾病Metxig C等的实验证明，BR粗提物在体外可减少人体血小板聚集，减少血小板在牛主动脉内皮细胞的吸附和大鼠体内血栓的形成。
JOLLY, JAMES F在其研究成果中认为，高水平的纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)会降低纤维蛋白溶解，导致血栓形成。
而有效剂量的BR可抑制PAI-1活性，从而起到治疗心血管疾病的作用。
因此，BR作为一种蛋白水解酶，加速纤维蛋白原的分解对心血管疾病的防治是有益的，它能抑制血小板聚集引起的心脏病发作和中风，缓解心绞痛症状。
4、治疗癌症Rahul Debnath等的动物实验中证实，用丙酮沉淀从菠萝果中分离出来BR和过氧化物酶，可通过上调抗氧化酶和调节凋亡蛋白的表达，降低体内非霍奇金淋巴瘤的进展，改善诱导淋巴瘤动物的生存率。
Jung‐Ha Lee 等采用MTT法测定用不同剂量的BR处理后的口腔癌细胞Ca9-22和SCC-25的活力，细胞的存活率明显降低，且呈剂量依赖性。
肿瘤坏死因子（TNF）是体内产生的糖蛋白，能够在体外和体内选择性杀死肿瘤细胞的蛋白质而不损害健康细胞，TNF同时也被证明是一种中枢免疫调节剂。
RANSBERGER, KARL的研究发现，BR在体外和体内均可刺激TNF的合成。
密集的细胞外基质(Dense extracellular matrix ECM)是抑制治疗药物在肿瘤组织中渗透的主要障碍。
Xin Wang等将BR通过正交酯基交联剂交联，制备了一种新型的pH敏感纳米载流子，BR在交联后仍保持着一定的降解ECM的能力。
体内实验表明，pH敏感纳米颗粒在微酸性条件下可以降解，释放的BR通过ECM原位水解进一步促进了纳米颗粒在肿瘤实质中的渗透，与阿霉素产生协同抗肿瘤作用，对肿瘤生长抑制作用达到了62.5%。
化疗药物伊达比星（idarubici）等的原发细胞毒在杀死癌细胞的同时亦杀死正常细胞，而Taşkın Abdullah研究表明，伊达比星与 Br联合使用能够使癌细胞更易受到细胞毒性和遗传毒性的影响，依达比星与BR在低浓度时对HL- 60癌细胞的作用更强，而对PBMC的细胞毒性和遗传毒性较小。
Elham Raeisi等的体外试验表明，BR-顺铂联合用药可抑制MCF7细胞的增殖，BR-5-FU联合用药对AGS细胞也有同样的作用。
Valle S J等报告了一种腹膜黏液性肿瘤患者BR和乙酰半胱氨酸( BromAc )的１期临床结果，将引流管插入肿瘤肿块或腹腔，Brom 20 ~ 60 mg，Ac1·5 ~2 g于5 %葡萄糖中给药，使肿瘤产生的黏蛋白溶解，可为不能手术的黏液性肿瘤患者提供一种新的微创治疗方法。
BR与N-乙酰半胱氨酸结合还可以增强化疗药物如吉西他滨（Gemcitabine）、5-FU、顺铂、多柔比星等化疗药物的疗效并降低毒性，使临床化疗剂量大大减少，用药次数和治疗周期延长，产生更高的疗效。
BR还可以与多种药物联用，减少单个药物的用量，使药物组合的总效果大于每种药物的效果之和，从而降低药物的毒副作用，亦即“鸡尾酒”疗法，研究较多的有BR与多种抗癌活性天然药物的组合物。
BR不仅具有化疗增敏作用，还可以用作肿瘤细胞的放射增敏剂，并可保护正常细胞免受辐射作用。
Raeisi Farzaneh等研究表明，BR与放射结合可显著降低小鼠乳腺癌细胞（4T1）的生长和增殖，有望用作乳腺癌患者放射治疗的增敏剂。
5、烧伤和清创BR是蛋白水解酶的混合物，具有分解坏死皮肤能力，对无法手术治疗的创伤病人尤为重要。
Samaneh Bayat研究了在动物模型中BR负载壳聚糖纳米纤维修复灼伤的疗效。
结果表明，2%BR -壳聚糖纳米纤维具有较好的物理化学性质和释放特性和伤口愈合活性。
Yaron Shoham报导，24名患有不同病因的慢性伤口的患者，连续11小时的酶清创治疗，直到伤口闭合。
结果表明，BR清创对慢性伤口安全有效，而由酶清创引起的唯一不良事件是疼痛。
TOREN, AMIR研究并公开了一种BR和银离子为主的组合物和应用专利技术，其中含局部麻醉药，以凝胶，乳膏等形式用于深度烧伤的清创术，可减少伤口部位的细菌负荷，保护伤口部位组织免受细菌的污染，克服由于延迟清创所产生的风险，并可避免清创过程的疼痛。
ROSENBERG, LIOR发明的伤口敷料，所含药物包括皮质类固醇、生长因子、杀菌剂、抗生素等，应用后可选择性清除坏死组织，22天的伤口可形成完整的上皮，并能使健康组织基本完好无损。
Mediwound公司生产的Nexobrid，是以BR为基础，用于传统手术切取深度真皮和全厚烧伤的替代治疗的药物。
但应用NexoBrid 需要注意的是，对患有糖尿病足烧伤的病人，可能导致进一步坏死的结果。
为了更好地指导酶清创术，欧盟发布了酶促清创术( Nexobrid RP )的相关指南。
6、抗病毒已有BR改善单纯疱疹感染引起的长期多形红斑发作的个案报导，患者用药一年，每天口服BR两次，每次500毫克，可抑制疱疹的再激活，而持续使用抗病毒药物，如阿昔洛韦、瓦拉昔洛韦和福昔洛韦，则不能有效地预防多形红斑的复发。
EVANS, ROBIN D 公开了治疗人乳头瘤病毒感染引起的皮肤损伤、扁平疣、丝状疣或足底疣，生殖器疣的组合物，其中含有菠萝蛋白酶。
CoVID-19是冠状病毒SARS-CoV-2引起的严重呼吸综合征疾病，其感染方式是由于SARS-CoV-2病毒的刺突蛋白(spike protein) 可与人体细胞表面的血管紧张素转化酶2(ACE2)受体蛋白结合，而进入人体细胞，人体细胞中跨膜丝氨酸蛋白酶(TMPRSS2)，在病毒入侵过程中可激活冠状病毒的刺突蛋白，为SARS-CoV-2进入细胞提供便利，在ACE2受体与TMPRSS2的联合作用下，SARS-CoV-2更容易入侵宿主细胞。