菠萝蛋白酶提取液
从菠萝中提取菠萝蛋白酶
从菠萝中提取菠萝蛋白酶
菠萝蛋白酶是一种有机物，也称为溶菌酶或蛋白水解酶。
它的特点是可以分解蛋白质，具有较强的酸性和碱性环境适应能力，因此，广泛应用于医疗、食品、化妆品等领域中。
从菠萝中提取菠萝蛋白酶是一项艰巨的任务。
以下是一些步骤：第一步是采集新鲜的菠萝果肉。
必须选用成熟度好的金丝菠萝果肉。
应选择外皮金黄色、果肉红黄相间的菠萝果肉。
第二步是制备浸出液。
将新鲜的菠萝果肉去皮、去核，切成小块，加入适量的水，搅拌并煮沸，经过静置、过滤，即可得到浸出液。
第三步是提取菠萝蛋白酶。
将制备好的浸出液冷藏，待其沉淀，将上层的冰冷水慢慢倒出，留下沉淀。
然后，在沉淀中加入适量的酸性酶解剂，轻轻摇晃，放置几小时。
第四步是酶活测定。
将提取的菠萝蛋白酶放在适宜的酶活测定条件下，如适宜的温度和酸碱度等，测定其活性或浓度。
以上是从菠萝中提取菠萝蛋白酶的一些步骤。
菠萝蛋白酶的应用范围广泛，可用于肉制品、啤酒、乳制品、水产品等食品中。
同时，它还能被用于医疗和化妆品领域，例如用于抗肿瘤、消炎、增加皮肤弹性等。
因此，菠萝蛋白酶的提取十分重要，细节决定了酶的纯度和活性，也影响到菠萝蛋白酶在不同领域中的应用。
菠萝蛋白酶的提取分离纯化及活性测定
菠萝蛋白酶得提取、初步分离纯化及活性测定１5食安(1)班张凯摘要:本研究运用硫酸铵沉淀法与透析法并结合考马斯亮蓝G520染色法测定菠萝皮中蛋白酶活性及蛋白质含量,得到同一品种及成熟度得菠萝皮经两种不同得纯化方法处理,菠萝皮中得蛋白酶都能被有效纯化,但就是蛋白酶活性会损失一部分、关键词:菠萝蛋白酶;透析法;分离纯化;酶活性;前言菠萝蛋白酶(bromelａｉｎ)就是从菠萝植株中提取得一类蛋白水解酶得总称,主要存在于菠萝茎与果实中,根据提取部位得不同,分为茎菠萝蛋白酶与果菠萝蛋白酶。
Mａrcaｎo于18９1年研究发现菠萝汁中含有蛋白酶、随后,人们对菠萝蛋白酶展开了一系列研究,发现其在医药与化工领域有很好得利用价值。
1957年,Heineche等从菠萝茎中提取得到蛋白质水解酶,从而使菠萝蛋白酶实现商品化生产。
目前,菠萝蛋白酶得一些功能成分已得到成功分离,并应用于医药领域、随着提取纯化技术得不断进步,高活性得菠萝蛋白酶将广泛应用于医药、化工与食品领域。
[１］利用菠萝皮分离纯化菠萝蛋白酶,不仅可充分利用资源,拓展菠萝蛋白酶得获取途径与应用空间,还可降低菠萝加工废料对环境得污染;随着市场对菠萝加工产品需求量得增大,对于菠萝皮得研究与利用就显得尤为重要,尤其对最主要得功能成分蛋白酶得分离、纯化与性质得研究更有意义、[２]本文通过对菠萝皮蛋白酶得提取,初步分离纯化及活性测定进行了初步研究,探讨影响菠萝蛋白酶活性得影响因素,并解决实验存在得一些问题、1实验材料与仪器１、1实验材料与试剂新鲜菠萝,透析袋(截留相对分子质量８00０~１４０00),0。
１mo1／ＬpH 7.8磷酸缓冲液配制(ＰBS),0.0１mｏ1/L pH 7。
８磷酸缓冲液配制(PBS),1%酪蛋白,激活剂[含20mｍo1/L半胱氨酸-盐酸盐、1mｍo１/L EDTA—Na2(乙二胺四乙酸二钠)],10%三氯乙酸(TCＡ)。
1、2实验仪器７2２型可见光分光光度计:上海舜宇恒平科学仪器有限公司;７52型光栅分光光度计:北京光学仪器厂;TＤL－６0B台式离心机:上海安宁科学仪器厂;D5Ｍ离心机:长沙湘智离心机仪器有限公司;DK-８Ｄ电热恒温水浴锅:上海森信实验仪器有限公司;可控硅恒温水浴锅:上海锦屏仪器仪表有限公司;AMPUT电子天平:深圳安普特科技有限公司;BS１１０S分析天平北京赛多利斯天平有限公司;ＤS—１型高速组织捣碎机:上海标本模型厂;HZS-H型水浴振荡器:哈尔滨市东联电子技术开发有限公司。
菠萝蛋白酶的提取与活力测定
上清液 沉淀物
加100ml0.1%EDTA溶液， 200ml1.5%氯化钠液
4200r/min,5min离心
氯 化 钠 溶
酶复合物 10
在提取菠萝蛋白酶时,添加单宁溶液的浓度为0. 2 %沉淀蛋白的效果最好,同时 果汁的总酸度不大,糖酸比合适,菠萝汁中菠萝蛋白酶的沉淀率达到72%。菠萝蛋 白酶提取时,pH值为6. 5～8.5左右,温度为6 0℃,菠萝蛋白酶的活性最强 ,可作为最 佳提取条件。
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计算酶的比活性 • 酶的比活性 • （F.I.P.-U/mg)=E275/(Ew×0.116×10） • E275——275nm处得吸光度 • Ew——每2.5ml所用酶液中含酶的重量，mg • 0.116——275nm处酪氨酸溶液（1umol酪氨酸/10ml）的吸光度 • 10——反应时间，min
•
温度范围： 50～60℃
•
作用PH值: 6.0～9.0
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三、实验材料和试剂 1、实验材料
新鲜菠萝(下脚料）、0.1mg/ml牛血清蛋白 2、实验试剂 柠檬酸钠 维生素C 单宁 0.1%EDTA溶液 1.5%氯化钠溶液 1%酪蛋白溶液 1mol/L氢氧化钠溶液 0.05mol/L磷酸缓冲液（溶解磷酸二氢钾，加氢氧化钾调PH至7.0） 激活剂（PH7.0，0.05mol/L磷酸缓冲液，内含15mmol/L硫代硫酸钠和6mmol/LEDTA2Na,现配现用）
工艺流程： 菠萝下脚料→压榨→汁液→去杂质→澄清液→超滤浓缩→浓缩液→降温→加有机溶
剂沉淀（ 95%乙醇）→湿酶→减压干燥→酶制品
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谢谢观赏
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二、菠萝蛋白酶在医药、保健品
• 1、抑制肿瘤细胞的生长 • 2、对心血管疾病的防治 • 3、用于烧伤脱痂 • 4、消炎作用
菠萝蛋白酶提取液
菠萝蛋白酶提取液简介：菠萝蛋白酶(Bromelain)简称菠萝酶，亦称凤梨酶、凤梨酵素等，是存在于菠萝植株中的蛋白水解酶，可从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到，菠萝蛋白酶已被广泛应用于食品、医药等行业。
利用吸附力、离子键、共价键等不同的联结方式，将酶与不溶性载体联结，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活，易于储存运输。
Leagene 菠萝蛋白酶提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的菠萝蛋白酶。
该试剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 离心管或试管操作步骤(仅供参考)：1、取g 菠萝肉或植物组织，切碎后在研钵或匀浆器中加入等体积组织匀浆液进行研磨或匀浆。
2、静置，滤纸过滤或纱布过滤。
3、留取滤液，边搅拌边加入Bromelain Lysis buffer ，搅拌，静置。
4、离心，弃上清液，收集沉淀，加入Bromelain 洗脱液，搅拌洗脱。
5、离心，取上清液，冻存，用于组织匀浆液的检测或其他用途。
计算：组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100% 注意事项：1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
编号 名称 CS0411 2×500ml Storage 试剂(A): 组织匀浆液 500ml 4℃ 试剂(B): Bromelain Lysis buffer 500ml 4℃ 避光 试剂(C): Bromelain 洗脱液 100ml 4℃ 使用说明书 1份2、所测样本的值高于标准曲线的上限，应用菠萝蛋白酶稀释样品后重新测定。
3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6个月有效。
相关：编号名称CC0007 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁)CS0001 ACK红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer)DC0032 Masson三色染色液DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA)NR0001 DEPC处理水(0.1%)PS0013 RIPA裂解液(强)TC1167 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)。
从菠萝中提取菠萝蛋白酶的实训
从菠萝中提取菠萝蛋白酶的实训任务一从菠萝汁中提取菠萝蛋白酶【提取工艺】1、选取70%-80%成熟度菠萝的果皮，榨汁，用四层纱布过滤得鲜果皮汁。
2、称取1kg制备好的鲜菠萝果皮汁，加5%苯甲酸钠溶液10ml，搅拌均匀。
3、4000r/min离心7min，取上清液倒入干净的烧杯中。
4、在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液，边加边搅拌约15min，可见沉淀析出。
静置40min。
5、除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4000r/min离心5min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。
6、把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中，加0.1%EDTA溶液100ml搅匀，再把1.5%氯化钠溶液200ml倒入烧杯中搅匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。
7、将洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%乙酸锌溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；加0.06%抗坏血酸溶液30ml，搅拌均匀，静置5min；加1.5%氯化钠溶液20ml，搅拌均匀，静置5min；最后加0.5%EDTA溶液20ml，静置5min后，以4000r/min 离心7min，把上清液倒掉，得到洗涤剂II酶复合沉淀物。
8、把洗涤剂II酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0.5%硫代硫酸钠溶液20马力，搅拌均匀，静置5min；加1%L-半胱氨酸溶液10ml，搅拌均匀，以4000r/min离心7min，倒掉上清废液，最后得到蛋白酶糊。
9、把酶糊放入冰室（-12℃），低温冷冻15-20h。
取出解冻，离心得酶膏。
10、把酶膏倒入装有氯化钙或五氧化二磷的干燥器中干燥6～10h，得到的是菠萝酶。
研成粉状，低温保存。
任务二质量鉴定以菠萝蛋白酶活力来标志它的质量。
1、取酶制品0.15g克加入到0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.0）定容至100mL，过滤。
此滤液为溶液酶制剂。
2、取1mL溶液酶加入0.9mL激活剂，于37℃水浴中保温。
3、保温恒定后，加入同样预热的1%酪蛋白溶液，混匀，在37℃下准确反应10min，加入8mL1mol/L氢氧化钠溶液，迅速摇匀，于室温放置半小时。
菠萝蛋白酶的提取和分离
菠萝蛋白酶的提取和分离朱明英 林文光(云南省热带作物科学研究所 景洪 666100) 菠萝蛋白酶,是菠萝下脚料综合利用的重要产品之一,一种新的生物化学制品。
菠萝蛋白酶有着广泛的用途,在制革、食品、饮料等生产中应用很多,在医学上用之医治炎症等多种疾病,特别对橡胶脱蛋白效果也很显著。
其水解蛋白质的活性大,适应性广。
菠萝蛋白酶的提取和分离方法主要参照文献[1—2]。
本试验在分离和提取工艺上作了一些摸索改进。
1 材料1.1原料:选70%—80%成熟度无刺卡因品种菠萝果皮,榨汁,用4层纱布过滤得鲜果皮汁。
1.2试剂:防腐剂:5%苯甲酸钠溶液。
沉淀剂:0.2%单宁溶液。
洗涤剂Ⅰ:0.1%乙二胺四乙酸二钠。
1.5%氯化钠溶溶洗涤剂Ⅱ:0.5%醋酸锌溶液、0.06%抗坏血酸溶30ml、0.15%氯化钠溶液200ml、0.5% EDT A溶液20m l洗涤剂Ⅲ:0.5%硫代酸钠溶液。
1%L—半胱氨酸溶液10m l(配制方法:称取L—半胱氨酸0.1g加水10ml,加1N盐酸溶液6—8滴助溶解,最后用6N N a OH溶液中和至pH3—4。
)2 方法和步骤2.1菠萝蛋白酶的提取称取1kg制备好的鲜果皮汁,加5%苯甲酸钠溶液10m l搅匀,以4000r/min离心7min,取上清液倒入干净烧杯中。
在上清液中缓缓加入0.2%的单宁溶液75ml,边加边拌约15min,沉淀物析出,静止40m in。
虹吸除去上清废液,把酶复合沉淀物倒入离心杯中,以4000r /min离心5min,倒掉上清废液,得到酶糊复合物。
2.2分离、洗涤和保护2.2.1洗涤Ⅰ把提取的蛋白酶糊倒入烧杯中,加0.1% EDTA溶液100m l搅匀,再把0.15%氯化钠溶液200m l倒入烧杯中搅匀,以4000r/m in离心7min,倒掉上清废液,得到洗涤Ⅰ酶复合沉淀物。
2.2.2洗涤Ⅱ把洗涤Ⅰ酶复合沉淀物倒入烧杯中,加0.5%醋酸锌溶液20ml搅拌均匀,静止5min,加0.06%抗坏血酸溶液30ml搅匀,静止5min;加1.5%氯化钠溶液20m l搅匀,静止5min;最后再加0.5%EDT A溶液20ml搅匀,静止5min以4000r/min离心7m in,把上清废液倒掉,得到洗涤Ⅱ酶复合沉淀物。
[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因
![[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因](https://img.taocdn.com/s3/m/8ea02ca0ed630b1c59eeb5dd.png)
[菠萝蛋白酶提取]果菠萝蛋白酶的提取失败原因菠萝蛋白酶提取一、实验目的：1、了解菠萝蛋白酶的提取和纯化工艺2、优化和加深熟悉菠萝蛋白酶提取二、实验原理：菠萝蛋白酶(Bromelain，简称菠萝酶，亦称为凤梨酶或凤梨酵素)是从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻干燥而得到的一种纯天然植物蛋白酶。
其外观为浅灰色粉末状，分子量为 33000 ，等电点为 9.55 。
品质最佳的菠萝蛋白酶是利用菠萝的中茎加工,采用超滤方法进行过滤浓缩,低温冷冻干燥而得的。
产品已被广泛应用于食品、医药等行业。
结果表明。
提取菠萝中菠萝蛋白酶最佳提取工艺条件是添加单宁溶液的浓度为0．2％，提取时最适pH值为6．5～8．5左右，而最适提取温度为60℃。
菠萝蛋白酶作为一种食品添加剂可用于肉质嫩化，啤酒澄清，还用于干酪、明胶及水解蛋白的生产。
在医药上它可以治疗水肿及多种炎症；它能迅速溶痂，对正常组织无害，不影响植皮，适用于中小面积深度烧伤的治疗。
三、实验步骤操作要点：菠萝蛋白酶的提取称取1 kg制备好的鲜果皮汁，加5％苯甲酸钠溶液10 ml搅匀，以4 000 r／min离心7 min，取上清液倒人干净烧杯中。
上清液分装在6个小烧杯中，每个装100 ml菠萝汁，分别缓缓加入空白、0．1％、0．2％、0．3％、0．4％、0．6％单宁溶液10 ml，边加边拌约1 5min，沉淀物析出，静止40 min。
虹吸除去上清废液，把酶复合沉淀物倒入离心杯中，以4 000 r／min。
离心5 min，倒掉上清废液，得到酶糊复合物。
分离、洗涤和保护把提取的蛋白酶糊倒人烧杯中，加0．1％EDTA溶液100 ml搅匀，再将1．5％氯化钠溶液200 ml倒人烧杯中搅匀，以4 000 r／min离心7 min，倒掉上清废液，得到洗涤剂I酶复合沉淀物。
把洗涤剂I酶复合沉淀物倒入烧杯中，加0．5％乙酸锌溶液20 min，搅拌均匀，静止5 min，加0．06％抗坏血酸溶液30 ml，搅匀，静止5 rain，加1．5％氯化钠溶液20 ml，搅匀，静止5 min，最后再加0．5％EDTA溶液20 ml，搅匀，静止5min，以4 000 r／min离心7 min，把上清废液倒掉，得到洗涤剂Ⅱ酶复合沉淀物。
菠萝中提取蛋白酶
注意事项
菠萝蛋白酶易受热失活，应低温短时生产， 一般在0℃左右进行。 某些化学药品和金属离子易引起菠萝蛋白酶 失活，生产过程忌碱、忌强酸作用，勿与铁、 铜等重金属接触。 菠萝蛋白酶是一种胶体，生产过程中易产生 气泡造成损失，所以生产过程应注意操作。
THE END 谢谢欣赏！
准备知识
菠萝茎和菠萝皮的含水量都达到85％以上， 但菠萝茎的榨汁率比菠萝皮的榨汁率低。菠萝皮 和菠萝茎中的糖分含量占总干重的80％左右，其 中菠萝茎中淀粉占总糖份量的一半。离心可以有 效去除榨汁中的不溶物质及菠萝茎中的淀粉，能 部分去除果胶，对一些大分子悬浮物质去除困难。
背景知识
菠萝蛋白酶在避光、低温条件下贮藏的酶活 力损失最小。在55℃时具有最高的蛋白酶活 性，40℃以上条件下酶活半衰期在2h以内， 其热变性温度在55℃和60℃之间。 金属离子对菠萝蛋白酶的酶活力具有影响， Ca2+引起的酶的失活速度最快；Fe2+和Cu2+对 酶活力影响最大。
结果讨论
3、菠萝蛋白酶对热不稳定，试验中温度的控制是否 、菠萝蛋白酶对热不稳定， 合理； 合理； 4、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足， 、在活力测定的步骤中所加入的酪蛋白的量不足， 导致结果偏低； 导致结果偏低；
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计算：
组织或植物粗酶液获得率(ml)=上清液体积(ml)/组织或植物质量×100%
注意事项：
1、 待测样品中不能含有磷酸酶抑制剂，同时需避免反复冻融。
北京雷根生物技术有限公司
2、 所测样本的值高于标准曲线的上限，应用菠萝蛋白酶稀释样品后重新测定。 3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：6 个月有效。
相关：
编号 CC0007 CS0001 DC0032 DF0135 NR0001 PS0013 TC1167
名称 磷酸缓冲盐溶液(10×PBS,无钙镁) ACK 红细胞裂解液(ACK Lysis Buffer) Masson 三色染色液 多聚甲醛溶液(4% PFA) DEPC 处理水(0.1%) RIPA 裂解液(强) 尿素(Urea)检测试剂盒(脲酶波氏比色法)
Storage
500ml
4℃
500ml 4℃ 避光
100ml
4℃
1份
自备材料：
1、 蒸馏水 2、 离心管或试管
操作步骤(仅供参考)：
1、取 g 菠萝肉或植物组织，切碎后在研钵或匀浆器中加入等体积组织匀浆液进行研磨或匀 浆。 2、静置，滤纸过滤或纱布过滤。 3、留取滤液，边搅拌边加入 Bromelain Lysis buffer，搅拌，静置。 4、离心，弃上清液，收集沉淀，加入 Bromelain 洗脱液，搅拌洗脱。 5、离心，取上清液，冻存，用于组织匀浆液的检测或其他用途。
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菠萝蛋白酶提取液
简介：
菠萝蛋白酶(Bromelain)简称菠萝酶，亦称凤梨酶、凤梨酵素等，是存在于菠萝植株中 的蛋白水解酶，可从菠萝果茎、叶、皮提取出来，经精制、提纯、浓缩、酶固定化、冷冻 干燥而得到，菠萝蛋白酶已被广泛应用于食品、医药等行业。利用吸附力、离子键、共价 键等不同的联结方式，将酶与不溶性载体联结，制成固定化酶，可以很好的避免酶的失活， 易于储存运输。
Leagene 菠萝蛋白酶提取液主要用于裂解植物组织，提取样品中的菠萝蛋白酶。该试 剂仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
编号 名称 试剂(A): 组织匀浆液 试剂(B): Bromelain Lysis buffer 试剂(C): Bromelain 洗脱液 使用说明书
CS0411 2×500ml
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