清肠温中方对三硝基苯磺酸诱导的实验性结肠炎大鼠肠黏膜作用的研究-论文

环球中医药２０１４年３月第７卷第３期Ｇｌｏｂａｌ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ　２０１４，Ｖｏ１．７，Ｎｏ．３　清肠温中方对三硝基苯磺酸诱导的实验性　结肠炎大鼠肠黏膜作用的研究　

刘丽娟　王允亮　史瑞魏仕兵杨美娟　李军祥　【摘要】　目的研究清肠温中方对三硝基苯磺酸诱导的实验性结肠炎大鼠结肠黏膜的作用。　方法以三硝基苯磺酸灌肠诱导大鼠急性结肠炎，造模成功后连续以清肠温中方高、中、低剂量混　悬液及柳氮磺吡啶（ｓａｌａｚ０ｓｕｌｆａｐｙｒｉｄｉｎｅ，ＳＡＳＰ）混悬液灌胃治疗１０天，取结肠，进行疾病活动指数　（ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ，ＤＡＩ），结肠黏膜损伤指数（ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎｄｅｘ，ＣＭＤＩ）和结肠组织病　理学（ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ，ＨＳ）评价。结果药物干预１Ｏ天后，模型组ＤＡＩ、ＣＭＤＩ、ＨＳ明显高于正常组　（Ｐ＜０。０５）；ＳＡＳＰ组ＤＡＩ及ＣＭＤＩ均较模型组有明显的下降（Ｐ＜０．０５）；清肠温中方各剂量组ＤＡＩ、　ＣＭＤＩ、ＨＳ水平较模型组均明显下降（Ｐ＜０．０５），其中清肠温中方高、中剂量组炎细胞侵润的程度明　显低于模型组（Ｐ＜０．０５）。结论清肠温中方对三硝基苯磺酸诱导的结肠炎大鼠肠黏膜有保护作　用，且能有效改善结肠组织炎细胞侵润。　【关键词】　清肠温中方；　疾病活动指数；　结肠黏膜损伤指数；　病理学评价；　炎性侵润　【中图分类号】　Ｒ２５４．６　【文献标识码】　Ａ　ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４—１７４９．２０１４．０３．００６　

Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｃｈａｎｇ　Ｗｅｎｚｈｏｎｇ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ　ｏｎ　ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｏｆ　ＴＮＢＳ・－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｏｌｉｔｉｓ　ｒａｔｓ　Ｌ／Ｕ　Ｌｉ・－　ｊｕａｎ，ＷＡＮＧ　Ｙｕｎ—ｌｉａｎｇ，ＳＨ１　Ｒｕｉ，ｅｔ　ａ１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＧａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｄｏｎｇｆａｎｇ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉ—　ｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆＣｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　１０００７８，Ｃｈｉｎａ　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ：ＬＩ　Ｊｕｎ—ｘｉａｎｇ，Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｉｊｘ９７０５ｏ８＠ｓｏｈｕ．ｔｏｍ　【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｘｐｌｏｒｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｑｉｎｇｃｈａｎｇ　Ｗｅｎｚｈｏｎｇ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ（ＱＣＷＺＤ）ｏｎ　ｃｏ—　Ｉｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｏｎ　ａ　ｒａｔ　ｍｏｄｅｌ　ｏｆ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ（ＩＢＤ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｏｌｉｔｉｓ　ｗａｓ　ｉｎ—　ｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｍａｌｅ　ｓｐｒａｇｕｅ—ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ｒａｔｓ　ｂｙ　ｉｎｔｒａｃｏｌｏｎｉｃ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　２，４，６－ｔｒｉｎｉｔｒｏｂｅｎｚｅｎｅ　ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（ＴＮＢＳ），１００　ｍｇ／ｋｇ．ＱＣＷＺＤ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｓａ１ａｚｏｓｕｌｆｌａｐｙｒｉｄｉｎｅ（ＳＡＳＰ）ｗａｓ　ｇｉｖｅｎ　ｂｙ　ｇａｒａｇｅ　ｒｏｕｔｅ　ｄａｉｌｙ　ｆｏｒ　１０　ｄａｙｓ．Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ（ＤＡＩ），ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎｄｅｘ（ＣＭＤＩ），ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ（ＨＳ）ｗｅｒｅ　ｅｓｔｉｍａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＤＡＩ，ＣＭＤＩ，ＨＳ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｈｉｇｈｅｒ　ｉｎ　ＴＮＢＳ—ｔｒｅａｔｅｄ　ｒａｔｓ（Ｐ　０．０５）；ＤＡＩ　ａｎｄ　ＣＭＤＩ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｉｎ　ＳＡＳＰ—ｔｒｅａｔｅｄ　ＴＮＢＳ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｃｏｌｉｔｉｓ　ｒａｔｓ（Ｐ＜０．０５）．ＱＣＷＺＤ　ｐｒｅｐａ－　ｒａｔｉｏｎ　ｒｅｄｕｃｅｄ　ＤＡＩ，ＣＭＤＩ　ａｎｄ　ＨＳ　ｏｆ　ＴＮＢＳ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｒａｔｓ（Ｐ＜０．０５）；ＱＣＷＺＤ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ（１２００　ｍｇ／ｋｇ，　６００　ｍｇ／ｋｇ）ｒｅｄｕｃｅｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ（ＩＩ）ｏｆ　ｃｏｌｏｎ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｄａｔａ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｉｎｄｉ—　ｃａｒｅｄ　ｔｈａｔ　ＱＣＷＺＤ　ｃｏｕｌｄ　ｐｒｏｔｅｃｔ　ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｂｙ　ｒｅｄｕｃｉｎｇ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ．　【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】　Ｑｉｎｇｃｈａｎｇ　Ｗｅｎｚｈｏｎｇ　Ｄｅｃｏｃｔｉｏｎ；Ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ；　Ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎｄｅｘ；Ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ；　Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ　

基金项目：北京中医药大学创新团队资助项目（２０１１一ＣＸＴＤ一２４）　作者单位：１０００７８北京中医药大学东方医院脾胃肝胆科［刘丽娟　（博士研究生）、王允亮（博士研究生）、史瑞、魏仕兵（硕士研究生）、　李军祥］；北京中医药大学基础医学院（杨美娟）　作者简介：刘丽娟（１９８４一），女，２０１２级在读博士研究生。研究　方向：中医药防治慢性胃肠道疾病。Ｅ—ｍａｉｌ：ｌｊｌｉｕ６０９＠１６３．ＣＯＢ　通讯作者：李军祥（１９６４一），博士，主任医师，博士生导师。研究　方向：中医药防治慢性肝胆和胃肠道疾病。Ｅ—ｍａｉｌ：１￣ｘ９７０５０８＠　ｓ０ｈｕ．ｃｏｍ　

１８７　・论著・　

炎症性肠病（ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ　ｂｏｗｅｌ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＩＢＤ）　是一组特发性、慢性、炎症性肠道疾病状态，包括克　罗恩病（Ｃｒｏｈｎ＇ｓ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＣＤ）和溃疡性结肠炎（ｕｌ—　ｃｅｒａｔｉｖｅ　ｃｏｌｉｔｉｓ，ＵＣ）…。ＩＢＤ过去常见于发达国家，　近几十年发展中国家的发病率逐步上升　Ｊ。中医　药对ＩＢＤ的治疗有着明显的优势　Ｊ。清肠温中方　在临床ＩＢＤ的治疗中有着显著的疗效，本研究拟在　观察清肠温中方对２，４，６一三硝基苯磺酸（２，４，６一ｔｒｉ—　１８８　环球中医药２０１４年３月第７卷第３期Ｇｌｏｂａｌ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｒｃｈ　２０１４，Ｖｏ１．７，Ｎｏ．３　ｎｉｔｒｏ．Ｂｅｎｚｅｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ，ＴＮＢＳ）诱导的实验性结　肠炎大鼠肠黏膜的作用。　

１材料与方法　１．１实验材料　健康雄性ｓＤ大鼠，４６只，体重（２００±２０）ｇ，　ＳＰＦ级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司　［许可证号：ＳＣＸＫ（京）２０１２—０００１］，常规饲养于北　京中医药大学ＳＰＦ级动物房，１２小时光照／黑夜循　环，温度（２２±２）℃，湿度５０～６０％；自由饮食饮水　饲养。　清肠温中方配方颗粒（黄连９　ｇ、炮姜９　ｇ、三七　６　ｇ、木香６　ｇ、炙甘草３　ｇ等）购自北京中医药大学东　方医院配方颗粒药房；柳氮磺吡啶片（ＳＡＳＰ，上海中　西三维药业有限公司）购自北京中医药大学东方医　院药房；ＴＮＢＳ，５％（ｗ／ｖ）购自ｓｉｇｍａ（Ｐ２２９７），冰乙　酸（ＮＯ．８１６０１）、邻甲联苯胺（ＮＯ．６１８０５）购自国药　集团化学试剂北京有限公司。　１．２动物分组与造模　ＳＤ大鼠适应性饲养１周后，按随机数字表随机　分为正常组（５只）、模型组（１０只）、柳氮磺吡啶组　（４００　ｍｇ／ｋｇ，１０只）、高剂量组（清肠温中方生药量　１２００　ｍｇ／ｋｇ，１０只）、中剂量组（清肠温中方生药量　６００　ｍｇ／ｋｇ，１０只）、低剂量组（清肠温中方生药量　３００　ｍｇ／ｋｇ，１０只）。采用ＴＮＢＳ／乙醇复合法复制实　验性结肠炎大鼠模型　Ｊ。造模前大鼠禁食不禁水　２４小时，１０％水合氯醛（０．３　ｍｌ／ｌＯ０　ｇ）腹腔注射麻　醉大鼠，将乳胶软管液体石蜡润滑后由肛门缓慢轻　插入直肠约８　ａｍ，一次性缓慢推注含３３．３％乙醇的　ＴＮＢＳ溶液（１００　ｍｇ／ｋｇ）０．６　ｍｌ，１分钟之内完成，保　持仰卧位臀部向上１５分钟，空白组灌入等量去离子　水，自然苏醒后放回笼中，常规饲养。造模３天后随　即取５只大鼠处死后观察结肠以确定造模成功。　造模第４天连续给予相应药物灌胃治疗１０天，模　型组及正常组以去离子水对照，１０　ｍｌ／ｋｇ，每天观　察大鼠一般状况，称取体重，检测大便潜血，观察大　便一般性状。以造模第一天为ＤＡＹ１，灌胃结束　为ＤＡＹ１３。　１．３标本采集与处理　末次给药后，禁食不禁水２４小时准备结肠，　１０％水合氯醛（０．３５　ｍｌ／１００　ｇ）腹腔注射麻醉大鼠，　腹主动脉取血，常温放置３小时后离心分离血清　（３０００　ｒｐｍ，１０分钟），分装后一２Ｏ℃冻存备用；分离　远端结肠１０　ｃｍ，沿肠系膜纵轴剪开肠腔，冰ＰＢＳ冲　洗后观察结肠黏膜损伤情况；取结肠损伤明显处　１　ｃｍ×１　ｃｍ放人４％多聚甲醛中固定，石蜡包埋，切　片４　ｍ，ＨＥ染色观察病理。　１．４疾病活动指数、结肠黏膜损伤指数　便潜血采用邻甲联苯胺法检测　Ｊ：取２～３滴　０．１５　Ｌ／Ｌ邻甲联苯胺冰乙酸溶液滴于粪便上，滴加　３％过氧化氢２～３滴，立即观察结果，在２分钟内显　蓝色为阳性。疾病活动指数（ｄｉｓｅａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎｄｅｘ，　ＤＡＩ）评分　ｊ：体质量：０分无下降，１分下降１％～　５％，２分下降５％～１０％，３分下降１０％～１５％，４　分下降＞１５％；大便性状：０分正常，２分松散，４分　腹泻；大便隐血：０分无，２分阳性，４分肉眼血便。　ＤＡＩ＝（体质量下降分数＋粪便性状分数＋隐血分　数）／３。　结肠黏膜损伤指数（ｃｏｌｏｎｉｃ　ｍｕｃｏｓａ　ｄａｍａｇｅ　ｉｎ．　ｄｅｘ，ＣＭＤＩ）评分　ｊ：０分无损伤；１分无溃疡；２分肠　壁变厚，无溃疡；３分有溃疡，直径＜１　ｃｍ；４分有溃　疡，直径＞１　ｃｍ，肠管与周围组织无粘连；５分有溃　疡，直径＞１　ｃｍ，肠管与周围组织有粘连。ＣＭＤＩ、　ＤＡＩ评估均由非课题组成员完成。　１．５结肠组织病理学评分　石蜡切片常规ＨＥ染色，封片。结肠组织病理　学评分（ｈｉｓｔｏｌｏｇｉｃａｌ　ｓｃｏｒｅ，ＨＳ）评分标准　ｊ：ＨＥ染　色后光学显微镜下观察评分，炎症细胞浸润（ｉｎｆｌａｍ．　ｍａｔｏｒｙ　ｉｎｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ，ＩＩ）：０分无炎细胞侵润，１分轻　度，２分重度；肉芽肿：０分无，１分轻，２分重；病变深　度：０分黏膜层，１分黏膜下层，２分肌层，３分浆膜　层，计算总分，每个样本随机取３个视野，计算平均　分。ＨＳ评估均由非课题组成员在病理老师指导下　完成。　１．６统计学处理　采用ＳＰＳＳ　１８．０统计软件，计量及评分指标用　均值±标准差（　－４－Ｓ）表示，ＤＡＩ、ＣＭＤＩ、ＨＳ、ＩＩ评分　资料不符合正态分布或方差不齐进行非参数检验。　以Ｐ＜０．０５为差异有统计学意义。