实验三 补体溶血实验
第五章 补体参与的反应
第五章补体参与的反应内容一、溶血试验二、补体结合试验一、溶血试验当红细胞与相应抗体相结合，在电解质存在时，可使红细胞产生凝集现象；若同时加入新鲜动物血清，则血清中的补体可与红细胞及其抗体（溶血素）形成的免疫复合物结合，从而激活补体导致红细胞溶解，产生溶血现象。
【材料】1、抗原：2%绵羊红细胞（简称SRBC）。
2、抗体：溶血素即（SRBC抗体）。
3、补体，新鲜豚鼠血清。
4、生理盐水。
5、小试管、刻度吸管、试管架、37℃水溶箱等。
【方法】1、取小试管3支，编号后按下表加入各物（容量单位均为ml）溶血试验加样表（表2—1）单位ml管号2％红血球溶血素（2单位）补体（2单位）生理盐水结果1 0.5 0.5 0.5 0.52 0.5 0.5 - 1.03 0.5 - 0.51.02、将试管摇匀后置37℃水箱内：15—30分钟，取出观察有无溶血现象；3、结果观察：管底无血球沉淀，液体红色透明管为溶血。
注意分析结果及其意义，了解补体的性质与作用。
二、补体结合试验凝集反应和沉淀反应分别是颗粒性抗原、可溶性抗原与特异抗体结合的结果。
补体结合试验，则是基于抗原抗体复合物可以结合补体的原理，在补体参与下，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统来检测抗原或抗体是否发生特异性结合的一种抗原抗体反应。
补体结合试验有两个系统共五个成分参加：检测系统的已知抗原（或抗体）与持检抗体（或抗原）、补体、指示系统的绵羊红细胞和溶血素。
依次加入检测系统成分与补体作用后再加指示系统，若不出现溶血，即为补体试验阳性，表示检测系统中抗原抗体相对应（待检标本中有相应抗体或抗原），形成抗原体复合物并结合了补体，指示系统因缺乏补体而不发生溶血；反之若出现溶血，则为补体试验阴性，表示检测系统的抗原抗体不对应（持检标本中无相应抗体或抗原），不能结合补体，游离的补体与后加入的指示系统结合，导致绵羊红细胞溶解。
补体结合试验敏感性和特异性均较高，可用于检测梅毒，立克次体病和病毒感染等患者体液中的抗体或抗原以辅助诊断，还可用于某些病毒的分型。
补体实验报告
补体结合实验原理：补体无特异性，可与任何抗原抗体复合物结合而被激活，但不能与单独的抗原或抗体结合。
补体结合试验是一种有补体参与，以绵羊红细胞和溶血素作为指示系统的抗原抗体反应体系。
绵羊红细胞与溶血素结合后可激活补体，导致红细胞破坏，出现溶血现象。
参与补体结合反应的五种成分可分为两个系统：(1)检测系统，已知抗原（或抗体）、待测抗体（或抗原）；（2）指示系统，SRBC、溶血素。
待检测系统与补体作用后，加入指示系统，若不出现溶血，表示待测系统中的抗原抗体相对应；两者特异性结合形成抗原抗体复合物结合并消耗了补体，无游离的补体与指示系统结合，故不溶血，为补体结合试验阳性。
反之，若出现溶血，则为补体结合试验阴性。
方法：1.取五支试管，依次做好标记，放在试管架中。
2.按照下表加样。
结果：结果分析：1.羊血用前轻轻摇匀，避免剧烈正当引起溶血。
2.各种试剂的吸管不要混用。
3.补体的性质较不稳定，低温保存，加样时再从冰箱里取出。
4.水浴时避免水滴滴进试管。
5.本实验影响因素很多，对照组的反应情况是否正常是判断实验可信度的参照。
人外周血单个核细胞分离原理：常用来分离人外周血单个核细胞的分离液是由聚蔗糖和泛影葡胺按一定比例混合制成。
它分子量大又无化学活性，20摄氏度时比重约为1.077kg/L，淋巴细胞和单核细胞比重略小于分层液，为1.070kg/L左右。
而粒细胞和红细胞比重大，为1.092 kg/L左右。
通过离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布，淋巴细胞和单核细胞位于分离液的上层，而粒细胞和红细胞沉于离心管的管底，从而将淋巴细胞和单核细胞等单个核细胞分离出来。
方法：1.抽取1.5ml静脉血至肝素抗凝管，加入1.5ml Hank’s液2.混匀后取3ml稀释液，沿试管壁缓慢加入到2ml分离液中。
2000rpm,离心20min。
3.小心吸取淋巴细胞层，加入2ml Hank’s液，2000rpm,离心10min。
4.弃上清，加入2ml Hank’s液。
溶血试验
200 200 200 50
200 50 --
1/16 1/32 1/64 1/128 1/256
观察结果时， 观察结果时，应先观察对照管结照管结果 全部正确前提下观察待测血清管的结果， 全部正确前提下观察待测血清管的结果， 以出现完全溶血作为抗体的效价。 以出现完全溶血作为抗体的效价。 完全溶血作为抗体的效价
3.向第一支试管中加入血清 向第一支试管中加入血清200ul，充分混匀， 向第一支试管中加入血清 ，充分混匀， 吸出200ul放入第二管，混匀后取出 放入第二管， 吸出 放入第二管 混匀后取出200ul加 加 入第三管中，如此类推直至第七管， 入第三管中，如此类推直至第七管，混匀后 取出200ul弃去。第八管不加血清，为生理盐 弃去。 取出 弃去 第八管不加血清， 水对照管。至此， 水对照管。至此，第1~7管的血清稀释度分 管的血清稀释度分 别为： ： ， ： ， ： 别为：1：2，1：4，1：8……1：128。这种 ： 。 稀释方法称为连续倍比稀释法， 稀释方法称为连续倍比稀释法，为免疫试验 中常用的稀释方法。 中常用的稀释方法。
溶血试验
实验原理
溶血反应是指补体参与的抗体致 红细胞的溶解反应. 红细胞的溶解反应 参与反应的成分有（ ）红细胞； 参与反应的成分有（1）红细胞； （2）抗红细胞抗体，也称溶血素； ）抗红细胞抗体，也称溶血素； （3）补体 ）
溶血反应实验过程 溶血反应实验过程
1.取洁净小试管 支，排列于试管架上， 取洁净小试管8支 排列于试管架上， 取洁净小试管 依次编号。 依次编号。 2.向各管中加入生理盐水 向各管中加入生理盐水200ul。 向各管中加入生理盐水 。
思考题 溶血反应与补体结合 试验有何不同？ 试验有何不同？
管号 1 2 200 200 200 50 1/8 3 200 200 200 50 4 200 200 200 50 5 200 200 200 50 6 200 200 200 50
医学免疫学实验课件-溶血实验
在实验结束后，需要对每个试管进行拍照并记录实验结果 ，如红细胞有无凝集、有无溶血等。这些结果将用于后续 的分析和讨论。
03
实验数据分析
溶血反应阳性率计算
计算每个样本的溶血反应阳性率，即阳性样本数除以总样本 数。
判断溶血反应阳性率的参考范围为：健康人群 < 5%，患者 < 10%。
当红细胞表面抗原与相应抗体结合后，可形成抗原-抗体复合 物，激活补体，导致红细胞溶解破裂，释放出血红蛋白；
通过检测血清中游离的抗体或红细胞抗原，可对相关疾病进 行诊断和鉴别诊断。
实验试剂与器材
试剂
抗A、抗B标准血清、A型、B型、O型试剂红细胞、生理盐水等；
器材
试管、移液管、离心管等。
02
实验步骤
THANKS
感谢观看
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05
相关应用
临床应用场景
溶血实验是医学免疫学中一个重要的实验，常用于检测红 细胞表面抗原和抗体，以及红细胞表面受体的检测。
溶血实验还用于检测血清中游离的抗体或抗原，以及红细 胞表面受体的激活状态，对于诊断多种疾病具有重要意义 。
其他领域应用
溶血实验在生物学、药理学、病理学等领域也有一定的应用 。
在生物学中，溶血实验可以用于研究生物膜的结构和功能， 探究生物膜与细胞之间的关系等。
未来发展趋势
溶血实验未来的发展趋势主要集中在提高实验的灵敏度和 特异性，以及寻找新的溶血方法等方面。
此外，溶血实验还可以应用于研究肿瘤细胞对红细胞的作 用，以及在药物筛选等领域的应用也有待于进一步拓展。
实验数据统计分析
溶血效应实验报告
一、实验目的1. 了解溶血现象的原理。
2. 掌握溶血效应实验的基本操作方法。
3. 学习溶血素和补体在溶血反应中的作用。
4. 分析不同溶血效应的影响因素。
二、实验原理溶血现象是指红细胞破裂、溶解的一种现象。
溶血效应实验主要包括溶血素和补体在溶血反应中的作用。
溶血素是一种能与红细胞表面抗原结合，导致红细胞溶解的蛋白质。
补体是一种存在于血液中的蛋白质，参与机体免疫反应，可激活红细胞溶解。
三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜鼠血、生理盐水、溶血素、补体、绵羊红细胞、抗绵羊红细胞抗体、小试管、移液器、离心机、显微镜等。
2. 仪器：水浴锅、振荡器、微量滴定板、温度计等。
四、实验方法1. 红细胞悬液的制备取新鲜鼠血10 ~ 20ml，放入盛有玻璃珠的三角烧瓶中振摇10分钟，或用玻璃棒搅动血液，除去纤维蛋白质，使成脱纤血液。
加入生理盐水100ml，摇匀，1000~1500r/min离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用生理盐水按上述方法洗涤2~3次，至上清液不显红色为止。
2. 溶血素和补体的添加取小试管6支，分别编号为1、2、3、4、5、6。
分别加入生理盐水、溶血素、补体、抗绵羊红细胞抗体、溶血素+补体、溶血素+抗绵羊红细胞抗体，各0.5ml。
3. 绵羊红细胞的添加向上述6支试管中分别加入0.5ml绵羊红细胞悬液，摇匀。
4. 观察与记录将试管置于37℃水浴锅中，观察30分钟，记录溶血现象。
五、实验结果与分析1. 实验结果（1）生理盐水组：红细胞无明显变化。
（2）溶血素组：红细胞明显溶解。
（3）补体组：红细胞无明显变化。
（4）抗绵羊红细胞抗体组：红细胞无明显变化。
（5）溶血素+补体组：红细胞明显溶解。
（6）溶血素+抗绵羊红细胞抗体组：红细胞无明显变化。
2. 实验分析（1）溶血素对红细胞具有溶解作用，溶血素组红细胞明显溶解。
（2）补体在溶血反应中发挥重要作用，溶血素+补体组红细胞明显溶解。
（3）抗绵羊红细胞抗体对溶血反应无影响，溶血素+抗绵羊红细胞抗体组红细胞无明显变化。
溶血试验的实验报告
溶血试验的实验报告实验目的：通过溶血试验，评估红细胞的溶血情况，了解红细胞的稳定性和膜的完整性，为血液学研究和临床诊断提供参考。
实验原理：溶血试验是通过观察红细胞在不同浓度的盐水中溶解的情况，来评估红细胞膜的完整性和红细胞的稳定性。
正常情况下，红细胞在等渗盐水中不会溶解，而在低渗盐水中会发生溶血。
实验材料：1. 新鲜抗凝血（EDTA或肝素）2. 0.9%生理盐水3. 低渗盐水（0.5% NaCl溶液）4. 试管若干5. 离心机6. 显微镜7. 计数板实验步骤：1. 取新鲜抗凝血1ml，加入试管中。
2. 将试管放入离心机中，以3000转/分钟的速度离心5分钟。
3. 离心后，取出试管，弃去上层血浆，保留红细胞层。
4. 向红细胞层中加入0.9%生理盐水1ml，轻轻摇匀，使红细胞充分悬浮。
5. 将混合液再次离心，离心条件同上。
6. 离心后，弃去上层液体，保留红细胞层。
7. 分别取两个新的试管，标记为“等渗盐水组”和“低渗盐水组”。
8. 向等渗盐水组试管中加入0.9%生理盐水1ml，向低渗盐水组试管中加入0.5% NaCl溶液1ml。
9. 将离心后的红细胞分别加入等渗盐水组和低渗盐水组试管中，各0.5ml。
10. 轻轻摇匀，使红细胞与盐水充分混合。
11. 将试管置于室温下静置30分钟。
12. 观察并记录红细胞的溶血情况。
13. 如有必要，使用显微镜和计数板进行更详细的观察和计数。
实验结果：1. 在0.9%生理盐水中，红细胞保持完整，未见明显溶血现象。
2. 在0.5% NaCl溶液中，红细胞发生溶血，可见红细胞膜破裂，细胞内容物释放。
实验结论：实验结果表明，红细胞在等渗环境下保持稳定，而在低渗环境下发生溶血。
这与红细胞膜的完整性和渗透压调节机制有关。
溶血试验是一种简单有效的评估红细胞稳定性的方法，对于血液学研究和临床诊断具有重要意义。
注意事项：1. 抗凝血的选择应根据实验要求和条件进行，避免溶血。
2. 离心过程中要确保离心机的稳定性，避免因操作不当导致红细胞损伤。
溶血实验
红细胞抗体，也称溶血素（3）补体
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3
当红细胞与相应抗体相结合，在电 解质存在时，可使红细胞产生凝集 现象；若同时加入新鲜动物血清， 则血清中的补体可与红细胞及其抗 体（溶血素）形成的免疫复合物结 合，从而激活补体导致红细胞溶解， 产生溶血现象。
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4
【实验材料】
1、抗原：2%绵羊红细胞（简称 SRBC）。
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1
薛 亚 （102015100பைடு நூலகம்） 付正阳 （1020151002） 王 淑 （1020151003） 李 飘 （1020151004）
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2
溶血实验
【实验目的】
了解补体的性质与作用。 分析结果及其意义。
【实验原理】
溶血反应是指补体参与的抗体致红细胞的 溶解反应.
参与反应的成分有：（1）红细胞（2）抗
① 0.5 0.5
0.5 0.5
② 0.5 0.5
--- 1.0
③ 0.5 ---
0.5 1.0
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6
2.将试管摇匀后置37℃水箱内：15— 30分钟，取出观察有无溶血现象。
3.管底无血球沉淀，液体红色透明管为 溶血。
【注意事项】
不要摇荡试管，红细胞离开机体是很容 易破裂的。
加样一定要精确，不要漏加。
2、抗体：溶血素（SRBC抗体）。 3、补体，新鲜豚鼠血清。 4、生理盐水。 5、小试管、刻度吸管、试管架、
37℃水溶箱等。
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【实验方法】
1、取小试管3支，编号后按表3-1加入各物 （容量单位均为ml）
表3-1 溶血试验加样表
管号 2%红细胞 溶血素（2单位） 补体（2单位） 生理盐水
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补体在溶血反应中的作用实验讨论
补体在溶血反应中的作用实验讨论
补体在溶血反应中起着重要的作用。
在溶血反应中，当红细胞与抗原相结合后，抗原与抗体结合的复合物会激活免疫系统中的补体系统。
补体系统的激活会引发一系列的反应，最终导致红细胞溶解。
具体来说，补体系统的激活分为经典途径和替代途径。
在经典途径中，抗体与抗原结合，形成免疫复合物后，一种叫做C1酶的补体蛋白会结合到免疫复合物上，激活后续的补体反应。
在替代途径中，补体蛋白C3通过蛋白质水解产生C3b，C3b结合至免疫复合物或直接与细菌表面结合，并进一步激活补体系统。
激活后的补体系统会形成膜攻击复合物（MAC），这些复合物能够插入到细菌或抗原溶血性红细胞的细胞膜上，破坏细胞膜完整性，导致细胞溶解。
此外，激活的补体还能激发炎症反应和吞噬细菌的过程。
在实验中，可以通过添加补体试剂来观察红细胞的溶解情况。
通过不同浓度的补体试剂与抗原结合形成免疫复合物，然后通过观察特定的溶血指标（如红细胞溶解度、血红蛋白释放量等）来评估补体的作用效果。
同时，还可以利用不同的实验条件探究补体系统的激活途径和对不同免疫复合物的作用差异。
总结来说，补体在溶血反应中的作用是通过激活补体系统，形成膜攻击复合物，破坏细胞膜完整性，导致红细胞的溶解。
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实验三补体溶血实验
一、实验目的：了解溶血反应的原理;掌握溶血反应的基本操作方法
二、实验原理：将绵羊红细胞做抗原注射家兔体内;经一定潜伏期;家兔血清中即出现特异性抗体;此种抗体称溶血素;它可以与绵羊红细胞结合;此时若加入补体;即可激活补体的
经典途径;则呈现溶血现象..
三、实验材料
1、溶血素1：1000、补体1：30、绵羊红细胞1%、生理盐水
2、试管、吸管、试管架等
四、实验方法
1、按下表将试管4支排成一排;
2、震荡混匀;37℃水浴30分钟..
五、实验结果
实验管因发生溶血而变红色透明;其余管为红细胞悬液..
六、注意事项
1、取样品的吸管不可混用；加样力求准确；
2、SRBC吹匀后再加；
3、补体稳定性差：T、pH、连续吹打等都使活性下降;所以置于冰浴中;用时再取；加入补体后轻轻吹打..。