半枝莲提取物对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用

２００８；２８（１０）南方医科大学学报（ＪＳｏｕｔｈＭｅｄＵｎｉｖ）・１８３５・半枝莲提取物对Ｈ２２荷瘤小鼠免疫功能的影响及其抑瘤作用代志军１，刘小旭１，汤薇２，薛茜３王西京Ｉ，纪宗正１，康华峰１，刁岩１（１西安交通大学医学ｅｇｇ二附属医院肿瘤科，陕西西安７１０００４；２陕西师范大学生命科学学院细胞生物学研究室，陕西西安７１００６２；３第四军医大学基础部免疫学教研室，陕西西安７１００３２）

摘要：目的探讨中药半枝莲提取物（ＥＳＢ）的抗肝癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法将接种Ｈ２２肝癌细胞的小鼠分为模型组、ＥＳＢ高、中、低剂量组（１２、６、３ｇ／ｋｇ）、５．氟尿嘧啶组（５．Ｆｕ组），另设正常对照组，连续给药１０ｄ。观察

小鼠瘤重、体质量、胸腺指数和脾指数；并检测各组淋巴细胞增殖活性、ＮＫ细胞活性及脾细胞ＩＬ－２分泌量。结果ＥＳＢ中、高剂量可明显抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长，抑瘤率分别为２８．６８％、３６．９８％．而且能明显增，ＪＵｄ＇鼠胸腺指数和脾指数（ｍ０．０１），而５一Ｆｕ组胸腺指数和脾指数明显降低。模型组荷瘤小鼠脾淋巴细胞增殖活性、ＮＫ细胞活性及分泌ＩＬ－２能

力均明显低于正常对照组（Ｐ＜０．０５）。与模型组比较，５．Ｆｕ组荷瘤小鼠的ＮＫ细胞活性和脾细胞ＩＬ－２分泌量进一步降低（Ｐ＜Ｏ．０５）。而ＥＳＢ高剂量组三者均得到明显改善。ＥＳＢ中剂量治疗使荷瘤小鼠的ＮＫ细胞活性增强。与模型组比较差异显著（Ｐ＜０．０５）。结论ＥＳＢ可明显抑制Ｈ２２移植瘤的生长，改善荷瘤小鼠的免疫功能。关键词：半枝莲；肝癌；免疫功能，小鼠中图分类号：Ｒ２８５．５文献标识码：Ａ文章编号：１６７３－４２５４（２００８）１０．１８３５．０３

Ａｎｔｉｔｕｍｏｒａｎｄｉｍｍｕｎｅ—ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｏｆＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｔａｅｘｔｒａｃｔｉｎｍｉｃｅｂｅａｒｉｎｇ

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Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｒａｅｘｔｒａｃｔ（ＥＳＢ）ｉｎｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇｔｕｌ！ｌｌｏｒｇｒｏｗｔｈａｎｄ

ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇｔｈｅｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎｓｉｎｍｉｃｅｂｅａｔｉｎｇｔｕｍｏｒｓｄｅｒｉｖｅｄｆｒｏｍｈｅｐａｔｏｃａｒｃｉｎｏｍａＨ２２ｃｅｌｌｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｉｆＩｙｍｉｃｅｉｎｏｃｕｌａｔｅｄｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓｌｙｗｉｔｈＨ２２ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｅｑｕａｌｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｈｉｇｈ一，ｍｏｄｅｒａｔｅ－，ａｎｄｌｏｗ－ｄｏｓｅＥＳＢｇｒｏｕｐｓ，ａｎｄ５－Ｆｕｇｒｏｕｐ，们ｔｈｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｆｏｒ１０ｄａｙｓ．Ａｎｏｔｈｅｒ１０ｍｉｃｅｗｉｔｈｏｎｌｙｓａｌｉｎｅｉｎｊｅｅｔｉｏｎｓｅｒｖｅｄａｓｔｈｅｎｏｒｍａｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ，ｔｕｍｏｒｍａｓｓ，ｔｈｙｍｕｓｉｎｄｅｘａｎｄｓｐｌｅｅｎｉｎｄｅｘｏｆｔｈｅｍｉｃｅｗｅｒｅｍｅａｓｕｒｅｄ，ａｎｄｔｈｅｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｃｔｉｖｉｔｙ，ＮＫｃｅｌｌａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｉｎｔｅｒｌｅｎｋｉｎ－２（ＩＬ－２）ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｂｙｔｈｅｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＭｏｄｅｒａｔｅ・ａｎｄｈｉｇｈ－ｄｏｓｅＥＳＢｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｓｕｐｐｒｅｓｓｅｄｔｈｅｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈｗｉｔｈＲｉｍ．ｏｒｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｒａｔｅｏｆ２８．６８％ａｎｄ

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Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｓｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｒａ；ｈｅｐａｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａ；ｉｍｍｕｎｅｆｕｎｃｔｉｏｎ，ｍｉｃｅ

半枝莲为唇形科黄芩属植物（ＳｃｕｔｅｌｌａｒｉａｂａｒｂａｔａＤ．Ｄｏｎ）的干燥全草，性辛、苦、寒，具有清热解毒，活血化瘀，消肿止痛等功效。全草含黄酮类成分如黄芩素、黄芩素苷、红花素及异红花素等［¨。中医常用于治疗各种感染、黄疸性肝炎、疮疡肿毒等。并用单方或复收稿日期：２００８—０３—２６基金项目：陕两省科技计划项目［２００６Ｋ１６－Ｇ５（１）］，西安市科技创新支撑计划（ＹＦ０７１７５）作者简介：代志军（１９７８－），男，主治医师，在读博士，。电话：８６．２９—８７６７９５２６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｚｊ０９１１＠１２６．咖通讯作者：王西京（１９６０・），男，教授，研究方向：消化系统肿瘤与乳腺癌．Ｅ－ｍａｉｌ：ｗａｎｇｘｉｊｉｎｇ＠２１ｅｎ．ｃｏｎｌ方治疗各种肿瘤［捌．但其抗肿瘤作用机制尚不清楚。本实验观察了中药半枝莲提取物（ＥＳＢ）对Ｈ２２小鼠肝癌的抑瘤作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响，研究ＥＳＢ的抗肝肿瘤作用及其抗肿瘤机制。

１材料和方法１．１实验材料１．１．１药品和试剂半枝莲提取物（ＥＳＢ）（西安中鑫生物科技有限公司）；５一氟尿嘧啶注射液（５．Ｆｕ）（上海旭东海普药业有限公司生产）；刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）；噻唑蓝（ＭＴＴ）（Ｓｉｇｍａ，ＵＳＡ）；小鼠　万方数据・１８３６・南方医科大学学报（ＪＳｏｕｔｈＭｅｄＵｎｉｖ）第２８卷几．２ＥＬＩＳＡ检测试剂盒（晶美生物工程有限公司）；其它试剂均为国产分析纯。１．１．２动物与瘤株ＩＣＲ小鼠，清洁级，体质量１８～２２ｇ，雌雄各半，由西安交通大学医学院实验动物中心提供（陕医动字第０８．００４号）。小鼠肝癌Ｈ２２细胞株和Ｙａｅ．１细胞株由陕西师范大学生命科学学院保存。１．２方法１．２．１荷瘤小鼠模型的建立及分组给药无菌条件下取传代６￣７ｄ的Ｈ２２肝癌小鼠腹水，用生理盐水（ＮＳ）稀释成含量为ｌｘｌ０，／ｍＬ的细胞悬液，于每只小鼠右侧腋窝皮下接种０．２ｍｌ。次日将接种Ｈ２２细胞２４ｈ后的小鼠随即分为５组：模型组、５．Ｆｕ组、ＥＳＢ高、中、低剂量组，另设正常对照组（小鼠右侧腋窝皮下接种ＮＳ０．２ｍ１），每组１０只。模型组和正常对照组均给予蒸馏水０．４ｍｌ灌胃，１次／ｄ：５．Ｆｕ组给予５．Ｆｕ０．０２眺ｇ，腹腔注射，每天１次／ｄ；ＥＳＢ高、中、低剂量组分别给予ＥＳＢ１２、６、３ｇ／ｋｇ灌胃。１次／ｄ，连续给药１０ｄ。末次给药２４ｈ后，处死小鼠，取瘤块称质量，计算肿瘤生长的抑制百分率（抑瘤率）。抑瘤率（％）＝（模型组瘤重．治疗组瘤质量）／模型组瘤质量ｘ１００％。１．２．２荷瘤小鼠胸腺指数和脾指数测定在小鼠体内抑瘤试验结束后处死各组小鼠，解剖、剥离瘤块同时，取胸腺、脾。分别计算胸腺指数和脾指数。胸腺指数＝胸腺质量（ｍｇ）／体质量（ｇ）；脾指数＝脾质量（ｍｇ）／体质量（ｇ）。１．２．３荷瘤小鼠淋巴细胞增殖活性的测定常规制备荷瘤小鼠脾细胞并制成含量为５ｘ１０６／ｍｌ的细胞悬液，以每孔２００ｉｘｌ加人９６孔板中，每样本设ＣｏｒｔＡ刺激组（终含量为１０ｇ／ｍ１）和无ＣｏｎＡ刺激对照组，

各设３个重复孔，以ＭＴＴ法（５７０ｍ）测定各孔吸光

度（Ａ）值［６］。以刺激指数（ＳＩ）作为判断脾淋巴细胞增殖的程度：ＳＩ＝实验孑ＬＡ值／对照组Ａ值。

１．２．４荷瘤小鼠ＮＫ细胞活性的测定以乳酸脱氢酶法测定ＮＫ细胞活性。ＮＫ细胞活性（％）＝（实验组Ａ值一自然释放组Ａ值）／（最大释放组Ａ值一自然释放组Ａ值）Ｘ１００％。１．２．５荷瘤小鼠脾细胞几．２分泌能力的检测采用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法测定上清液中ＩＬ－２的含量。按试剂盒说明操作。１．３统计方法数据以均数±标准差表示。应用ＳＰＳＳｌ１．０统计软

件进行单因素方差分析中均数两两比较的口检验，显著性检验水平为ｅｔ＝０．０５。

２结果２．１ＥＳＢ对荷瘤小鼠体质量增长和瘤质量的影响各组荷瘤小鼠体质量均有不同程度的增加，但ＥＳＢ高剂量组小鼠体质量增加量明显高于模型组（氏０．０５）；５．Ｆｕ组小鼠体质量增加量明显低于其余各组，结果见表１。ＥＳＢ中、高剂量组及５一Ｆｕ组小鼠的瘤质量明显小于模型组（Ｐ＜０．０５）。抑瘤率分别为２８．６８％、３６．９８％、４２．２６％。ＥＳＢ小剂量组抑瘤率为１４．３４％．与模型组比较瘤质量差异无显著性．结果见表１。

表１ＥＳＢ对荷瘤小鼠体质量增长和瘤质量的影响Ｔａｂ．１ＥｆｆｅｃｔｓｏｆＥＳＢＯｉｌｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔａｎｄｔｕｎｌｏｒｗｅｉｇｈｔｏｆＩ－１２２ｔｕｍｏｒ—ｂｅａｒｉｎｇ

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