45Ca2+ uptake study in PC12 cells简要介绍
基于PC12细胞的西维因神经损伤作用机理研究
大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤（PC12 细胞）由中国
按照 1.3.2 中细胞培养方法，在细胞培养完成后，
科学院细胞库提供；西维因（Carbaryl，99%）、2',7'- 分别利用酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒，计算 LDH
二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA，97.00%）和二甲 的漏出率。计算公式：
基亚砜（DMSO，99%）购自 Sigma-Aldrich 公司； DMEM-低糖培养基、胎牛血清（FBS）、磷酸盐缓冲
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现代食品科技
Modern Food Science and Technology
2016, Vol.32, No.12
的重要风险因素[5]。人体是农药的非靶标生物，为达
超氧化物歧化酶（SOD）WST-1 法试剂盒购自南京建
到尽可能减轻农药残留对人体损伤的目的，有必要研 成生物工程研究所；透明孔板购自上海宏生生科科技
加。同时，利用激光共聚焦扫描显微镜观察到了线粒体膜电位的显著下降。西维因对 PC12 细胞表现出很强的神经毒性。
关键词：PC12 细胞；西维因；损伤；细胞毒性；神经毒1-5
DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.12.001
增加到了（73.00±1.71）%；同时谷胱甘肽（GSH）含量从 96.15±6.10 μmol/g prot 逐渐减少到 22.91±3.98 μmol/g prot；细胞相对荧光
强度（RFI）从 37.38±11.48 先增强到 45.56±11.96，后因细胞严重损伤又减弱到 17.11±1.50。细胞液内乙酰胆碱（ACh）含量也逐渐增
Key words: PC12 cells; Carbaryl; injury; cytotoxicity; neurotoxicity
钙调蛋白在PC12细胞分化和迁移中的作用
钙调蛋白在PC12细胞分化和迁移中的作用
袁俊;李朝军
【期刊名称】《华北农学报》
【年(卷),期】2011(026)001
【摘要】PC12 细胞经神经生长因子 (NGF)作用后,利用免疫荧光染色、单个细胞迁移率检测等方法,研究了钙调蛋白在PC12 细胞中的分布以及钙调蛋白对PC12 细胞分化和迁移的影响.免疫荧光染色结果表明,钙调蛋白在PC12细胞突起的顶端处呈密集分布.加入钙调蛋白抑制剂W7的细胞仅有少量长出突起.单个细胞迁移率检测表明钙调蛋白可能促进PC12 细胞迁移.提示钙调蛋白可能在PC12细胞的分化和迁移过程中发挥作用.
【总页数】4页(P22-25)
【作者】袁俊;李朝军
【作者单位】南京晓庄学院,生物化工与环境科学学院,江苏,南京,211171;南京大学,医学院,江苏,南京,210093
【正文语种】中文
【中图分类】Q26
【相关文献】
1.P53和P21在PC12细胞分化中的作用 [J], 沈晗;吴少波;张百芳;彭芳芳;武栋成
2.ERK在NGF诱导PC12 细胞分化中的作用 [J], 张雯;彭芳芳;张百芳;沈晗;吴少波;武栋成
3.蛋白酶抑制剂MG132在联合NGF诱导PC12细胞分化过程中的作用及机制[J], 王晓明;卢伟;丁军
4.MAPK、PI3K途径在蛇毒神经生长因子诱导PC12细胞分化的作用 [J], 何艳;汪效英;陈崇宏
5.人牙周膜细胞条件培养基促PC12细胞分化的作用研究 [J], 徐娟;刘洪臣;徐璐璐因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Seipin敲低大鼠PC12细胞株的构建和对细胞凋亡的影响
·专题研究１·Ｓｅｉｐｉｎ敲低大鼠ＰＣ１２细胞株的构建和对细胞凋亡的影响吕菊１，２，胡玉梅１，２，任真奎１，２，３，谢鹏１，２，张春林４，焦玲５ ，禹文峰１，２（１．贵州医科大学分子生物学重点实验室，贵州贵阳 ５５０００４；２．贵州医科大学地方病与少数民族疾病教育部重点实验室，贵州贵阳 ５５０００４；３．黔西南州人民医院检验科，贵州兴义 ５６２４００；４．贵州医科大学基础医学院，贵州贵阳 ５５００２５；５．贵州医科大学附院神经内科，贵州贵阳 ５５０００４）［摘 要］目的：构建大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤（ＰＣ１２）细胞的先天性脂肪代谢障碍２型（ＢＳＣＬ２／Ｓｅｉｐｉｎ）敲低细胞株，探讨Ｓｅｉｐｉｎ敲低后对细胞凋亡的影响。
方法：将ＰＣ１２细胞分为空白感染组和助感染组（加助感染试剂ＨｉｔａｎｓＧ），采用不同慢病毒感染复数（ＭＯＩ）感染细胞进行病毒预感染试验筛选助感染试剂和合适的ＭＯＩ；依据上述感染条件，用阴性对照病毒和Ｓｅｉｐｉｎ ｓｈＲＮＡ目的病毒感染ＰＣ１２细胞作为阴性对照组和Ｓｅｉｐｉｎ敲低组，同时设置正常组（正常ＰＣ１２细胞），采用蛋白质免疫印迹法检测Ｓｅｉｐｉｎ蛋白的表达；将阴性对照组与Ｓｅｉｐｉｎ敲低组细胞用脱氧核苷酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）细胞凋亡染色法和Ｈｏｅｃｈｓｔ３３２５８染色法检测细胞凋亡情况。
结果：慢病毒ＭＯＩ＝１００时感染效果最强，助感染试剂能增加感染效率；与正常组相比，Ｓｅｉｐｉｎ敲低组Ｓｅｉｐｉｎ蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０５）；与阴性对照组相比，ＴＵＮＥＬ染色结果显示Ｓｅｉｐｉｎ敲低组发红色荧光的凋亡细胞明显增加，Ｈｏｅｃｈｓｔ染色结果显示Ｓｅｉｐｉｎ敲低组细胞的细胞核致密浓染或碎块状致密浓染程度明显增多。
结论：成功构建大鼠ＰＣ１２Ｓｅｉｐｉｎ敲低细胞，下调Ｓｅｉｐｉｎ蛋白表达会增加细胞凋亡。
［关键词］细胞凋亡；帕金森病；ＰＣ１２细胞；神经变性疾病；Ｓｅｉｐｉｎ蛋白；基因干扰［中图分类号］Ｒ７４２．５；Ｒ－３３２ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１０００ ２７０７（２０２０）０３ ０２４９ ０６ＤＯＩ：１０．１９３６７／ｊ．ｃｎｋｉ．１０００ ２７０７．２０２０．０３．００１ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＲａｔＰＣ１２ ＳｅｉｐｉｎＫｎｏｃｋｄｏｗｎＣｅｌｌＬｉｎｅａｎｄｉｔｓＥｆｆｅｃｔｏｎＡｐｏｐｔｏｓｉｓＬＶＪｖ１，２，ＨＵＹｕｍｅｉ１，２，ＲＥＮＺｈｅｎｋｕｉ１，２，３，ＸＩＥＰｅｎｇ１，２，ＺＨＡＮＧＣｈｕｎｌｉｎ４，ＪＩＡＯＬｉｎｇ５，ＹＵＷｅｎｆｅｎｇ１，２（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；２．ＥｄｕｃａｔｉｏｎＭｉｎｉｓｔｒｙＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＥｎｄｅｍｉｃａｎｄＭｉｎｏｒｉｔｙＤｉｓｅａｓｅｓ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；３．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＬａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｐｅｏｐｌｅ＇ｓＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｗｅｓｔＧｕｉｚｈｏｕＡｕｔｏｎｏｍｏｕｓＰｒｅｆｅｃｔｕｒｅ，Ｘｉｎｇｙｉ５６２４００，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；４．ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ，ＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５００２５，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ；５．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＮｅｕｒｏｌｏｇｙ，ｔｈｅＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕｉｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕｉｙａｎｇ５５０００４，Ｇｕｉｚｈｏｕ，Ｃｈｉｎａ）［Ａｂｓｔｒａｃｔ］Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｒａｔＢｅｒａｒｄｉｎｅｌｌｉ Ｓｅｉｐｃｏｎｇｅｎｉｔａｌｌｉｐｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ２（ＰＣ１２ ＢＳＣＬ２／Ｓｅｉｐｉｎ）ｋｎｏｃｋｄｏｗｎｃｅｌｌｌｉｎｅａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｏｎａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｐｈｅｏｃｈｒｏｍｏｃｙｔｏｍａｃｅｌｌｓ１２（ＰＣ１２ｃｅｌｌｓ）ｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｂｌａｎｋｉｎｆｅｃｔｉｏｎｇｒｏｕｐａｎｄＨｉｔａｎｓＧｇｒｏｕｐ（ａｄｄＨｉｔａｎｓＧａｇｅｎｔ），ａｎｄｒｅｃｅｉｖｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓＭＯＩｆｏｒｖｉｒｕｓｐｒｅ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｔｅｓｔｔｏｓｃｒｅｅｎＨｉｔａｎｓＧｒａｇｅｎｔａｎｄａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅＭＯＩ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ＰＣ１２ｃｅｌｌｓｒｅｃｅｉｖｅｄｉｎｆｅｃｔｉｏｎｗｉｔｈｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｖｉｒｕｓａｎｄＳｅｉｐｉｎ ｓｈＲＮＡｖｉｒｕｓ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（ｎｏｒｍａｌＰＣ１２ｃｅｌｌｓ）ｗａｓｓｅｔａｔｔｈｅｓａｍｅｔｉｍｅ．ＴｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＷｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ．Ｃｅｌｌｓ９４２第４５卷 第３期２０２０年３月 贵州医科大学学报ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＧＵＩＺＨＯＵＭＥＤＩＣＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ Ｖｏｌ．４５ Ｎｏ．３２０２０．３［基金项目］国家自然科学基金（８１３６０１９９）；教育部科学技术研究项目（２０１３０３２Ａ）；贵州省国际科技合作计划项目［黔科合外Ｇ字（２０１３）７０２６］；贵州省创新计划项目［黔教合协同创新中心（２０１４）０６］；贵州省教育厅项目（２０１５年贵州省普通高等学校地方病和少数民族疾病防控创新团队）；贵州省科技厅计划课题［黔科合重大专项字（２０１４）６００８］；贵州省教育厅项目［黔教合外Ｇ字（２０１３）６３］ 通信作者Ｅ ｍａｉｌ：ｊｉａｏｌｉｎｇ５１５１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ；ｗｅｎｆｅｎｇｙｕ２０１３＠１２６．ｃｏｍｏｆｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐａｎｄＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐｗａｓｓｔａｉｎｅｄｂｙＴｄＴ ｍｅｄｉａｔｅｄｄＵＴＰＮｉｃｋ ＥｎｄＬａｂｅｌｉｎｇ（ＴＵＮＥＬ）ａｎｄＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｔｏｄｅｔｅｃｔａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＴｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｌｅｎｔｉｖｉｒｕｓｗａｓｔｈｅｂｅｓｔｉｎＭＯＩ＝１００，ａｎｄｔｈｅＨｉｔａｎｓＧｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅｌｅｖｅｌｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌｓ，ｔｈｅａｐｏｐｔｏｓｉｓｒｅｓｕｌｔｓｏｆＴＵＮＥＬｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｉｎｃｒｅａｓｅｉｎｒｅｄｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐ，ａｎｄｔｈｅＨｏｅｃｈｓｔ３３２５８ｓｔａｉｎｉｎｇｓｈｏｗｅｄｃｏｎｄｅｎｓｅｄｂｒｉｇｈｔｎｕｃｌｅｉａｐｏｐｔｏｔｉｃｃｅｌｌｓｉｎｔｈｅＳｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｇｒｏｕｐ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＰＣ１２Ｓｅｉｐｉｎｋｎｏｃｋｄｏｗｎｃｅｌｌｓａｒｅｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｌｙｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ，ａｎｄｄｏｗｎ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＳｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎｃａｎｉｎｃｒｅａｓｅａｐｏｐｔｏｓｉｓ．［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ（ＰＤ）；ＰＣ１２ｃｅｌｌｓ；ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｖｅｄｉｓｅａｓｅ；ｓｅｉｐｉｎｐｒｏｔｅｉｎ；ＲＮＡｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ 帕金森病（ｐａｒｋｉｎｓｏｎｄｉｓｅａｓｅ，ＰＤ）的病理特征是中枢和外周特定神经元群的神经退行性病变和残存的多巴胺（ｄｏｐａｍｉｎｅ，ＤＡ）能神经元内出现的嗜酸性小体－路易小体（ｌｅｗｙｂｏｄｙ，ＬＢ），主要发生在黑质致密部［１］。
PC12细胞培养方法步骤
PC12细胞培养方法步骤PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤分化细胞株，具神经内分泌细胞的一般特征，因其具可传代特点，广泛应用于神经生理和神经药理学研究。
1. PC12细胞有两种：未分化型和分化型。
其中未分化型的PC12细胞贴壁能力强，传代时需要胰酶消化，形状不规则。
分化型PC12细胞传代时不需要胰酶，直接可以吹下来，形状规则。
这两种细胞没有很大的区别，但我在实验中发现，未分化型的PC12细胞对药物的敏感性较之分化型的要差一些。
2. 由于PC12细胞是一种肿瘤细胞，在传代次数较多后，它的形状和性状会发生改变。
这些改变尤见于未分化型PC12细胞。
主要是细胞形状变得更加不规则，对药物的敏感性愈加下降。
因此，建议长期用PC12细胞作实验的战友最好严格控制细胞的传代次数。
3.在复苏细胞时动作一定要迅速，放入温水中1～2min后要马上加入培养液中，培养12～24小时后更换一次培养液，这样不仅可以把DMSO吸掉，而且可以将死亡的细胞也吸掉。
细胞一天一看即可，经常动会有影响。
注意过滤后血清的PH值，因为培养液过滤后PH值会有所改变。
复苏后的换液时间取决于您复苏时是否洗涤离心细胞，去除了冻存液中的DMSO，如果没有去除DMSO，细胞培养过夜后就要彻底换液；如果复苏时洗涤离心过，可以待传代时再换液也可。
（据我个人经验，还是复苏时去除DMSO，细胞的生长状态好一些）4. 状态良好的细胞复苏后 4 h即可贴壁，开始增殖，大约2 d即可传代，接种48h应该到了对数增长期。
5. 每天观察一两次细胞我不认为会对细胞的生长造成不良影响，不过每次观察的时间不易过长。
6. 传代时我认为最好不要用胰蛋白酶，因为胰蛋白酶对细胞有破坏作用。
我以前用胰蛋白酶消化传代过PC12, 结果传代后的细胞虽然贴壁，形态也好，但就是增殖缓慢，所以我现在都是用枪吸取培养液直接吹打，传代后细胞增殖迅速，2 d就长满了（因为长的太快，我只好降低血清浓度，用5%FBS）7. 传代的时机最好选在细胞生长旺盛，占瓶底70%－80%时最好，如果细胞长的太满，细胞的状态会越来越差，最后大片死亡；这种细胞传代后生长也不好；而且长的太满后，细胞贴壁牢，难于吹起来，相反，70%－80%时细胞很容易吹起来。
肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用
收稿日期:2000-12-11 修回日期:2001-05-30基金项目:黑龙江省自然科学基金(9717)*通讯作者:E mail:Wangam@文章编号:1001 6325(2001)06 0551 03肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用刘长振1,王爱民1*,谢振华1,聂丹瑶1,马 春2,杨歌德1,贺雨虹3(哈尔滨医科大学1 生物化学教研室;2 神经生物教研室,哈尔滨150086;3 清华大学生命科学院,北京100084)摘要:本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。
将培养的细胞进行分组:正常对照组;损伤组;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠;肌肽保护组,同损伤组的制备,但予先加入肌肽。
用MTT 法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH 活性,观察了细胞形态和蛋白电泳等。
结果表明:在保护组,MTT 的测定结果高于损伤组,LDH 低于损伤组,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。
关键词:PC12细胞;肌肽;氧化应激损伤中图分类号:Q255 文献标识码:A随着自由基生命科学研究的不断进展,氧化应激损伤和抗氧化保护作用的理论已越来越受到人们的普遍关注,诸如象动脉硬化,糖尿病,Alzheimer s 病,白内障已及衰老等均被公认是与氧化应激损伤及自由基代谢失调相关[1]。
而寻找,研制和开发更有效的制剂,药物用以延缓,阻止,抵制这些疾病的发生发展,或预防衰老,探索抗氧化剂保护细胞的途径和作用机制已成为医学领域的重要研究课题。
本文的目的是以PC12细胞作为氧化应激损伤的靶细胞,通过比较各组MTT 的检测结果,比较LDH 活力水平及交联蛋白质电泳等实验,借以观察肌肽[2,4](carnosine)是否有抗氧化的神经保护作用,从而为深入研究肌肽的抗氧化机制及它的开发应用提供有意义的药物学依据。
1 材料和方法1 1 实验细胞PC12细胞,购自上海细胞生物所细胞库1 2 试剂Canosine ,NADH,MTT,购自Sigma 公司;DME M 培养基,胎牛血清,Hyelone 公司;胰酶,牛血清蛋白等,Sigma 公司;其它试剂,均为国产分析纯。
胰岛素样生长因子1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用
细胞与分子生物学胰岛素样生长因子-1对氯化钴诱导的PC12细胞凋亡的抑制作用马珂1，2，徐会友1，2，赵飞2，张健1，2，江继鹏1，2，代晨1，2，王仁杰2，陈旭义2△摘要：目的探讨胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对氯化钴（CoCl2）诱导的肾上腺嗜铬细胞瘤PC12细胞凋亡的作用及机制。
方法取对数生长期的PC12细胞，分别以10、20、40、80µmol/L的CoCl2溶液和100、200、400µg/L的IGF-1溶液处理细胞，CCK-8法检测细胞活力，得出CoCl2和IGF-1最佳干预浓度。
根据选定的实验条件，应用CoCl2处理PC12细胞建立HIE细胞模型，实验分为对照组、CoCl2处理组、IGF-1+CoCl2处理组。
分组处理24h后采用CCK-8法检测细胞存活率；TUNEL染色检测细胞凋亡情况；Western blot检测各组细胞Bax、Bcl-2及Caspase-3的蛋白的表达水平。
最后在上述实验的基础上，设CoCl2处理组、CoCl2+IGF-1处理组、HIF-1α抑制剂2-甲氧雌二醇（2-MeOE2）+ CoCl2组和CoCl2+2-MeOE2+IGF-1组，Western blot观察IGF-1、2-MeOE2及两者共用对PC12细胞HIF-1α及Bax的表达水平的影响。
结果CCK-8检测结果显示，40µmol/L CoCl2和200µg/L IGF-1为最佳干预浓度。
利用以上浓度分组干预细胞24h后，与CoCl2组相比，IGF-1+CoCl2处理组细胞存活率明显提升，TUNEL阳性细胞数和细胞比例降低，同时抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调，促凋亡蛋白Bax、Caspase-3，HIF-1α表达下调，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。
应用2-MeOE2对细胞进行预处理后，CoCl2+2-MeOE2组与2-MeOE2+IFG-1组HIF-1α和Bax蛋白表达差异无统计学意义，但均较CoCl2+IGF-1组明显下调（P＜0.01）。
葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用
葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用海峡药学2011年第23卷第3期1H),10.33(s,1H);¨CNMR(400MHz,DMSO—d6)8(ppm)25.27(2C).28.65(2C),32.48,36.61,119.26(2c),123.14,128.87(2C),139.58.169.34,171.45;IR:3312,3270,1663,1618.1599,1530,1444cm.3讨论在伏立诺他的合成中,本方法做了如下的改进:①缩短了反应步骤.也避免了工业上大量用乙酸酐蒸馏的困难,而此法操作简便,收率高,适合工业化生产;②粗品用乙腈进行重结晶.效果很好.通过一次精制产品的纯度就能达到99.6%以上.唯一不足就是氯甲酸乙酯和氯甲酸异丁酯有刺激性气味.工业化生产上需要做好安全通风措施,保证人员安全.目标化合物的结构经MS,'H-NMR.13C-NMR.IR予以确认.参考文献[1]RichonVM.EmilianiS,V erdinE,eta1.Aclassofhybridpolar Inducersoftransformedcelldifferentiationinhibitshistonedeacety,实验研究?lases[J).ProcNatlAcadSciUSA.1998.95(6):3003—3007.[2】MarkPA.Discoveryanddeve1opmentofjL}【Aasananticancera-gent(J).Oncogene,2007,26(9):1351.1356.(3)BreslowR,MarksPA,RifkindBA.eta1.NoveIpotentinducersof terminaldifferentiationandmethodsofusethereof(P】.WO:9307148.199304-15.[4]StowellJC.HuotRI,vanV oastL.eta1.ThesynthesisofN.hydroxy—N.phenyloctanediamideanditsinhibitoryeffectonproliferationof AXCratprostatecancerce!Ls【J].JMedChem,1995.38(9):1411-1413.[5]SbardellaEG,MassaS.AnewfacileandexpeditioussynthesisofN-hydroxy-N'-phenyloctanediamide,apotentinducerofterminalcytod-ifferentiation[J].OrgPrepProeedlnt,2001.33(4):391.394.[6]GediyaLK,ChopraP.PurushottamacharP.eta1.Anewsimpleandhigh?yieldsynthesisofsuberoylanilidehydroxamicacidanditsin- hibitoryeffectaloneorincombinationwithretinoidsonproliferation ofhumanprostatecancercells[J].JMedChem.2005,48(15):50475051.葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤的保护作用牛慧娟,戴平,杨中林(1.中国药科大学教育部现代中药重点实验室南京210009;2.广西桂林医学院桂林541004)摘要:目的研究葛根素对PC12细胞缺氧损伤的影响.方法使用氯化钻对PC12细胞制备缺氧损伤模型.通过测定受损细胞给药后的活力,受损细胞LDH泄漏量和受损细胞SOD活力,研究葛根素对受损细胞的保护作用.结果在5x10_..～2x10一'Img?mL一'范围内,葛根素显着地增加模型受损细胞的活力;降低细胞LDH自々泄露量;并增强受损细胞的SOD活性.结论葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤具有修复作用.?关键词:葛根素;PC12细胞;氯化钻;缺氧损伤.中圉分类号:R969.4;R282.71文献标识码:A文章编号:1006.3765f2011I.03.0190.03 ProtectiveeffectsofpuerarinonanoxiainjuryinculturedPC12cellsNIUHui.iuan',DAIPing,Y ANGZhong.1in(boratoryofModernChineseMedicine,Ch inaPharmaceuticalUniversity,Nanjing,210009,China;2.GuangxiGuilinMedicalUniversity,Guilin541004, China)ABSTRAOT:OB3ECTIVEToinvestigatetheeffectsofpuerarinonanoxiainjuryincultured PC12cells.METHODSCulturedPC12cellsweretreatedwith150~tmo卜I一cobaltdichlorideincombinationwithglu.cosedeprivation.Theprotectiveeffectsofpuerarinonthemodelwereevaluatedbycellularvit ality.1actatedehy—drogenate(LDH)effluxassayandcontentofS0D.RESULTspuerarin.withintherangeof5×10一～2×10—mg'mI～significantlyincreasecellularvitality.antagonizeI』)Heffluxandimprovetheactivityof SoD.CONCLUS10NItwasshownthatpuerarinmarkedlyprotectedPC12cellsfromanoxiai njury.KEYWORDS:Puerarin;PC12cdl;Cobaltdichloride;Anoxiainjury作者简介:牛慧娟,女.硕士,中国药科大学,E.mail:*********************通讯作者:杨中林.女.博士生导师.E.mail:*****************.en19O?StraitPharmaceutical[ournalV ol23No.32011脑组织极为敏感,当其缺血缺氧时,极易引起神经细胞的损伤.在目前研究脑缺血损伤的模型中PC12是常用的细胞.PC12细胞是大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤克隆的细胞株.具有神经元细胞的基本生物学特性.细胞膜上有NMDA受体,胆碱能M,N受体等,可对神经生长因子产生反应.获得许多交感神经元特有的生物性质【1已被广泛用作研究神经细胞功能的实验材料.细胞缺氧模型中常用的造模方法包括物理缺氧法和化学缺氧法等.化学缺氧法是指使用化学试剂使细胞缺氧的方法.二氯化钴就是一种可以体外诱导细胞损伤的化学试剂,能够很好的模拟神经细胞缺氧损伤￡引.葛根素是一种异黄酮类化合物,广泛应用于治疗心脏血管疾病.既往文献表明:葛根素对A8诱导的PC12细胞凋亡有保护作用L3】,葛根素也可以降低过氧化氢诱导的PC12损伤中乳酸脱氢酶(LDH)的释放量,提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性【4].也有文献报道葛根素对神经瘤细胞株N2a细胞的物理缺氧损伤保护作用,可以降低ca~pase一3活性和表达【5】.推测葛根素对细胞缺氧损伤可能具有保护作用.但目前尚无关于葛根素对氯化钴致PC12细胞缺氧损伤模型作用的相关报道,因此本文研究了葛根素对该模型的作用的影响,以便从另一个侧面研究证明葛根素对细胞缺氧损伤的具有保护作用.l材料与方法1.1试验药物葛根素(购自中国药品生物制品检定所,纯度为≥96.0%,批号110752—200912),尼莫地平(Nim,山西亚宝药业集团股份有限公司,批号081007).1.2细胞PC12细胞株(为大鼠肾上腺嗜铬肿瘤细胞株.购自于中国医学科学院基础医学研究所)1.3试剂小牛血清(杭州四季青生物工程材料研究所);RPIM1640培养基(Gibco产品);胰蛋白酶(Trypsin(1:250) AMRESCO,USA);溴化一(4,5一二甲一2一噻唑基)-2,5一二苯基四氮唑(MTT)(南京生兴生物技术有限公司产品);乳酸脱氢酶(LDH)超氧化物歧化酶(SOD)(南京建成生物技术有限公司).1.4仪器DG5033A型酶联免疫检测仪(华东电子管厂); COICXDS-1B型倒置生物显微镜(重庆光学仪器厂);cch培养箱(thermo产品);JJ—CJ一1FD超净工作台(吴江市净化设备有限公司).1.5方法1.5.1细胞培养:细胞置培养瓶中于95%(),,5%CCh,37℃条件下传代培养,培养基为RPMI1640培养基(含10%小牛血清,100U?mLI1青霉素和:t00/~g?mL链霉素).1.5.2实验分组及给药:实验用细胞在96子L培养板中培养.取生长良好的PC12细胞接种于96孑L培养板,1×10个细胞ITL,培养24h后,弃原液.)对照组:加入RPMI1640培养基(含10%小牛血清)培养.②模型组:加入低糖培养基以及终浓度为150/~mol?LI1氯化钴共作用4h.③阳性对照组:加入低糖培养基,终浓度为150/~mol?L-1氯化钴以及0.05mg?mL的Nim共作用4h④葛根素给药组:加入低糖培养基,终浓度为l5Omol?L氯化钴以及终浓度为5×10～～2×10mg?mL的葛根素共作用4h.1.5.3细胞活力测定:作用4h后加入终浓度为0.5mg?mL的M1vr反应4h,吸去上清液(注意避免吸走甲瓒结晶),每孔加200#LDMSO,待孑L内颗粒完全溶解后,以DMSO调零,测定570nm处的光密度值(0D).计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的活力.1.5.4LDH泄漏量测定:用LDH试剂盒测定LDH含量,计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的培养介质中LDH含量.1.5.5SOD活力测定:用SOD试剂盒测定SOD活力,计算给药组对氯化钴诱导的PC12细胞的S()D活力.1.6数据处理实验数据输入Excel表格,使用Excel统计软件处理,结果以平均数±标准差(x±s)表示.组间差异比较采用t检验.表1葛根素对氯化钴致PC12细胞损伤的修复作用实验结果lX土s,n= 6J注:与对照组比较:P<0.05.P<0.01;与模型组比较:P<0.05.★P<0.01.计算公式:细胞活力增值率=(给药组OD值.模型组OD值)/模型组OD值.2结果模型组与正常组相比,细胞活力明显降低,LDH泄漏量显着增加.SOD活性显着性降低,即显示造模成功.葛根索在5×10I4～2×10-1mg?mL的浓度范围内能极显着提高细胞活力,显着抑制LDH的泄露,提高SOD活性的能力,这说明葛根素对二氯化钴造成PC12细胞缺氧损伤具有修复作用(见表1).3讨论MTT法是检测细胞活力的经典方法,处于增值期的活细胞线粒体在能量代谢时产生大量的的琥珀酸脱氢酶,可将外源性M1vr还原成紫色结晶甲攒(forlTlazam).甲瓒被DMSO溶解后,在570nm处有最大吸收峰,在一定范围内吸收值与活细胞浓度呈线性关系.LDH是无氧酵解过程中的一个关键酶.广泛存在于各组织的细胞浆内,通常情况下,神经细胞漏出很少.而受损神经元因细胞膜损伤,LDH漏出明显增加,神经细胞损伤程度与LDH释放量成比,故测定培养液中LDH活性是反映细胞损伤的一种敏感且较为简便的指标【6】. 自由基是机体代谢过程中不断产生的损害自身的毒性产物,它广泛参与机体的生理与病理过程.同时机体内也存在许多】9】?海峡药学2011年第23卷第3期自由基清除剂,保护机体免受损伤.超氧化物歧化酶(SOD)是机体内清除氧自由基的重要物质,在清除自由基的动态平衡状态中发挥着极大作用173.本实验结果表明,葛根素在5X10～2×10mg?rnL1范围内可以不同程度地提高细胞活力,抑制LDH泄露,提高SOD酶活力.葛根素对氯化钴所致PC12细胞缺血缺氧损伤具有一定程度的保护作用.既往关于葛根素对细胞缺氧损伤模型的研究虽多,但尚无关于葛根索对氯化钴致PC12细胞缺氧损伤模型作用的相关报道,本实验从另一个侧面研究证明了葛根素对细胞缺氧损伤的保护作用.参考文献(1]ShaferTJ,AtchisonWD.Transmitterionchannelandreceptorproper. tiesofpheochromoeytoma(PC12)cells:amodelforneurotoxicolog.ical教学探讨?studies[J].Neurotoxico|ogy,1991.12:473.[2]权晶晶.二氯化钴在体外细胞缺氧研究中的应用【J】.国际口腔医学杂志,2009.6(4):455.[3]张海英.胡海涛,刘亦恒,等.葛根索对aft25.35诱导PCI2细胞凋亡的影响[J].中药材,2008,31(4):543.(4]王立祥,曾季平,魏欣冰.等.葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用[J].山东大学,2006,44(1):20.[5]陈娟,陈庆,肖卫东,等.葛根素在体外模拟脑缺血再灌注诱导的神经元损伤中的保护作用(J].中华实验外科杂.2005,10(22):1254.(6]黄丽萍,黄敬耀.麝香酮对D_半乳糖所致拟痴呆小鼠抗痴呆作用研究[J].江西中医学院,2002.14(1):35.[7]李素婷,王海林,杨鹤梅.王宝元.黄芩茎叶总黄酮对脑组织缺氧的保护作用(J].中国中医基础医学杂志.2001,7(1):35.《中药药剂学》教学中探讨教改关键之教师因素王晓颖(福建中医药大学福州350108)摘要:教师是教学改革的关键因素之一,教师的教学能力关系到教学质量的高低.本文从更新教学内容,增加交流,深入实践,积极科研,解读实例,适时进修等方面,就教师如何在(中药药剂学)教学过程中提高自身教学水平.以促进教学质量不断提高作一探讨.关键词:中药药荆学;教学改革;教师因素;教学质量中图分类号:R95文献标识码:B文章编号:1006,3765(2011).03—0192.02 着名教育家陶行知说过:"做先生的,应该一面教一面学,并不是贩买些知识来,就可以终身卖不尽的."在教学改革过程中,我们大多在研究和探讨如何教学生以提高教学质量.少有探讨作为教学主导者的教师应该如何不断地提高自身的教学水平,而教学质量高低的关键恰恰在于教师的教学能力[1].(中药药剂学)是以中医药理论为指导,运用现代科学技术,研究中药药剂的配制理论,生产技术,质量控制与合理应用等内容的--F/综合性应用技术科学,是中药类各专业教学的主干课程【2】.这要求承担(中药药剂学>教学的教师应能尽职尽责地将本学科的知识很好地传授给学生,以实现培养目标.在这个过程中,作为教学改革的关键因素之一的教师应充分发挥主导作用,不断提高教学质量.以下从几个方面探讨教师如何在教学过程中提高自身水平,以推进(中药药剂学>教学改革的不断深入.l与时俱进,及时更新教学内容教材的编写,出版需要较长的一段时间,而中药药剂学技术发展得很快,很多知识在教材出版后已经不新了,因此.需作者简Or.王晓颖,女(1978一).2003年硕士毕业于长春中医药大学中药学专业,讲师,从事中药药剂学教学与科研工作.联系电话:139****4809,E—mail:******************192?要教师在教学的过程中,在深入研究基本理论的同时,及时地了解本学科的前沿知识.融入到相关知识的教学中.如在新剂型的讲授过程中,教师应大量查阅相关文献,学习和了解制剂新技术,把握新剂型发展动向,在基本剂型知识和基本技能的基础上适量地介绍给学生中药新剂型发展的前沿及新进展,做学生今后新剂型研究的引路人.另外,与<中药药剂学)教学内容密切相关的<中国药典>目前每五年就有新版问世. 而教材中涉及的(中国药典)中规定的内容也在不断变化,所以教师应对新版药典及时参阅和了解,在教学中,及时更新教材中相关内容,让学生及时掌握有关中药药剂的新要求和新规定.2增加交流.改进教学方法经常参加教学会议是增加备高校同学科教师之间交流,促进共同进步的好机会.交流过程中,同行教师对教学改革提出问题,各高校的教师可以共同探讨.一起解决,很多好的教学模式和教学方法都是在共同讨论和相互学习中产生,成熟并推广的.在<中药药剂学)的教学中,现在已有多种新的教学方法被广泛采用,如案例教学法,类比教学法,流程教学法等【3j.授课教师应在交流中学习并拓展这些方法,了解各种教学方法的利弊,在教学中,针对自身教学情况选择适合的方法应用于课堂教学,以达到最佳教学效果,提高教学质量,。
PC12细胞在缺氧条件下的自噬现象
PC12细胞在缺氧条件下的自噬现象胡中慧;马慧萍;樊鹏程;李加恒;王俊丽;蒙萍;贾正平【摘要】目的:考察PC12细胞内自噬发生与缺氧时间的关系,探讨自噬对缺氧细胞的影响作用.方法:以PC12细胞为模型,将对数生长期的细胞加入96孔培养板,37℃、5％ CO2培养24h后,放入0.5％O2、94.5％ N2和5％ CO2的培养箱缺氧1h、3h、6h、9h、12h、24h、36 h和48h,用MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察细胞内自噬体,Westen blot法检测自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclint)的表达,用试剂盒检测细胞内乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧自由基(ROS)和线粒体膜电位(MNP)水平,探究缺氧不同时间自噬对PC12细胞的作用.结果:在缺氧3～12h,PC12细胞自噬明显增加,自噬相关蛋白(LC3B、Atg5和Beclin1)表达增加,尤其是缺氧9h,PC12细胞存活明显增加,表明短时间缺氧自噬对细胞起保护作用,而随着缺氧时间的延长细胞存活明显降低,自噬相关蛋白表达水平减少,细胞LHD和ROS水平明显增加.MMP水平显著下降,细胞凋亡明显增加.结论:在缺氧早期自噬对PC12细胞起保护作用,但缺氧时间较长,超过了细胞自身调节能力导致细胞死亡.【期刊名称】《中国应用生理学杂志》【年(卷),期】2017(033)001【总页数】4页(P65-68)【关键词】自噬;PC12细胞;缺氧;自噬相关基因【作者】胡中慧;马慧萍;樊鹏程;李加恒;王俊丽;蒙萍;贾正平【作者单位】兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区联勤部药品仪器检验所,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050;兰州军区兰州总医院药剂科,甘肃兰州730050【正文语种】中文【中图分类】Q255【DOI】 10.12047/j.cjap.5319.2017.016氧气对所有真核细胞的正常发育、新陈代谢和内环境稳定至关重要。
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45Ca2+ uptake study in PC12 cells
1. Plate the cells on to the poly-D-Lysine-coated six well plates 2 days prior to study.
2. Rinse the cells with 1 ml secretion buffer (150 mM NaCl, 5mM KCl, 2mM CaCl2, 10 mM Hepes, pH 7.4) every 15 minutes for 1 hour at 37o C.
3. Add 45Ca2+ (2 µCi/ml) to Ca2+ -free buffer (secretion buffer without 2 mM CaCl2), and drugs to the labelled buffer at 37o C.
4. Incubate the cells with labelled buffer with different conditions for 1 minute at room temperature.
5. After 1 minute dump the solution and add 2 ml of ice cold Ca2+ -free buffer with 2 mM LaCl3 and 2 mM EGTA.
6. Wash the cells 6 times with ice cold Ca2+ -free buffer with LaCl3 and EGTA.
7. Add 1 ml of cell lysis buffer to each well.
8. Collect the cell lysate after 30 minutes and count in a beta-counter using
program for 14C.
9. The data are expressed as dpm/well.
Source of the reagents: 45Ca2+ (Dupont) (Calcium chloride in water; specific activity: 25.92 mCi/mg). 你可能感兴趣的相关试剂：
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优级胎牛血清
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基础培养基
人、大小鼠等酶联免疫试剂盒抗体。