第一章微生物的纯培养与显微技术201508

2 微生物的纯培养和显微技术

2 、扫描电镜（ scanning electron microscope, SEM ）
电子束做电子探针在样品表面激发出二次电子，二次电子产生的多少与样品表面立体形貌有关。对二次电子处理，在荧光屏呈现放大样品立体图像。主要用于观察微生物的表面三、显微镜观察样品的制备结构。
1 、光学显微镜制样 2 、电子显微镜制样
4m 0m 焦f 距（） 12m 70 m 工离作距 4 n光蓝 2 µ 5 m源 0 . m 3 （光的率）分时辨
2 、特殊功能的光学显微镜
名称普通光学镜光源可见光特殊装置视野亮样品处理与观应用察染色、清晰形态结构观察
暗视野镜相差镜
可见光特殊聚光器可见光环状光阑，相差板短波光滤光片
基分离
富集培养目的菌验证
选择培养
练习思考题：
利用选择培养基如何筛选：（ 1 ）抗链霉素（ str ）细菌？（ 2 ）降解利用尿素的细菌？（ 3 ）分解利用纤维素的细菌？利用富集培养和选择培养如何分离：（ 1 ）如何从土壤中分离筛选高温（ 70℃ ）解烃细菌？（ 2 ）如何从污染废水中分离筛选苯胺降解细菌？
同一稀释度培养 20 支
生长者为纯培养物
三、单细胞（孢子）分离
营养琼脂平板不能形成菌落的微生物解剖显微镜下用吸管挑选单细胞（孢子）显微镜下用显微操作仪挑选单细胞（孢子）操作难度与单细胞（孢子）大小成反比
四、选择培养分离
原理：创造适于目的微生物生长条件促使目的微生物快速生长成优势菌抑制非目的微生物生长从混杂微生物中选择分离目的微生物 1 、利用选择培养基直接分离目的微生物选择培养基（ selective medium ）只允许特定微生物生长，而同时抑制或阻止其它微生物生长的培养基。

《微生物纯培养技术》课件

纯培养技术可用于病原微生物的分离、鉴定和药物敏感性试验，为临床诊断和治疗提供依据。
微生物纯培养技术
02
的基本原理
微生物的分离与纯化
微生物的分离
通过选择合适的培养基和培养条件，将混合的微生物群体分离成单一的微生物个体。
微生物的纯化
通过反复划线、稀释接种等方法，获得纯培养的微生物，即同一菌种或纯种微生物的培养。
微生物的培养基
培养基的组成
培养基是由水、碳源、氮源、无机盐等组成，根据不同微生物的需求，培养基的成分和比例会有所不同。
培养基的制备
根据配方和操作步骤，将各种成分混合在一起，经过灭菌处理后，制成适合微生物生长的培养基。
微生物的培养条件
温度
不同微生物对温度的需求不同，适宜的温度可以促进微生物的生长和代谢。
生理生化特性分析
测定微生物的生理生化特性，如氧化酶试验、糖发酵试验等。
应用前景探讨
探讨微生物纯培养技术在生产、科研等领域的应用前景和潜在价值。
微生物纯培养技术04Fra bibliotek的应用实例
在医学领域的应用
抗生素生产
01
微生物纯培养技术用于分离和培养具有抗生素产生能力的菌株
，为医学领域提供大量抗生素。
疾病诊断
《微生物纯培养技术》 ppt课件
目录
• 微生物纯培养技术概述 • 微生物纯培养技术的基本原理 • 微生物纯培养技术的实验操作 • 微生物纯培养技术的应用实例 • 微生物纯培养技术的挑战与展望
微生物纯培养技术
01
概述
微生物纯培养技术的定义
01
微生物纯培养技术是指通过一定的物理、化学手段，将自然界中混杂的微生物群体分离出来，获得纯种微生物的技术。

第一节微生物微生物的的的的纯培养纯培养

分段划线法 2、稀释倾注分离法：
可定性、定量。方法：先取稀释液注入平皿，再注入 45℃左右的培养基，将稀释液冲开培养基表面、中间均会出现菌落。 3、涂布平板法（培养基表面出现菌落）简单易行，但易造成机械损伤
（二）．液体分离法适用于细胞较大的微生物。用液体培养基对菌液做 10 倍系列稀释，使试管
第一节微生物的纯培养
纯培养（pure culture）：单个细胞或一种细胞群繁殖得到的后代。克隆：对于微生物，由于其主要进行无性繁殖，故纯培养即为克隆。显微镜技术：栖居于自然界中的微生物是以肉眼难以分辩地杂居丛生着。在显微镜问世之前，人们是无法目睹这个丰富多彩的微生物世界。光学显微镜的诞生，它将肉眼的分辨率提高到微米级水平，而电子显微镜的出现使人眼分辨达到纳米水平。从此过去视而不见、触而不觉的微生物世界就展现在人们的眼前。第一台显微镜是由荷兰的杨森父子发明的。列文虎克是第一个用显微镜来观察和描述微生物的。以后光学显微镜中相继出现了相差、暗视野和荧光等新附件，加上良好的制片和染色技术等又大大推动着微生物学形态、解剖和分类等研究。30 年代初电子显微镜技术，以及与之配套的各种新技术和新方面的应用，使微生物学的研究从细胞水平逐渐向亚细菌和分子水平迈进。所以显微镜技术的问世和完善，不仅为揭开微生物世界作出贡献，同是也为揭示微观领域的奥秘提供了强有力的工具。无菌技术：要真正揭开微生物世界的奥秘，就得深入研究，也就是必须创造一个无其他微生物干扰的无菌环境，即我们熟称的无菌技术，无菌技术是在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。现代无菌技术是由法国人阿贝特（Appert）在食品保藏中偶然发现的。而对灭菌技术的原理等作出科学解释的是巴斯德，他所进行的举世闻名的曲颈瓶实验，不仅彻底否定了当时十分流行的“生命自然发生学说”，而且为微生物学中的无菌技术的创立和发展奠定了理论和实践基础。纯种分离技术：纯种分离技术是人类揭开微生物世界奥秘的重要手段。要揭开在自然条件下处于杂居混生状态的某一微生物的特点，以及它们对人类是有益还是有害，就必须采用在无菌技术基础上的纯种分离方法。早期对微生物群体进行单个纯化分离者是李斯特。但真正取得突破的是柯赫发明的培养皿琼脂平板技术。从此它为微生物的纯种分离技术奠定了扎实的基础。直到现在它仍广泛地应用于微生物菌种的筛选、鉴定、育种、计数及各种生物测定等工作中。纯种培养技术：微生物纯种培养技术在科学实验和生产实践中有着极其重大的理论与实践意义。若为微生物提供一个初级培养的实验方法并不复杂，但要使

微生物的纯培养与显微技术

第二章微生物的纯培养与显微技术
已知最小的独立生活的生命体
最小的基因组
（一）
骑火球纳米古生菌
(Nanoarchaeum equitan)
基因组500kb，直径 400nm
P379
第二章微生物的纯培养与显微技术
最大的细菌
（一）
费氏刺骨鱼菌
80*600μm
纳米比亚硫珍珠菌
Φ750μm
第二章微生物的纯培养与显微技术
高密度培养
又称高密度发酵，一般要求大肠杆菌培养液浓度达到50g/L干重，应用于大规模制备重组蛋白。
外源基因表达产量与细胞浓度正相关。
（二）
第二章微生物的纯培养与显微技术
纯培养的局限—二元培养物、不可培养与混合培养
二元培养物：培养物中只含有两种微生物，并有意识地保持两者之间的特定关系。
第二章微生物的纯培养与显微技术
光学显微镜观察样品的制备和染色
直接观察活体：可以避免染色固定时对
微生物结构的破坏，主要用来观察微生物的大致形态和运动情况
压滴法悬滴法压(埋)片法
染色
微生物细胞一般透明
（一）
第二章微生物的纯培养与显微技术
压滴法(水封片法)示意图
（一）
悬滴法示意图
（一）
第二章微生物的纯培养与显微技术
宏基因组(Metagenome)是特定小生境中全部微小生物遗传物质的总和—通过基因工程获得新的功能基因。
（二）
第二章微生物的纯培养与显微技术
将未培养的微生物转变成可培养的微生物
添加微生物生长所必需的营养成分用低浓度的培养基来进行分离培养新颖的分离培养方法
参考文献：焦瑞身，2004，新世纪微生物学者的一项重要任务— 未培养微生物的分离培养，生物工程学报，20：641645

[精品]微生物的纯培养和显微镜技术

[精品]微生物的纯培养和显微镜技术第2章微生物的纯培养和显微镜技术重点、难点剖析1(无菌技术是最基本的微生物学实验操作技术，其核心是无菌概念的建立，以及正确而严格地按实验教材和实验课的要求，掌握在各种情况下的具体应用原则和操作规范。

2(分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的基础。

获得纯培养的方法有固体培养基分离、液体培养基分离和单细胞挑取3大类(表2—1)，其中用固体培养基获得单独的微生物菌落是最常用、最基本的方法。

此外还有活细胞或活体分离法，如噬菌体和动植物病毒纯培养的分离等。

表2-1 获得微生物纯培养的方法比较方法特点应用菌落分离较为均匀，进行微生这3种方法可用于所有在固物计数结果相对准确。

但操作体培养基表面形成菌落的稀释倒平板法相对麻烦，热敏感菌有时易被微生物的纯培养分离。

并烫死，而严格好氧菌也可能被且，通过选用适当的选择平固体培养基分离固定在培养基中生长受到影响板及培养条件可直接分离各种具有特定生理特征的操作相对简单，是较常使用的微生物。

和厌氧罐或厌氧手常规方法。

但有时会因涂布不套箱技术结合，这3种方法涂布平板法均匀使某些部位的菌落不能分也可用于获得各种厌氧开，进行微生物计数时需对稀菌的纯培养释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确结果平板划线法操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离稀释倒平板的一种变通形式，在缺乏专业的厌氧操作设稀释摇管法但由于菌落形成在琼脂柱的中备的情况下对严格厌氧菌间，观察和挑取都相对困难进行分离和观察工作量大，是否获得纯培养需不能或不易在固体培养基稀释法依靠统计学的推测上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计一般不能直接获得微生物的纯1)根据某种微生物的特殊液体培养基分离培养，在通过富集培养使原本生长要求，按照意愿从自然在自然环境中占少数的微生物界中对这种微生物进行有富集培养的数量大大提高后，需再通过针对性的有效分离;2)分离平板法进行相应富集培养微生培养出由科学家设计的特物纯培养的分离和检测定环境中能生长的微生物，尽管我们并不知道什么微生物能在这种特定的环境中生长分离过程直观，可靠，但对仪从样品中直接分离所需的器和操作技术要求较高，多限微生物细胞或孢子，获得其单细胞(孢子)于高度专业化的研究，而挑取纯培养显微操作挑取的微生物单细胞或孢子需经固体或液体培养基培养后才能获得其纯培养物3(保证所用菌种性状的稳定是微生物学工作最重要的基本要求，否则生产或科研都无法正常进行。

新教材高中生物第1章微生物的培养技术及应用一微生物的基本培养技术pptx课件新人教版选择性必修3

物的能源物质
花生粉饼、石油等
氮源
合成蛋白质、核酸以及含氮无机氮源：N2、NH3、铵盐、
的代谢物
硝酸盐等
营养物质
作用
不仅是优良的溶剂，而且可维持水
生物大分子结构的稳定
是细胞的组成成分、生理调节物
无机盐质、某些化能自养菌的能源、酶
的激活剂等
来源培养基、空气、代谢物
无机化合物
3．培养基配制的基本原则 (1)目的要明确：不同的微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。营养物质浓度过低不能满足微生物营养的需要，过高对微生物的生长有抑制作用。 (3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，为维持pH的相对稳定，可在培养基中加入缓冲溶剂。
3．酵母细胞的纯培养
【答案】马铃薯琼脂湿热干热 50 酒精灯火焰平板划线未接种 24～48
微生物的纯培养的方法有哪些呢？平板划线法的原理是什么？ ______________________________________。【答案】平板划线法和稀释涂布平板法。平板划线法的原理是通过多次划线达到将多个菌种纯化成一个菌落的目的
天然培养基
含化学成分不明确的天然物质
工业生产
合成培养基培养基成分明确微生物的分类、鉴定等
划分标准培养基的种类
特点
主要用途
用途
选择培养基
培养、分离特定的微生物，培养基中加入或
如在加入青霉素的培养基中去除某种化学物
分离酵母菌、霉菌等；在加质，或控制某种
入高浓度食盐的培养基中分特定培养环境
离金黄色葡萄球菌
根据微生物的代鉴别不同种类的微生物，如

纯培养和显微技术PPT课件

混合培养物：含有多种微生物的培养物；纯培养物：只有一种微生物的培养物；
通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果
纯培养技术是进行微生物学研究的基础！
.
3
微生物的基本特点：
小！
参见P13
显微技术微生物个体微小的特点也决定了
是进行微生物研究
的另一项重要技术，因为绝大多数微生物的个体形态及其内部结构只能
37
七、微生物的保藏技术
（移到第八章微生物遗传）
.
38
微生物的基本特点：
小！
参见P13
显微技术微生物个体微小的特点也决定了
待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制
.
34
五、选择培养分离
1. 利用选择平板进行直接分离
参见P18
显不同于其它微生物
.
35
五、选择培养分离 2. 富集培养
特定的环境条件
参见P18
仅适应于该条件的微生物旺盛生长
待分离微生物在群落中的数量大大增加
13
二、用固体培养基分离纯培养
培养基：
液体培养基；固体培养基；半固体培养基；
参见P15
.
14
二、用固体培养基分离纯培养
培养基：
液体培养基；固体培养基；半固体培养基；
参见P15
固化剂
琼脂
柯赫（Robert Koch）
的助手W Heese和
.
他的夫人Fran 1H5 eese
二、用固体培养基分离纯培养
从自然界中分离到所需的特定微生物
.
36
2. 富集培养
参见P18
富集培养是微生物学家最强有力的技术手段之一。营养和生理条件的几乎无穷尽的组合形式可应用于从自然界选择出特定微生物的需要。

微生物的培养技术及应用ppt课件

二、无菌技术获得纯净的微生物培养物的关键是防止杂菌污染，主要包括消毒和灭菌。
无菌技术除用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，
还有什么作用？
还能有效避免操作者被微生物感染。
二、无菌技术 1.消毒（1）概念
使用较为温和的物理、化学或生物等方法杀死物体表面或内部一部分微生物。（2）消毒方法
杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污接种结束后染环境和感染操作者
接种环共需灼烧几次？
6次
【问题探究2】在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？
避免接种环温度太高，杀死菌种。
【问题探究3】在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端酵母菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使酵母菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细胞繁殖而来的菌落。
培养、分离出特定微生物
鉴别不同种类微生物
【注意】病毒为非细胞结构生物，只能在活细胞中营寄生生活，目前不能
利用人工培养基来培养。
一、培养基的配制 4.培养基的营养构成：（1）基本成分
一般都含有水、碳源、氮源、无机盐等。
组分牛肉膏蛋白胨 NaCl
H2O
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的营养组成
含量
怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物呢？
应该先对制作用具和原料进行灭菌处理，再接种纯的菌种，并控制发酵条件，避免杂菌进入。
研究和应用微生物的前提，发酵工程的重要基础：防止杂菌污染，获得纯净的微生物培养物。
在实验室培养微生物： ①为微生物提供合适的营养和环境条件 ——培养基
②确保其它微生物无法混入，并将需要的微生物分离出来。 ——无菌技术、微生物的纯培养