肿瘤免疫及检测
Ag-NORS检测肿瘤患者的免疫功能
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文章编号 ：０７ ２７ ２０ ）３ ３８ ２ １０ —４８ （０９０ —０９ —０
Ａ — Ｏ Ｓ检 测肿 瘤 患 者 的免疫 功 能 ｇＮ Ｒ
Ａ － Ｏ Ｓ的检 测进 而对 肿瘤进 行监测 。 ｇＮ Ｒ
１ 材料 和方 法
１１ 标 本 来 源 ．
选 择 ４ —８ 人 员 ，０ ０ ０岁 ８２例 （０ ４０
例男性 ，０ ４２例 女性 ） 院住 院 的肿 瘤 患 者 （ 病 理 本 经 诊 断证实 ）５０例 （７ 男性 ，３ 女 性 ） 源 于 ，０ ２０例 ２０例 来 体检 的正 常人对 照 。 １２ 主要 仪 器 和 试 剂 Ｋ －Ｉ ． Ｌ Ｉ型免 疫 图像 分 析 系 统， 北京健 尔康公 司产 品试 剂 、 养液 、 染液 和 其 培 银
离 心 ５分钟 后 ， 上清 ， ５Ｉ 低 渗液充 分 混匀 ， 弃 加 ｌ Ｉ ｌ 置 室温 １ ｉ 右 ， 加 固定 液 ０５Ｉ 充 分 混匀 ， ０ｒｎ左 ａ 再 ． ｌ Ｉ ｌ ２ ００ ／ ０ 转 分离 心 ５ｍｎ 加 ５ｒ 固定 液并混 均 ， 室温 ｉ， ｌ Ｉ ｌ 置 ５分钟 ， 重复此 步骤 一次 弃上 清后 混匀 取 ２—３ 滴 滴 到预冷玻 片 上 ， 自然 晾 干 。水 浴 ８￣ 放 上 钻 板 热 ０Ｃ，
合形 成 Ａ － Ｏ ￣ ｇＮ Ｒ 本质 为 Ｒ Ａ聚合酶 的亚 ｇ Ｒ 。Ａ － Ｏ ｓ Ｎ Ｎ
它配套试剂由健尔康公司提供。 １３ 方 法 无 菌 条件 下 取 ０５Ｉ 抗凝 血 加 到培 养 ． ． １ ｌ １ 液 的瓶 中， ３ ℃培 养箱 中 ，２小 时后取 出。将 培 置 ７ ７ 养 的细 胞 悬 液 轻轻 混 匀 吸 到 ５ｌ 试 管 中， ０转 １ ｌ ｌ ２０ ０
肿瘤抗原检测的方法
肿瘤抗原检测的方法1.引言1.1 概述肿瘤抗原检测是一种重要的方法，用于早期发现和诊断肿瘤疾病。
它是通过检测体内存在于肿瘤组织或肿瘤相关反应产物中的特定标志物来判断个体是否存在着潜在的肿瘤问题。
肿瘤抗原是一类特殊的蛋白质分子，它们在正常情况下应该是不存在或仅存在于极低水平的。
然而，当人体存在肿瘤时，肿瘤细胞会产生并释放出大量的肿瘤抗原，这些抗原可通过血液、尿液等生物样本进行检测。
肿瘤抗原检测方法主要有两种：一种是直接检测肿瘤抗原的存在与水平，另一种是通过特定抗体对抗原进行识别和结合来间接检测抗原的存在。
直接检测方法有着简便、快速的特点，常见的技术包括酶联免疫吸附法（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）以及荧光免疫测定法（FIA）等。
这些方法能够精确地测定肿瘤抗原的浓度，从而提供有关肿瘤的诊断和治疗信息。
间接检测方法则更加灵敏和特异，常见的技术包括免疫组化、免疫荧光和免疫组织化学等。
这些方法通过特定抗体对抗原进行特异性识别和结合，从而间接地检测抗原的存在。
虽然这些方法有着较高的灵敏度和特异性，但其检测过程相对复杂且耗时较长。
肿瘤抗原检测方法在临床诊断中起着重要的作用。
它可以帮助医生及时发现潜在的肿瘤问题，进而采取相应的治疗手段和预防措施。
此外，肿瘤抗原检测还可以用于评估治疗效果和监测肿瘤复发情况。
尽管肿瘤抗原检测方法在肿瘤诊断中有着广泛的应用潜力，但其局限性也不可忽视。
一些肿瘤抗原在正常情况下也可能存在于体内，而某些肿瘤抗原的水平也可能受到其他因素的干扰，因此在进行具体实验和分析时，还需结合其他临床指标和病史等综合考虑。
总之，肿瘤抗原检测是一种重要的诊断方法，能够有效地帮助医生早期发现和诊断肿瘤疾病。
随着技术的不断发展和完善，相信肿瘤抗原检测方法将在未来发挥更加重要的作用。
1.2 文章结构文章结构是指文章的组织和布局方式，它决定了文章的逻辑性和条理性。
本文将从引言、正文和结论三个部分进行展开。
首先，引言部分将概括介绍肿瘤抗原检测的背景和意义，引出文章的主题。
免疫组织化学检查——肿瘤诊断治疗的好帮手
免疫组织化学检查——肿瘤诊断治疗的好帮手免疫组织化学检测，是根据抗原与抗体特异性结合的原理，使用特殊标记技术对组织或细胞中的特异性抗原或抗体进行定性检测的一种检测技术。
免疫组织化学检测具有特异性强、灵敏度高、操作步骤简单的特点，在病理诊断工作中应用广泛。
采用该项检查技术，不仅提高了病理诊断的准确性，而且在分析肿瘤起源、确定肿瘤性质、指导后续治疗等各方面都发挥出了重要作用。
一、有利于确定病原体与肿瘤的关系免疫组化检测可以应用于研究病原体引起癌症的机理，该检测方法在发现癌症发生原因工作中有着重要意义。
例如在对乙肝病毒进行免疫组织化学检测时，通过使用HBsAg单克隆抗体与多克隆抗体，还有已经被生物素标记过的HBVDNA 探针，可以清晰的检测出标志物。
二、有利于确定肿瘤的发生起源免疫组化检查技术在研究肿瘤来源的过程中也起到了关键作用，通过开展免疫组化检测，可以研究清楚在各种肿瘤细胞中表达的特异性抗体，有助于人们更加明确的发现肿瘤的真正起源，例如淋巴结组织内存在大量恶性肿瘤细胞，利用免疫组化就能够有助于人们判断肿瘤细胞起源。
三、有利于鉴别诊断肿瘤的发展位置免疫组织化学检验还普遍应用于对肿瘤中的抗原进行检查，例如，通过检查甲胎蛋白来判别人体肝脏、卵巢、睾丸等部位是否出现肿瘤细胞。
若人体的消化道、卵巢、子宫、乳房和膀胱等部位的出现恶性肿瘤，那么这些部位会广泛分布有癌胚抗原，虽然该抗原不具备特异性，但是在一定的条件下依旧可以清晰识别出来，其表达情况如何可以直接反映出肿瘤的恶化程度。
除此之外，在前列腺肿瘤诊断过程中，已知前列腺酸性磷酸酶与前列腺肿瘤的分化程度呈现正相关，因此通过对其进行检测对于研究前列腺肿瘤的发展情况具有重要意义。
四、有利于区分分化差的肿瘤在对肿瘤疾病进行治疗的过程中，其细胞分化程度往往不同，单靠光镜无法具体判断之间的差别，因此正确分别出肿瘤和肉瘤是医生们亟待解决的问题。
通过利用免疫组化的标记细胞角蛋白(CK)、波形蛋白(Vimentin)、S-100蛋白、LCA(白细胞共同抗原，CD45RB)等就可以清楚区分。
肿瘤免疫检测项目及其临床意义
肿瘤免疫检测项目及其临床意义肿瘤免疫检测项目及其临床意义1、甲种胎儿球蛋白试验(AFP)【正常值】化学发光法0~10.9ng/ml【临床意义】(1)定性①阳性：原发性肝癌。
②弱阳性：转移性肝癌、黄疸型肝炎、阻塞性黄疸、肝硬变、胃癌、胆道癌、肺癌等。
(2)定量①高度升高：原发性肝癌(进行性升高)、胃癌肝转移、孕妇、先天性胆道闭锁症。
②中度短暂升高至轻度升高：阿米巴性肝脓肿、心源性肝淤血、特发性血友病、阻塞性黄疸、脂肪肝、酒精中毒性肝炎、传染性单核细胞增多症、慢性肝炎。
③轻度升高：非特异性溃疡性结肠炎、局限性肠炎(与非特异性反应性肝炎有关)。
2、血清癌胚抗原测定(CEA)【正常值】化学发光法血清：0~3ng/ml【临床意义】①升高：恶性肿瘤、结肠癌、直肠癌、胃癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、子宫癌、甲状腺癌、胆道癌等。
②良性疾病：肝硬变、慢性肝炎、阻塞性黄疸、糖尿病、抗癌剂引起肝损害、吸烟者较不吸烟者高。
3、糖链抗原50(CA50)【正常值】RIA法<24U/ml【临床意义】升高：胰腺癌、胆囊癌、结肠癌、直肠癌、胃癌、肝癌、肺癌、子宫癌、卵巢癌、肾癌、乳腺癌、溃疡性结肠炎、肝硬化、黑色素瘤、淋巴瘤。
4、糖链抗原15-3(CA15-3)【正常值】化学发光法0-31.3U/ml【临床意义】升高：乳腺癌、肺癌、结肠癌、胰腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、原发性肝癌。
5、糖链抗原125(CA125)【正常值】化学发光法0~35U/ml【临床意义】升高：卵巢癌(>100u/ml)、乳腺癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、结肠直肠癌、子宫内膜异位症、卵巢囊肿、胰腺炎、肝炎、肝硬化、良性和恶性胸腹水、早期妊娠。
6、神经元特异性烯醇化酶(NSE)【正常值】1~9ng/ml【临床意义】升高：小细胞肺癌和神经母细胞瘤(标志物，特异性升高)。
【临床意义】升高：肝癌(93.88OD/30mg蛋白质)、癌周围组织(24.09OD/30mg 蛋白质)。
一起走进肿瘤的细胞免疫检测
一起走进肿瘤的细胞免疫检测免疫系统是机体的防御系统，具有抵御外来抗原和内在抗原入侵的作用。
但是，研究发现，人体的免疫系统功能会随着年龄的升高而降低，通过检测免疫细胞状态，可以及时发现肿瘤隐患[1]。
近年来，免疫学研究进程不断加大，在分子生物学和细胞生物学的研究中取得了重要的进展，为肿瘤患者诊治提供重要的依据。
一、T淋巴细胞亚群（T-lymphocyte subsets）T淋巴细胞亚群可以根据CD抗原和免疫应答中的功能将其分为两类，包括CD4和CD8。
CD4T细胞亚群，根据表型以及功能不同，可以分为辅助型T细胞和诱导型T细胞，辅助性T细胞可以影响B细胞对抗体的生成，而诱导性T细胞可以对辅助性T细胞产生影响，并且能够抑制T细胞的成熟情况。
然而，CD8T细胞亚群在临床中可以分为抑制性T细胞亚群和细胞毒性T细胞亚群。
抑制性T细胞亚群对于B细胞抗体的产生会产生影响，细胞毒性T细胞亚群可以对靶细胞产生杀伤效果。
在机体正常免疫应答中往往需要免疫细胞的支撑，尤其是T细胞亚群，T细胞亚群之间具有相互的促进和制约功能[2]。
肿瘤免疫的主要作用是细胞免疫，T淋巴细胞是参与机体抗肿瘤免疫反应的主要免疫反应细胞。
T淋巴细胞亚群检测已成为临床检测癌症患者细胞免疫状态的首选方法，尤其是在癌症患者治疗期间(手术前后、化疗前后、放疗前后) ，其细胞免疫水平对治疗计划具有重要参考价值。
如果细胞免疫水平低，特别是低CD4细胞和低CD4/CD8比例的患者，其手术耐受性和放化疗耐受性往往会受到直接影响，疗效不佳。
细胞免疫功能正常患者的预后好于细胞免疫功能差的患者。
检测T淋巴细胞的方法有酶免疫法（Enzyme immunoassay）、免疫荧光法（immumofluorescence method）、流式细胞术（Flow cytometry）等。
酶免疫分析在我国基层医院得到了广泛的应用[3]。
二、T淋巴细胞嗜银蛋白（T Lymphocytes Ag-NORs）检测细胞周期中，核仁（nucleolus）处于分解、消失和重组的动态过程，它的主要功能是参与核糖体rna的生产。
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段及原理
常用检测肿瘤细胞表型的实验手段主要包括细胞免疫表型分析、蛋白质表达诸分析和基因表达诸分析等。
1.细胞免疫表型分析:通过检测肿瘤细胞表面的抗原标记物，可以确定肿瘤细胞的免疫表型，从而了解肿瘤细胞的免疫应答和免疫逃逸机制。
2.蛋白质表达诸分析:通过比较肿瘤细胞和正常细胞之间的蛋白质表达谱，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达蛋白质，进-步揭示肿瘤细胞的生物学特征。
3.基因表达诸分析:通过检测肿瘤细胞和正常细胞之间的基因表达诸，可以发现与肿瘤发生、发展相关的差异表达基因，从而了解肿瘤细胞的基因组特征。
这些实验手段的原理主要是基于分子生物学和生物信息学的方法，通过对肿瘤细胞表面或内部的分子进行检测和分析。
从而获得肿瘤细胞的表型信息。
这些信息对于理解肿瘤细胞的生物学特征、寻找新的治疗靶点以及评估治疗效果具有重要意义。
肿瘤免疫的概念
肿瘤免疫治疗还面临着许多挑战，例如免疫治疗的副作用、耐药性等问 题，需要进一步研究和探索。
肿瘤免疫研究方向
深入研究肿瘤免疫治疗的机制，探索更多的免疫治疗靶点，提高免疫治疗 的疗效和特异性。
开发更加安全、有效的免疫检查点抑制剂和其他新型免疫治疗方法，以更 好地应对不同类型的肿瘤。
研究肿瘤免疫治疗与其他治疗方法的联合应用，以提高治疗效果并减少副 作用。
缺点
免疫治疗也存在一些缺点，如部分患者可能会出现严重的免疫相关不良反应，如细胞因 子释放综合征等。此外，免疫治疗的疗效因人而异，部分患者可能无法从中获益。
Part
04
ห้องสมุดไป่ตู้
肿瘤免疫预防
预防免疫定义
• 预防免疫定义：预防免疫是指通过增强机体免疫力，达到预防、控制肿瘤发生、发展的目的。它包括特异性和非特 异性两个方面，其中特异性预防免疫是指针对特定肿瘤抗原的免疫应答，而非特异性预防免疫则是指对多种肿瘤都 具有防御作用的广谱免疫应答。
肿瘤免疫预防
通过疫苗接种等方式来提 高人群的免疫力，预防某 些肿瘤的发生。
Part
02
肿瘤免疫的种类和作用
细胞免疫
细胞免疫是机体抗肿瘤的重要机制之 一，通过激活和调节特异性T细胞和 NK细胞等免疫细胞，识别和杀伤肿瘤 细胞。
NK细胞是一种固有免疫细胞，能够识 别和杀伤肿瘤细胞，同时也能调节适 应性免疫应答。
疫苗治疗
利用肿瘤抗原制备疫苗，通过注 射疫苗刺激机体产生特异性免疫 反应，以消灭肿瘤细胞。
细胞因子治疗
利用细胞因子等生物因子激活免 疫细胞，增强机体对肿瘤的免疫 应答。
免疫细胞治疗
将患者自身的免疫细胞在体外培 养、激活，然后输回患者体内， 以增强其对肿瘤细胞的杀伤能力 。
临床医学检验临床免疫技术：肿瘤免疫与免疫学检验四
临床医学检验临床免疫技术：肿瘤免疫与免疫学检验四1、单选作HLA-Ⅱ类分子分型时，应用最广，最简便快捷和精确的方法是（）A.SBTB.PCR-SSOC.PCR-SSPD.RFLPE.以上均不对答案（江南博哥）：C参考解析：PCR-SSP（Sequence specific primer，序列特异性引物）是一种基因多态性分析技术，可用于HLA复合体及其他具有多态性特点的基因分型。
2、单选结合（）可用于精原细胞瘤的分型和分期A.AFP和HCGB.AFP和睾酮C.睾酮和HCGD.AFP和雌激素E.HCG和雌激素正确答案：A参考解析：AFP和HCG结合用于精原细胞瘤分型和分期，精原细胞瘤可分为精原细胞型、卵黄囊型、绒毛膜上皮细胞瘤和畸胎瘤。
精原细胞型AFP正常，HCG升高；卵黄囊型AFP升高，绒毛膜上皮细胞瘤HCG升高，而畸胎瘤两者均正常。
考点：临床常规检测的肿瘤标志物3、单选以下肿瘤标志物中属于胚胎抗原类的是（）A.CA125B.ACTHC.hCGD.PAPE.CEA正确答案：E参考解析：AFP和CEA等属于胚胎抗原类，ACTH和hCG属于激素类，CA125属于糖链抗原类，PAP属于酶类。
4、单选不作为肿瘤标志的是（）A.胚胎性抗原B.糖链抗原C.某些激素D.癌细胞抗体E.癌基因的产物正确答案：D参考解析：肿瘤抗原不容易诱导体液免疫应答发生，肿瘤发生时不容易检测到抗体。
5、单选患者，女，48岁。
左乳无痛性包块1个月。
查体：左乳可触及蚕豆大包块，表面粗糙，边缘不整，活动度差，包块表面皮肤有橘皮样改变，左腋下可触及黄豆大淋巴结，均无触痛。
诊断：左乳腺肿瘤。
选择血清中高表达的乳腺癌肿瘤标志（）A.AFP、CEAB.CA15-3、CEAC.AFP、CA15-3D.CA125、CEAE.CA125、CA15-3正确答案：B参考解析：CA15.3在健康人血清中含量很少，30%～50%乳腺癌患者明显增高，也是监测乳腺癌术后复发的最佳指标，CEA是乳腺癌诊断的参考指标。
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Dr. Wang Hui,
Faculty of Laboratory Medicine in Xinxiang Medical College
二、 肿瘤的发生因素
1、内在因素：个体基因背景 、免疫功能 状态 2、外部条件：化学因素（化学诱变剂） 物理因素（辐射、X线、紫外线） 病毒感 染个体基因背景 免疫功能状态
2018/7/25
Dr. Wang Hui,
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（一）肿瘤特异抗原
Hale Waihona Puke 肿瘤特异抗原（tumor specific antigen， TSA）是指该类抗原系肿瘤细胞所特有， 只表达于肿瘤细胞，而不存在于任何处 于不同发育阶段的正常细胞。
2018/7/25
Dr. Wang Hui,
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3、自发肿瘤抗原 自发性肿瘤是指一些无明确诱发因素的 肿瘤 大多数人类肿瘤属于这一类。 自发肿瘤的抗原有两种： 一种是TAA； 另一种是TSA。
2018/7/25
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2018/7/25
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NK细胞 具有广谱杀伤肿瘤细胞的作用 无肿瘤特异性和MHC限制性 直接杀伤肿瘤细胞 通过ADCC作用杀伤IgG包裹的肿瘤细胞。 NK细胞杀伤肿瘤的能力可被细胞因子所增强， 包括干扰素，肿瘤坏死因子和白细胞介素-2。 是一类在肿瘤早期起作用的效应细胞，是机体 抗肿瘤的第一道防线。
一、 概 述
肿瘤：正常组织细胞异常增生所形成的赘生 物。 肿瘤免疫学（tumor immunology）是研究机 体的免疫状态与肿瘤发生、发展的相互关系 和免疫学方法在肿瘤诊治中应用的一门学科。 其内容包括： 肿瘤的抗原性 、肿瘤的免疫 逃避机制、 机体抗肿瘤的免疫效应机制 、 肿瘤的免疫检验、 肿瘤的免疫治疗。
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2018/7/25
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CD8+CTL杀伤肿瘤细胞的机制：
1、通过其抗原受体识别肿瘤细胞上的特 异性抗原，并在TH细胞的辅助下活化后 直接杀伤肿瘤细胞； 2、活化的CTL可分泌淋巴因子如γ干扰 素、淋巴毒素等间接地杀伤肿瘤细胞。
2018/7/25
Dr. Wang Hui,
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2018/7/25
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1、胚胎抗原 胚胎抗原是在胚胎发育阶段由胚胎组织产生 的正常成分，在胚胎后期减少，出生后逐渐 消失，或仅存留极微量。当细胞恶性变时， 此类抗原可重新合成。 最常见的两种胚胎抗原：甲胎蛋白(alphafeto protein,AFP)； 癌胚抗原 （carcinoembryonic antigen,CEA）
2018/7/25
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CD4+T杀伤肿瘤细胞的机制：
产生淋巴因子增强CTL的功能 激活巨噬细胞或其他APC 产生肿瘤坏死因子发挥溶瘤作用
2018/7/25
(4) 树突细胞
专职抗原递呈细胞，其极强的抗原提呈 作用，辅助T、B细胞参与特异性杀伤肿 瘤的过程
2018/7/25
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2018/7/25
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2018/7/25
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2、分化抗原（differentiation antigens） 分化抗原是特定组织正常分化到一定阶段所 特有的标志。 不能刺激抗肿瘤的免疫应答； 可作为肿瘤起源的诊断性标志。
2018/7/25
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T细胞 T细胞应答是控制肿瘤生长发育 的最重 要的宿主应答。 参与抗肿瘤免疫的 两类T细胞亚群 : CD8+细胞毒性T细胞（CTL） ，受 MHC I类抗原限制 CD4+辅助性T细 胞（TH），受MHC II类抗原限制
2018/7/25
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1、化学物质诱发的TSA 特点： 特异性高 抗原性较弱 常表现出明显的个体独特性。
2018/7/25
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2018/7/25
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（ 二）肿瘤相关抗原（tumor-associated antigen,TAA）
肿瘤相关抗原是指非肿瘤细胞所特有的抗 原成分，也少量的存在于正常细胞，但在 肿瘤发生的机体可异常表达。
第二十九章 肿瘤免疫及其免疫检验
王 辉 新乡医学院医学检验系
目的要求：
1、掌握临床常规检测的肿瘤标志物的检 测及临床意义 2、掌握肿瘤抗原的分类 3、熟悉机体抗肿瘤的免疫效应机制及 肿瘤的免疫逃避机制 4、了解肿瘤标志物免疫测定的临床意义
2018/7/25
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2018/7/25
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常见肿瘤的免疫诊断及应用原则
（一）肿瘤诊断的三大支柱： 1、影像学：B超、CT、核磁共振、同位 素扫描、普通影像学诊 2、显微诊断：细胞、组织病理诊断 3、生化免疫诊断
2018/7/25
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（二）肿瘤的免疫诊断
肿瘤的免疫诊断，乃指测定肿瘤标记物、宿主 对肿瘤抗原的免疫应答和肿瘤患者免疫功能状 态。 肿瘤标记物通常指细胞癌变过程中所产生的正 常细胞缺乏或含量极微的特异性和相对特异性 的物质，也有可能是宿主细胞针对癌细胞所产 生的正常细胞成分，但在量和质上与正常状态 或良性疾病时明显不同。 存在于肿瘤细胞表面、 血液或体液中 ；如肿瘤的TSTA、TAA、TSA、 激素、酶（同功酶）等
2018/7/25
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三、机体抗肿瘤的免疫效应机制
（一）、体液免疫效应 抗肿瘤体液免疫机制是通过抗肿瘤细胞的抗体与 肿瘤细胞表面特异抗原结合后，再通过以下几种 途径发挥生物效应：1）激活补体系统溶解肿瘤细 胞。2）抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用 （ADCC） 杀 伤IgG包裹的肿瘤细胞。3）调理吞 噬作用。4）干扰肿瘤细胞的某些生物因子行为 （5）其它。
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2、病毒诱发的TSA 具有较强的抗原性。 瘤细胞表面的TSA 多系病毒基因的表达 产物 同一种病毒诱发的不同类型肿瘤可表达 相同的抗原 正常细胞无此类抗原的存在； 病毒感染细胞可有此类抗原的存在
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肿瘤抗原的分类
肿瘤抗原（tumour antigens）是指细胞 癌变过程中所表达的新生物或过量表达 产物. 根据肿瘤抗原特异性分为： 肿瘤特异抗 原（tumor specific antigen TSA）， 肿 瘤相关抗原（tumor-associated antigen,TAA）
(3) 巨噬细胞