工作菌液储存期限验证
培养基有效期的验证
灭菌后的培养基及美国药典标准参考内毒素工作溶液有效期的确认1.0 Purpose 目的The purpose of this protocol is to validate the shelf life of media in sealed (bottle with silicagel plug and screw cap flask) and unsealed container ( Petri dishes) and USP ReferenceStandard Endotoxin (RSE) working solution. (concentration –10EU/ml)该方案是确认装在密封容器（包括胶塞瓶及旋盖瓶）及非密封容器（培养皿）中的培养基以及美国药典标准参考内毒素工作溶液(浓度为10EU/ml)的有效期。
2.0 Background & Scope背景和范围3.0 Applicable Documents 参考文件4.0 Materials 物料4.1 Test articles测试物品A．Microbiological media after autoclaving 灭菌后的培养基Three separate batches of flasks and petri dishes(screw cap and silica gel plug: per batchwill be filled with 400mls of media; petri dishes: per plate will be filled with 8-10ml of agarmedia.每种培养基准备三个批次瓶装的及倒好平板的（胶塞瓶及旋盖瓶每瓶装400ml 培养基；平板每个装8-10ml 琼脂培养基）B. RSE working solution (concentration –10EU/ml). RSE工作溶液 (浓度为10EU/ml)RSE working solution (concentration –10EU/ml) of 1000ml volumetric flasks for threeseparate batches.准备三个批次碘量瓶装的浓度为10EU/ml的美国药典标准参考内毒素工作溶液，每瓶装1000ml。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义➢标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
➢传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
➢工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
➢菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
黑曲霉孢子悬液贮存期的确认
附表1 黑曲霉孢子悬液贮存期确认用培养基、稀释液序号名称生产商1玫瑰红钠琼脂培养基北京三药科技开发公司2含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液聚山梨酯80：北京益利精细化学品有限公司氯化钠：国药集团化学试剂有限公司注：玫瑰红钠琼脂培养基已通过适用性检查。
助消化、抗病毒、抑菌防腐、抗氧化之作用。
临床用于治疗咽喉肿痛、咳嗽痰黏、失音、烦渴、鱼蟹中毒和湿疹较理想。
西青果又名“藏青果”，为中药诃子的幼果。
其化学成分与青果有许多不同，其醇提取物有清除羟自由基及抗DNA氧化作用。
临床多用于治疗阴虚白喉和急、慢性咽炎。
由于青果与西青果的不同，建议医师在遣方用药时，根据患者病情注意区分使用并准确书写；同时注意西青果的常用剂量很小，药典规定剂量为1.5～3g，约为青果的1/3。
中药调剂人员亦应按《饮片调剂规程》的饮片药味应付规定，正确调配。
以使临床用药更加合理有效。
参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)2010版[S].北京:中国医药科技出版社,2010:183,1212 北京市药品监督管理局.北京市中药饮片炮制规范2008年版[S].北京:化学工业出版社,2010:243,2313 何志勇,夏文水.中药青果化学成分及药理研究进展[J].中成药,2006,28(7):1024～10264 张鑫.西青果化学成分的研究[J].解放军广州医高专学报,1998,21(2):100～1015 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大、小鼠急性酒精性肝损伤模型自由基代谢的影响[J].江苏中医药,2004,25(1):55～566 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大鼠急性酒精性肝损伤肝组织病理形态的影响[J].中国中医药学报,2004,19(8):468～4707 袁剑刚,刘昕,汤展球.橄榄的抑菌效应及其药效成分的初步研究[J].食品科学,2001,22(3):82～848 王恒,宋良科,汤昊,等.不同种质青果清热利咽化学组分的研究[J].中国中药杂志,2010,35(6):699～6729郑民实.E L I S A技术检测中草药抗HBeAg的实验研究[J].中国医院药学杂志,1991,11(2):5310 张亮亮,林益明.橄榄果实提取物中没食子酸含量及自由基清除能力的研究[J].林产化学与工业,2009,29(B10):192～19411 阿不都热依木,阿不都艾尼,哈木拉提,等.五种维吾尔药的清除羟自由基及抗损伤作用研究[J].中草药,2001,32(3):236～23812北京市卫生局,北京市中医管理局.北京市中药饮片调剂规程2011版[S].2011:50～51（20131019收稿）北京北大维信生物科技有限公司（100094）马威 王晓峰 孟春玲Δ 张丽梅 闫夏黑曲霉孢子悬液贮存期的确认摘要：目的 我厂QC微生物实验室制备的黑曲霉孢子悬液用于基于《中华人民共和国药典》（2010年版）附录“微生物限度检查法”进行的微生物计数方法学验证及计数培养基适用性检查。
消毒剂消毒效果与储存有效期验证方案(2015)
文件编号：消毒剂消毒效力及储存有效期验证方案1.概述31.1消毒剂种类31.2消毒剂成分和作用机理32.验证目的33.验证范围34.验证小组成员及分工45.相关文件46.风险分析47.验证内容47.1验证前准备57.2验证用消毒剂的配制67.3消毒剂消毒效力确认67.4消毒剂储存有效期的确认77.5消毒剂消毒效果确认88.相关记录89.验证进度及计划810.验证偏差和变更810.1验证偏差810.2验证变更91. 概述1.1 消毒剂种类本公司在洁净区使用的消毒剂有0.1％新洁尔灭溶液、含氯消毒液<有效氯含量为0.5g/L>、75％乙醇溶液和3%双氧水四种。
其中75％乙醇溶液和3%双氧水用于A/B级洁净区消毒,0.1％新洁尔灭溶液用于C级和D级洁净区消毒,含氯消毒液用于地漏消毒。
1.2消毒剂成分和作用机理1.2.1 0.1％新洁尔灭溶液是一种阳离子表面活性剂,其作用机理是：破坏细胞膜,改变其通透性而起杀菌作用。
含氯消毒液<有效氯含量为0.5g/L>的主要消毒成分是次氯酸钠,属于高效的含氯消毒剂。
含氯消毒剂的杀菌作用包括次氯酸的作用、新生氧作用和氯化作用。
次氯酸的氧化作用是含氯消毒剂的最主要的杀菌机理。
含氯消毒剂在水中形成次氯酸,作用于菌体蛋白质。
次氯酸不仅可与细胞壁发生作用,且因分子小,故侵入细胞内与蛋白质发生氧化作用或破坏其磷酸脱氢酶,使糖代谢失调而致细胞死亡。
次氯酸钠的浓度越高,杀菌作用越强。
75％乙醇溶液的主要消毒成分为乙醇,属中效消毒剂,其作用机理是〔1使蛋白质变性：乙醇作用于细菌细胞首先起到脱水作用,乙醇分子进入到蛋白质分子的肽链环节,使蛋白质发生变性沉淀；〔2破坏细菌细胞壁：乙醇具有很强的渗透作用,60％～85％的乙醇比较容易渗透到菌体内,使得细菌细胞破坏溶解。
〔3对微生物酶系统破坏：乙醇通过抑制细菌酶系统,特别是脱氢酶和氧化酶等,阻碍了正常代谢,抑制细菌生长繁殖。
消毒剂效力及有效期验证方案
1.目的PURPOSE (5)2.范围SCOPE (5)3.引言INTRODUCTION (5)4.参考资料REFENRENCE (6)5.验证方法TEST METHOD (6)5.1.所用仪器和物料 (6)5.2.测试工作菌种 (6)5.3.实验程序 (6)6.接受标准 (8)6.1.消毒效力接受标准： (8)6.2.中和效力控制及其接受标准： (8)1.目的PURPOSE验证惠氏苏州工厂目前使用的几种消毒剂Process LpHse: 酸性、Process VespheneⅡ se:碱性、Ethanol 酒精溶液、快活溶液，在不锈钢、橡胶、瓷砖、玻璃、塑料门帘、墙面等不同材质上的消毒效力，同时验证消毒剂的使用有效期。
2.范围SCOPE本验证需要验证的消毒剂有：Process LpHse: (酸性)、Process VespheneⅡ se:(碱性)、Ethanol 酒精溶液、快活溶液FORWARD disinfectant四种。
3.引言INTRODUCTION本验证的原理是，在某种材质表面接种0.1ml (104-105CFU)的菌种，室温下自然风干后，将消毒剂直接喷在材质表面，等消毒剂作用一段时间后，检验没有被杀灭的细菌数；根据细菌被杀灭的数量，来判断消毒剂的杀菌效果。
实际消毒操作时，消毒剂喷到要消毒物体表面后，再通过人为的涂擦等操作使消毒剂与物体表面充分接触，同时，此操作也会机械去除掉一部分微生物。
在该验证中，消毒剂是喷到材质表面，这种方法要比实际消毒时的效果差，因此验证的结果更能体现实际的消毒效果。
4.参考资料REFENRENCEDisinfectant Effectiveness Study（812-Analytical Report-0807-1.0）SOPTS-35(V5)5.验证方法TEST METHOD5.1.所用仪器和物料➢所用培养皿、移液管、容器均在121度下灭菌30分钟后使用➢无菌一次性培养皿，移液管。
19 检定菌管理制度
1.目的规范医疗器械微生物实验室检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保无菌检查及微生物限度检验结果的准确可靠。
建立菌种的购买、保存、使用和销毁管理规定，为使购进菌种能妥善保存，有计划合理使用，制订本规程。
2.适用范围适用于所有检定菌管理及相关人员。
3.术语定义3.1 检定菌是指微生物测定和其它检查用的标准菌种。
3.2 标准菌种是指由中国药品生物制品检定所或其他合法供应商所提供的冷冻干燥菌。
4.职责4.1 质量部微生物室管理人员，负责按本标准进行检定菌的申购、接收、分发。
检验人员负责菌种的确认、传代、贮存、编码、使用和销毁。
4.2 采购部负责检定菌的采购。
4.3 质量部负责人负责监督本规定的执行。
5.流程图无6.内容及要求6.1 人员要求6.1.1 菌种和试验菌管理人员应具有一定的微生物学专业知识，并经过培训合格，熟悉检定菌的特性、贮存条件，有一定的菌种保存经验。
6.2 菌种的购买及接收6.2.1 每年根据检定菌的使用情况，由QC主管作采购计划，相关领导审批批准后，交采购部购买。
6.2.2 医疗器械检验用的试验菌必须来自国内或国外菌种保藏机构的标准菌株，或是用于标准菌株所有相关特性等效的商业派生菌种。
6.2.3 当菌种购入后，菌种保管员首先要对菌种进行验收，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，确认正确后仔细阅读所附的标签和说明书中关于保存条件的要求，严格按照规定条件进行保存并上锁保管，并作好《菌种接收记录》。
6.3 检定菌保存6.3.1标准菌种的保存将新购进的检定菌菌种（冻干粉的形式存在），根据各菌种的保存方法、条件储存，放置洁净的（最好带锁的）冰箱（一般为2～8℃），或-20℃以下保存。
6.3.2 传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法，也可采用斜面低温保存法，标准菌种传代后按规定的温度和时间培养后，置于冰箱内继续保存。
琼脂斜面保藏的菌种每隔3月、6个月传代一次，液体石蜡保藏的菌种视菌种情况1至2年传代一次，半固体培养基保存法保藏的菌种半年至一年传代一次。
产品有效期验证实验
产品有效期验证实验
一、目的
验证公司产品的稳定性和有效期
二、对象
公司自产2013.04.26枯草芽孢杆菌、2013.04.19粪肠球菌、2013.07.13屎肠球菌
三、方法及要求
按照公司产品检测标准进行。
保存条件为冷藏保存，检测周期为15天/次，检测方法遵循公司检测标准进行。
检测若干
周期并观察期外观、菌数、水分等指标的变化情况，并及时归
档记录或实验数据。
四、实验时间
2013年11月19日起开展，严格按照上述实验要求进行检测，若与其他实验冲突、应提前安排，确保实验顺利进行。
五、实验记录
见附表1～3。
枯草芽孢杆菌周期性检测记录
粪肠球菌周期性检测记录
屎肠球菌周期性检测记录
乳酸片球菌周期性检测记录。
洁净服清洁消毒效果、贮存期验证方案
洁净服清洁消毒效果、贮存期验证方案1.概述本公司为体外诊断试剂生产企业，清洗消毒后洁净服存放时间不超过14天，期间连续穿着不得超过7天。
本方案为洁净服清洁消毒效果、贮存期验证方案。
2.目的证明清洗、消毒方法有效可行，确认洁净服清洗消毒后符合生产工艺要求，防止洁净服对洁净区生产环境及产品产生污染。
3.范围本验证方案适用洁净服清洁消毒效果、贮存期的验证。
4.职责4.1验证委员会姓名部门职务验证职务验证委员会职责组长1.负责验证方案的审核和批准。
2.负责验证报告的审核和批准。
组员1.负责验证方案的审核。
2.负责验证报告的审核。
组员1.负责验证方案的审核。
2.负责验证报告的审核。
4.2验证小组姓名部门职务验证职务验证小组成员职责组长 1.负责参与验证方案的审核。
2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。
3.负责验证数据及结果的收集和审核。
4.负责参与验证报告的审核。
5.负责做出验证结论。
6.负责洁净服清洁消毒效果、贮存期监测及验证时间的确认。
组员组员组员组员组员组员4.3验证涉及部门部门职责质量管理部1.牵头组织起草验证方案，会同验证涉及部门进行审核。
2.检查是否已完成验证方案的起草、审核和批准工作。
3.负责进行计量器具和检测设备的校准和确认。
4.提前通知QC及时配合验证过程中的检验等工作。
5.核实验证具体实施时间，进行验证数据的收集和记录，确保验证进度。
6.负责验证记录、验证报告的填写、审核和归档。
7.最终验证报告的编写、审核和批准。
8.跟踪及调查验证过程中发生的偏差和变更。
9.负责验证中需要的环境监测项目的监测。
10.针对不一致项，协商解决方法。
生产部1.配合起草验证方案和验证报告，参与验证方案的审核。
2.安排人员参与验证小组，由验证小组执行和完成验证。
3.协调验证活动，确保验证进度。
4.负责容器具的清洁。
5.偏差过程的调查、分析，提出解决办法。
6.与质量管理部一起完成最终验证报告的编写、审核。
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工作菌液贮存时间验证方案
1．目的：
确认工作菌液在2-8℃条件下的贮存时间。
2．范围：适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的工作菌液贮存。
3．环境条件要求：所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区域隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。
4．验证方法的依据：《中国药典》2010年版二部。
5．验证前准备：
5.1验证用菌种
金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003] 铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌[CMCC(B) 44102] 枯草芽孢杆菌[CMCC(B) 63501]
生孢梭菌[CMCC(B) 64941] 白色念珠菌[CMCC(F) 98001]
黑曲霉[CMCC(F) 98003]
5.2培养基的制备：
营养肉汤培养基批号：北京三药科技开发公司硫乙醇酸盐流体培养基批号：北京三药科技开发公司营养琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司改良马丁琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司改良马丁培养基批号：北京三药科技开发公司玫瑰红钠琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。
5.3稀释液的制备：
0.9％无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解至1000ml，121℃灭菌20min。
0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温80 0.5ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至1000ml，121℃灭菌20min。
5.4菌原液制备：
（1）将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，经30-35℃培养18-24小时。
（2）将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30-35℃培养18-24小时。
（3）将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经23-28℃培养24-48小时。
实验人/日期：
（4）接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，备用。
实验人/日期：
6.验证内容：
6.1菌种的确认
菌种名称代数编号接种日期实验人员
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
6.2仪器设备：
实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过170—180℃干热灭菌至少60分钟。
隔水式恒温培养箱： GRP—9050 型北京桑翌科技发展有限公司
生化培养箱： SHP-250型上海森信实验仪器有限公司
立式压力蒸汽灭菌器： LDZM—75 上海申安医疗器械厂
天平： DT系列电子天平中国江苏常熟长青仪器仪表厂
电热鼓风干燥箱： 101-3AB型天津泰斯特仪器有限公司
家用冰箱
6.3 验证过程
6.3.1新制备原菌液计数
（1）取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌的菌原液，用稀释液0.9％无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数：
菌液名称稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期实验人员金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
（2）取黑曲霉孢子悬液，用稀释液0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数：
菌液名称稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期实验人员黑曲霉
6.3.2保存条件的确认：
将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后，置冰箱（2-8℃）保存，原菌液一定时间计数一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。
6.3.3结果
金黄色葡萄球菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
铜绿假单胞菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
大肠埃希菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
枯草芽孢杆菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
生孢梭菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
白色念珠菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
黑曲霉菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期3
6
9
12
15
备注：
8.验证结论
项目名称：
验证内容：
验证结论：
验证人/日期：复核人/日期：审核人/日期：负责人/日期：。