工作菌液储存期限验证
标准菌种管理规程
标准菌种管理规程目的：规范药品微生物学检定用菌的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
职责： QC 主管负责菌种的申购、接受、保存、分发，微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。
内容：1术语标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代。
2.标准：2.1 检定菌的申购QC主管每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由质量管理部部长审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）药检所购买传代用菌种，购买时，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。
2.2 检定菌的接收菌种到达实验室后，由QC主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌接收记录》（附表 1）上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，贴好标签并储存于 2-8?C直到需要使用时。
储存期最长不超过 5 年。
2.3 检定菌的保存2.3.1 工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至2～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌： 1 个月；酵母菌： 2 个月；霉菌及芽胞： 3 个月。
培养基有效期的验证
灭菌后的培养基及美国药典标准参考内毒素工作溶液有效期的确认1.0 Purpose 目的The purpose of this protocol is to validate the shelf life of media in sealed (bottle with silicagel plug and screw cap flask) and unsealed container ( Petri dishes) and USP ReferenceStandard Endotoxin (RSE) working solution. (concentration –10EU/ml)该方案是确认装在密封容器（包括胶塞瓶及旋盖瓶）及非密封容器（培养皿）中的培养基以及美国药典标准参考内毒素工作溶液(浓度为10EU/ml)的有效期。
2.0 Background & Scope背景和范围3.0 Applicable Documents 参考文件4.0 Materials 物料4.1 Test articles测试物品A．Microbiological media after autoclaving 灭菌后的培养基Three separate batches of flasks and petri dishes(screw cap and silica gel plug: per batchwill be filled with 400mls of media; petri dishes: per plate will be filled with 8-10ml of agarmedia.每种培养基准备三个批次瓶装的及倒好平板的（胶塞瓶及旋盖瓶每瓶装400ml 培养基；平板每个装8-10ml 琼脂培养基）B. RSE working solution (concentration –10EU/ml). RSE工作溶液 (浓度为10EU/ml)RSE working solution (concentration –10EU/ml) of 1000ml volumetric flasks for threeseparate batches.准备三个批次碘量瓶装的浓度为10EU/ml的美国药典标准参考内毒素工作溶液，每瓶装1000ml。
高水平消毒物品储存时限的研究
高水平消毒物品储存时限的研究傅响玲;张玉侠;章晓燕;毛鸣琦;张洁;庄燕华【摘要】目的探讨高水平消毒物品储存有效期限,为临床安全应用消毒物品以及消毒供应中心何时进行物品的再处理提供依据。
方法将临床各科室送至消毒供应中心高水平消毒处理后的呼吸机管道、呼吸机管道附件、复苏囊、面罩等物品共240件（普通科室与ICU各120件,用保鲜自封袋包装后,送至科室,统一储存于治疗室的整理箱内,于消毒后保存1周,2周,3周,1个月,2个月,3个月时分别采样进行细菌培养。
结果不同储存时限消毒物品细菌培养均合格,普通科室组和ICU组的消毒物品在消毒后1周、2周、3周、1个月、2个月和3个月的细菌学培养均为合格。
结论经过高水平消毒后的物品储存3个月是安全可使用的,更长的储存时限还需进一步的验证。
【期刊名称】《护理学杂志》【年(卷),期】2016(031)004【总页数】2页(P55-56)【关键词】消毒供应中心;高水平消毒;储存地点;储存时限;普通科室;ICU【作者】傅响玲;张玉侠;章晓燕;毛鸣琦;张洁;庄燕华【作者单位】[1]复旦大学附属儿科医院消毒供应中心,上海201102;[2]复旦大学附属儿科医院护理部,上海201102【正文语种】中文【中图分类】R472.1呼吸机管道、复苏囊及面罩是危重患者抢救救治中常用的诊疗用具。
有研究表明，呼吸机管路是细菌寄居的重要部位，呼吸机管路污染是导致呼吸机相关性肺炎(VAP)的重要危险因素[1]。
消毒技术规范规定，呼吸机管道、面罩等中度危险性物品应采用高水平消毒或中水平消毒[2]，但未对其储存有效期限做出规定。
各个医院的储存时限也都不相同。
我院一直以来沿袭1周消毒1次的规定并无循证依据。
本研究旨在通过对消毒供应中心高水平消毒后的物品储存不同时间后进行采样细菌培养，以探索此类物品的储存时限，为高水平消毒后的物品储存时限提供依据。
1.1 一般资料选择2015年1～7月临床各科室送至消毒供应中心处理的呼吸机管道、呼吸机管道附件、复苏囊、面罩等物品共240件。
无菌有效期验证资料
无菌有效期验证资料
无菌有效期验证资料是指对无菌产品进行有效期验证的相关资料。
这些资料包括但不限于以下内容：
1. 无菌产品的生产日期和有效期：记录无菌产品的生产日期和有效期，以确保产品在有效期内保持无菌状态。
2. 无菌产品的灭菌方法和灭菌剂的验证：记录无菌产品的灭菌方法和灭菌剂的验证结果，以确保灭菌过程能够有效地杀灭微生物。
3. 无菌产品的包装材料和包装过程的验证：记录无菌产品的包装材料和包装过程的验证结果，以确保包装能够有效地防止微生物的污染。
4. 无菌产品的微生物检测结果：记录对无菌产品进行微生物检测的结果，包括菌落总数、霉菌和酵母菌的检测结果，以确保产品在无菌状态下。
5. 无菌产品的贮存条件和贮存期验证：记录无菌产品的贮存条件和贮存期的验证结果，以确保产品在贮存期内保持无菌状态。
这些资料是对无菌产品进行有效期验证的重要依据，能够确保产品在有效期内保持无菌状态，从而保证产品的质量和安全性。
培养基有效期的验证
灭菌后的培养基及美国药典标准参考内毒素工作溶液有效期的确认1.0 Purpose 目的The purpose of this protocol is to validate the shelf life of media in sealed (bottle with silicagel plug and screw cap flask) and unsealed container ( Petri dishes) and USP ReferenceStandard Endotoxin (RSE) working solution. (concentration –10EU/ml)该方案是确认装在密封容器（包括胶塞瓶及旋盖瓶）及非密封容器（培养皿）中的培养基以及美国药典标准参考内毒素工作溶液(浓度为10EU/ml)的有效期。
2.0 Background & Scope背景和范围3.0 Applicable Documents 参考文件4.0 Materials 物料4.1 Test articles测试物品A．Microbiological media after autoclaving 灭菌后的培养基Three separate batches of flasks and petri dishes(screw cap and silica gel plug: per batchwill be filled with 400mls of media; petri dishes: per plate will be filled with 8-10ml of agarmedia.每种培养基准备三个批次瓶装的及倒好平板的（胶塞瓶及旋盖瓶每瓶装400ml 培养基；平板每个装8-10ml 琼脂培养基）B. RSE working solution (concentration –10EU/ml). RSE工作溶液 (浓度为10EU/ml)RSE working solution (concentration –10EU/ml) of 1000ml volumetric flasks for threeseparate batches.准备三个批次碘量瓶装的浓度为10EU/ml的美国药典标准参考内毒素工作溶液，每瓶装1000ml。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程,操作规程
菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义➢标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
➢传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
➢工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
➢菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4～8℃冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4～8℃冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
黑曲霉孢子悬液贮存期的确认
附表1 黑曲霉孢子悬液贮存期确认用培养基、稀释液序号名称生产商1玫瑰红钠琼脂培养基北京三药科技开发公司2含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液聚山梨酯80：北京益利精细化学品有限公司氯化钠：国药集团化学试剂有限公司注：玫瑰红钠琼脂培养基已通过适用性检查。
助消化、抗病毒、抑菌防腐、抗氧化之作用。
临床用于治疗咽喉肿痛、咳嗽痰黏、失音、烦渴、鱼蟹中毒和湿疹较理想。
西青果又名“藏青果”，为中药诃子的幼果。
其化学成分与青果有许多不同，其醇提取物有清除羟自由基及抗DNA氧化作用。
临床多用于治疗阴虚白喉和急、慢性咽炎。
由于青果与西青果的不同，建议医师在遣方用药时，根据患者病情注意区分使用并准确书写；同时注意西青果的常用剂量很小，药典规定剂量为1.5～3g，约为青果的1/3。
中药调剂人员亦应按《饮片调剂规程》的饮片药味应付规定，正确调配。
以使临床用药更加合理有效。
参考文献1 国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)2010版[S].北京:中国医药科技出版社,2010:183,1212 北京市药品监督管理局.北京市中药饮片炮制规范2008年版[S].北京:化学工业出版社,2010:243,2313 何志勇,夏文水.中药青果化学成分及药理研究进展[J].中成药,2006,28(7):1024～10264 张鑫.西青果化学成分的研究[J].解放军广州医高专学报,1998,21(2):100～1015 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大、小鼠急性酒精性肝损伤模型自由基代谢的影响[J].江苏中医药,2004,25(1):55～566 彭勃,苗明三,王颖芳,等.橄榄解酒饮对大鼠急性酒精性肝损伤肝组织病理形态的影响[J].中国中医药学报,2004,19(8):468～4707 袁剑刚,刘昕,汤展球.橄榄的抑菌效应及其药效成分的初步研究[J].食品科学,2001,22(3):82～848 王恒,宋良科,汤昊,等.不同种质青果清热利咽化学组分的研究[J].中国中药杂志,2010,35(6):699～6729郑民实.E L I S A技术检测中草药抗HBeAg的实验研究[J].中国医院药学杂志,1991,11(2):5310 张亮亮,林益明.橄榄果实提取物中没食子酸含量及自由基清除能力的研究[J].林产化学与工业,2009,29(B10):192～19411 阿不都热依木,阿不都艾尼,哈木拉提,等.五种维吾尔药的清除羟自由基及抗损伤作用研究[J].中草药,2001,32(3):236～23812北京市卫生局,北京市中医管理局.北京市中药饮片调剂规程2011版[S].2011:50～51（20131019收稿）北京北大维信生物科技有限公司（100094）马威 王晓峰 孟春玲Δ 张丽梅 闫夏黑曲霉孢子悬液贮存期的确认摘要：目的 我厂QC微生物实验室制备的黑曲霉孢子悬液用于基于《中华人民共和国药典》（2010年版）附录“微生物限度检查法”进行的微生物计数方法学验证及计数培养基适用性检查。
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程
菌种保存、传代、使用、销毁管理规程-操作规程菌种管理制度1、目的建立菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程，规范微生物学检定用菌种的管理，最大限度降低变异率，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。
2、适用范围本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的购买、保存、传代、使用及销毁等。
3、定义标准菌株是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。
传代用菌种是指用标准菌株制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用菌种。
工作用菌种是指用标准菌株或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。
菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第0代。
4、职责4.1部门主管负责菌种的申购、接收、保存分发。
4.2微生物检验员负责菌种的确认、传代、使用及销毁。
5、规程5.1菌种的申购部门主管根据菌种的使用情况，提出年度购买计划（包括临时检验需要），填写申购流程，经审批后，向中检所菌种保藏中心或省（市）药检所购买冻干菌种（标准菌株）或传代用菌种，购买时，需确定菌种的代数，以便控制传代代数。
5.2菌种的接收菌种到达实验室后，由部门主管接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《标准菌株库存记录》上，内容包括：名称、数量、编号（无编号者按检定菌种的编号原则编号）、代数、来源、接收日期、接收人等，并将其暂贮存于4〜8 C 冰箱中，在一周内必须完成转种。
5.3菌种的保存5.3.1工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。
将菌种接种在适宜的琼脂斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至4〜8C冰箱中保存。
此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。
保存时间根据菌种种类而不同，细菌：每个月转种一次；酵母菌及芽胞：3~6个月转种一次；丝状真菌每年转种一次。
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工作菌液贮存时间验证方案
1．目的：
确认工作菌液在2-8℃条件下的贮存时间。
2．范围：适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的工作菌液贮存。
3．环境条件要求：所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区域隔离系统内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。
4．验证方法的依据：《中国药典》2010年版二部。
5．验证前准备：
5.1验证用菌种
金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]铜绿假单胞菌[CMCC(B) 10104]
大肠埃希菌[CMCC(B)44102]枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]
生孢梭菌[CMCC(B)64941]白色念珠菌[CMCC(F)98001]
黑曲霉[CMCC(F)98003]
5.2培养基的制备：
营养肉汤培养基批号：北京三药科技开发公司
硫乙醇酸盐流体培养基批号：北京三药科技开发公司
营养琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司
改良马丁琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司
改良马丁培养基批号：北京三药科技开发公司
玫瑰红钠琼脂培养基批号：北京三药科技开发公司
以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。
5.3稀释液的制备：
0.9％无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解至1000ml，121℃灭菌20min。
0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温80 0.5ml，加0.9％无菌氯化钠溶液至1000ml，121℃灭菌20min。
5.4菌原液制备：
（1）将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基中，经30-35℃培养18-24小时。
（2）将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30-35℃培养18-24小时。
（3）将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经23-28℃培养24-48小时。
实验人/日期：
（4）接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml含0.05％（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。
然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，备用。
实验人/日期：
6.验证内容：
6.1菌种的确认
菌种名称代数编号接种日期实验人员
金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
6.2仪器设备：
实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过170—180℃干热灭菌至少60分钟。
隔水式恒温培养箱： GRP—9050 型北京桑翌科技发展有限公司
生化培养箱： SHP-250型上海森信实验仪器有限公司
立式压力蒸汽灭菌器： LDZM—75 上海申安医疗器械厂
天平：DT系列电子天平中国江苏常熟长青仪器仪表厂
电热鼓风干燥箱： 101-3AB型天津泰斯特仪器有限公司
家用冰箱
6.3 验证过程
（1）取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌的菌原液，用稀释液0.9％无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数：
菌液名称稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期实验人员金黄色葡萄球菌
铜绿假单胞菌
大肠埃希菌
枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌
黑曲霉
（2）取黑曲霉孢子悬液，用稀释液0.05％聚山梨酯80无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，平皿法计数：
菌液名称稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期实验人员黑曲霉
将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后，置冰箱（2-8℃）保存，原菌液一定时间计数一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。
金黄色葡萄球菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
铜绿假单胞菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
大肠埃希菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
枯草芽孢杆菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
生孢梭菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
白色念珠菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期1
2
3
4
5
6
7
备注：
黑曲霉菌：
贮存天数稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期3
6
9
12
15
备注：
8.验证结论
项目名称：
验证内容：
验证结论：
验证人/日期：复核人/日期：审核人/日期：负责人/日期：。