生化实验操作方法
八种常用生化实验步骤
实验一基因的PCR扩增技术一、实验目的与原理简介聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。
因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。
常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。
通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。
二、复性。
降低温度使DNA单链分子同引物结合。
温度为55℃，时间1min。
三、延深。
升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。
同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。
经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。
PCR反应包含的七种基本成分：1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg.2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。
3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。
每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。
4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。
Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。
5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。
在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。
临床生化项目操作规程
总胆红素(T-Bil)标准操作程序（SOP）【目的】保证总胆红素检测结果准确，可靠。
【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。
【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪总胆红素重氮法测定。
【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司。
【标本类型】血清、血浆【实验原理】对氨基苯磺酸＋亚硝酸钠−−→−盐酸重氮苯磺酸盐胆红素＋重氮苯磺酸盐酸盐−−−→−二甲亚砜重氮复合物（红紫色）【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1、一份R1于一份R2等比例混合。
2、每个病人600微升温浴10分钟备用。
3、取离心后标本30微升加入600微升试剂温浴10分钟，后检测。
【参考值】血清：<5.17mmol/L。
【临床意义】总胆红素的测定对于急性性肝炎，慢性肝炎，肝硬化，胆管炎，胆石症，急性胆囊炎等肝胆疾病和溶血性贫血的诊断具有重要意义。
【注意事项】1、标本为血清或肝素血浆。
标本采集后应避光保存。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)标准操作程序（SOP）【目的】保证丙氨酸氨基转移酶检测结果准确，可靠。
【该SOP变动程序】本SOP的改动，可有任一使用本SOP的工作人员提出，并经下述人员批准签字：专业主管，科室主任。
【本SOP适用范围】BT-815A半自动生化仪丙氨酸氨基转移酶测定。
【试剂来源】上海荣盛生物技术有限公司【标本类型】血清、血浆【实验原理】一步法或者两步法、速率法L-丙氨酸+α-酮戊二酸→丙酮酸+ L-谷氨酸（ALT催化）丙酮酸+NADH+H+→L-乳酸+NAD++H2O(LDH催化)【实验仪器】BT-815A半自动生化仪【操作步骤】1.取标本与试剂30/600的比例混匀。
2.上机检测。
【参考值】血清：<40umol/L。
【临床意义】血清ALT活力的检测对中毒性肝炎,病毒性肝炎,肝癌,肝硬化活动期,脂肪肝,阻塞性黄疸,胆管炎,胆囊炎,心血管疾病,心肌梗塞,心肌炎,骨骼肌疾病,内脏和肌肉炎症性坏死等病症的诊断具有重要的价值。
生化实验基本操作
生化实验基本操作目的要求：1．熟悉实验室规则及常用生化仪器2．清点洗刷实验用具。
3．掌握各种仪器的正规操作及维护实验操作1．玻璃仪器的洗涤(1) 洗涤液：①洗洁精，肥皂水，洗衣粉。
②玻璃仪器专用洗涤液：主要成份为中性稀氯氧化剂，上海日化研究所出品(2) 洗涤的要求与步骤：要求：洁净的玻璃器皿表面应不挂任何水滴。
步骤：不净的器皿：洗衣粉或肥皂水刷洗自来水冲净对使用过的仪器应养成及时清洗的习惯，特别是血液分析时用以吸取血液样本的吸管，用过后应当立即用水将所沾的血液冲去，否则放置过久，血液干燥硬结，就很不容易清除。
(3)玻璃仪器的干燥一般的玻璃仪器均可洗净后倒置架上，让其水分蒸发自然干燥，如需迅速干燥者应按仪器的不同类型按下述不同方法处理：①试管、离心管、烧杯、烧瓶等普通玻璃器皿可置烤箱中100—105℃烘烤②少量仪器如需急用也可在电炉上或酒精灯上烘烤。
烘烤时应将器皿时时转动，务使受热缓慢且均匀，并将管口(或杯口)倾斜向下，以便水蒸气冷凝成水滴，顺口流出，不致使水滴接触烘热了的器壁而使仪器爆裂。
③使用电吹风干燥一般玻璃仪器也很便利常用。
④下列玻璃仪器应避免烘烤：吸管：容易造成器壁变形而致容量不准。
比色杯：易在烘烤时发生破裂。
2．移液操作：(1)吸量管的使用①吸量管的选择：在一次完成转移的前提下，应选用容量较小的吸量管。
·对于同一次实验中同一种试剂的移取，应选用同一支吸量管②操作·用洗耳球将液体吸至超过标线·移开洗耳球，迅速用食指压紧管口·必要时将管尖端外围拭净·调液面至标线·放开食指，使液体流入容器·将最后液滴沿器壁而下或吹出③读数·吸量管保持垂直·视线与液面应水平·管中液面与刻度线应呈切线注：对于刻度由上至下的吸量管应尽量使用上端刻度管尖残液是否需吹出，(2)枪式移液器的使用①枪式移液器的结构1. 液体吸放钮2．体积选取钮3. 体积、显示4．枪头排放钮5. 枪头排放器6．枪头接嘴其内部柱塞分2段行程，第1档为吸液，第2档为放液，手感十分清楚。
实验一、生化实验基本操作
八、舍弃物的处理
舍弃物必须依照其性质作适当之处理。 舍弃物必须依照其性质作适当之处理。以免 造成实验材料之浪费，损坏水槽及下水管道， 造成实验材料之浪费，损坏水槽及下水管道， 或污染实验环境。 或污染实验环境。 1．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、损坏 ．所有固体舍弃物（例如用过的滤纸、 的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。 的软木塞及橡皮物、玻璃渣、火柴梗等）。 必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。 必须放入废物筒或篓中，切勿丢水槽中。 2．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中，再倒 ．废硫酸或洗液，应先倾入大量水中， 入水槽中，并以大量水冲走。 入水槽中，并以大量水冲走。 3．实验完成后的沉淀或混合物，若含有可提 ．实验完成后的沉淀或混合物， 取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃， 取或收回的贵重物品者，不可随意舍弃，应 放入教师指定的回收器中。 放入教师指定的回收器中。
六、试剂
1．每2~3人合用一份试剂，在一般情况下， ． 人合用一份试剂， 人合用一份试剂 在一般情况下， 使用的试剂应该固定。 使用的试剂应该固定。 2．取试剂瓶塞与量取用具（如吸管或滴管） ．取试剂瓶塞与量取用具（如吸管或滴管） 不应分开，用后应立即放回原处， 不应分开，用后应立即放回原处，量取用具 应按规定放置。瓶塞与量具一旦弄错， 应按规定放置。瓶塞与量具一旦弄错，试剂 即受损坏、污染，实验就可能失败。 即受损坏、污染，实验就可能失败。 3．标准试剂不应用潮湿之吸管与之直接接触， ．标准试剂不应用潮湿之吸管与之直接接触， 取出后不得再放入原瓶。 取出后不得再放入原瓶。
七、粉以毛刷洗涤即足以满 足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉， 足要求，洗后应将肥皂或去污粉仔细冲掉，将水倾 去后，器壁不挂水珠，视为合格。 去后，器壁不挂水珠，视为合格。铬酸洗液仅用于 毛刷不能洗净的仪器， 毛刷不能洗净的仪器，切勿滥用普通玻璃仪器之洗 涤。使用铬酸洗液时，仪器应干燥；过多的水份将 使用铬酸洗液时，仪器应干燥； 使洗液迅速失效。 使洗液迅速失效。用过之铬酸洗液须加以保存以反 复使用，直至变为绿色后方可舍弃； 复使用，直至变为绿色后方可舍弃；其舍弃法与浓 硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器， 硫酸液相同。用洗液浸洗过的玻璃仪器，应先用自 来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗， 来水冲洗，然后再用蒸馏水或去离子水清洗，清洗 宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水， 时，宜采用“少量多次”原则以节约蒸馏水，同时 清洗的效率也高。 清洗的效率也高。
微生物鉴定之生化实验大全
(一）碳水化合物代谢实验糖(醇、苷）类发酵实验（1)原理：细菌分解糖得能力与该菌就是否含有分解某种糖得酶密切相关,故分解糖得能力各不相同，细菌分解糖类后得终产物亦不一致，在含糖培养基中加入指示剂，若细菌分解糖则产酸或产酸产气,使培养基颜色改变，从而判断细菌就是否分解某种糖或其她碳水化合物。
（2)基本培养基：在培养基中加入0、5％-1％得糖类(单糖、双糖、或者多糖）、醇类（甘露醇、肌醇）苷类(水杨苷、菊糖等）、培养基可为液体、半固体、固体或微量生化管几种类型.（3)实验方法：取某一种细菌得２4h纯培养物分别接种到葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等培养基内,37℃培养2４h，观察结果并记录.（4)结果判定：如果接种进去得细菌可以发酵某种糖或醇,则可产酸,使培养基由紫色变成黄色,如果不发酵,则仍保持紫色。
如发酵得同时又产生气体,则在微量发酵管顶部积有气泡。
（5)应用:就是鉴定细菌最主要最基本得实验,特别就是对肠杆菌科细菌得鉴定尤为重要。
氧化型与发酵型（Ｏ/F）得测定（1）原理:细菌在分解葡萄糖得过程中，必需有氧得参加，称为氧化型(O),细菌在分解葡萄糖过程中可以进行无氧降解得,称为发酵型(F）。
发酵型细菌无论在有氧无氧得环境中都能分解葡萄糖。
不分解葡萄糖得细菌称为产碱型（-)。
这在区别微球菌与葡萄球菌、肠杆菌科成员中尤其有意义.（2）培养基：培养基蛋白胨2g，氯化钠5ｇ,磷酸氢二钾0、３g,葡萄糖10g,琼脂3g，1％溴麝香草酚蓝3mL，蒸馏水10００mL。
将蛋白胨、盐、琼脂与水混合,加热溶解，校正PH至7、2，然后加葡萄糖与指示剂，加热溶解,分装试管，３-4ｍL/管；115℃,高压蒸汽灭菌20m ｉn,取出冷却成琼脂柱。
（3）试验方法：挑取18—2４h得幼龄斜面培养物,穿刺接种,每种细菌接种两管，于其中一管覆盖1ｍL液体石蜡，3７℃培养２4h或更长时间。
（4）结果判定:(５)应用:O／F试验主要适用于G—肠道杆菌得鉴别。
生化实验的基本操作
生化实验的基本操作（一）搅拌和振荡1.配制溶液时，必须随时搅拌或振荡混合。
配制完了时，必须充分搅拌或振荡混合。
2.搅拌使用的玻璃搅棒，必须两头都烧圆滑。
3.搅棒的粗细长短，必须与容器的大小和所配制的溶液的多少呈适当比例关系。
不能用长而粗的搅棒去搅拌小离心管中的少量溶液。
4.搅拌时，尽量使搅棒沿着器壁运动，不搅入空气，不使溶液飞溅。
5.倾入液体时，必须沿器壁慢慢倾人以免有大量空气混入。
倾倒表面张力低的液体(如蛋白质溶液）时，更需缓慢仔细。
6.振荡溶液时，应沿着圆圈转动容器，不应上下振荡。
7.振荡混合小离心管中液体时，可将离心管握在手中，以手腕、肘或肩作轴来旋转离心管; 也可由一手持离心管上端用另一手弹动离心管；也可用一手大拇指和食指持管的上端，用其余三个手指弹动离心管。
手指持管的松紧要随着振动的幅度变化。
还可以把双手掌心相对合拢，住离心管，来回挫动。
8.在容量瓶中，混合液体时，应倒持容量瓶摇动，用食指或手心顶住瓶塞，并不时翻转容量瓶。
9.在分液漏斗中振荡液体时，应用一手在适当斜度下倒持漏斗，用食指或手心顶住瓶塞，并用另一手控制漏斗的活塞。
一边振荡，一边开动活塞，使气体可以随时由漏斗泄出。
10.研磨配制肢体溶液时，要使杵棒沿着研钵的单方向进行，不要来回研磨。
（二）沉淀的过滤和洗涤1.过滤沉淀一般使用滤纸。
2.应根据沉淀的性质选择不同的滤纸.胶状沉淀,应使用质松孔大的滤纸.一般大小颗粒的结晶形成沉淀,应使用致密孔小的滤纸。
而极细的沉淀，则应使用致密孔最小的滤纸。
滤纸越致密，过滤就越慢。
3.滤纸的大小要由沉淀量来决定，并不是由溶液的体积来决定。
沉淀量应装到滤纸高度的1／3左右。
最多不应超过1／2，通常使用直径为7-9厘米的圆形滤纸。
4.折叠滤纸应先整齐的对折，错开一点再对折，打开后形成一边一层，一边三层的圆锥体。
折叠尖端时不可过于用力，以免容易出洞。
放入漏斗中时，滤纸边缘应完全吻合。
撕去三层一边的外面两层部分的尖端，使滤纸上缘能更好的贴在漏斗的壁上，不留缝隙。
生化实验基本操作技术
生化实验基本操作技术一：玻璃仪器的洗涤及干燥：（一）意义：去除干扰物，提高实验结果的准确性。
（二）常用洗涤剂：1．洗衣粉，肥皂，洗洁精，去污粉----用于一般去污。
2．强酸，强碱，尿素------去除蛋白质，核酸。
3．铬酸洗液------见附2。
4．水（自来水，蒸馏水）------用来冲洗容器。
（三）洗涤方法：* 洗涤程序：泡→洗（→泡）→冲→漱1．新仪器的洗涤：2%的盐酸浸泡数小时→自来水冲净→洗涤剂溶液中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
2．非定量敞口仪器的洗涤（试管、烧杯等）用后立即放入洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→试管刷蘸肥皂、洗衣粉或去污粉擦洗容器内外壁→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水漱洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
注意：检查毛刷顶部是否裸露，洗刷时用力不可过猛，以免戳破玻璃仪器。
3．窄口仪器的洗涤（容量瓶、试剂瓶）使用后立即在洗涤剂溶液或清水中浸泡过夜→洗涤剂溶液倒入容器内（约1/4）→小心转动或摇动仪器→自来水冲10 遍→检查是否洗净→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
4．刻度吸管的洗涤使用后立即用大量自来水冲洗（切勿使样品干在管内，否则难以洗净）→干燥后放入铬酸洗液中浸泡过夜→取出，在特制的容器中用自来水冲洗30 分钟→蒸馏水涮洗内壁3 遍→包装、消毒→干燥备用。
（四）判断洗净的标准：洗净的玻璃仪器管壁光洁、清亮，无污渍；被水湿润后，管壁呈现均匀水膜，无挂水珠。
（五）干燥方法1、晾干：仪器倒立放在特制架子上，自然晾干。
2、烘干：尽量倒净仪器内部的水，将其倒立放在托盘上，放入烘箱烘干。
普通仪器用80-100℃，容量分析仪器用37-40℃。
3、有机溶剂干燥：体积小的容器急需干燥时，可用此法。
洗净的仪器先用少量酒精洗一次，再用少量丙酮或乙醚洗涤，吹干（不必加热）。
二：吸管和微量移液器的使用及注意事项：（一）刻度吸管：1．作用：用于准确移取一定体积的溶液。
生物化学实验的基本操作
一、玻璃仪器的使用及清洁（一）玻璃仪器的洗涤及干燥1、一般仪器：烧杯、试管、离心管等普通玻璃仪器，可直接用毛刷蘸餐洗净刷洗，然后用自来水冲洗，直至容器内不挂水珠即可。
最后用少量蒸馏水冲洗内壁2－3次，倒置晾干即可。
2、容量分析仪器：容量瓶、滴定管及吸管等容量仪器，用后用自来水多次冲洗，如能清洁（壁不挂水珠），再用蒸馏水少量冲洗2~3次晾干即可备用。
若仍不干净附有油污等，则须于干后放入铬酸洗液内浸泡数小时，然后倒净（或捞出）洗液，用自来水充分冲洗至水不显黄色后再冲几次，最后用少量蒸馏水冲洗2~3次晾干备用。
在做酶学实验时，对仪器的清洁要求更高，因如有极微量的污物（如重金属离子）即可导致整个实验失败。
因此，必要时仪器经上述方法洗涤后，还需用稀盐酸或稀硝酸洗涤，以除去铬及其它金属离子，然后再用自来水、蒸馏水冲洗。
生化实验室常用的洗液有以下几种：（1）铬酸洗液：为最常用的洗液，由重铬酸钾、粗硫酸及水配制而成，去污力强，清洗效果好。
其配制方法有多种，可根据需要进行选择，常用的配方如下表。
重铬酸钾（ｇ）100 60 100水（ｍｌ）750 300 200粗硫酸（ｍｌ）250 460 800清洁性能较弱较强（常用）最强配制方法为：先将重铬酸钾溶于水，再慢慢加入浓硫酸。
因配制过程产生大量热，容器需放入冷水中，边加硫酸边搅动混合。
由于产热量很大，使用玻璃容器有破裂的危险，所以最好用耐高温的陶瓷或耐酸的搪瓷容器。
洗液可多次反复使用，如效力变弱，可加入少量重铬酸钾及浓硫酸继续使用，但如果变为绿色，则不宜再用。
（2）10%尿素液：为蛋白质良好溶剂，帮适用于洗涤盛血的容器。
（3）草酸盐液：用于清洗过锰酸钾的痕迹。
（4）硝酸液：用1：1的硝酸水溶液，用于清洗CO2测定器及微量滴定管。
（5）乙二胺四乙酸二钠（EDTA－Nａ2）液：5~10%的EDTA－Nａ2液可用于洗涤器皿内无机盐类。
玻璃仪器的干燥方法可根据不同仪器的种类而定。
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生化实验操作方法
生化实验操作方法是进行生化实验的步骤和操作流程的总称。
生化实验通常用于研究生物体内的生物大分子结构、组成、功能以及生物反应等方面的变化。
下面我将详细介绍生化实验的操作方法。
首先，实验前要做好准备工作。
包括准备实验所需的试剂和仪器设备，并检查仪器设备的工作情况。
同时，要进行实验场地的清洁和消毒，以确保实验的严密性和安全性。
接下来，进行实验前的样品处理。
样品可以是生物体的组织、细胞或者生物体内的某种物质。
样品处理的目的是提取和纯化所需的生物大分子或物质，使其达到实验所需的浓度和纯度要求。
常用的样品处理方法有离心、超声波破碎、酶解等。
然后，进行实验的具体操作。
根据实验的目的和要求，选择相应的实验方法和技术进行操作。
常见的生化实验方法包括蛋白质分离与纯化、核酸提取与分析、酶活性分析、分子克隆、酶联免疫吸附实验等。
在实验操作过程中，要严格按照实验方法和步骤进行操作，掌握好技术细节。
操作时要注意消毒、洗手、穿戴实验服和手套等个人防护措施，确保实验过程的安全。
实验中要保持实验器皿和工作台的清洁，并避免交叉污染。
实验后，要进行实验数据的记录和分析。
实验结果一般通过测定生物大分子的浓
度、活性或者结构等指标来进行评价。
实验数据的记录可以通过手动记录、仪器记录或电脑记录等方式进行，同时要对实验数据进行统计和分析，以得到科学可靠的结论。
最后，进行实验材料和实验场地的清理工作。
彻底清洗和消毒实验器皿和设备，将废液和废弃物妥善处理。
同时对实验室进行清洁，保持环境整洁。
总结起来，生化实验操作方法包括实验准备、样品处理、实验操作、数据记录与分析以及实验清理等步骤。
准确掌握操作方法，合理选用适当的实验技术，严格遵循实验操作的规范和安全要求，才能获得可靠的实验结果，并为科研工作或医药领域的应用提供有力的支持。