生化实验整理
生化实验
奥普托欣试验1.奥普托欣（Optochin）试验原理：几乎所有肺炎链球菌对奥普托欣试验敏感，而奥普托欣试验对其他链球菌则无抑制作用。
2.培养基：血琼脂平板。
3.方法：将待检菌菌落或肉汤培养液均匀涂布于血琼脂平板上，稍干后贴上含5μg/片的Optochin纸片，35℃培养18～24h观察结果。
4.结果：抑菌环直径：>14mm为敏感，若抑菌环直径≤14mm，对此菌株应再做胆汁溶菌试验，以证实是否为肺炎链球菌。
5.应用：主要用于肺炎链球菌与其他链球菌的鉴别。
胆汁溶菌试验（1）胆汁溶菌试验原理：胆汁或胆盐可溶解肺炎链球菌，可能是由于胆汁降低细胞膜表面的张力，使细胞膜破损或使菌体裂解；或者是由于胆汁加速了肺炎链球菌本身自溶过程，促使细菌发生自溶。
（2）试剂：10%去氧胆酸钠或纯牛胆汁。
（3）方法1）平板法：取10％去氧胆酸钠溶液一接种环，滴加于被测菌的菌落上，置35℃30min后观察结果。
2）试管法：被检菌培养物2支，各0.9ml，分别加入l0％去氧胆酸钠溶液和生理盐水（对照管）0.1ml，摇匀后置35℃水浴10～30min，观察结果医学教|育网搜集整理。
（4）结果：平板法以“菌落消失”判为阳性；试管法以"加胆盐的培养物变透明，而对照管仍“混浊”判为阳性。
（5）应用：主要用于肺炎链球菌与甲型链球菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。
杆菌肽试验1.杆菌肽试验原理：A群链球菌对杆菌肽几乎全部敏感，而其他群链球菌绝大多数对其耐药。
2.培养基：血琼脂平板。
3.方法：将待检菌纯培养物（肉汤）均匀涂布于医|学教育网搜集整理血液琼脂平板上，稍于后贴上0.04U/片的杆菌肽纸片，35℃培养18～24h观察结果。
4.结果：抑菌环直径>10mm为敏感，抑菌环直径5.应用：用于A群链球菌与非A群链球菌的鉴别。
(整理)生化实验分析
果蔬成分生化分析果蔬成分的分析主要分为四个方面：维生素C含量的测定、总糖和还原糖含量的测定、蛋白质含量的测定、过氧化物酶的分析。
总体从实验目的、实验原理、实验试剂、实验结果和分析的角度进行分析一．实验目的：1、掌握微量测定维生素C的方法和技术。
2、了解果蔬中维生素C含量。
3、掌握总糖和还原糖含量的测定方法。
4、掌握蛋白质测定的方法和技术。
5、了解果蔬中蛋白质的含量。
6、了解聚丙烯酰胺凝胶的制作过程及结构特点。
二．实验原理：1.还原型维生素C可被氧化型2，6-二氯酚靛酚（下面简称染料）所氧化，成为氧化型维生素C。
氧化型染料在中性或碱性溶液中呈蓝色，在酸性溶液中呈红色。
成为还原型后为无色。
用氧化型染料来滴定还原型维生素C，当滴至全部还原型维生素C被氧化后，在稍滴一点呈微红色为终点。
滴定用去染料量与样品中还原型维生素C量成正比。
（此法虽简单迅速，但氧化型染料亦能使其他还原型物质氧化，所以有一定缺点。
）2.蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。
其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物，在620nm处有最大吸收。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求出总糖和还原糖的含量。
3. 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质-染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。
考马斯亮蓝G-250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。
考马斯亮蓝G-250在酸性游离状态下呈棕红色，最大光吸收在465nm，当它与蛋白质结合后变为蓝色，最大光吸收在595nm。
在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
蛋白质和考马斯亮蓝G-250结合，在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速，其结合物在室温下1小时内保持稳定。
普通生化实验总结
普通生化实验总结一、引言普通生化实验（General biochemistry experiments）是生物化学课程中的重要内容之一，通过实验操作和数据分析，帮助学生巩固理论知识，培养实验技能和科学思维能力。
本文将总结普通生化实验的主要内容，包括实验的目的、原理、实验操作步骤以及实验结果的分析和讨论。
二、实验目的普通生化实验的目的在于深入理解生物化学的基本原理和实验技术，培养学生的实验操作能力和数据分析能力。
三、实验一：蛋白质的定性实验1. 实验原理蛋白质是生物体内重要的有机物质，通过蛋白质的定性实验可以初步判断样品中是否含有蛋白质。
定性实验的原理是基于蛋白质的特性，在特定条件下，蛋白质与某些试剂发生反应产生显色或沉淀。
2. 实验操作步骤1.取一定量的样品溶液，分别加入Biuret试剂和Millon试剂，观察颜色变化。
2.根据颜色变化结果判断样品中是否含有蛋白质。
3. 实验结果分析根据实验结果，如果样品与Biuret试剂发生变色反应，由淡蓝变为紫色，可以初步判断样品中含有蛋白质；如果样品与Millon试剂发生变色反应，由白色变为红色，也可以确定样品中存在蛋白质。
四、实验二：酶的性质与活性测定1. 实验原理酶是生物体内的催化剂，能够加速生物化学反应的进行。
了解酶的性质和活性测定方法对于研究生物体内的代谢过程非常重要。
通过测定酶活性，可以确定酶对底物的催化效果和酶的活化或抑制情况。
2. 实验操作步骤1.准备一定浓度的酶底物和辅酶溶液。
2.将一定量的酶底物加入试管中，分别加入辅酶溶液。
分别设立对照组和实验组。
3.在一定时间内测量酶底物与辅酶溶液反应的光吸收度。
3. 实验结果分析通过测量实验组和对照组的光吸收度差异，可以计算出单位时间内的酶活性。
根据酶活性的测定结果，可以初步评估酶的催化效果和活性。
五、实验三：核酸的分离与纯化1. 实验原理核酸是生物体内的遗传物质，对于研究生物体的遗传信息和进化规律具有重要意义。
(整理)检验医学专业实验IV临床生物化学检验部分
自动生化分析仪实际K值测定实际K值：理论K值受样品和试剂的加量准确度、比色杯光径准确度，尤其是ε的影响。
ε在波长和温度等不同时有所不同，故有必要获得用户所用分析仪的实际ε，再计算K值，此为~。
一、340nm波长实际K值测定【实验原理】：通过有NAD+（NADP+）参与的反应途径，用NADH或NADPH标准液来校正仪器。
用己糖激酶（HK）方法测定葡萄糖时，葡萄糖的消耗与NADH的生成呈等摩尔关系。
葡萄糖有标准纯品，当反应达到终点时，NADH的摩尔数等于标准的葡萄糖摩尔数。
在需要校正的仪器上测其A即可求得实际摩尔吸光系数，计算出实际K值。
【注意事项】1．减少偶然误差重复测定10次，当CV>5％时，则重新测定10次。
2．减少系统误差使用实际K值计算酶活性。
3．如果实际ε值与理论ε值偏差过大，需对仪器检修和校正。
二、405nm波长实际K值测定【实验原理】：许多酶活性测定时，以人工“色素原”为底物，经酶作用后可释放出在405nm 波长具有吸收峰有色的反应产物，如对硝基苯酚(4-NP)、对硝基苯胺(4-NA)、对硝基-5-氨基苯甲酸(ANBA)。
他们在405nm波长时的理论ε分别为18 700、9 870、9 490。
可使用其相应的纯标准品在需要校正的仪器上测其A即可求得实际ε，计算出实际K值。
以ALP实验(产物为4-NP) 为例测定实际K值。
【注意事项】1．4-NP标准品纯度要求较高，必要时需纯化。
2．其他注意事项参见340nm K值校正。
三、如何校正K值在理论K值或实际K值得情况下，测定某标准品的含量，若测得的结果偏低，则需要把测得的结果调整至原标准品的含量，此时调整的数值称为校正因子，则校正K值=理论（实际）K值×校正因子=理论（实际）K值×校准值÷实测值NADH正负向反应测定酶活性一、血清乳酸脱氢酶测定LD催化反应式为：L-乳酸+ NAD+（LD）→丙酮酸+ NADH + H+在反应过程中，乳酸被氧化生成丙酮酸，同时NAD+还原为NADH。
(整理)生化实验讲义
食品生物化学实验指导书食品科学与工程学院实验一糖的颜色反应及还原性检验A. 莫氏试验①一、目的掌握莫氏（Molisch）试验鉴定糖的原理和方法。
二、原理糖经浓无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α-萘酚②生成紫红色缩合物。
利用这一性质可以鉴定糖。
三、实验器材棉花或滤纸；吸管1.0ml（×5）、2ml（×1）；试管1.5cm×15cm（×5）；容量瓶50ml （×5）；烧杯50ml（×5）；棕色瓶50ml（×5）；玻璃棒多根、电炉（配石棉网）多个。
四、实验试剂莫氏试剂：称取α-萘酚2.5g，溶于95％乙醇并稀释至50ml。
此试剂需新鲜配制，并贮于棕色试剂瓶中。
1％蔗糖溶液：称取蔗糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％葡萄糖溶液：称取葡萄糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％果糖溶液：称取果糖0.5g，溶于蒸馏水并定容至50ml。
1％淀粉溶液：将0.5g可溶性淀粉与少量冷蒸馏水混和成薄浆状物，然后缓缓倾入沸蒸馏水中，边加边搅，最后以沸蒸馏水稀释至50ml。
五、操作于5支试管中，分别加入1％葡萄糖溶液、1％蔗糖溶液、1％果糖溶液与1％淀粉溶液1 mL和少许纤维素（棉花或滤纸少量浸在1ml水中），然后各加莫氏试剂2－3滴①，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸 1.5ml（切勿振摇！！！），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫红色环出现。
注意：①一些非糖物质（如糠醛、糖醛酸等）亦呈阳性反应。
此外，样液中如含高浓度有机化合物，将因浓硫酸的焦化作用，而出现红色，故试样浓度不宜过高。
②亦可用麝香草酚或其他苯酚化合物代替α-萘酚，麝香草酚的优点是溶液比较稳定，且灵敏度与萘酚一样。
B. 塞氏试验一、目的掌握塞氏（Seliwanoff）试验鉴定酮糖的原理和方法。
二、原理酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5-羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液②。
生化实验实验三 蛋白质颜色反应及沉淀反应
实验三蛋白质颜色反应及沉淀反应一、目地、掌握鉴定蛋白质地原理及方法.、熟悉蛋白质地沉淀反应.、进一步掌握蛋白质地有关性质.二、原理蛋白质分子中地某种或某些基团与显色剂作用，可产生特定地颜色反应，不同蛋白质所含氨基酸种类不同，颜色反应亦不同.颜色反应不是蛋白质地专一反应，一些非蛋白物质亦可产生相同地颜色反应，因此不能仅根据颜色反应地结果决定被测物质是否是蛋白质.颜色反应是一些常用地蛋白质定量测定地依据.多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定性被破坏或与某些试剂结合成不溶解地盐后，即产生沉淀.三、实验器材、鸡蛋白、试管、吸管、滴管、水浴锅等四、实验试剂、卵清蛋白液：将鸡蛋白用蒸馏水稀释倍，层纱布过滤，滤液冷藏备用.、茚三酮溶液：茚三酮溶于乙醇并稀释至.、氢氧化钠溶液：氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至.、浓硝酸：比重.、硫酸铜溶液：硫酸铜溶于蒸馏水，稀释至.、饱和硫酸铵溶液：蒸馏水加硫酸铵至饱和.、乙醇.、结晶氯化钠.、醋酸铅：醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至.、饱和苦味酸溶液.、醋酸溶液：冰醋酸用蒸馏水稀释至.五、操作、颜色反应：、双缩脲反应：蛋白质分子中含有肽键，与两分子尿素经过加热形成地双缩脲地结构相似，能与硫酸铜结合成红紫色地络合物.取一支试管，加蛋白质溶液滴，再加溶液滴及溶液滴，混匀，观察是否出现紫玫瑰色.、黄色反应：蛋白质分子中含有苯环结构地氨基酸.遇硝酸可硝化成黄色物质，此物质在碱性环境中变为橘黄色地硝苯衍生物.于一试管中加蛋白质溶液滴及浓硝酸滴，加热，冷却后再加溶液滴，观察颜色变化.、茚三酮反应：蛋白质与茚三酮共热，则产生蓝紫色地还原茚三酮、茚三酮和氨地缩合物.此反应为一切蛋白质及α氨基酸所共有.含有氨基地其他物质亦呈此反应.取蛋白质溶液置于试管中，加滴茚三酮试剂，加热至沸，即有蓝紫色出现.、沉淀反应：、蛋白质盐析作用：向蛋白质溶液中加入中性盐至一定浓度，蛋白质即沉淀析出，这种作用称为盐析.取蛋白质溶液，加入等量饱和硫酸铵溶液（此时硫酸铵溶液地浓度为饱和），微微摇动试管，使溶液混合静置数分钟，球蛋白析出（如无沉淀可再加少许饱和硫酸铵）.、乙醇沉淀蛋白质：乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体质点地水化层而使其沉淀析出.取蛋白质溶液，加晶体少许（加速沉淀并使沉淀完全），待溶解后再加入乙醇混匀.观察有无沉淀析出.、重金属盐沉淀蛋白质：蛋白质与中金属离子结合成不溶性盐类而沉淀.取试管支各加蛋白质溶液，一管内滴加醋酸铅溶液，另一管内滴加溶液至有沉淀生成.、生物碱试剂沉淀蛋白质：植物体内具有显著生理作用地含氮碱性化合物称为生物碱（或植物碱）.能沉淀生物碱或与其产生颜色反应地物质称为生物碱试剂，如鞣酸、苦味酸、磷钨酸等.生物碱试剂能和蛋白质结合生成沉淀，可能因蛋白质和生物碱含有相似地含氮基团之故.于支试管中加蛋白质溶液及醋酸溶液滴，再加饱和苦味酸溶液数滴，观察结果.六、实验结果记录、颜色反应结果、沉淀反应结果七、思考题、简述茚三酮与蛋白质进行颜色反应地原理.、维持蛋白质胶体溶液稳定性地因素有哪些？乙醇、重金属盐及生物碱试剂破坏蛋白质胶体溶液稳定性地机理是什么？。
生化实验报告
生化实验报告实验目的，通过对不同生物体进行生化实验，探索其生物学特性和生化反应规律。
实验材料，小鼠、果蝇、大豆、细菌培养基、生化试剂等。
实验方法：1. 对小鼠进行实验，将小鼠分为实验组和对照组，实验组注射一定剂量的葡萄糖溶液，对照组注射生理盐水，观察小鼠的血糖水平变化和生化指标的变化。
2. 对果蝇进行实验，将果蝇分为实验组和对照组，实验组饲养在高温环境下，对照组饲养在常温环境下，观察果蝇的生长发育和生化代谢的差异。
3. 对大豆进行实验，将大豆种子浸泡在不同浓度的盐水中，观察大豆的生长情况和生化成分的变化。
4. 对细菌进行实验，将细菌接种在不同营养基上，观察其生长速度和代谢产物的差异。
实验结果：1. 小鼠实验结果显示，实验组小鼠的血糖水平显著升高，血清中的胰岛素水平下降，对照组小鼠的血糖水平无显著变化。
说明葡萄糖溶液注射导致小鼠胰岛素分泌不足，血糖升高。
2. 果蝇实验结果显示，高温环境下果蝇的寿命显著缩短，生化代谢速率加快，对照组果蝇的寿命正常，生化代谢速率稳定。
说明高温环境对果蝇的生化代谢产生负面影响。
3. 大豆实验结果显示，在高盐浓度环境下，大豆的生长受到抑制，生化成分中的蛋白质含量下降，对照组大豆的生长和生化成分无显著变化。
说明高盐浓度对大豆的生化代谢产生不利影响。
4. 细菌实验结果显示，不同营养基对细菌的生长和代谢产物有显著影响，说明细菌的生化代谢对营养基的需求存在差异。
实验结论，通过对不同生物体进行生化实验，我们发现生物体的生化代谢受到环境因素和营养因子的影响，不同生物体对外界环境和营养条件的适应能力不同，生化反应规律也存在差异。
这些实验结果为我们深入了解生物体的生化特性和生物学规律提供了重要参考。
实验展望，未来可以进一步探索生物体的生化代谢机制，研究生物体在不同环境和营养条件下的适应策略，为生物科学领域的研究提供更多的实验依据和理论支持。
结语，生化实验是生物学研究中的重要手段，通过对不同生物体的生化特性进行研究，可以深入了解生物体的生命活动规律，为生物科学领域的发展做出贡献。
生化系统综合实验报告
生化系统综合实验报告1. 引言生化系统是一个复杂的系统，由多个生化反应和生物分子组成。
了解和研究生化系统对于理解生物体的功能和疾病发生机制具有重要意义。
本实验旨在通过实验操作和数据分析，加深对生化系统的认识和理解。
2. 实验目的1. 掌握生化实验操作技能；2. 了解常用的生化实验仪器和试剂的使用方法；3. 学习采集和处理实验数据；4. 加深对生化反应和生物分子的理解。
3. 实验材料与方法3.1 材料- 实验仪器：分光光度计、离心机、PCR仪、电泳仪；- 实验试剂：DNA提取试剂盒、PCR试剂盒、琼脂糖、DNA分子量标记物。
3.2 方法1. DNA提取：从植物叶片样品中提取DNA，按照DNA提取试剂盒的说明书进行操作；2. PCR扩增：通过PCR扩增特定基因片段，使用PCR试剂盒和PCR仪进行反应，优化PCR反应条件，包括温度和时间；3. 准备琼脂糖凝胶：按照说明书将琼脂糖溶解于TAE缓冲液中，并将其倒入电泳仪模型中固化；4. 准备DNA样品：将PCR扩增产物与DNA分子量标记物混合，加载到琼脂糖凝胶槽中；5. DNA电泳：将琼脂糖凝胶放入电泳仪中，设定合适的电流和时间进行电泳，观察DNA迁移结果。
4. 实验结果与讨论在本实验中，我们成功提取了植物叶片样品的DNA，并通过PCR扩增得到了特定基因片段。
下图展示了PCR电泳结果：通过结果观察，我们发现所有样品都成功扩增出了目标基因片段，并且具有相似的大小。
这说明我们的PCR反应条件是合适的，并且得到了高质量的PCR产物。
通过DNA电泳结果，我们可以看到样品之间的DNA迁移距离存在差异。
这是因为DNA分子的大小不同，在电场力下会以不同的速度迁移。
另外，我们还看到了DNA分子量标记物，在琼脂糖凝胶上形成了明显的条带。
通过与标准品的比较，我们可以估计出PCR产物的大小。
5. 结论通过本实验，我们成功地进行了DNA提取、PCR扩增和DNA电泳等生化实验操作。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
1. 氨基酸的分离鉴定——纸层析法一、实验目的✓ 了解层析技术的一般原理✓ 掌握纸层析的方法和原理，学会分析未知样品的氨基酸成分二、实验原理➢ 层析法亦称色谱法，是利用混合物中各组分的物理、化学及生物学特性的差异，使各组分以不同程度分布在两个相中，即固定相和流动相，当流动相流过加有样品的固定相时，各组分所受固定相的阻滞作用和受流动相的推动作用的影响各不相同，从而使各组分以不同速度移动而达到分离的目的➢ 固定相：是由层析基质组成的，可以是固体物质（如吸附剂、凝胶、离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在纤维素或硅胶上的溶液），这些基质能与待分离的化合物进行可逆的吸附、溶解、交换等作用➢ 流动相：是在层析过程中，推动固定相上待分离的物质向一定方向移动的液体、气体或超临界体。
柱层析中一般称为洗脱液，薄层层析时称为展层剂➢ 分配系数：是指在一定的条件下，某一组分在固定相和流动相中含量（浓度）的比例，常用K 来表示，它是层析中分离纯化物质的重要依据➢ 迁移率：是指在一定条件下，某一组分在相同的时间内，在固定相移动的距离与流动相本身移动的距离之比值，常用R f 来表示分配系数或迁移率的差异程度是决定几种物质采用层析方法能否分离的先决条件，差异越大，分离效果越理想➢ 层析根据不同的标准可以分为多种类型：如按固定相基质的形式不同可分为纸层析、薄层层析和柱层析；按流动相的形式不同可分为液相层析、气相层析和超临界层析；按分离的原理不同可分为吸附层析、分配层析、凝胶过滤层析、离子交换层析等➢ 纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的羟基具有亲水性，吸附一层水作为固定相，有机溶剂为流动相。
有机相流经固定相支持物时，与固定相之间连续抽提，使物质在两相间不断分配而得到分离。
溶质在滤纸上的移动速度用R f 值表示：在一定条件下，某种物质的R f 值是常数。
R f 值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关❖ 氨基酸显色反应——茚三酮反应原理：所有的α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质，除了脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质该反应分为两步：第一步是氨基酸被氧化形成CO 2、NH 3和醛，水合茚三酮被还原成还原型茚三酮；第二步是所形成的还原型茚三酮结合另一分子水合茚三酮和氨缩合生成有色物质f R三、实验器材大试管及塞子，大头针，三角薄层喷瓶，毛细管，吹风机，层析滤纸（新华一号），分液漏斗四、实验材料与试剂扩展剂：4份水饱和的正丁醇和1份醋酸的混合物氨基酸混合液：0.5%的赖氨酸、脯氨酸、亮氨酸的混合液（各组份浓度均为0.5%）显色剂：0.1%水合茚三铜正丁醇溶液五、实验操作➢取层析滤纸（20×2cm）一条，在纸的一端距边缘3cm处用铅笔划一直线，取其中点作为原点。
在大试管中加入适当的扩展剂，使扩展剂的液面处于悬挂在橡皮塞上的层析滤纸的原点到底端的中间➢点样：用毛细管将氨基酸混合液点在原点上，用吹风机吹干，干后再点一次。
每次在纸上扩散的直径最大不超过3mm➢扩展：将点好样的层析滤纸悬挂于橡皮塞的钩子上，点样端的底边浸入扩展剂约1.5cm。
保持大试管的垂直，待溶剂上升15～20cm时取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界限，用吹风机热风吹干➢显色：用三角薄层喷瓶将0.1％茚三酮正丁醇溶液均匀地喷在风干的层析滤纸条上，用热风吹干即可显出各层析斑点➢计算各种氨基酸的R f值六、注意事项➢为了防止滤纸被手上的汗液污染，应尽量在操作时带手套➢重复点样时可用吹风机的冷风吹干样品，喷了茚三酮后的显色则要用热风吹干滤纸2.血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳一、实验目的✓了解电泳技术的一般原理✓学习醋酸纤维薄膜电泳的操作二、实验原理➢电泳是指带电质点在电场中向本身所带电荷相反的电极移动的现象。
在一定pH条件下，不同的质点由于具有不同的等电点而带不同性质的电荷，因而在一定的电场中它们的移动方向和移动速度也不同，即它们的电泳迁移率不同，因此可使它们分离➢影响电泳迁移率的外界因素：电场强度、溶液的pH值、溶液的离子强度和电渗现象➢影响电泳迁移率的内在因素：质点所带净电荷的量、质点的大小和形状➢按支持介质不同可将电泳分为纸电泳、醋酸纤维薄膜电泳、琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳➢另外，还可以按分离原理不同、支持介质形状不同、用途不同以及所用电压不同等将电泳分类➢电泳的装置主要包括两个部分：电源和电泳槽。
电源提供直流电，在电泳槽中产生电场，驱动带电分子的迁移；电泳槽可以分为水平式和垂直式两类➢采用醋酸纤维薄膜作为支持物的电泳方法称为醋酸纤维素薄膜电泳。
醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜则成为醋酸纤维素薄膜。
该膜具有均一的泡沫状的结构，厚度约为120μm，有很强的通透性，对分子移动阻力很小➢醋酸纤维素薄膜电泳是近年来推广的一种新技术，它具有微量、快速、简便、分辨力高，对样品无拖尾和吸附现象等优点➢本实验以醋酸纤维素为电泳支持物，分离各种血清蛋白。
血清中含有清蛋白、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白和各种脂蛋白等。
各种蛋白质由于氨基酸组成、分子量、等电点及形状不同，在电场中的迁移速度不同。
以醋酸纤维素薄膜为支持物，正常人血清在pH8.6的缓冲体系中电泳，染色后可显示5条区带。
其中清蛋白的泳动速度最快，其余依次为α1-、α2-、β-及γ-球蛋白三、实验器材醋酸纤维薄膜（2×8 cm），常压电泳仪，点样器（盖玻片），培养皿，粗滤，载玻片，镊子四、实验材料与试剂兔血清（实验室制备），巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07），染色液（氨基黑10B），漂洗液五、实验操作➢浸泡：将2×8 cm醋酸纤维薄膜迎着光辨别光泽面和无光泽面。
在无光泽面距短边一端1.5 cm处用铅笔轻轻画一条点样线，将之置于盛有缓冲液的平皿中，浸泡30 min方可用于点样➢点样：用镊子取出浸透的薄膜，夹在两层粗滤纸内吸干多余的缓冲液，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。
在另一载玻片上滴一滴血清，点样器（用盖玻片的一边）在血清上蘸一下（可来回移动一次），再将点样器轻印在加样线上，使血清渗透到薄膜内，形成均匀的直线➢电泳槽的准备：根据电泳槽膜支架的宽度，裁剪尺寸合适的滤纸条。
在两个电极槽中，各倒入等体积的电泳缓冲液，在电泳槽的两个膜支架上，各放两层滤纸条，使滤纸一端的长边与支架前沿对齐，另一端浸入电泳缓冲液中。
当滤纸全部润湿后，用玻璃棒轻轻挤压在膜支架上的滤纸以驱赶气泡，使滤纸的一端能紧贴在膜支架上，即为滤纸桥➢电泳：将点样端的薄膜平贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上（点样面朝下），另一端平贴在阳极端支架上。
盖上电泳槽盖，使薄膜平衡10 min。
通电，调节电压至160 V，电流强度为0.4～0.6 mA/cm膜宽度，电泳时间约25 min ➢染色：电泳完毕后将薄膜取下, 放在含氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5 min➢漂洗：将薄膜从染色液中取出后移置漂洗液中漂洗数次，直至背景蓝色脱尽，条带清晰为止，可得到色带清晰的电泳图谱六、注意事项➢市售醋酸纤维素薄膜均为干膜片，薄膜的浸润与选膜是电泳成败的关键之一。
若飘浮于液面的薄膜在15～30 s内迅速润湿，整条薄膜色泽深浅一致，则此膜均匀可用于电泳➢醋酸纤维素薄膜电泳常选用pH8.6巴比妥－巴比妥钠缓冲液，其浓度为0.05～0.09 mol/L。
选择何种浓度与样品和薄膜的厚薄有关。
缓冲液浓度过低，则区带泳动速度快区带扩散变宽；缓冲液浓度过高，则区带泳动速度慢，区带分布过于集中，不易分辨➢点样时，应将薄膜表面多余的缓冲液用滤纸吸去，以免引起样品扩散。
但不宜太干，否则样品不易进入膜内，造成点样起始点参差不起，影响分离效果➢点样时，动作要轻、稳，用力不能太大，以免损坏膜片或印出凹陷影响电泳区带分离效果➢电泳时应选择合适的电流强度，一般电流强度为0.4～0.6mA/cm膜宽度。
电流强度高，则热效应高；电流过低，则样品泳动速度慢且易扩散➢操作过程为防止指纹污染，应戴手套七、实验思考➢用醋酸纤维薄膜电泳做电泳支持物有什么优点？➢电泳图谱清晰的关键是什么？如何正确操作？3.蛋白质的透析一、实验目的✓了解透析技术的一般原理。
✓通过蛋白质透析实验掌握透析操作。
二、实验原理➢透析是膜技术的一种，利用透析膜可以选择性的透过一定大小分子，从而将待分离纯化的物质和杂质离子分离开。
➢常见的透析有：蛋白质的透析和糖类的透析。
➢透析是利用半透膜进行的一种选择性扩散操作，通常是将半透膜制成袋状，将生物大分子样品溶液置入袋内，将此透析袋浸入水或缓冲液中，样品溶液中的大分子量的生物大分子被截留在袋内，而盐和小分子物质不断扩散透析到袋外，直到袋内外两边的浓度达到平衡为止。
➢保留在透析袋内未透析出的样品溶液称为“保留液”，袋（膜）外的溶液称为“渗出液”或“透析液”。
➢把需要透析的样品盛于透析袋内，袋内留有挤去空气的空余部分，以防由于溶剂渗入造成样品体积增加而引起透析袋胀破。
➢为了获得较快的透析速度，常常采取一些措施保持膜两侧浓度差具有最大差，如经常更换透析外液，连续搅动外液。
➢透析外液尽量不用纯水，常使用一定pH的低盐缓冲液，这样可以避免袋内样品pH的变化和过分地稀释。
➢透析袋出厂时都用10％的甘油处理过，并含有极微量的硫化物、重金属和一些具有紫外吸收的杂质，它们对蛋白质和其它生物活性物质有害，用前必须除去。
➢透析袋的处理：一般是将透析袋剪成10～20cm的小段，在2％（W/V）NaHCO3和1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，然后放在1mmol/L的EDTA（pH8.0）中煮沸10min，用蒸馏水彻底洗尽透析袋，冷却后，存放于4℃，从此时起取用透析袋，必须戴手套。
➢检查透析效果的方法：用1％BaCl2检查(NH4)2SO4，用1％AgNO3检查NaCl、KCl等。
三、仪器、材料和试剂●磁力搅拌器（配搅拌子）●试管及试管架●透析袋（截留分子量10000）●蛋白质氯化钠溶液●3个除去卵黄的鸡蛋清与700mL水及300mL饱和氯化钠溶液混合后，用数层干纱布过滤。
●10%硝酸溶液●1%硝酸银溶液●1%硫酸铜溶液●10%氢氧化钠溶液四、操作步骤1.取10～15mL蛋白质氯化钠溶液，装入处理好的透析袋中，夹紧两端，浸入蒸馏水烧杯中进行1～2h的透析。
2.用硝酸银检测烧杯中透析液是否有氯离子存在？✓1～2mL透析液+数滴10%硝酸溶液至酸性+ 1%硝酸银溶液3.用双缩脲法检测是否有蛋白质存在？✓蛋白质溶液在碱性环境下与铜离子反应生成紫红色化合物4.透析完全后，检测透析袋内是否存在蛋白质和氯离子？✓注意：透析完全时，透析袋内会出现球蛋白沉淀，因为球蛋白不溶于纯水。