不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选方法比较
中草药中乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选
中草药中乙酰胆碱酯酶抑制活性的筛选张东博;任晋【摘要】阿尔茨海默病是一种慢性中枢神经系统退行性疾病,是老年痴呆的主要类型.对于该病的治疗,一个有希望的策略是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用.为了寻找潜在的、高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,5种中草药的生物碱提取物的乙酰胆碱酯酶抑制活性通过经典的Ellman比色法被评价.结果表明,元胡与黄柏的生物碱提取物显示了显著的乙酰胆碱酯酶抑制活性,其余3种中草药的生物碱提取物显示了非常弱的乙酰胆碱酯酶抑制活性.结果暗示,从中草药的生物碱提取物中筛选乙酰胆碱酯酶抑制剂是可行的,能够为开发治疗阿尔茨海默病的新药提供有用的先导化合物.【期刊名称】《甘肃科技》【年(卷),期】2010(026)019【总页数】2页(P172-173)【关键词】阿尔茨海默病;筛选;乙酰胆碱酯酶抑制活性;Ellman比色法【作者】张东博;任晋【作者单位】兰州理工大学,甘肃,兰州,730050;兰州理工大学,甘肃,兰州,730050【正文语种】中文【中图分类】R971阿尔茨海默病 (AD)是一种发生于老年和老年前期以进行性神经退化为特征的大脑退行性疾病。
伴随着全球老龄化人口的增加,AD的发病率呈逐年上升的趋势[1]。
对于该病的治疗,目前最有效的手段是乙酰胆碱酯酶抑制剂的使用[2,3]。
现有的几个高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,像石杉碱甲[4]、加蓝他敏[5]均源自于药用植物。
这暗示,对于乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选,中草药是极具价值的资源之一。
为了寻找潜在的、高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂,本文通过改进的 Ellman比色法[6,7]对 5种中草药的生物碱提取物进行了乙酰胆碱酯酶抑制活性的评价。
1.1 供试药材元胡 (Corydalis humosa),黄柏 (Bark of Phellodendron amurense),鸡骨草(Abrus cantoniensis),龙葵草 (Solanum nigrum),草乌 (Aconitum vilmorinianum),以上药材均购买自兰州黄河药材市场安宁医药公司复兴厚药庄,由兰州理工大学生命科学与工程学院杨林副教授鉴定。
【挑战杯】农药残留快速检测中酶制剂的筛选12
农药残留快速检测中乙酰胆碱酯酶来源的筛选付劲，罗欣明，陈敏仪，张晓君，肖治理*（华南农业大学食品学院食品质量与安全实验室，广东广州510642）摘要：从小麦粉、鲫鱼肌肉、蚕蛹头部和蚕蛹整体中提取和纯化乙酰胆碱酯酶，并对4种酶液的酶活性及其对甲胺磷的敏感性进行比较，结果表明：来源于鲫鱼肌肉的乙酰胆碱酯酶粗酶液的比活力最高，为0.4396U/mg pro；来源于蚕蛹头部的乙酰胆碱酯酶对甲胺磷的敏感性最高，被抑制率为17.424％。
综上所述，来自蚕蛹头部的乙酰胆碱酯酶可以作为常见有机磷农药快速检测的最佳酶制剂。
关键词：乙酰胆碱酯酶比活力甲胺磷抑制率1.前言我国是农业大国，同时也是世界上最大的农药生产国，由农药残留引起的食品安全问题也越来越受到人们的关注。
建立农药残留的监测体系已成为各方的共识，因此对农药残留的监测手段和检测水平也提出了更高的要求，并促进了农药残留快速检测方法朝着更加快速、方便、灵敏可靠的方向发展。
目前农药残留分析的主要方法是气相色谱法（GC）、高效液相色谱法（HPLC）等，这些方法虽然分析精度高，定量准确，但其样品的前处理复杂、检测耗时长、成本高、需要技术熟练的操作人员等缺点[1]。
酶抑制法是利用OPs的毒理特性建立的一种快速检测方法。
酶抑制法的基本原理是有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱酯酶有强烈的抑制作用，将水果和蔬1菜等农产品的农药残留提取液添加到酶的反应体系中，通过显色反应能够快速测定农药的残留情况。
[3]在一定条件下,有机磷农药对某些酯酶催化水解的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关[2]。
酶抑制率法检测农药残留具有快速、简便、灵敏及成本低等优点，适用于现场快速检测[3]。
有机磷和氨基甲酸酯类农药能对胆碱酯酶(cholinesterase,ChE)起到抑制作用：在一定条件下，ChE的活性变化与有机磷农药的浓度存在良好的相关性，通过测定农产品的农药残留提取液对ChE酶活的抑制可判定农药残留的情况[3]。
中药中乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂的亲和筛选及其与酶的相互作用研究
中药中乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂的亲和筛选及其与酶的相互作用研究中药中乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂的亲和筛选及其与酶的相互作用研究摘要：乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶是参与生物体代谢的关键酶，与多种疾病的发生发展密切相关。
本研究采用了亲和筛选的方法，研究了中药中乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选，并进一步探讨了其与这些酶的相互作用机制。
1. 引言乙酰胆碱酯酶是一种重要的酶类，能够降解神经递质乙酰胆碱，维持突触前后的正常传递。
α-葡萄糖苷酶则是一种参与多种氧化酶反应和碳水化合物代谢的酶。
这些酶的异常活性与多种疾病的发生和进展密切相关。
传统中药中存在着大量能够干预这些酶活性的化合物，因此，研究中药中乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶抑制剂具有重要意义。
2. 方法和材料本研究从中药中提取了一系列的化合物，并采用亲和筛选的方法，通过对这些化合物与乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶的相互作用进行筛选和评价。
亲和筛选的结果通过分子对接和动力学模拟进行验证。
3. 结果通过亲和筛选，我们筛选出了8个中药中具有明显抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶活性的化合物。
其中，化合物A和化合物B在不同酶的抑制活性中表现出最佳的效果。
分子对接结果显示，化合物A和化合物B与酶活性中心形成稳定的结合。
动力学模拟进一步揭示了这些化合物与酶的结合机制，并证实了它们对乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用。
4. 讨论通过亲和筛选的方法，我们成功地筛选出了具有抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶活性的化合物。
这些化合物的发现为中药开发和治疗相关疾病提供了候选物。
进一步的研究可以深入探讨这些化合物的药理机制以及应用的可行性。
5. 结论本研究通过亲和筛选的方法，筛选了多个中药中具有抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶活性的化合物，并揭示了它们与酶的相互作用机制。
这些研究结果有望为开发新的中药治疗方法和药物提供理论基础。
通过亲和筛选和分子对接及动力学模拟的方法，本研究成功筛选出了多个中药中具有抑制乙酰胆碱酯酶和α-葡萄糖苷酶活性的化合物。
高校生物化学专业酶抑制剂筛选实验方案
高校生物化学专业酶抑制剂筛选实验方案为了研究酶抑制剂在生物化学领域的应用，本实验旨在筛选具有抑制特定酶活性的化合物，以便深入了解其生物活性和可能的药理效应。
以下是本实验的详细方案：实验材料：1. 目标酶：选择具有明确酶活性的酶作为目标，如乙酰胆碱酯酶（AChE）或蛋白酪氨酸激酶（PTK）等。
2. 酶底物：适合目标酶反应的底物，如乙酰胆碱对于AChE活性的检测。
3. 酶抑制剂样本：准备一系列有机化合物作为潜在的酶抑制剂，如天然产物或化学合成物。
4. 阳性对照组：包含已知具有抑制目标酶活性的化合物作为阳性对照，用于验证实验方法和设定阈值。
5. 阴性对照组：包含不具有抑制目标酶活性的化合物或溶剂，用于验证实验方法和排除假阳性结果。
6. 试剂：如缓冲液、底物浓度递增液、酶抑制剂稀释液等。
实验步骤：1. 预处理：根据实验需要，将目标酶、底物、酶抑制剂样本以及阳性、阴性对照组等准备好。
2. 负对照组实验：a. 在微量试管中加入适量缓冲液作为空白对照组，并记录酶活性测定结果。
b. 加入适量目标酶，使其达到最佳反应条件，并记录酶活性测定结果。
3. 阳性对照组实验：a. 在微量试管中加入适量缓冲液、阳性对照组样本和目标酶，使其达到最佳反应条件。
b. 加入适量底物，启动酶反应，并根据实验方法测定酶活性，作为阳性对照组结果。
4. 酶抑制剂筛选：a. 在微量试管中加入适量缓冲液、酶抑制剂样本和目标酶，使其达到最佳反应条件。
b. 加入适量底物，启动酶反应，并根据实验方法测定酶活性。
c. 比较各个酶抑制剂样本组的酶活性与负对照组的差异，确定是否具有抑制目标酶活性的效果。
5. 数据分析：a. 将实验结果转化为定量数据，如化合物浓度与酶活性的相关性。
b. 统计和分析每个酶抑制剂样本与目标酶的抑制作用，确定有效的化合物。
实验注意事项：1. 严格遵循实验操作规程，使用个人防护装备，如实验手套和防护眼镜等。
2. 每个实验步骤都要准确记录实验条件、操作过程和结果，以备后续分析。
不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选方法比较
不同酶源乙酰胆碱酯酶的抑制剂筛选方法比较刘佳莉;苑玉和;陈乃宏【摘要】目的:建立一种可靠、快速、便捷、经济的乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)抑制剂的筛选方法,为新药发现阶段AChE 抑制剂的筛选提供经济可靠的微量筛选方法,然后对植物提取物样品进行筛选.方法:分别采用电鳗AChE、人源红细胞AChE、大鼠海马区、纹状体匀浆液中的AChE 为酶源.以96 孔板为载体,利用优化的Ellman 方法,在生理pH 值和温度的条件下,以他克林和石杉碱甲作为阳性对照,检测对不同酶源AChE 的抑制作用,确定最佳酶反应条件(最佳底物浓度、反应时间、显色剂浓度),并对植物提取物样品的AChE抑制作用进行检测.结果:采用上述四种酶源的AChE 进行AChE 抑制剂微量筛选方法操作简便快速、可靠经济.其中应用电鳗AChE 进行筛选显示灵敏度较高,他克林和石杉碱甲对电鳗AChE 的抑制作用相当,而对人源红细胞AChE、大鼠海马区、纹状体匀浆酶源的抑制作用,石杉碱甲明显优于他克林,所筛选植物提取物对AChE均没有抑制作用.结论:本实验中所建立的筛选方法操作简便、快速、可靠经济,可用于纯化合物的筛选.【期刊名称】《神经药理学报》【年(卷),期】2011(001)003【总页数】4页(P27-30)【关键词】乙酰胆碱酯酶;石杉碱甲;他克林;阿尔茨海默病【作者】刘佳莉;苑玉和;陈乃宏【作者单位】天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国;医学科学院北京协和医学院药物研究所,北京,100050,中国;天津中医药大学,天津,300193,中国;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国;医学科学院北京协和医学院药物研究所,北京,100050,中国;天然药物活性物质与功能国家重点实验室,中国;医学科学院北京协和医学院药物研究所,北京,100050,中国【正文语种】中文【中图分类】R965.1随着世界人口不断趋于老龄化，阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）、帕金森病（Parkinson’s Disease，PD）等神经退行性疾病的发病率亦逐年升高，研究表明它们与胆碱能神经系统减退有关［1］。
天然产物中酶抑制剂的快速筛选方法研究进展
天然产物中酶抑制剂的快速筛选方法研究进展近年来，随着生物技术的不断发展，人们对于天然产物中的酶抑制剂的研究日益深入。
酶抑制剂是一类能够抑制酶活性的化合物，对于研究和开发新药物具有重要意义。
然而，由于天然产物复杂多样的特点，如何快速筛选出具有酶抑制活性的潜在候选化合物一直是一个挑战。
本文将对天然产物中酶抑制剂的快速筛选方法研究进展进行探讨。
一、酶抑制剂的筛选方法在天然产物中筛选出具有酶抑制活性的化合物需要经过一系列的实验步骤。
目前，常用的筛选方法包括分离、纯化、鉴定和评价。
1. 分离和纯化：首先，需要从天然产物中分离出具有潜在酶抑制活性的化合物。
这可以通过常规的分离技术，如层析和萃取等来实现。
分离后，需要对所得化合物进行纯化，以获得高纯度的样品。
2. 鉴定：分离和纯化后的化合物需要经过结构鉴定，以确定其化学结构和组成。
这可以通过波谱学、色谱质谱等技术进行。
3. 评价：最后，需要对已知化合物进行酶抑制活性的评价。
目前常用的方法有体外酶活性测定、酶动力学研究等。
二、快速筛选方法的研究进展为了提高天然产物中酶抑制剂的筛选效率，科研人员不断探索和研究各种快速筛选方法。
以下是几种经典的研究进展：1. 高通量筛选技术：高通量筛选技术是一种能够在短时间内对大量样品进行酶抑制活性测试的方法。
其核心是建立自动化实验平台和高效的样品处理系统，以快速筛选出具有活性的化合物。
2. 转基因酵母筛选系统：转基因酵母筛选系统是一种利用酵母细胞作为基础的快速筛选方法。
通过在酵母细胞中表达目标酶蛋白，然后加入天然产物样品，观察酵母细胞生长或荧光表达等指标变化，以筛选出具有酶抑制活性的化合物。
3. 胶体金颗粒法：胶体金颗粒法是一种通过胶体金纳米颗粒的变色反应快速筛选出具有酶抑制活性的化合物的方法。
其原理是当酶抑制剂存在时，酶活性会发生变化，导致胶体金颗粒的颜色发生可见变化。
三、进一步发展与应用酶抑制剂在新药物研发、疾病治疗等领域具有广阔的应用前景。
乙酰胆碱酯酶抑制
好、试剂消耗少、准确度高，尤其适用于如中药
粗提取液等混合化合物样品中乙酰胆碱酯酶抑制 剂的筛选和临床快速诊断与乙酰胆碱酯酶相关的 疾病。
4、核磁共振法
它是一种利用核磁共振筛选乙酰胆碱酯酶抑
制剂的方法，其特征在于，它通过测定作为底物的
试样化合物的溶剂中，加入乙酰胆碱酯酶，是乙酰
能力丧失。胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键性的酶， 在胆碱能突触间，该酶降解乙酰胆碱，终止神经递质对突 触后膜的兴奋作用，保证神经信号在生物体内的正常传递。 胆碱酯酶依其催化底物的特异性分为乙酰胆碱酯酶和丁酰
胆碱酯酶。胆碱酯酶会催化乙酰胆碱的裂解反应，导致乙
酰胆碱的缺失、神经信号传递失败，目前对老年痴呆的药 物治疗主要是通过抑制 AChE 来提高患者体内的乙酰胆碱 水平。医学治疗上多采用乙酰胆碱酯酶抑制剂抑制 AChE 活性，延缓 ACh 水解的速度，提高突触间隙 ACh 的水平， 从而发挥对 AD 的治疗作用。
乙酰胆碱酯酶抑制剂
一、阿尔茨海默病 二、植物中天然乙酰胆碱酯酶抑制剂筛选进展
三、乙酰胆碱酯酶抑制剂的检测方法
1、TLC生物自显影法
2、Ellman法
3、电泳介导的微量分析法 4、核磁共振法 5、分子筛选法 6、其他
一、阿尔茨海默病
阿尔茨海默病(Alzheimer disease，AD)即 老年性痴呆症，是以进行性痴呆为特征的大脑退 行性变性疾病，是最常见的与年龄有关的神经衰 退症，严重影响患者的认知功能、记忆功能、视 空间功能、社会生活能力、个人生活能力和情感 人格等。随着世界老年人口的急速增长，AD发病 人数也逐年增多，目前，全世界约有一千七百到 二千五百万的人患有此病。在65岁人群中AD发病 率为10％，75～84岁人群AD发病率为19％，而85 岁人群中AD发病率比65～70岁人群的发病率高出 14倍。我国的AD患者已超过500万。AD已成为继心 脑血管疾病和恶性肿瘤之后，威胁人类健康的 “第三大杀手”。
不同酶原及样品前处理方法对测定农药残毒的影响
不同酶原及样品前处理方法对测定农药残毒的影响余向阳;储瑞武;田子华;刘贤进【期刊名称】《江苏农业学报》【年(卷),期】2005(021)003【摘要】测定了中国常用的21种农药对意大利蜜蜂头部和云南小白鼠肝脏两种不同生物来源的乙酰胆碱酯酶的抑制作用,并以蜜蜂头部胆碱酯酶为酶原,探讨酶抑制法农药残留快速测定的样品前处理方法.结果表明:农药对不同胆碱酯酶的抑制活性有很大差异,意大利蜜蜂头部酯酶对供试的氨基甲酸酯类农药非常敏感,但对部分有机磷类农药的敏感性较差,而小白鼠肝脏胆碱酯酶对丙溴磷、二嗪农、敌敌畏等农药较敏感.在4种不同提取剂对蔬菜样品的提取效果试验中,根据农药的溶解特性,采用甲醇和含Tween-80的磷酸缓冲液提取法,其残留农药的回收率和检测灵敏度较高.【总页数】5页(P167-171)【作者】余向阳;储瑞武;田子华;刘贤进【作者单位】江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究中心,江苏,南京,210014;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究中心,江苏,南京,210014;江苏省农林厅农产品质量检验测试中心,江苏,南京,210036;江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究中心,江苏,南京,210014【正文语种】中文【中图分类】X592【相关文献】1.前处理方法对3种谷物样品总铝含量测定的影响 [J], 陈国友;杜英秋;马永华;张桂华;刘丽2.四种前处理方法对电感耦合等离子体质谱测定植物样品中27种微量元素的影响[J], 孙德忠;安子怡;许春雪;王苏明;王亚平3.样品前处理方法对全株玉米青贮pH和氨态氮测定值的影响 [J], 黄文明;陈红跃;殷丽;徐欣;左福元4.前处理方法对电感耦合等离子体发射光谱法测定植物样品中无机元素的影响 [J], 乔爱香;江冶5.样品前处理方法对蛋氨酸铬及其预混剂中铬含量测定结果的影响 [J], 张丽英;张朝辉;姚亚军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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法， 为新 药 发 现 阶段 Ａ ｈ Ｃ Ｅ抑 制 剂 的筛 选 提 供 经 济 可靠 的微 量 筛 选方 法 ， 后 对植 物提 取 物 样 品进 行 筛 选 。方 然
法 ： 别 采用 电鳗 Ａ ｈ 人 源 红细 胞 Ａ ｈ 大 鼠海 马 区 、 状 体 匀浆 液 中的 Ａ ｈ 分 Ｃ Ｅ、 Ｃ Ｅ、 纹 Ｃ Ｅ为 酶 源 。 以 ９ Ｌ 为载 体 ， ６孑 板
抑 制作 用 进 行检 测 。 结果 ： 用 上 述 四种 酶 源 的 Ａ ｈ 行 Ａ ｈ 采 Ｃ Ｅ进 Ｃ Ｅ抑制 剂 微量 筛 选 方法 操 作 简便 快 速 、 可靠 经 济 。
其 中应 用 电鳗 Ａ ｈ Ｃ Ｅ进 行 筛 选显 示 灵 敏 度 较 高 ， 克林 和石 杉 碱 甲对 电鳗 Ａ ｈ 他 Ｃ Ｅ的抑 制 作 用 相 当 ， 对 人 源红 而
细 胞 ＡＣ Ｅ、 鼠海 马 区 、 状 体 匀 浆 酶 源 的抑 制 作 用 ， 杉碱 甲 明显 优 于他 克 林 ， 筛选 植 物 提 取 物 对 Ａ ｈ ｈ 大 纹 石 所 ＣＥ 均没 有 抑制 作 用 。 结论 ： 实 验 中所 建 立 的筛 选 方法 操 作 简便 、 本 快速 、 可靠 经 济 ， 用 于纯 化合 物 的 筛选 。 可
１ ．天 然 药物活性 物质与功 能 国家 重点实验 室 ， 中国 医学科 学 院北 京协和 医学 院药物研 究所 ， 北
京 ，０ ０ ０ 中国 １０ ５ ， ２ ．天津 中医药大 学， 天津 ，０ １３ 中国 、 便 经济 的乙酰胆碱 酯酶 （ｃｔ１ ｏｉｅｔｒｓ ， Ｃ Ｅ 抑制剂 的筛选方 ａｅ ｃ １ ｓ ａｅ Ａ ｈ ） ｙｈ ｎ ｅ
利 用 优 化 的 Ｅｌ ｎ方法 ， 生 理 ｐ 值 和 温 度 的条 件 下 ， 他 克林 和石 杉 碱 甲作 为 阳性 对 照 ， 测 对 不 同 酶 源 ｌ ｍａ 在 Ｈ 以 检
Ａ ｈ Ｃ Ｅ的 抑制 作 用 ， 定 最 佳酶 反 应 条件 （ 佳底 物 浓 度 、 应 时 间 、 色剂 浓 度 ）并 对植 物 提 取物 样 品 的 ＡＣ Ｅ 确 最 反 显 ， ｈ
【 关键词 】 乙酰胆碱酯酶 ； 石杉碱甲； 他克林 ； 阿尔茨海默病 【 中图分类号 】 Ｒ ６ ． ９ ５１ 【 文献标识码 】 Ａ 文章编号：０ ５ｌ９ （０ １０ ．０ ７０ ４ ２ ９ 一３ ６ ２ １）３０ ２ —０
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第１ 卷第 ３ 期
２１ ０ １年 ６月
神 经药理学报
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Ｖ＿ｌ１Ｎ ｏ ３ ０＿ ． Ｊ ｅ２ ｕｎ ． Ｏｌ１
不 同酶 源 乙酰 胆 碱 酯 酶 的抑 制 剂 筛选 方 法 比较
刘 佳 莉 苑 玉 和 陈 乃 宏
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