不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响
毕业论文
（2011届）
题目：不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能
的影响
学院农学院
专业动物科学
年级 2007 级
学生学号 12007241517
学生姓名眭丹
指导教师张巧娥
2011年5月10日
不同蛋白质水平的日粮对奶牛生产性能的影响
摘要
本试验选用30头体况、年龄、胎次相近、健康的荷斯坦奶牛,采用完全随机单位组试验设计，随机分为三组, 每组10头。饲喂三种不同蛋白质水平的日粮, (试验I、II、III组CP分别为 16.7%、 18.6%、 20.6%)，来研究对奶牛生产性能的影响。试验结果表明：随着日粮蛋白质水平的增加，奶牛的干物质采食量和产奶量增加，乳脂率和乳蛋白率反而降低，且三组间差异显著（P<0.05）；乳糖随日粮蛋白水平的增加而升高（P<0.05），对乳中尿素氮无明显影响（P>0.05）。
关键词: 蛋白质水平产奶量乳成分荷斯坦奶牛
Effects of different dietary protein levels on performance of
dairy cows in diet
Abstract
30 similar body condition, age, parity, healthy Holstein cows were randomly divided into 3 groups of 10 head in this experiment adopting completely random design. 3 different protein levels in diet(CP 16.7%, 18.6%, 20.6% in experiment I, II III group repectively) were fed to study effects on performance of dairy cows.The results were shown that dry matter intake and milk yields were increased, fat contents and protein contents were decreased cows with dietary protein level was increased, which were significant different in the three groups (P<0.05). Lactose increased significantly (P <0.05), urea nitrogen in milk had no effect (P> 0.05) with increasing dietary protein level.
Key words:Different protein levels Milk yields Milk composition Holstein cows
目录
1引言 (4)
1.1 蛋白质主要功能 (4)
1.2 奶牛对日粮粗蛋白质的利用 (4)
1.3 本研究目的和意义 (4)
2 试验材料与方法 (5)
2.1 试验时间与地点 (5)
2.2试验牛的选择与分组 (5)
2.3试验动物的饲养管理 (5)
2.4 试验日粮组成及营养水平 (5)
2.5测定的指标与方法 (7)
2.5.1产奶量和奶样的收集与处理 (7)
2.5.2干物质采食量的测定 (7)
2.5.3乳成分的测定 (7)
2.6 数据统计及分析 (7)
3 结果分析 (8)
3.1 不同蛋白质水平的日粮对奶牛干物质采食量的影响 (8)
3.2 不同蛋白质水平的日粮对奶牛产奶量的影响 (8)
3.3不同蛋白质水平的日粮对乳成分的影响 (9)
4讨论 (10)
4.1 (10)
4.2 (10)
4.3 (10)
5小结 (11)
参考文献 (12)
1引言
1.1 蛋白质主要功能
蛋白质是生命的物质基础，牛体各种组织主要由蛋白质组成，牛体需要不断地利用日粮中的蛋白质来修补、更替和增重，蛋白质是构成组织、维持代谢、生长、繁殖、泌乳和抵抗疾病所必需的营养物质[1]。近年来蛋白质资源紧缺和反刍动物对含氮资源利用率偏低制约了反刍动物生产性能的发挥。同时随着人类对畜产品质量和环境保护的更高要求, 研究者面临着既要生产出满足人类健康需要的畜产品又要减少粪尿中氮排放量的双重任务。特别是随着新蛋白质体系的提出, 蛋白质、氨基酸和肽的代谢成为动物营养学家研究的热点。生产出高品质满足不同人群需求的生鲜乳一直是营养学家研究的目标。
1.2 奶牛对日粮粗蛋白质的利用
日粮中不同蛋白质组分含量差异在一定程度上影响瘤胃微生物的发酵和生长[2]。反刍动物所食入的粗蛋白中只有30%直接变成可代谢蛋白质，70%被瘤胃微生物所分泌的脲），然后转化为菌体蛋白再被利用[3]。人工添加的NPN（非蛋白氮，如酶分解成氨（NH
3
尿素、磷酸尿等）也可以作为反刍动物的氮素来源，被脲酶分解成氨，并用于合成菌体蛋白。反刍动物瘤胃微生物分解粗蛋白和NPN的速度非常快，在2-4h内即可将这些物质部分或大部分分解为氨，氨在体内若不能及时利用或排除，就会引起反刍动物氨中毒。所以奶牛日粮中的蛋白质因随奶牛的产奶量的升高而增加，从而充分利用日粮中的蛋白质，同时增加生产效益。
1.3 本研究目的和意义
Depeters 和Cant[4]认为,日粮蛋白质水平对奶牛的产奶量以及乳成分的作用是通过影响蛋白质摄入量、蛋白质与日粮能量间的互作实现的。因此本试验在日粮蛋白质为18.6%的基础上增加或减少2%,来研究不同蛋白水平的日粮对奶牛产奶量、乳成分和经济效益的影响,探讨在不影响奶牛产奶性能的情况下降低日粮蛋白质的可行性,为奶牛实际生产提供试验依据。
2 试验材料与方法
2.1 试验时间与地点
试验于2011年2月14日至2011年4月25日在宁夏贺兰山奶牛原种繁育有限公司进行。其中预饲期为8d ,正试期为60d。
2.2 试验牛的选择与分组
试验选择30头处于产奶中期,年产奶量7. 0～7. 5 t ，且体况、年龄、胎次相近的健康的荷斯坦奶牛，随机分为3组,每组10头。试验I组喂以蛋白水平为20.6%的日粮，试验II组喂以蛋白水平为18.6%的日粮，试验III组喂以蛋白水平为16.7%的日粮。
2.3试验动物的饲养管理
每天饲喂三次全混合日粮，圈舍式饲喂，自由采食，自由饮水，每天挤奶三次。不改变奶牛场原来的饲养管理方式以及饲养环境，目的是为了降低试验对奶牛的各种应激。
2.4 试验日粮组成及营养水平
三个试验组所喂日粮的组成与营养水平见表1，三组的精料与粗料的添加量分别为：，I组：8.0kg、27kg,II组：10.5kg、33.3kg,III组：12.6kg、37.2kg。
表1 三组的日粮组成与营养水平
日粮原料I组II组III组
青贮（%）69.09 67.69 61.33
苜蓿（%）12.73 13.85 14.67
干糖渣（%） 3.64 3.08 5.33
酒糟（%）14.55 15.38 16.00
棉籽（%）0.00 0.00 2.67
玉米（%）67.00 57.00 41.00
豆粕（%） 3.50 10.00 12.10
菜籽饼（%）8.10 5.50 3.90
棉粕（%） 3.50 9.00 13.40
玉米DDGS（%）7.10 8.00 15.70
麦芽根（%） 4.70 4.00 4.10
预混料*（%） 1.00 1.00 1.00
磷酸氢钙（%） 1.00 1.00 2.00
碳酸钙（%） 1.60 1.50 1.80
小苏打（%） 1.50 2.00 3.00
盐（%） 1.00 1.00 2.00
营养水平
NEL(MJ/kg) 1.80 1.82 1.81
CP(%) 16.70 18.60 20.60
Ca(%) 1.00 1.10 1.30
P(%) 0.50 0.50 0.60
NDF(%) 46.60 44.20 45.10
ADF(%) 26.20 25.30 26.00
注：预混料为每公斤饲料所含:维生素A（IU/kg）：2.7×106；维生素D3（IU/kg）:6.7×105；维生素E（IU /kg）：11000；烟酸(mg/kg):7200;铜（mg/kg）：6000.0；锌（mg/kg）：4200.0；锰（mg/kg）：7900.0；碘（mg/kg）：120.0；硒（mg/kg）：190.0。
2.5 测定的指标与方法
2.5.1 产奶量和奶样的收集与处理
采用利拉伐管道式MP510挤奶器挤奶，智能电子显示产奶量。
产奶量的记录：对试验牛群进行定期记录一次全天三个班次的产奶量，整个试验期对产奶量的记录共12次，每5d记录一次全天产奶量。
奶样的收集：整个试验期共收集奶样三次，每次的奶样为全天三个班次早：中：晚=4:3:3的比例，采集之后于次日送出进行DHI测定。
2.5.2 干物质采食量的测定
整个试验期间在对产奶量记录的同时对该试验牛群的采食量进行测定，再计算出平均每头牛每天的干物质采食量。方法如下：
（1）测定实际采食量：记录早、中、晚班一共投料量，以及次日清槽时剩余料量；
（2）测定全混合日粮干物质：测定日时每个班都在食槽中进行取样100g,
并将样品放置在烘箱中，经高中低火各5分钟进行烘干，待重量不再变化时则证明烘干；
（3）计算公式：
试验群体采食量（kg）＝[早班投料量（kg）+中班投料量（kg）+晚班投料量（kg）]－清槽剩余量（kg）
平均每头牛一天的干物质采食量（kg/头）=群体采食量（kg）×饲料干物
含量（%）/试验牛头数（头）。
2.5.3乳成分的测定
乳成分中蛋白、脂肪、乳糖、乳中尿素氮浓度,都由DHI报告提供。
2.6 数据统计及分析
数据处理及分析采用SAS 8.0统计软件进行F检验，试验表中数据表示为平均数±标准差。
3 结果分析
3.1 不同蛋白质水平的日粮对奶牛干物质采食量的影响
不同蛋白质水平的日粮对奶牛干物质采食量的影响见表2。
表2 三组干物质采食量比较单位：kg 组别I 组II 组III 组
1 16.20 20.20 21.00
2 15.80 19.80 23.30
3 15.40 20.40 22.20
4 17.60 22.00 25.20
5 16.00 21.10 24.80
6 16.10 19.40 22.40
7 16.70 20.20 23.50
8 16.80 18.90 24.00
9 17.00 20.60 25.40
10 17.20 20.90 22.90
11 16.10 20.20 22.50
12 17.50 20.10 23.70
平均数±标准差16.53c±0.70 20.32b±0.80 23.41a±1.31
注:同行数据肩注不同字母表示差异显著(P<0.05), 相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由表2 可知，试验I组的干物质采食量为（16.53±0.70）kg，II组的干物质采食量为(20.32±0.80)kg，III组的干物质采食量为(23.41±1.31)kg。经F检验分析，三组间的干物质采食量差异显著（P＜0.05）。说明随着日粮蛋白质水平的增加，奶牛的干物质采食量也在增加。
3.2 不同蛋白质水平的日粮对奶牛产奶量的影响
不同蛋白质水平的日粮对奶牛产奶量的影响见表3。
表3 三组奶牛产奶量比较单位：kg
组别I 组II 组III 组
1 14.3 20 34.75
2 12.74 19.71 35.31
3 13.19 19.42 34.91
4 14.52 17.86 38.07
5 12.52 18.74 36.29
6 12.52 18.93 35.15
7 11.64 19.32 34.42
8 11.64 17.76 35.48
9 8.98 19.61 35.96
10 16.4 22.72 36.53
11 13.52 19.03 36.37
12 10.97 19.03 38.07
平均数±标准差12.75c±1.90 19.34b±1.26 35.94a±1.17
注:（1）表中的产奶量都为校正奶FCM，计算公式为FCM=M(0.4+0.15*F)。M为实际产奶量；F为实际乳脂率。（2）同行数据肩注不同字母表示差异显著(P<0.05), 相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由表3可以看出，I组的平均产奶量为（12.75±1.90）kg，II组为（19.34±1.26）kg，III组为(35.94±1.17)kg，经F检验分析，差异显著(P<0.05)。说明随着日粮蛋白质水平的增加，奶牛的产奶量也在增加，变化趋势与干物质采食量一致。
3.3不同蛋白质水平的日粮对乳成分的影响
不同蛋白质水平的日粮对乳成分的影响见表4。
表4 三组乳成分的比较
组别I 组II 组III组乳脂率（%） 4.72a±1.17 3.81b±0.77 2.73c±0.69
乳蛋白率（%） 4.01a±0.34 3.72b±0.30 2.94c±0.26乳糖（%） 4.65b±0.16 4.73b±0.25 4.94a±0.20
乳中尿素氮
12.96a±1.6912.77a±1.7613.11a±1.84
（mg/dl）
注:同行数据肩注不同字母表示差异显著(P<0.05), 相同字母表示差异不显著(P>0.05)。
由表4可知，试验I、II、III组乳脂率和乳蛋白率差异显著(P<0.05)，且与日粮中的蛋白水平呈负相关。I、II组与III组乳糖差异显著(P<0.05)，但I、II组差异不显著(P>0.05)。三组乳中尿素氮差异不显著(P>0.05)，III组的较高，这有待于进一步研究。
4讨论
4.1 采食量是影响奶牛生产性能的重要限制因素, 因此研究不同蛋白水平对干物质采
食量的影响具有重要意义。本试验结果表明，试验各组随着日粮蛋白质水平的提高，干物质采食量显著地提高。
4.2 日粮中的能量和粗蛋白是满足奶牛维持和产奶的营养需要, 它们的饲喂量应该按
奶牛的产奶量及奶牛的泌乳潜力来供给[5]。能量和粗蛋白喂量不足, 会影响奶牛产奶量
的提高和奶牛泌乳潜力的发挥。它们的喂量也不能过多,否则一方面造成浪费, 另一方
面可能导致许多疾病特别是代谢病的发生。此外, 日粮中两者的含量要保持一定的比例, 维持能量和蛋白质饲料的平衡, 才能保证产奶量稳产、高产和奶牛的健康。Kalscheur 等[6]报道日粮蛋白水平差异为2.2%，Kauffman等[7]报道日粮蛋白质水平差异为3.9%-4.0%
对奶牛产奶量产生显著影响。本试验的蛋白质水平差异就在4.0%，且试验结果显示:随
着日粮蛋白水平的增加，I、II、III组间产奶量呈显著的上升，这与上述研究结果类似。
4.3 随着奶产业的发展, 乳品加工企业在收购原料奶时, 更加注重以质论价, 特别是
乳脂率和乳蛋白率的高低已成为确定原料奶收购价格的主要指标。Emery等（1978）报道, 日粮中蛋白质水平同乳蛋白浓度存在正相关, 日粮蛋白质水平每增加1%, 则乳蛋
白浓度提高0.02%。然而, Sporndly等(1986)研究的结果恰恰相反, 日粮中蛋白质水平与乳蛋白浓度关系不大。Metcalf等(1996)通过饲喂3种含不同水平粗蛋白的日粮(11%,15%,20%), 结果发现含粗蛋白水平较高的两种日粮对改善乳及乳蛋白产量的效果没有明显差异[8]。随着日粮蛋白质水平的提高，会使奶牛机体蛋白质代谢过程中氮的有毒副产物（氨气、尿素）增多[9]。Hristov[10]（2006）研究发现，增加日粮粗蛋白从15.8%到18.3%，导致尿氮损失从58%上升到62%，血中尿素氮从13mg/100ml上升到16mg/100ml,减少瘤胃氨氮利用率，从而减少奶牛乳蛋白的合成。这与本试验的结果：随着日粮蛋白质水平的增加乳蛋白率随之降低相符合。
5小结
本试验结果表明：随着日粮蛋白质水平的增加，奶牛干物质采食量和产奶量
显著增加，而乳脂率、乳蛋白率随着降低，这说明日粮中过高的蛋白质水平，而对乳成分并没有改善的作用。
参考文献
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致谢
值此论文完成之际，我首先要感谢我的指导老师张巧娥教授的热情关怀和悉心指导。在我撰写论文的过程中，张老师倾注了大量的心血和汗水，无论是在论文的选题、构思和资料的收集方面，还是在论文的研究方法以及成文定稿方面，我都得到了张老师悉心细致的教诲和无私的帮助，特别是她广博的学识、深厚的学术素养、严谨的治学精神和一丝不苟的工作作风使我终生受益，在此表示真诚地感谢。
其次，我要感谢宁夏贺兰山奶牛原种繁育有限公司的全体员工，尤其是史春玲场长，她不但为我的试验提供了平台，还在我试验的过程中给予了我极大的帮助。通过这两个多月大的实习，无论是在专业知识上还是做人做事上，都学到了很多。在此一并致以诚挚的谢意，感谢所有关心、支持、帮助过我的良师益友。
最后，向在百忙中抽出时间对本文进行评审并提出宝贵意见的各位老师表示衷心地感谢！
猪和鸡的低蛋白质日粮-霍启光
猪和鸡的低蛋白日粮 霍启光 北京康华远景科技有限公司首席科学顾问 中国农业科学院饲料研究所研究员 1、研究与推广低蛋白质日粮的必要性 1.1低蛋白质日粮与环境保护 中国，猪禽年产粪5－8亿吨，粪水60亿吨。每头成年猪的生化需氧量（BOD）是人的13倍。如此大量需氧腐败有机物不经处理进入水体，会造成严重的水体污染，水中氧含量下降，硝酸根离子增加，并随畜禽粪便排出大量金属元素、细菌病毒和有害气体（甲烷、硫化氢、甲醇等）。 表1猪氮、磷的摄入量、排出量和存留量＊ 仔猪（9~25kg）生长猪(25~106kg) 种母猪(年产19.6头仔猪) 氮摄入（kg）0.94 6.32 27.78 排出（kg）0.56 4.24 22.42 存留（%）40 33 19 磷摄入（kg）0.21 1.22 6.55 排出（kg）0.13 0.82 5.42 存留（%）39 33 17 *Jongbloed等(1993)。 猪摄入氮和磷的60%-80%由粪尿中排出(表1)。粪氮主要来源为未消化氮、微生物氮和内源氮(脱落上皮，消化道分泌物)，饲用消化性低的饲料和含有抗营养因子的饲料会增加粪氮的排出量。已消化而未被利用的氨基酸氮则以尿素/尿酸形式排出，随尿排出的还有尿囊素、马尿酸和肌酐。排出的粪尿，在厌氧微生物的作用下，对环境之污染，起着推波助澜的作用，粪尿中的含氮物质大量降解，约有60%-70%氮转化为氨。除氨外，粪尿中还发现80多种含氮物质，其中有10种为产生恶臭的主要物质(表2)。 表2动物排泄物中产生恶臭的主要成分 成 份形 态气 味靶 器 官 乙酸无色液体辛辣的、腐蚀性的呼吸系统 丙酸无色油状液体辛辣的皮肤，眼 丁酸无色油状液体恶臭的呼吸系统，眼 酚无色至粉色结晶有气味的呼吸系统，眼 对-甲苯酚无色至粉色结晶酚味的呼吸系统，眼，皮肤，肝，肾 氨 无色气体刺激性的呼吸系统，眼 二氧化氮棕红色气体毒性的呼吸系统，肺，眼，皮肤乙硫醇无色液体蒜味的呼吸系统，眼，粘膜 甲硫醇无色气体令人恶心的所有器官 硫化氢无色气体臭味的呼吸系统，眼注：引自Tamminga等(1992)的资料。
低蛋白日粮添加尿素对蛋鸡生产性能的影响
沈阳工学院 毕业论文 题目：低蛋白日粮添加尿素对蛋鸡生产性能的影响 学院：生命工程学院 专业：动物科学 学号： 学生姓名： 指导教师： 2019年 2月28日
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Abstract The production performance, excreta nitrogen content and protein appearance of layers were studied by adding 0.1% urea (group U) and 0.1% urea + 0.5% soybean oil (UO) to a low-protein diet. Chowder. Metabolic rate. The results showed that the rate of laying was significantly decreased in the U group (P < 0.05). UO group had no effect on egg yield, egg weight and food intake. The nitrogen content in feces was significantly decreased in the U group (P < 0.05). The apparent metabolic rate of protein was not affected. UO group had no significant effect on excreta nitrogen content and protein apparent metabolic rate. 目录
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Q/NC LH J 12 01—2004 奶牛全混日粮（ＴＭＲ）饲养技术标准 1 范围 本标准规定了奶牛全混日粮（ＴＭＲ）的概念、特点、调配、制作、饲喂管理及配套设施等方面的技术要求。 本标准适用三元种业科技所属牛场全混日粮（ＴＭＲ）的应用。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 Q/NC LH J 04 01 —2003 饲料与营养 Q/NC LH J 04 02 —2003 饲养管理与生产工艺 3 ＴＭＲ的概念及其特点 3.1 概念： ＴＭＲ（Total Mixed Ration ）为全混合日粮的英文缩写，TMR是根据奶牛在不同生长发育和泌乳阶段的营养需要，按营养专家设计的日粮配方，用特制的搅拌机对日粮各组分进行搅拌、切割、混合和饲喂的一种先进的饲养工艺。全混合日粮（TMR）保证了奶牛所采食 每一口饲料的营养均衡性。 3.2 ＴＭＲ饲养工艺的优点： 3.2.1 精粗饲料均匀混合，避免奶牛挑食，维持瘤胃PH值稳定，防止瘤胃酸中毒。 奶牛单独采食精料后, 瘤胃内产生大量的酸；而采食有效纤维能刺激唾液的分泌，降低瘤胃酸度。TMR使奶牛均匀地采食精粗饲料，维持相对稳定的瘤胃PH值，有利于瘤胃健康。3.2.2 TMR日粮为瘤胃微生物同时提供蛋白、能量、纤维等均衡的营养物质，加速瘤胃微生物的繁殖，提高菌体蛋白的合成效率。 3.2. 3 增加奶牛干物质采食量，提高饲料转化效率。 3.2.4 充分利用农副产品和一些适口性差的饲料原料，减少饲料浪费，降低饲料成本。 3.2.5 根据饲料品质、价格，灵活调整日粮，有效利用非粗饲料的NDF。 3.2.6 简化饲喂程序，减少饲养的随意性，管理的精准程度大大提高。 3.2.7 实行分群管理，便于机械饲喂，提高劳产率，降低劳动力成本。 3.2.8 实现一定区域内小规模牛场的日粮集中统一配送，从而提高奶业生产的专业化程度。 3.3 ＴＭＲ饲养工艺的不足： 3.3.1 ＴＭＲ饲养工艺的特点讲求的是群体饲养效果，同一组群内个体的差异被忽略，不能对奶牛进行单独饲喂，产量及体况一定程度上取决于个体采食量差异。 3.3.2 从理论上讲，高产牛往往需要更多的精料；而少数食欲不良的牛只往往应给予少量的精料和大量的干草，因此对一些特殊牛的照顾是TMR饲喂无法做到的。
影响生鲜乳蛋白质含量的因素及调控措施.
影响生鲜乳蛋白质含量的因素及调控措施 刘桂瑞,李正洪,李兆林 摘要:生鲜乳中乳蛋白含量受许多因素的影响,如遗传、生理阶段、环境、疾病及饲养方式等,而奶牛日粮营养成分是影响生鲜乳中乳蛋白含量的主要因素。合理配制平衡日粮 ,对提高乳蛋白含量有重要作用。 关键词:乳蛋白;含量;影响因素 牛奶中蛋白质和脂肪含量是决定牛奶营养价值的重要指标之一。乳蛋白是一种营养价值很高的蛋白质,它的氨基酸含量和构成比例基本上与人体所需氨基酸的数量、比例接近。乳蛋白含量受许多因素的影响,如遗传、生理阶段、环境、疾病及饲养方式等,而奶牛日粮营养是影响生鲜乳中乳蛋白含量的重要因素。合理配制平衡日粮,对提高乳蛋白含量具有重要作用。 1 乳中蛋白质的合成 现已证明,90%以上的乳蛋白是在乳腺中由氨基酸合成。对动物静脉注射14C-标记的氨基酸以及进行动静脉差的测定均证明,酪蛋白、β-乳球蛋白和α-乳清蛋白是由乳腺中的游离氨基酸合成的,而这些氨基酸来自血液。乳腺细胞自身还有合成非必需氨基酸的能力,为合成乳蛋白提供原料。乳腺合成蛋白质的过程与其他组织相同。乳腺细胞合成的大部分蛋白质最终要分泌出去,主要乳蛋白的合成在粗面内质网的核糖体上开始,然后由信号肽引导进入内质网腔,并在内质网和高尔基体内进行磷酸化和糖基化等化学修饰过程,再由分泌泡转送到上皮细胞顶膜,通过胞吐的方式释放到腺泡腔中。这一机制已被广泛接受 收稿日期:2011-03-21(Mercier等,1982[1]。 乳腺是一个合成蛋白质十分活跃的场所。乳蛋白编码基因的表达具有明显的组织特异性和阶段特异性,即乳蛋白质的合成仅在乳腺上皮细胞中进行,表达量高,并且发生在哺乳母体即将分娩之前和分娩之后的相当长一段时间的泌乳期中,乳腺合成
净能体系下配制猪低蛋白日粮的技术基础
江西农业学报 2010,22(1):136~139A cta A g ricult urae Ji angx i 净能体系下配制猪低蛋白日粮的技术基础 景亚岐1 ,李振田 1* ,马文峰1,闫军 2 收稿日期:2009-11-09 作者简介:景亚岐(1983-),男,河南南阳人,硕士,研究方向:单胃动物营养。*通讯作者:李振田。 (1.河南农业大学牧医工程学院,河南郑州450002;2.河南碧云天饲料有限公司,河南郑州450002) 摘 要:简述了低蛋白日粮的研究现状及其存在的问题,介绍了配制猪低蛋白日粮的技术基础(理想蛋白质理论、可消化氨基酸技术、人工合成氨基酸技术、小肽营养技术),论述了净能体系在猪低蛋白日粮配制中的作用。 关键词:猪;净能体系;低蛋白日粮;配制 中图分类号:S828.5 文献标识码:A 文章编号:1001-8581(2010)01-0136-04 Technological Base for P reparation of Lo w Protein Daily D iet of P igs under Net Energy Syste m JI NG Y a-q i 1,L I Zhen-tian 1*,MA W en-feng 1,YAN Jun 2 (1.Co llege o fA n i m a lHusbandry and V eter i nary Eng i neer i ng ,H enan A gricu ltura lU niversit y ,Zhengzhou 450002,Chi na ;2.B iyuntian F eed L i m ited Company ofH enan P rov i nce ,Zheng z hou 450002,Ch i na)Abstract :Th i s paper briefl y su mm ar i zed the current situa tion o f low pro tein dail y diet research and so m e ex istent prob l ems ,i n -troduced t he techno l og i ca l base for the preparati on of l ow pro tein da ily diet of pi gs (idea l prote i n theory ,d i gestive a m i no ac i d technolo -gy ,a rtific i a lly-synthes i zed a m ino ac i d techno l ogy ,s m all pepti de nutr iti on technology ),and elaborated the ro le of ne t energy syste m in t he preparati on of lo w prote i n da ily diet of p i gs . K ey words :P i g ;N e t energy syste m;Low pro te i n dail y d i et ;P reparation 猪日粮成本占整个养猪业成本的70%左右,其中蛋白质饲料大约占日粮总用最的20%,其成本约占整个饲料成本的35%。随着畜牧业的迅速发展,蛋白质饲料原料严重匮乏,蛋白质饲料自给率低下,蛋白质饲料紧缺问题日趋严重。饲料生产成本居高不下,原料涨价使饲料生产企业处于亏损的边缘,养殖业经济效益难以保障,影响到了农民的生计。因此,如何降低蛋白质饲料的用量,提高其利用效率,已成为提高养猪业经济效益的重要课题。关于低蛋白日粮的研究目前已经趋于成熟,而净能体系在动物营养学界有用于评定动物能量需要和饲料能量价值的趋势。本文对以净能体系为基础配制猪低蛋白日粮的可行性进行了阐述。 1 低蛋白日粮的研究现状及其存在的问题 低蛋白日粮,是指与高蛋白日粮相比,其蛋白质水平较低的日粮,这里的高蛋白质日粮通常为典型日粮或按某一饲养标准配制的日粮。低蛋白日粮与高蛋白日粮相比,前者限制氨基酸种类较多和限制程度较大,日粮限制性氨基酸的满足程度制约低蛋白日粮的蛋白质水平。 虽然国内外大量的试验证明,畜禽日粮中氨基酸的种类、比例和数量如能满足动物所需,日粮蛋白水平可降低2~4个百分点,畜禽生产性能不变,同时,饲料转化率、畜禽氮沉积和氮排放、热应激能力均有所改善。但进一步降低日粮蛋白水平,无论如何保证AA 的需要,都会 遇到两个问题:一是动物的生长成绩均达不到理想水平;二是胴体脂肪含量有所上升。 2 净能体系下设计猪的低蛋白日粮的技术基础 2.1 理想蛋白质理论 /理想蛋白质0是指含有最佳氨基酸组合和利用率的饲料蛋白质,同时为动物合成蛋白质提供最佳比例的必需氨基酸。在理想蛋白质条件下动物可以实现最高饲粮蛋白质利用率,同时饲粮中的必需氨基酸具有同等限制性。 主要的/理想蛋白质0体系有英国Ro wett 研究所W ang 和Fuller(1989,1990)的模式、英国ARC(1981)模式、美国Ili nois 大学Chung 和Ba ker(1992)的模式等(表1)。其中ARC 模式是以瘦肉组织中的氨基酸组成中的氨基酸平衡为基础,Fuller 等的模式以猪最大氮沉积为基础,Baker 等的模式以饲喂补充晶体氨基酸的纯合饲粮所得到的数据为基础,而NRC 模式则以文献调研的数据推导为基础。 2.2 可消化氨基酸技术 可消化氨基酸是指能真正被动物消化吸收的氨基酸。可消化理想氨基酸是指食入蛋白质所含可消化氨基酸的组成与动物所需氨基酸组成比例一致,动物对该种蛋白质的吸收利用率为100%。猪的可消化理想氨基酸模式见表2。 从低蛋白日粮的定义以及理想氨基酸模式或理想蛋白的定义看,低蛋白日粮就是理想氨基酸模式在生产
奶牛日粮配方设计3
奶牛日粮配方设计 发布时间：2012-04-11 摘自：荷斯坦 ●饲喂方式非常重要，保证每头牛有足够的采食空间。奶牛也是分等级的，如果没有足够的空间，有些弱的奶牛抢食不过强壮的奶牛。 ●保证饲料新鲜度，刚配好的日粮与24小时后的日粮，能量至少相差10%。能量损失的原因是因为当它跟空气接触后，饲料中的酵母和霉菌利用饲料中的糖同时产热。另外，保证饲料新鲜度对围产期奶牛至关重要，围产期奶牛本身存在食欲不好的问题，所以应该给它提供最新鲜、适口性最好的饲料。 ●牛舍及舒适度，奶牛应激更少，牛就越舒适。卧床设计要保证有足够的空间、奶牛起卧非常方便、卧倒的时候非常舒适。 重视奶牛信号 此外，有很多的奶牛信号都会给我们设计日粮配方时提供参考。 采食行为 如果奶牛挑食，那挑食的原因可能是TMR日粮混合不均匀，粗饲料的切割长度过长。奶牛中的“头牛”会先采食精料，而一些弱势的奶牛只能采食剩下的粗料，因此，在一个牛群中，奶牛的体况评分的差别会很大。另外，奶牛先采食精饲料，然后再吃粗料，“先精后粗”还会使瘤胃pH值不稳定。 瘤胃充盈度 对于瘤胃充盈度有一个1~5分的评分，1分是瘤胃充盈度差的，5分是瘤胃充盈度最好的。瘤胃隐窝处于奶牛左侧，是一个倒三角型，吃饱的牛，瘤胃处看起来像大苹果;另外还可通过看瘤胃隐窝来判定牛是否吃饱，如果看不见瘤胃隐窝就表示牛只基本上是吃饱了，如果隐窝非常明显，就表示没有吃饱。评价奶牛采食量时，要多选几头奶牛检查瘤胃充盈度。瘤胃充盈度好表示采食了足够的纤维和干物质。 反刍行为 奶牛一天8~10个小时都在反刍，全群中50%的牛卧倒反刍才是正常的，如果日粮配制比较合理，奶牛每次反刍应该咀嚼50~60次，若咀嚼次数低于40次，就表明粗饲料饲喂过少，如果咀嚼次数高于70次，就意味着粗饲料饲喂太多。 粪便的评分
配制低蛋白质日粮的必要性及其注意事项
配制低蛋白质日粮的必要性及其注意事项 近几十年来，猪的氨基酸营养一直是各国学者研究的热点。一方面由于全世界范围内蛋白质资源的日趋紧张，另一方面由于日粮氨基酸不平衡引发粪尿氮大量 排放而引起严重的环境污染。在成本和环保的双重压力下，低蛋白质日粮成为自20世纪90年代以来欧美动物营养领域的研究热点。因此，在充分满足动物营养需要的情况下，采用以理想氨基酸模式为基础，按照真可消化氨基酸需要量合理配制 低蛋白质日粮，对降低日粮蛋白质水平及减少环境污染意义重大。 1配制低蛋白质日粮的必要性 1.1饲料蛋白质营养价值评定体系的不断完善 评定饲料营养价值是为了了解日粮营养素在动物体内转变为动物产品过程中的损失及利用程度，直接影响营养需要的准确性并为充分利用日粮营养素提供理论基础，为日粮营养素投入与动物产品产出之间提供更直接的联系（伍喜林，2003）。 准确评价饲料氨基酸的含量、畜禽对氨基酸的需要量和饲料氨基酸的利用 率是科学设计饲料配方的基础。饲料原料种类繁多，原料氨基酸的含量和质量差异较大，不同畜禽有不同的利用效率。但饲料蛋白质营养价值评定中基本未考虑动物不同生产类型、生理阶段、生产水平、产品质量及健康状况条件对饲料蛋白质营养价值的影响（Han, 1995），存在日粮组成对饲料蛋白质营养价值影响的问题；由于缺乏不同饲料原料的组合效应资料，饲料加工贮存条件（温度、湿度、压力等）对饲料蛋白质营养价值的定量影响关系及其在日粮配制中的研究应用尚处于起步阶段。为更准确地满足动物对氨基酸的需要量，需要由粗蛋白质和总氨基酸体系向 可消化或可利用氨基酸体系发展，以理想氨基酸模式为基础，从动态模型出发，采 用真可消化氨基酸体系，并考虑各种因素影响，形成切实可行的参考标准式计算模 式，这样才能使氨基酸的供给与猪氨基酸需要之间达到精确的统一，减少蛋白质饲料消耗和氮的排出量，使配方设计更加科学，日粮配制更加合理。
奶牛标准和饲料配方
奶牛饲养标准自动生成及 用Excel 的“规划求解”拟制奶牛饲料配方 韩友文 （东北农业大学 动物科技学院 哈尔滨 150030） 现今，作为信息技术载体的计算机，已普及到企业、机关、学校、研究机构各个单位。饲料和养殖行业甩开纸笔进行日粮和饲料配方计算已成现实。软件市场也有多种饲料配方专用软件可供选购使用。本文要介绍的是不花一分钱买软件，用每一计算机都装有的MS-Office 中Excel 的“规划求解”-“加载宏”，完成奶牛的日粮和精料配方的拟制，并达到最低成本要求。 大家知道，奶牛作为畜牧养殖的重要草食动物，不同于精料型自由采食的猪和禽类，基本上是个体计量单喂。奶牛日粮中的饲草和其他非精饲料组分（青贮料、根茎类、糟渣类）非常重要，且要求占日粮的一定比例范围。奶牛日粮中的精饲料部分，通常配成精料补充料形式。在每次挤奶同时分别喂给。这些，无疑都给拟制最低成本奶牛日粮配方带来计算和操作上的某些复杂性。 做配方，遇到第一个问题是：确定对象奶牛的饲养标准。查标准表采点加合计算，既烦琐，又不连续。我们根据标准提供的参数和相关数据，转化成数学模型，再用VBA 编程。作到了输入奶牛的必要参数，就能准确、快速、自动生成配方对象奶牛的饲养标准。（图1） “规划求解”的数学模型与数学中的线性规划模型相同。其基本数学表达式如下： 配方解--结构变量 X i ≥ 0 (i = 1,2,……,m-1,m) 最低成本—目标函数 Z = ∑=m i CiXi 1＝→min 配方要求—约束条件 ∑=m i aijXi 1 （≥, ＝, ≤） b i (j = 1,2,……,n-1,n) 引申的约束条件可能有： X i ≥ X i 下 ；X i ＝ X i 等 ；X i ≤ X i 上 (饲料原料约束量) b g / b h （≥, ≤）K 下 , K 上 (例：蛋白/能量 比) DM Xi r i ∑=1/∑=m i XiDM 1 （≥ ，≤）R 下 , R 上 (例：饲草DM 占日粮DM 的比例) 上述式中的符号和参数： X i 结构变量，即待求的配方解，相当于配方中个原料组分占总量的比例（% 或 g/kg ）。 m 参与配方组成的饲料原料数； n 为饲料配方所定的各种指标数。 Z 目标函数，取最小值（＝→min ），相当于日粮或配方的饲料原料成本（￥/kg ）。 C i 第i 种饲料原料的市场价格（￥/kg ）。 a ij 第i 种饲料原料的第j 种属性数据，相当于饲料原料的营养指标含量(%，g/kg ，MJ/kg ，Mcal/kg ，)。 K R 饲养标准规定的有关比例参数； r 为饲草和非精饲料原料的种类数。
蛋白质与酶工程复习题
一．选择题： 1.影响蛋白质化学修饰反应的主要因素有：（） 一是蛋白质功能基的反应活性；二是修饰剂的反应活性。 2. 蛋白质化学修饰有以下作用（以酶为例），请指出错误的一条： ( ) (1)改造酶的作用特性（包括改变酶活性、专一性、对效应物响应性能及对辅助因子的要求）;(2)提高酶的稳定性;(3)扩大在体内应用可能性（防止在体内非专一性水解、减少和消除免疫原性以利于医疗应用）. 3．蛋白质侧链上的巯基在进行烷基化修饰时，常用的烷基化试剂是：（） 碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺、5,5-二硫 -2- 硝基苯甲酸 4. 下面哪一项叙述是错误的： () 5. 人类基因组计划的启动和草图完成时间在：（） 1990年正式启动，2000年6月26日人类基因组工作草图完成。 6. 人类基因组计划的启动到人类基因组序列图测序完成时间在： ( ) 1990年正式启动到2003年4月14日 7. 通过比较两个或多个蛋白质序列的相似区域和保守性位点，确定相互间具有共同功能的序列模式和分子进化关系，进一步分析其结构和功能。此方法为： ( ) 序列两两比对 8. 通过对目标蛋白质进行定位突变或化学修饰改变其结构和功能，为蛋白质分子设计中的：（） 称为“小改“，最广泛使用的方法，主要是通过定点突变或盒式替换技术来有目的地改变几个氨基酸残基 9. 通过对来源于不同蛋白质的结构域进行拼接和组装，为蛋白质分子设计中的：（）“中改“，”分子剪裁“ 10. 完全从头设计出一种具有特异结构与功能的全新蛋白质，为蛋白质分子设计中的：（）“全新蛋白质设计“或”蛋白质从头设计“ 11 下面哪一条不是真核基因在原核中正确表达的必备条件：（） 第一，克隆到原核表达系统中的序列必须是去掉内含子的cDNA序列；第二，要用原核的启动子；第三，真核基因可能在表达过程中需要有分子伴侣帮助折叠成正确的构象才会有活性；第四，注意控制表达条件，尽量不要形成包涵体。 12 外源基因在大肠杆菌（）高效表达时，常会发生一种特殊的生理现象，形成包涵体。 13 由欧洲生物信息学研究所进行维护和管理的SWISS-PROT数据库：（） SWISS-PROT是经过注释的蛋白质序列数据库，由欧洲生物信息学研究所(EBI)维护。数据库由蛋白质序列条目构成，每个条目包含蛋白质序列、引用文献信息、分类学信息、注释等，注释中包括蛋白质的功能、转录后修饰、特殊位点和区域、二级结构、四级结构、与其它序列的相似性、序列残缺与疾病的关系、序列变异体和冲突等信息。SWISS-PROT中尽可能减少了冗余序列，并与其它30多个数据建立了交叉引用，其中包括核酸序列库、蛋白质序列库和蛋白质结构库等。利用序列提取系统(SRS)可以方便地检索SWISS-PROT和其它EBI的数据库。SWISS-PROT只接受直接测序获得的蛋白质序列，序列提交可以在其Web页面上完成。 14 核酸序列数据库GenBank是由：（） 美国国立生物技术信息数据库是由美国国立生物技术信息中心（中心（NCBI）维护的一级核酸序列数据库。）维护的一级核酸序列数据库；数据库的数据来源有三种（1）、直接来源于测序工作者提交的序列；（2）、与其它数据机构协作交换的数据；（3）、美国专利局提供的专利数据。
低蛋白日粮成败分析
猪和肉鸡低蛋白日粮的成败分析 味之素(中国)有限公司 乔岩瑞 从理论上来讲，动物对氨基酸的需求可以通过纯化日粮(purified diets)来提供。在 这种情况下，动物不需要通过日粮中的蛋白质提供它所需要的氨基酸，日粮的蛋白质水平可以是零。从生物化学角度来看，动物对日粮蛋白质的需求本质上是对氨基酸的需求。日粮配方更需要设定的是氨基酸而不是粗蛋白水平。这是降低日粮粗蛋白水平、配制低蛋白日粮的营养学基础。 过去，由于工业生产的氨基酸品种有限，人们只能通过蛋白质保障氨基酸的需求，导致传统日粮中多种氨基酸过量、饲料粗蛋白水平偏高。随着越来越多的工业氨基酸(L-赖氨酸，L-苏氨酸，DL-蛋氨酸和L-色氨酸)的面市和价格的逐渐降低，通过使用工业氨基酸、降低蛋白原料的用量来满足动物的氨基酸需求、减少饲料中的粗蛋白含量成为一种现实的可能。 低蛋白日粮的开发和实施的直接驱动力来自于养殖业的竞争和对生存的渴望。在成本和环保的压力下，低蛋白日粮成为自九十年代以来欧洲和北美动物营养研究领域的热点 。其一，在低蛋白日粮中，价格相对昂贵的蛋白原料的用量得以减少，而价格便宜的谷物原料的用量得以增加，因此，低蛋白日粮普遍具有降低饲料成本的特点。其二，养殖业对环境的污染迫使越来越多的国家(包括中国)对污染的排放做出限制，为了进一步扩大生产规模和避免环境问题导致的处罚，养殖业更积极地审视自身造成的环境问题。这些问题包括氮的排放，矿物质例如磷的排放，以及对空气中臭气的排放。在这类污染中，至少氮排放污染和臭气的污染直接和日粮中的粗蛋白含量有关。 目前，低蛋白日粮研究的成果及影响已经超越了最初拟定的目标。这些研究推动人们更深刻地从理论上认识动物的代谢需求，在动物营养科学的发展历程上留下了划时代的印迹。例如，为了解决某些低蛋白日粮导致猪胴体变肥，人们对猪的能量需要从代谢能水平深入到了净能的层次。在法国INRA(国家农业研究院)的研究人员的努力下，欧洲的猪日粮配方进入了净能的时代。再例如，尽管满足了理想蛋白所规定的各种(必需)氨基酸的需要，肉鸡对日粮蛋白水平降低的幅度仍然比较敏感，这一现象引发了人们对肉鸡非必需氨基酸需要的思考，越来越多的科研人员开始关注这方面的研究。 下面通过实例考察猪和肉鸡低蛋白日粮开发取得的成果，探讨饲料企业和养殖场如何安全、有效地利用本学科发展的最新成果。 低蛋白日粮≠低氨基酸日粮 低蛋白日粮的基础是理想蛋白比例。严格地说，所谓低蛋白日粮，就是在配制日粮时根据理想蛋白设定必需氨基酸水平，而日粮的粗蛋白水平由配方程序自动选定的日粮。这样配制的日粮因为尽可能使用多种工业氨基酸，动物的必需氨基酸的需要得到了满足，非
低蛋白质日粮技术
低蛋白质日粮技术 近年来，随着畜禽可消化氨基酸为基础的理想氨基酸模式、净能体系以及微生态制剂、酶制剂和小肽等动物营养的研究深入，低蛋白质日粮逐渐受到人们的重视。低蛋白质日粮(LPD)是指将日粮蛋白质水平降低2%～4%，同时满足畜禽日粮中氨基酸的种类、比例及数量的营养均衡日粮。 与传统畜禽日粮相比，低蛋白日粮具有以下优点： 1、提高饲料利用率，增加日粮氮的沉积。 研究表明，添加和平衡了氨基酸的低蛋白质日粮可以增加氮的沉积，氮的利用率明显提高，氮的沉积增加5%，尿氮每天减少2.3g，生物学价值提高17%。 2、节约蛋白原料，降低饲料成本。 中国的蛋白质资源极度匮乏，几种主要饲料蛋白原料鱼粉、豆粕等长期依赖进口，这已经成为影响我国养殖业和饲料工业成本、农民增收的决定性因素。传统的畜禽日粮往往浪费蛋白原料，增加生产成本。低蛋白日粮每降低1%的粗蛋白质，可以减少23kg/t的豆粕用量，该空间可以添加适量合成氨基酸和价格低廉的能量饲料进行填充，一些杂粕也成为可添加原料，这为优化饲料配方、降低饲料成本提供了途径。 3、降低环境污染，减少疾病发生。 研究表明，猪只能利用日粮中30%～55%的氮，而60%～80%的氮随粪便排出；磷的吸收利用率也只有约30%左右，有70%随粪便排出体外。目前我国仅猪禽两项养殖，一年的产粪量就高达5～8亿吨、粪水60亿吨。这些过剩的营养处理不当很容易污染土壤、河流和空气等，因为畜禽养殖污染环境，目前我国一些地区已经设立禁养或限养区。另外，蛋白质是所有有机营养物质中最难消化的一种，过高的蛋白质水平会加重畜禽肝脏和肾脏的负担，大量未消化的营养物质进入大肠段，给病原菌生长和繁殖提供了条件，造成畜禽腹泻、下痢甚至死亡。低蛋白日粮可以保持胃肠道较高的酸性，抑制有害菌生长，有效避免和减少疾病发生。此外，可以将微生物发酵与低蛋白质日粮相结合发展生物饲料，既降低了抗营养因子水平，同时为机体提供大量的益生菌、有机酸、消化酶和小肽等，改善肠道健康，提高畜禽生产性能，
低蛋白饲料对蛋用育成鸡的影响研究报告
低蛋白饲料对蛋用育成鸡的影响研究报告邱忠玉1,桑国俊1,魏彩虹1,张砚铮1,潘雁玲1,马继军2,徐先贵2,张换成3 (1.甘肃省畜牧兽医研究所,甘肃平凉 744000;2.平凉畜产局;3.平凉市畜牧兽医站)中国图书分类号:S816132 文献标识码:A 文章编号:1006—799X(2003)01—0004—03 蛋白质饲料的质量取决于氨基酸的含量和配比,鸡对氨基酸的选择和要求很严,如果必需氨基酸的含量与配比完善,饲料的质量就高,即在氨基酸满足需要时,低蛋白饲料也能保证鸡的正常生长发育和生产性能。本课题结合当地自然生态环境和饲料资源情况,利用低蛋白饲料对蛋用育成鸡进行饲养试验,研究总结出最佳低蛋白含量饲料配方,在当地推广应用,降低饲料成本,提高养鸡效益,促进当地养鸡业的发展。现将试验内容与研究结果总结如下。 1 试验材料与方法 1.1 试验材料 1997年从西安北关种鸡场引进伊莉莎父母代种蛋,在平凉炮团鸡场孵化,选留试验 收稿日期:2002—08—12 作者简介:邱忠玉(1955—),男,内蒙古左旗人,畜牧师,主要从事动物饲料与营养研究。鸡1000只供试,1998年从宝鸡市机械化养鸡场引进海兰W-36商品代雏鸡选留1000只,进行重复试验。雏鸡于1～15日龄网上平养,饲养密度15～20只/m2,16～45日龄转入育雏笼饲养,自由采食饮水,日粮营养水平按品种标准配制,按常规程序进行免疫。 1.2 试验分组 试验按蛋白含量分为12%～13%、13%～15%、15%～16%三个水平组,每组分为A、B二种不同配方,共6个试验组,每组100只试验鸡,各组除蛋白质含量不同外其它营养成份相同,对照组100只使用当地自配饲料,蛋白质16%～1615%,代谢能量11129MJ/kg。 1.3 日粮与营养水平 本试验参照供试鸡品种营养标准,按当地饲料资源选料配方,以玉米、麸皮、油渣为主要原料,配以各种微量营养成份,日粮中除 明,采用nested2PCR技术,检测灵敏度可以比原来提高1000倍。 设计引物时,应兼顾CSFV不同血清型的序列差异以及与BVDV和BDV之间的差异,以便于将测序结果同已知序列同源性比较时,可以产生明确的特征差异,进行有效地区别。nested2PCR产物长度略短于R T2PCR 长度。通常CSFV5’2U TR(5’端非翻译区)具有较高的保守性,可以作为设计引物的参考位置。同时,设计引物时,还应兼顾扩增片段的长度,一般在400bp左右为宜,以方便扩增又能有效区别为原则。一次设计合成的引物可用于众多样品的检测。 在进行R T2PCR和nested2PCR时,最容易出现的失误就是因污染而造成结果错误。理论上讲,只要污染一个模板分子,就足以产生假阳性结果,为避免这一现象的发生,在每次检测过程中,都要设阳性和阴性对照,小心进行每一步操作,保证检测结果的准确性。 4 甘肃畜牧兽医 2003年1(总168)期
实验十蛋白质的表达、分离纯化和鉴定
实验十蛋白质的表达、分离纯化和鉴定 第一部分蛋白质的表达、分离纯化 目的要求 （1）了解重组蛋白表达的方法和意义。 （2）了解重组蛋白亲和层析分离纯化的方法。 实验原理 目的基因在宿主细胞中的高效表达及表达的重组蛋白的分离纯化对理论研究和实验应用都具有重要的意义。通过表达能探索和研究基因的功能以及基因表达调控的机理，同时目的基因表达出所编码的蛋白质可供作结构与功能的研究。大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统，其表达外源基因产物的水平远高于其它表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌总蛋白量的80%。本实验中，携带有目标蛋白基因的质粒在大肠杆菌BL21（DE3）中，在37℃，IPTG诱导下，超量表达携带有6个连续组氨酸残基的重组氯霉素酰基转移酶蛋白，该蛋白N端带有6个连续的组氨酸残基，可通过固相化的镍离子（Ni2+）亲和层析介质加以分离纯化，称为金属熬合亲和层析（MCAC）。蛋白质的纯化程度可通过聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分析。 试剂和器材 一、试剂 [1] LB液体培养基：Trytone 10g, yeast extract 5g, NaCl 10g, 用蒸馏水配至1000mL。 [2] 氨苄青霉素：100mg/mL。 [3] 上样缓冲液(GLB)：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 1 mM β-巯基乙醇, pH8.0。 [4] 清洗缓冲液(UWB)：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8 M Urea, pH6.3。 [5] 洗脱液缓冲液：100 mM NaH2PO4, 10 mM Tris, 8M Urea, 500 mM 咪唑, pH8.0。 [6] IPTG 二、器材 摇床，离心机，层析柱（1 10 cm），蠕动泵 操作方法 一、氯霉素酰基转移酶重组蛋白的诱导 1. 接种含有重组氯霉素酰基转移酶蛋白表达载体的大肠杆菌BL21（DE3）菌株于5mL
奶牛日粮精粗比应用研究进展
奶牛日粮精粗比应用研究进展 易学武，张石蕊 （湖南农业大学动科院动物营养研究所，长沙410128） 摘要：日粮精粗比作为科学饲养奶牛的基础，已日益引起学者们的重视。该文在奶牛日粮精粗比研究历史的基础上，主要讨论了日粮精粗比在奶牛的瘤胃功能、采食行为和生产性能等方面的最新研究进展。 关键词：奶牛；日粮精粗比；瘤胃功能；采食行为；生产性能 奶业作为我国畜牧业的重要组成部分，将逐渐发展成为农业乃至国民经济的支柱产业。但与美国、加拿大、以色列等国相比，我国奶业生产起步晚、起点低，尚未建立起自己完善的奶牛生产体系，奶牛的饲养水平相对较低，尤其是我国的奶牛饲养过程中所采用精粗饲料类型及比例不整齐，泌乳期奶牛精料比例不适宜或粗料利用不适当的情况比比皆是，这些均会导致奶牛瘤胃健康受损、消化率降低、生产性能降低，甚至影响奶牛遗传潜力的发挥乃至乳成分的改变。因此，日粮精粗比是科学饲养奶牛的基础，合理的精料饲喂及其与粗饲料的配比对优化瘤胃环境及维持乳脂率具有潜在的益处。 1 日粮精粗比对奶牛瘤胃的影响 奶牛的瘤胃发酵以及消化粗饲料的功能归因于瘤胃微生物之间以及与动物宿主之间是一个高效的生态系统。瘤胃微生物的生长需要适宜的瘤胃发酵内环境。而日粮精粗比制约着瘤胃内环境、微生物合成效率及区系形成、瘤胃对粗饲料的降解以及终产物挥发性脂肪酸的消化吸收。 1.1 日粮精粗比对奶牛瘤胃细菌菌群数量的影响 1.1.1 日粮精粗比对奶牛瘤胃总细菌菌群变化的影响 关于日粮精粗比对瘤胃总细菌菌群变化的影响已有许多研究。一般而言，采食高精料的奶牛瘤胃细菌浓度往往高于采食高粗饲料的奶牛。随着奶牛摄入的可利用能量的增加，瘤胃细菌浓度会逐渐升高。不过，由于日粮精粗比同时也影响瘤胃容积，一般采食高精料的奶牛瘤胃容积小于采食高粗饲料的奶牛瘤胃容积。因此，不同日粮条件下瘤胃细菌总数（即浓度×容积）可能相当。 1.1.2 日粮精粗比对奶牛瘤胃细菌各亚群变化的影响日粮精粗比可影响瘤胃中不同种群在数量上的变化。许多研究表明（见表l）在高粗料日粮条件下，丁酸弧菌和栖瘤胃普雷沃氏菌是瘤胃中的优势菌种，而在高精料日粮条件下，反刍动物瘤胃中单细菌、消化链球菌、链球菌、乳酸杆菌以及嗜淀粉瘤胃杆菌为优势种群。
蛋白不表达常见原因及分析
蛋白不表达：常见原因及分析 根据自己体会和蛋白版的既往精华帖子，总结了没有发现蛋白质表达的原因，或者蛋白质不表达的原因，欢迎大家拍砖。 1.载体构建错误。这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别；另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。 2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。见下图
3.密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子，尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子，对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好，对真核表达系统未见得有很好的效果。曾经有某人在毕赤酵母表达某蛋白两年未果，试图将密码子优化进行表达，结果还是没有表达。一气之下将该优化的基因序列克隆到原核表达载体，表达量居然出奇地高！这是一个辛酸的笑话，但是一个真实的故事。但是有一点我可以有很大把握的说：对于真核表达，密码子优化只能起锦上添花的作用（确认有表达，以此来提高表达量），而不能雪中送炭（没有表达出来，通过密码子优化极有可能不奏效）。 4、质粒不稳定或者质粒丢失。pET系统通常比较稳定。但是你选用带氨苄青霉素抗性的载体时，也许有可能产生 β-lactamase降解了抗生素，使质粒丢失。还有一种情况是表达重组的毒素蛋白，对宿主细胞也有毒性，造成质粒丢失。这种情况多见于真核表达系统。 5、蛋白酶将蛋白降解了。这种情况常由重组蛋白本身的N-或C-端序列引起的。当蛋白N-端是Arg, Leu, Lys, Phe, Trp,或Tyr这些氨基酸时，容易遭受蛋白酶降解，此即N-末端规则。N-端是Met时，大肠杆菌可以悄悄地把这个Met偷走，特别是Met 后紧跟着一个带小侧链的氨基酸时。C-末端存在非极性氨基酸时，
仔猪日粮中的蛋白质
仔猪日粮中的蛋白 出版日期：2009年12月7日 作者：Ian Wellock和Paul Toplis 前言 高蛋白开口料已经使用很长时间了，尤其是在断奶仔猪方面的应用，因为它们可以帮助胃顺利地适应奶水向固体饲料的转变。但是高蛋白日粮也利于病原细菌在胃肠道中定殖(Prohászka和Baron, 1980)。欧盟取消在饲料中使用抗微生物生长促进剂，部分是考虑到人类疾病细菌的抗生素耐药性增强，再加上高蛋白饲料可能会增加断奶后腹泻的发生率，进而降低生产性能，增加药用饲料添加剂的使用。通过降低蛋白浓度和/或增加蛋白消化率，降低用于细菌增殖的底物，以 此调节高蛋白日粮，可能会成为使用无抗生素饲料调节动物健康的有效手段。这两种手段将在下面的文章中一一探讨。 降低日粮蛋白浓度 许多研究探讨了通过降低开口料的蛋白含量来降低断奶后腹泻，进而限制潜在内源病菌对未消化蛋白的利用。Wellock等(2006; 2008a,b)研究表明将日粮蛋白从23%降低到13%，会使粪便变硬，减少致病细菌，进而改善肠道健康，降低断奶后腹泻的风险。仔猪感染产肠毒素大肠杆菌的实验也证明如此，这是一种断奶后腹泻的主要病原体，实验仔猪是4周龄和6周龄的断奶仔猪。 图1 饲喂高蛋白日粮，4周龄和6周龄断奶仔猪感染产肠毒素大肠杆菌后，对生产性能的影响，并与未感染组比较（感染后3天；在断奶后第3天感染）。数据来自Wellock等（2008年a）。 在这些实验中氨基酸含量维持在总蛋白的赖氨酸量占总蛋白的7％。将日粮中的蛋白降低到13％，会对生长产生不利影响，但给仔猪提供18％蛋白质的日粮就不会出现这种影响，它与饲喂23％蛋白质的日粮所获得的生长性能相似。
牛日粮配方的设计
牛日粮配方的设计 一、目的要求熟悉牛精料补充料配制原则与方法，初步掌握不同泌乳阶段 奶牛TMR(日粮)和肉牛日粮配制技术。 二、实习材料计算器、电脑、奶牛和肉牛饲养标准、常规饲料营养成分表。 三、实习方法与步骤 (一)试差法设计平衡奶牛日粮 为体重为600 kg、日产奶量为30 kg、乳脂率为3.5％的奶牛配制日粮。可用饲料为全株玉米青贮、羊草、玉米、麸皮、豆粕、棉子饼、磷酸氢钙、石粉、食 盐等。 1．查奶牛饲养标准：体重600 kg、日产奶30 kg、乳脂率为3.5％的成年母牛的营养需要量见表实5-1，饲料营养成分见表实5-2。 表5－1 体重600kg、日产奶30kg、乳脂率为3.5%成年母牛的营养需要量 需要量干物质（kg）奶牛能量单位（NND）可消化粗蛋白质（g）钙（g）磷（g）维持需要7.52 13.73 364 36 27 产奶需要11.70 27.90 1 560 126 84 合计19.22 41.63 1 924 162 111 表5－2饲料营养成分含量 饲料种类干物质（kg）奶牛能量单位（NND）可消化粗蛋白质（g）钙（g）磷（g）全株玉米青贮22.7 0.36 10 1.0 0.6 羊草91.6 1.38 37 3.7 1.8 玉米88.4 2.76 59 0.8 2.1 麸皮88.6 1.91 109 1.8 7.8 豆饼90.6 2.64 366 3.2 5.2 棉籽饼89.6 2.34 263 2.7 8.1 磷酸氢钙100 230 160 石粉100 380
2．确定奶牛饲料中的精粗比例，并计算粗饲料提供的营养日粮干物质中粗饲料所占的比例按40%计，则粗饲料干物质需要=19.22×40%=7.688kg，因此确定每天饲喂玉米青贮20kg，羊草4kg，可获得营养物质如表5-3所示。 表5-3日粮粗饲料提供的营养与需要量的差额 饲料种类 数量 （kg）干物质 （kg） 奶牛能量单位 （NND） 可消化粗蛋白质 （g） 钙 （g） 磷 （g） 全株玉米青贮20 4.54 7.2 200 20 12 羊草 4 3.664 5.52 148 14.8 7.2 合计24 8.204 12.72 348 34.8 19.2 需要量的缺额11.016 28.91 1 576 127.2 91.8 3．计算精料补充料的用量及提供的营养，初拟精料补充料配方。现有玉米、麸皮、豆饼、棉子饼等精料补充料种类，初拟精料各原料用量(kg)：玉米 6.3、 麸皮2.5、豆饼1、棉子饼3。表5—4为日粮营养含量。 表5-4 初配日粮营养含量 种类 数量 （kg）干物质 （kg） 奶牛能量单位 （NND） 可消化粗蛋白质 （g） 钙 （g） 磷 （g） 玉米 6.3 5.569 17.388 371.7 5.04 13.23 麸皮 2.5 2.215 4.775 272.5 4.5 19.5 豆饼 1 0.906 2.64 366 3.2 5.2 棉籽饼 3 2.688 7.02 789 8.1 24.3 合计12.8 11.378 31.823 1 799.2 20.84 62.23 与需要量比较＋0.362 ＋2.913 ＋223.2－106.36 －29.57 4．确定钙、磷的用量尚缺的106.36 g钙和29.57 g的磷，用石粉和磷酸氢钙补充。需要加入的磷酸氢钙的量为：29.57÷160=0.185(kg)；需要加入的石粉 量为：[106.36—0.185×230]÷380=0.168(kg)。因此，体重为600 kg、日产奶30 kg、 乳脂率为3.5％的奶牛日粮组成为：羊草4 kg、青贮玉米20 kg、玉米63 kg、麸 皮2.5 kg、豆饼1 kg、棉子饼3 kg、磷酸氢钙0.185 kg、石粉0.168 kg。营养水 平：奶牛能量单位为44.543，可消化粗蛋白质为2 1472 g，钙为162.03 g，磷为