配制固体培养基操作规程
培养基的配制
培养基的配制培养基是指供给微生物、植物或动物（或组织）生长繁殖的，由不同营养物质组合配制而成的营养基质。
一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐（包括微量元素）、维生素和水等几大类物质。
培养基既是提供细胞营养和促使细胞增殖的基础物质，也是细胞生长和繁殖的生存环境。
1. 成分配方转换—在容器中加入少量水(蒸馏水、天然水)—按配方称各种药物(依次添加)—加入足够的水(一药一勺，服完药后立即盖上瓶子)。
2. 解散淀粉溶解:少量的冷水进粘贴琼脂融化温度为95-97℃，加热时需搅拌以防烧焦。
3.调整pH值用1n盐酸或1n氢氧化钠将培养基调至所需值。
4. 过滤滤纸或棉。
(有时可以省略)5. 分装一般在烧瓶或试管中灭菌。
(1)三角瓶静态培养时，100ml培养基/ 250ml烧瓶的最大值不应超过150ml 培养基/ 250ml否则，在灭菌过程中，培养基的煮沸极易污染棉塞，造成细菌污染;如果进行瓶培养，15-20ml培养基/ 250ml三角瓶应通风良好。
(2)试管包装液体培养基通常填充4-5ml，约为试管高度的1 / 4;一般固体斜培养基为3-4ml，约为试管高度的1 / 5。
6. 用绷带包扎包装完毕后，塞好棉塞，用牛皮纸包好棉塞，防止灭菌时湿气进入，弄湿棉塞。
7. 灭菌高压蒸汽灭菌按照配方中要求的温度和压力进行。
如果灭菌温度过高，营养成分就会被破坏培养基中的糖和氨基酸会使培养基的颜色变深。
8. 斜灭菌后，需要倾斜的试管应在加热过程中倾斜放置，使其固化成一个斜坡，约占试管长度的1 / 2。
9. 存储中可以使用不污染被放置在30℃后一天。
通常用牛皮纸包好，置于2-8℃冰箱中保存。
实验一 MS培养基的配制和灭菌
（七）倒出、沥去最后一次清洗用水，开始进行植 物材料的切割及接种。
逐一取出经上述灭菌处理的植物材料，置于 下面垫有经灭菌处理的培养皿（或小白瓷碟）的无 菌纱布或滤纸上，左手拿小镊子，右手拿解剖刀， 切除各切段或切块上被灭菌剂毒坏的部分。如有必 要，也可再行切分。在完成切割后，将解剖刀和小 镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒精灯焰上灼烧灭 菌之后放回原处，以便待冷却后下一切割再用。
4
一、实验目的： 熟悉外植体材料的预处理，掌
握其消毒和接种方法。
二、方法步骤： 预处理 →酒精消毒→消毒剂消毒
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（一）对采来的植物材料进行适当的预处理。除去 不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自 来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物 材料清洁程度而定。这在污染严重时特别有用。
（二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等 浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉 水。这是进一步减少污染的处理。
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（八）接着，左手拿培养瓶，将培养容器口外壁在 靠近酒精灯外焰处转燎数秒，以将其可能带有的微 生物等固定于原处；在酒精灯焰附近处，用右手拇 指与食指配合将瓶塞打开，并将其夹于左手无名指 与最小指之间；再将培养瓶口在酒精灯焰上轻转灼 烧灭菌；以右手拇指与食指配合，用大镊子夹紧一 外植体准确送入培养容器，并将其轻轻地半插入固 体培养基；将大镊子在95%乙醇中浸蘸一下，在酒 精灯焰上灼烧灭菌之后放回原处，以便待冷却后下 一操作再用；将培养瓶口及瓶塞分别在酒精灯焰上 小心地轻转灼燎数秒；盖好瓶塞，旋紧，将其置于 超净工作台的适当位置。
混合：分别加入一定量的贮备液I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和 生长调节物质及其它特殊补加物，再加蒸馏水直至 需配培养基的终体积。
调pH值：充分混合后，0.1mol/L的NaOH调节培养 基的pH值至5.8。
62-培养基配制标准操作规程文档
废弃处理等。
范围：本规程适用于微生物实验室检验用的所有培养基职责：QC检验员对本标准的实施负责。
内容:1．操作依据：《中国药典》2010年版二部2、培养基（Media）是指人工配制的生物营养物质，即用人工方法将多种物质按各种微生物生长繁殖的需要配成的一种混合营养物。
通常指干粉培养基（Dehydrated Medium）和配制好的琼脂（Agar）、肉汤（Broths）、稀释液（Diluents）等等。
3.程序3.1.购买3.1.1.质量控制部提出采购计划，并填写《采购计划》，注明培养基名称、数量、质量要求、生产厂家等，由相关人员审核，交采购部采购。
3.1.2.培养基买回后，由使用部门填写领料单，由物流部发出。
3.1.3.领回后的干粉培养基，开瓶后应贴上《开启标签》，注明开口日期、有效期至、开口人、贮存条件，并且不得把原标签覆盖。
使用时填写《干粉培养基使用记录》。
3.1.4.检验人员必须依据培养基生产厂家的操作说明进行配制，并填写《培养基配制使用记录》，配制记录上注明所用培养基的批号；盛装配制好的培养基的容器外应贴《培养基标签》，标签应注明：名称、批号、配制人、配制日期、有效期至等信息。
批号定义为：同一批灭菌的培养基为一批，批号编号方式为年XX，月XX，日XX，流水号XX，例如：2010-05-01配制的培养基第一批灭菌的培养基批号为：。
3.1.5.配制好的培养基应在一定时间内，按说明书规定时间进行灭菌，避免微生物滋生。
3.1.6.必要时，灭菌后的培养基在配制后必须进行pH值的测定以确保符合药典及生产厂家的规定。
3.2.培养基质量控制3.2.1.为了保证微生物检验的质量，在使用前，每批配制好的培养基在灭菌后用于供试品检验之前都应进行培养基质量控制检查。
3.2.2.无菌检查用培养基的适用性检查，包括无菌性检查和灵敏度检查；微生物限度检查用培养基的适用性检查指计数培养基适用性检查；控制菌检查用培养基的适用性检查包括促生长能力检查、抑制能力检查和指示能力检查。
培养基的配制
一、实验所需的仪器设备和用具。
二、实验安排与要求：将全班若干小组（6-7人），每小组配制500 mlMS固体培养基，三、边示范边讲解实验方法和步骤1、计算并填写培养基成分单计算公式：∨母液＝∨配制÷母液倍数∨激素＝∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度2. 每组取500ml的烧杯一只，加300ml蒸馏水，用天平称4g琼脂放入蒸馏水中，在电炉上加热溶解。
称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。
3. 按配方取出各种母液，放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中，用玻璃棒搅动混合，并加蒸馏水定容至500ml。
4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8，可用PH精密试纸或酸度计测定。
5. 用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。
6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口，并做好标记。
7. 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒桶内，将外层锅内加水至水位线。
盖好锅盖，上好螺丝，接通电源升温。
待锅内温度达100。
C（0.05kgf/cm2或0.005MPa）左右时，打开排气阀排净锅内冷空气，然后关闭排气阀，继续加热至温度达到121。
C（1.05kgf/cm2或0.103MPa）时，维持20~30min即可切断电源，让锅内气压自然下降，当压力降到零点后，打开排气阀，排出剩余蒸汽，再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。
8. 培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后，存放于阴凉干燥洁净处待用。
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验试验一：培养基的配制学号：200730030120 班级专业：07茶学姓名：张晓菊联系电话：136****3981实验目的：1、了解培养基的组成，掌握培养基的配制原理和步骤。
2、了解影响培养基配制的因素。
3、了解灭菌基本操作。
4、为植物的离体培养创造营养条件。
实验原理：培养基的类别，依据培养基中是否加有固化剂可分为固体培养基和液体培养基，前者因加有固化剂如琼脂或卡拉胶而呈固体状态，后者不加固化剂，培养基为液体。
固体培养基的配制及灭菌
实验二固体培养基的配制与灭菌一、目的要求1、通过实验的准备工作，掌握培养皿、三角瓶等器皿的洗涤技能；2、通过固体培养基的配制，掌握配制固体培养基的基本技能；3、掌握培养基的灭菌方法与分装方法。
二、仪器与用具1、仪器：各类天平、电炉、高压灭菌锅；2、用具：烧杯、量筒、玻璃棒、培养皿、三角瓶、标签、pH试纸、报纸或牛皮纸；3、试剂：0. 1 -1N NaOH，0.1-1N HCl，各类培养基母液，琼脂粉，蒸馏水。
三、方法步骤（一）相关器皿的洗涤1、将使用完毕的培养器皿中的培养基残渣清除干净（倒入垃圾桶而非下水道中）2、用洗衣粉或肥皂水浸泡培养器皿后进行清洗3、用清水冲洗培养器皿3遍4、用蒸馏水冲洗1-3遍5、将清洗干净的培养器皿倒扣于铺好报纸的桌面上或试管架上晾干备用。
（二）培养基的配制1、将培养基母液按照以下次序摆放于试验台上：大量、微量、铁盐、有机、生长调节物质2、取适量蒸馏水放入容器3、按需要量依次取母液（若使用移液管，需专管专用，不可混用；若用量筒，已取出的多余母液严禁倒回原试剂瓶中）4、加入蔗糖（30g/L）溶解5、加入蒸馏水，使溶液体积比最终体积略少6、调节PH值（pH=5.8）7、加入琼脂（6-10g/L）8、定容至终体积（三）培养基的分装与灭菌1、用三角瓶培养（1）将上述培养基煮开2-3min，使琼脂溶化均匀（2）趁热将培养基分装入洗净晾干的三角瓶中（3）扎好瓶口（4）高压灭菌（5）将灭菌后的培养基摆放于平面上，待凝固后存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用2、用培养皿培养（1）将培养基进行高压灭菌后趁热取出（2）趁培养基凝固之前，在超净工作台上将灭菌后的培养基分装至无菌培养皿中（3）将分装好的培养皿平置于超净工作台上，待其凝固，并吹干培养皿盖上的水汽（4）将凝固吹干后的培养基用干净的保鲜膜包好，存放于20℃以下的洁净橱柜中，并贴好标签备用。
（四）高压灭菌方法1、用牛皮纸或报纸等将玻璃器皿和金属器械包扎好2、在高压灭菌锅内装一定量的蒸馏水，水必须淹没电热丝，严禁干烧3、把分装好培养基的培养瓶、包扎好的玻璃器皿和金属器械、装有蒸馏水的玻璃瓶等物品放入高压灭菌锅内（注意带盖的密封试剂瓶不要拧太紧，要留有一定的缝隙防止因热胀冷缩而造成的瓶体破裂或变形），盖好高压锅盖，成对拧好锅盖上的螺帽，打开排气阀，开启电源（严禁对易燃易爆易挥发的物品进行高温高压灭菌）4、当排气阀开始放气时计时3-5分钟，待排出的气体呈持续均匀的白色蒸汽时关闭排气阀（关闭排气阀时注意防止蒸汽烫伤）5、当高压灭菌锅显示锅内温度达到121℃时开始计时，使温度稳定在121℃以上（锅内压力严禁超过0.165 M Pa），保持15-20min6、切断电源，让高压灭菌锅自然冷却，必须等压力降到0.05 M Pa以下时打开排气阀（无论何种情况下，严禁在压力超过0.05 M Pa时开排气阀），待压力指针降到零，锅内外压力一致后方可打开锅盖，取出锅内物品（永远记得要先开排气阀，再开高压灭菌锅锅盖）。
培养基配制标准操作规程
培养基配制标准操作规程一、目的：规范培养基配制操作流程，确保培养基的质量符合要求。
二、适用范围：本规程适用于实验室培养基配制操作。
三、岗位责任（1）实验员：根据实验需要，按照配方准确称量试剂，按照标准操作流程进行配制，保证培养基的质量。
（2）实验室主任：对实验员所配制的培养基进行审核，对质量不符合要求的培养基要求实验员进行整改，并记录在实验室日志中。
四、基础设施和基本设备实验室应配备足够的天平、电子计时器、玻璃棒、玻璃瓶、蒸馏水机、高压灭菌器等基础设备及设施。
五、培养基配制操作流程（1）准备试剂应先仔细阅读所选培养基的配方，根据试剂名称和精确剂量，准备称量瓶、试剂架、天平等计量仪器。
配制时应避免手触、相沾等操作，避免交叉污染。
（2）称量试剂初次粗择试剂后，建议先将试剂转移到称量室中，配合现代科技的天平，便可精确计算配比比例。
所有试剂称重时必须使用内配计量，不能使用外配以避免误差增大影响试剂配比。
（3）配制溶液将所需试剂依照标准配比和数量先加入容器，再用分度水小心勾兑均匀，用方法如下：先将容器中整量标容量的水加入到标记线以下。
然后倒入试剂，如对称量试剂的总质量要求是1000 ml，而已注入200 ml水时，即将剩余的实验试剂灌入到950毫升，再次将液面加到1000毫升，如此反复操作完整。
（4）用自来水采样，并抽真空去泡水样的采集，我们应该在步入实验室后在首先采用自来水进行放置，保留水样大概20分钟后，用玻璃棒试管器分别进行抽取。
培养基液体所产生的泡沫和气泡需要用抽真空的方式去除，以确保培养基的质量。
（5）实验室水龙头口淋洗容器本次所述的辛勤劳累的操作一旦完成，容器内部的物质已经被彻底摧毁，真正变成了医学科学上可行的培养基，此时我们应该用干净的管子将洗涤水彻底排完，真正保障实验室完全无菌的标准。
（6）高压灭菌用高压灭菌锅进行消毒，根据不同的材质和设备使用说明，对耐高温不锈钢的容器用121度高压灭菌20分钟，可以保证彻底去除培养基中的细菌。
培养基配制和灭菌方法验证
培养基配制和灭菌方法验证一、培养基配制培养基是一种供养菌落生长的基础物质，可以提供细菌所需的营养物质和环境条件。
培养基的配制是非常关键的步骤，如果配制不当会影响到培养菌落的生长和观察结果的准确性。
1.1固体培养基的配制固体培养基是通过在液体培养基中加入凝固剂（如琼脂）使其凝固，形成固体的培养基。
固体培养基可以用来分离纯菌、观察菌落特征以及保存菌种。
配制固体培养基的主要步骤如下：步骤一：准备配方根据不同的菌种需要，选择适当的培养基配方。
常见的培养基如营养琼脂(NA)、大肠杆菌琼脂(MacConkey)、血琼脂(Blood Agar)等。
步骤二：计量和溶解根据配方，按照适当的比例称量需要的成分，并加入适量的蒸馏水。
然后，将成分加热溶解，直至成分完全溶解。
步骤三：凝固将已溶解的培养基液倒入培养皿或试管中，装入适量的培养基液。
温度下降至约50℃时，可以添加相应的抗生素(如青霉素)等，促进无菌条件的保持。
待培养基液凝固后，即可进行灭菌处理。
1.2液体培养基的配制液体培养基主要用于培养大量的菌落或进行革兰氏染色等实验。
液体培养基的配制步骤与固体培养基配制类似，只是不需要加入凝固剂。
为了确保培养基无菌，常常需要进行灭菌处理。
2.1常见的灭菌方法常见的灭菌方法主要包括以下几种：1)高压灭菌法：利用高温高压的环境，将培养基中的微生物逐一被杀死。
常用的高压灭菌法是使用高压蒸汽灭菌器进行处理。
2)紫外线灭菌法：使用紫外线灭菌器，将细菌暴露在紫外线下，排除细菌生长的可能性。
3)化学灭菌法：使用化学物质，如乙醛、次氯酸钠等，浸泡培养基或在培养基上喷雾，杀灭细菌。
2.2检验培养基灭菌效果的验证方法验证培养基灭菌效果的方法主要有两种：物理指标法和培养法。
1)物理指标法：即通过检测物理指标，如温度、压力等，来验证灭菌效果。
例如，在培养基中放置一个温度计，通过测量温度变化来判断灭菌的有效性。
2)培养法：即将培养基在灭菌前后进行对照培养，观察菌落的生长情况，或通过采样培养基，进行菌种分离和鉴定。
培养基配制标准规程
目的：建立培养基的配制方法，保证培养基质量稳定可靠，使检验结果准确可信。
适用范围：公司所有培养基责任人：质量管理部主任、检验员内容：1、培养基管理员应具有一定的微生物专业知识并经过培训合格。
2、培养基制备前的准备工作。
2.1、制备培养基所用的玻璃器皿，如吸管、试管、三角瓶和平皿等。
新的玻璃器皿（首次使用）和再次使用的分别按各自批准的规程洗涤、干燥。
2.2、干燥后器皿按规定程序进行灭菌。
2.3、已灭菌的器皿按规定要求保存，并在规定期限内用完。
2.4、用前检查质量（颜色、结块等），变质不符合要求的不得使用。
3、培养基的制备3.1、按处方生产的符合规定的脱水培养基3.2、配制：所用溶剂为纯化水。
脱水培养基应完全溶解于水中，再行分装与灭菌。
配制时若需加热助溶。
应注意不要过度加热，避免培养基颜色变深。
所用器具应用纯化水充分冲洗，以消除清洁剂和外来物质的残留。
3.3、灭菌：培养基配制后应在2小时内灭菌，避免细菌繁殖。
应按生产商提供的或验证的参数进行湿热灭菌，pH值范围3.4、认真填写配制记录，内容有：名称、配制批号、操作方法中重要参数（时间、压力、温度）、配制日期、配制者、使用期限。
3.5、在每个已灭菌的培养基容器外标明名称、配制批号、配制日期、使用期限。
4、培养基的质量检查：对初次使用或新购进的培养基均要进行适用性检查，并做好适用性记录，记录内容：名称、配制日期、接种菌名称、接种菌培养（阳性检查）结果、未接种菌培养（阴性检查）结果、结论、检查日期、检查者。
5、经检查验证合格的培养基方可准许使用，否则不准使用。
6、培养基的保存6.1、琼脂培养基不得在0℃或0℃以下存放，以防破坏凝胶特性。
6.2、配制好的培养基应保存在2-25℃，避光的环境，若保存于非密闭容器，一般不超过3周。
6.3、融化的培养基应置于45-50℃的水浴中。
6.4、倾注培养基时应擦干容器外表面的水分，以免容器外壁的水滴进入培养皿造成污染。
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操作顺序
操作内容
操作要求
1
填写培养基成分单
按所用培养基配方及其配制量，准确计算出各种成分母液及琼脂、蔗糖的用量，并按大、微、铁、有、调、琼、糖、pH的顺序，填写在“配制培养基成分单”上。
2
水锅加热
在做培养基专用的不锈钢锅内，加进约为欲配培养基量的70-80%的蒸馏水或软化水（澄清后的凉开水），放在电炉上加热。
19
高压锅排水
打开排水阀，放尽锅内存水，以减少积垢。
说明
一、制定本操作规程的目的是：（1）防止发生差错，提高培养基质量；（2）使配制过程井然有序，省时、省力、节省能源，提高工作效率。
二、制定本操作规程所依据的条件是：（1）一人操作，一次配制8升培养基；（2）用2000W的电炉为水锅加热；（3）所用高压锅是“立式电热压力消毒器”（工作压力：137Kpa），并配有3-6KV的稳压电源控制器，因此，当上述条件有变化时，就应对相关操作顺序和操作要求作必要的调整或变动。
3
高压锅加水
关闭高压锅排水阀，加软化水至安全水位线。
4
称取琼脂、蔗糖
称取前，剪碎干胶条状琼脂，破碎蔗糖结块，须按1%以上的精度准确称量。
5
摆放培养瓶
按预定分装瓶数，将洗净、晾（烘）干的培养瓶，在桌上摆放整齐。
6
量取和混溶母液
把贮存各种所需母液的试剂瓶，按培养基成分单所列顺序摆放整齐，再按配方用量顺序量取各成分母液，并混溶于烧杯中。
12
分装培养基
按不同组培目的所需的每瓶培养基用量，将培养基均匀分装于摆好的培养瓶内。然后在瓶口盖上消毒好的棉塞或封口膜。
13
高压锅加热
关闭进水口及放气阀，打开排气阀，通电加热。
14
培养基（瓶）封口
棉塞上加盖牛皮纸（或直接用封口膜），并用棉线扎紧封口。
15
培养基（瓶）装锅
瓶口向上，略向中心倾斜，瓶口不可贴于锅壁（防止冷凝水进入瓶内）。码放均匀，上方加盖三层牛皮纸吸湿，装锅不可过满，以加盖后不堵塞安全阀和放气阀的孔口为度。
7
加琼脂
当水锅温度达90℃左右时，加进称量好的琼脂，继续加热，不断匀速搅拌，严防糊锅。
8
加蔗糖
待琼脂完全溶化后，撒入蔗糖，不停地搅拌。
9
加母液混溶液
蔗糖溶化后，断电停止加热，边搅拌、边徐徐倒入母液混溶液。
10
加水定容
加蒸馏水（或软化水）至标示欲配培养基量的锅壁记号。
11
调pH值
用精密pH试纸，与比色卡比较：偏酸，滴入1mol/L的NaOH液；偏碱，滴入1mol/L的HCl液，少量多次进行调节，直至合乎
封盖时应按顺时针顺序拧紧固定螺栓。在高压灭菌锅控制面板上选择温度121℃，时间为20分钟，按确认键开始灭菌。
17
培养基（瓶）出锅
当灭菌结束后，高压灭菌锅自动断电，打开锅盖，取出培养基（瓶）。
18
培养基（瓶）存放
将出锅的培养基（瓶）整齐平放于接种室的存放架上，并明确标示其培养对象（种类、品种）、培养目的（诱导、继代、生根）或其它特定用途以及配制日期。