动物组织石蜡切片制作页PPT文档
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动物组织石蜡切片制作PPT课件
石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ 石蜡Ⅲ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min 30min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min 30min
10
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
2021/3/7
8
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
2021/3/7
3
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
2021/3/7
4
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12） （13）
2021/3/7
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min 30min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min 30min
10
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
2021/3/7
8
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
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方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
2021/3/7
4
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12） （13）
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操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ
《实验三石蜡切片法》课件
提高实验安全性：加强实验安全防护措施，确保实验人员的安全
医学领域：用于病理学研究，帮助医生诊断疾病
科研领域：用于生物医学研究，探索细胞和组织结构
教育领域：用于教学实验，帮助学生理解生物结构和功能
工业领域：用于材料科学和生物技术研究，开发新型材料和生物制品
汇报人：
染色液选择：根据实验需求选择合适的染色液，如苏木精和伊红染色液
切片处理：将石蜡切片放入染色液中，浸泡一段时间
染色时间：根据染色液的浓度和切片的厚度，确定染色时间
染色效果观察：染色完成后，用显微镜观察切片染色效果，判断染色是否成功
观察染色后的石蜡切片，记录观察到的现象
对比染色前后的石蜡切片，分析染色效果
02
PART THREE
石蜡切片是组织学和病理学研究中常用的切片方法
石蜡切片的主要材料包括石蜡、切片刀、切片机等
石蜡切片的过程包括固定、脱水、包埋、切片、染色等步骤
石蜡切片的优点是切片薄、透明度高、易于观察和保存
添加标题
添加标题
添加标题
添加标题
显微镜结构：目镜、物镜、载物台、光源等
显微镜类型：光学显微镜、电子显微镜等
显微镜功能：观察细胞、组织、微生物等
显微镜操作：调节焦距、调整光源、观察样品等
苏木精：用于细胞核染色
伊红：用于细胞质染色
甲基紫：用于细胞核和细胞质染色
荧光染料：用于荧光显微镜观察
刀片：用于切割石蜡切片
盖玻片：用于覆盖石蜡切片
石蜡：用于制作石蜡切片
载玻片：用于放置石蜡切片
石蜡切片机：用于制作石蜡切片
收获：掌握了三石蜡切片法的基本操作步骤和注意事项
不足：实验过程中出现了一些操作失误，影响了实验结果
石蜡切片PPT课件
• 透蜡温度要恒定，不第可21忽页/共高26忽页 低；操作要迅速，在
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
第16页/共26页
16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
第3页/共26页
【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
石蜡切片机
第22页/共26页
横向调整旋钮
蜡块竖向调整旋钮 蜡块固定器锁紧扳手 蜡块钳 旋转手轮 刀片固定旋钮
手轮停止旋转手柄 滑动刀座
离合器
切片接收托盘
切片厚薄粗调器 切片厚薄微调器
切片刀倾斜角度调整扳手
第23页/共26页
第24页/共26页
第17页/共26页
17、脱水Ⅱ
• 放入95%乙醇中洗去多余的红色，然后放入无水乙醇中3～5min。最后用吸水纸吸干多余的乙醇。 第18页/共26页
18、透明
• 切片放入二甲苯-乙醇等量混合液中约5min，然后放入纯二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3～5min。二甲苯应尽量保持 无水，应经常更换，或用纱布包无水硫酸铜放入染色缸内吸收水分。切片如在二甲苯中出现白雾现象，说 明脱水未尽，应退回乙醇中重新脱水，否则切片难以镜检。
第14页/共26页
14、漂洗
• 切片再放入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维 成分无色为标准。然后放入蒸馏水中漂洗一次。
第15页/共26页
15、脱水Ⅰ
• 切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5min。
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16、复染
• 用0.5%伊红乙醇液对比染色2~5min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木精染细胞核的浓淡相配合， 如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡 染。可在伊红乙醇液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
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【实验过程】
石蜡切片Ⅰ
• 取材 • 固定 • 洗涤 • 脱水 • 透明 • 透蜡 • 包埋 • 切片 • 贴片
动物组织石蜡切片制作
具体步骤
• 100％酒精：二甲苯（1：1）0.5－1小时。 二甲苯（Ⅰ）20—30分钟。 二甲苯（Ⅱ）10—20分钟。 浸蜡（Ⅰ）40分钟。 浸蜡（Ⅱ）40分钟。 组织包埋。 蜡块整修。切片。贴好的切片置于60℃恒 温箱内干燥2小时。
H.E染色
• 二甲苯Ⅰ脱蜡 10分钟。 二甲苯Ⅱ脱蜡 10分钟。 100％酒精Ⅰ2－5分钟。 100％酒精Ⅱ2－5分钟。 95％酒精1－2分钟。 90％酒精1－2分钟。 85％酒精1－2分钟。 自来水洗 片刻 蒸馏水 片刻 苏木素 10—15分钟 自来水洗 1—2分钟 1%盐酸酒精分化 0.5—1分钟 流水冲洗 蓝化10分钟—至数小时
动物组织石蜡切片制作
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌 握动物组织制片技术
实验用品
1．动物的组织。 2．器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载 玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90% 乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、 中性树胶。
石蜡切片的制作
H.E染色
• 蒸馏水冲洗 1－2分钟 70％酒精1－2分钟 85％酒精1－2分钟 90％酒精1－2分钟 伊红（醇溶）5-20秒 95％酒精（Ⅰ）1秒 95％酒精（Ⅱ）1秒 100％酒精（Ⅱ）1－210分钟 中性树胶封片 镜检
基本制作过程：
1．取材
2．固定 3．脱水、透明及浸蜡
4．包埋
5. 切片 6. 染片 7. 封片
石蜡切片的制作技术
• 组织取材1*1*0.5厘米，固定于福尔马林一周左右。 组织流水冲洗过夜。 70％酒精2－4小时。 85％酒精2－4小时。 95％酒精（Ⅰ）2－3小时。 95％酒精（Ⅱ）1－2小时。 100％酒精（Ⅰ）1－2小时。 100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时。
【大学实验】动物组织石蜡切片制作-PPT课件
docin/sundae_meng
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μ m。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的石 蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
docin/sundae_meng
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
docin/sundae_meng
步骤 （1） （2） （3） （4） （5） （6） （7） （8） （9） （10） （11） （12）
操作项目 60%乙醇 70%乙醇 80%乙醇 90%乙醇 95%乙醇Ⅰ 95%乙醇Ⅱ 无水乙醇Ⅰ 无水乙醇Ⅱ 二甲苯Ⅰ 二甲苯Ⅱ 石蜡Ⅰ 石蜡Ⅱ
小鼠 15min 15min 20min 20min 20min 20min 20min 20min 5min 3min 10min 20min
大鼠 20min 20min 30min 30min 30min 20min 30min 30min 8min 5min 15min 25min
家兔 30min 30min 40min 40min 40min 30min 40min 40min 10min 5min 20min 30min
《石蜡切片技术》课件
2 不足
制备石蜡切片需要复杂的操作和专业设备，同时样本可能发生失真和伪影。
石蜡切片技术的发展前景
科技创新
随着科技的
石蜡切片技术在不同领域的应 用将促进跨学科的合作和创新。
新发现
通过石蜡切片技术，我们将有 机会发现更多细胞和组织的奥 秘，推动科学的发展。
总结和展望
《石蜡切片技术》是一项重要的科学技术，它在医学和科学研究中发挥着重要作用。我们相信随着技术的不断 发展，石蜡切片技术将为我们带来更多的新发现和突破。
《石蜡切片技术》PPT课 件
欢迎来到《石蜡切片技术》的世界！让我们一起探索这个令人着迷的技术， 揭开它的奥秘！
技术背景
在科学研究和医学领域中，石蜡切片技术起着重要作用。了解其背景将有助于我们深入了解该技术的重要性和 应用。
石蜡切片技术的定义与原理
1
定义
石蜡切片技术是一种用于制作细胞切片的方法，它可以保持细胞结构的完整性。
2
原理
该技术的原理是将固定的组织样本浸入石蜡中，使其固化，然后使用显微切片机 切割出薄片。
3
挑战
石蜡切片技术需要严格的控制温度和时间，以确保薄片的质量和细胞结构的完整 性。
石蜡切片制备方法
石蜡切片技术有多种制备方法，包括冷冻切片、热切片和冷热切片等。每种 方法都有其适用的情况和优缺点。
石蜡切片技术的应用领域
医学研究
石蜡切片技术在病理学和生 物医学研究中广泛应用，有 助于揭示疾病发生的机制。
植物学
通过石蜡切片技术，科学家 可以观察植物的细胞结构、 组织构造和生长过程。
材料科学
该技术也用于材料科学中， 用于观察材料的结构和性能。
石蜡切片技术的优势与不足
1 优势
制备石蜡切片需要复杂的操作和专业设备，同时样本可能发生失真和伪影。
石蜡切片技术的发展前景
科技创新
随着科技的
石蜡切片技术在不同领域的应 用将促进跨学科的合作和创新。
新发现
通过石蜡切片技术，我们将有 机会发现更多细胞和组织的奥 秘，推动科学的发展。
总结和展望
《石蜡切片技术》是一项重要的科学技术，它在医学和科学研究中发挥着重要作用。我们相信随着技术的不断 发展，石蜡切片技术将为我们带来更多的新发现和突破。
《石蜡切片技术》PPT课 件
欢迎来到《石蜡切片技术》的世界！让我们一起探索这个令人着迷的技术， 揭开它的奥秘！
技术背景
在科学研究和医学领域中，石蜡切片技术起着重要作用。了解其背景将有助于我们深入了解该技术的重要性和 应用。
石蜡切片技术的定义与原理
1
定义
石蜡切片技术是一种用于制作细胞切片的方法，它可以保持细胞结构的完整性。
2
原理
该技术的原理是将固定的组织样本浸入石蜡中，使其固化，然后使用显微切片机 切割出薄片。
3
挑战
石蜡切片技术需要严格的控制温度和时间，以确保薄片的质量和细胞结构的完整 性。
石蜡切片制备方法
石蜡切片技术有多种制备方法，包括冷冻切片、热切片和冷热切片等。每种 方法都有其适用的情况和优缺点。
石蜡切片技术的应用领域
医学研究
石蜡切片技术在病理学和生 物医学研究中广泛应用，有 助于揭示疾病发生的机制。
植物学
通过石蜡切片技术，科学家 可以观察植物的细胞结构、 组织构造和生长过程。
材料科学
该技术也用于材料科学中， 用于观察材料的结构和性能。
石蜡切片技术的优势与不足
1 优势
石蜡切片的制作.47页PPT
石蜡切片的制作.
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
பைடு நூலகம்
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
36、如果我们国家的法律中只有某种 神灵， 而不是 殚精竭 虑将神 灵揉进 宪法， 总体上 来说， 法律就 会更好 。—— 马克·吐 温 37、纲纪废弃之日，便是暴政兴起之 时。— —威·皮 物特
38、若是没有公众舆论的支持，法律 是丝毫 没有力 量的。 ——菲 力普斯 39、一个判例造出另一个判例，它们 迅速累 聚，进 而变成 法律。 ——朱 尼厄斯
40、人类法律，事物有规律，这是不 容忽视 的。— —爱献 生
பைடு நூலகம்
谢谢
11、越是没有本领的就越加自命不凡。——邓拓 12、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的错儿。——爱尔兰 13、知人者智，自知者明。胜人者有力，自胜者强。——老子 14、意志坚强的人能把世界放在手中像泥块一样任意揉捏。——歌德 15、最具挑战性的挑战莫过于提升自我。——迈克尔·F·斯特利
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动物组织石蜡切片制作
动物学教研室 顾 勇
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动 物组织制片技术
实验用品
1．动物的组织。 2．器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载
玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%
乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、 中性树胶。
Hale Waihona Puke • 【切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例： 1．将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀 至合适位置（刀刃与蜡块切面呈5°夹角）旋转式切片机切取组织，是由下 向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的 部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜 面朝上）。 2．左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最 大切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续 旋转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上 端，正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整， 一般水温为45℃左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对 于展片困难的切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水 盒内可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少 切片刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切 片。 3．捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于 载物片右侧1/3与2/3交界处为佳，并注意整齐美观。 4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温 度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
步
骤
操作 项 目
（1）60%醇乙
（2）70%醇乙
（3）80%醇乙
（4）90%醇乙 95%乙
小大家
鼠鼠兔
15 20 30 mmm iii nnn
15 20 30 mmm iii nnn
实验1 石蜡切片的制做技术
• 70％酒精2－4小时。 85％酒精2－4小时。 95％酒精（Ⅰ）2－3小时。 95％酒精（Ⅱ）1－2小时。 100％酒精（Ⅰ）1－2小时。 100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时。 100％酒精：二甲苯（1：1）0.5－1小时。 二甲苯（Ⅰ）20—30分钟。 二甲苯（Ⅱ）10—20分钟。 浸蜡（Ⅰ）40分钟。 浸蜡（Ⅱ）40分钟。 组织包埋。 蜡块整修。切片。贴好的切片置于60℃恒温箱内 干燥2小时。
方案二 石蜡切片的制作
四、贴片： 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起， 铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片 垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起， 拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要 写得小而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋 白质凝固后即可染色。
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μm。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的 石蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
方案二 石蜡切片的制作
二、切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内， 2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋 紧刀架 3、根据需要调整切片厚度。 4、修整切片，直到切出完整的最大组织切 面后，再行切制。 5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起， 拉下切片带
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
实验1 石蜡切片的制做技术
• 试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊 红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸， 200ml容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖 玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油 空闲时间：参观冰冻切片的制做 石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义） 组织取材2毫米厚度，固定于福尔马林2小时。 组织流水冲洗1－2小时。
20 30 40 mmm iii nnn
20 30 40 mmm iii nnn
20 30 40 mmm
注意事项
• 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。 △同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不 能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太 大。 △皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。 △神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。 △包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、 蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组 织与蜡分离。 △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内。
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。
动物学教研室 顾 勇
实验目的
• 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动 物组织制片技术
实验用品
1．动物的组织。 2．器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载
玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。 3．试剂：60%乙醇、70%乙醇、80%乙醇、90%
乙醇、95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、 中性树胶。
Hale Waihona Puke • 【切片制作过程】 以使用旋转式切片机石蜡切片为例： 1．将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀 至合适位置（刀刃与蜡块切面呈5°夹角）旋转式切片机切取组织，是由下 向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的 部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜 面朝上）。 2．左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最 大切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续 旋转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上 端，正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整， 一般水温为45℃左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对 于展片困难的切片经30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水 盒内可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少 切片刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切 片。 3．捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于 载物片右侧1/3与2/3交界处为佳，并注意整齐美观。 4．烤箱60℃左右烘烤切片30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温 度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。
方案一:病理石蜡切片的制作
（一）石蜡组织块制作 1．取材。 2．固定。 3．脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。 4．包埋
步
骤
操作 项 目
（1）60%醇乙
（2）70%醇乙
（3）80%醇乙
（4）90%醇乙 95%乙
小大家
鼠鼠兔
15 20 30 mmm iii nnn
15 20 30 mmm iii nnn
实验1 石蜡切片的制做技术
• 70％酒精2－4小时。 85％酒精2－4小时。 95％酒精（Ⅰ）2－3小时。 95％酒精（Ⅱ）1－2小时。 100％酒精（Ⅰ）1－2小时。 100％酒精（Ⅱ）0.5－1小时。 100％酒精：二甲苯（1：1）0.5－1小时。 二甲苯（Ⅰ）20—30分钟。 二甲苯（Ⅱ）10—20分钟。 浸蜡（Ⅰ）40分钟。 浸蜡（Ⅱ）40分钟。 组织包埋。 蜡块整修。切片。贴好的切片置于60℃恒温箱内 干燥2小时。
方案二 石蜡切片的制作
四、贴片： 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起， 铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻 轻拉展以切片无皱褶为最好。 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片 垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起， 拨正切片位置。 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要 写得小而清楚、端正。 4、贴好的切片置于60℃恒温箱内干燥2小时，蛋 白质凝固后即可染色。
（二）石蜡切片制作
• 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切 片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚 度为一般4~6μm。 【切片前的准备】 1、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的 石蜡，一般留下约2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留 得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则 影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却 一定时间。 2、切片用品准备 （1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一 次性切片。 （2）载物片：载物片经清洁液、95%乙醇处理后备用。 （3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。 （4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。
方案二 石蜡切片的制作
二、切片的步骤： 1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内， 2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋 紧刀架 3、根据需要调整切片厚度。 4、修整切片，直到切出完整的最大组织切 面后，再行切制。 5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起， 拉下切片带
方案二 石蜡切片的制作
三、切片的注意事项 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、 切片刀的好坏有关外。 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产 生震动。 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过 重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却， 可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。
实验1 石蜡切片的制做技术
• 试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊 红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸， 200ml容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖 玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油 空闲时间：参观冰冻切片的制做 石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义） 组织取材2毫米厚度，固定于福尔马林2小时。 组织流水冲洗1－2小时。
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注意事项
• 一般实质性脏器的组织及肿瘤组织应把最大切面朝下包埋；食管、胃、 肠等组织须将管壁横断面朝下包埋，若在同一蜡块中包埋数块管壁组 织时，应平行横埋且黏膜面（内膜）的方向应一致，以便切片及观察。 △同一蜡块包埋多个组织块时，组织的性质应相同，方向要一致，不 能把大小、厚薄差别悬殊的组织包埋在一起，组织块间的距离不能太 大。 △皮肤、骨等难切组织及需要连续切片的组织都应单独包埋。 △神经、脊髓及需要定向包埋的组织应注意组织块的相互关系。 △包埋（尤其在室温较低的情况下）操作应迅速，防止组织块变凉、 蜡液凝结及出现气泡，组织块与蜡液不能很好凝固定在一起，导致组 织与蜡分离。 △遇有管腔或空洞标本与小标本同埋一个蜡块时，不能将小标本放入 其他标本的管腔或空洞内。
方案二 石蜡切片的制作
1—6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。 一、切片前的准备： 1、恒温水浴锅首先预热至35℃—40℃。 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。 3．载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片
剂。 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以20°-30°为佳。 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。