纸片扩散法在药敏试验中的应用
纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制

纸片扩散法抗菌药物敏感试验的质量控制目的抗菌药物敏感试验是临床抗菌治疗的指导性实验。
关系到抗菌药物治疗成败。
方法多种方法中选WHO推荐使用的利于基层医院开展的纸片扩散法。
结果日常常规操作中应控制好平板厚度、琼脂浓度、细菌接种量、琼脂种类及多种因素。
结论在严把纸片扩散法抗菌药物敏感实验的操作过程的同时,有必要做好质量控制,确保结果准确性,服务于临床。
标签:纸片扩散法;抗菌药物敏感试验;质量控制Quality Control of Anti-bacterial Drug Sensitive Test of Paper Diffusion MethodZHONG Wei-pingWeihai Municipal Second Hospital Affiliated to Qingdao University,Weihai,Shandong Province,264200 China[Abstract] Objective The sensitive test of antimicrobial agents is the guiding experiment of clinical antibacterial therapy,which is related to the success or failure of antibacterial drug treatment. Methods The paper diffusion method of the primary hospital is recommended by the WHO among the various methods. Results The plate thickness,AGAR concentration,bacterial inoculation,AGAR variety and various factors should be controlled in routine operation. Conclusion In strict control of the paper diffusion method of antimicrobial susceptibility testing process,it is necessary to grasp the quality control to ensure the accuracy of the results,so as to serve the clinical practice.[Key words] Paper diffusion method;Sensitive test of antimicrobial agents;Quality control在臨床感染性疾病、菌种的耐药性、抗生素的合理应用等。
纸片扩散法实验报告

1. 掌握纸片扩散法(Kirby-Bauer法)的原理、操作方法和结果判读。
2. 了解纸片扩散法在抗菌药物敏感试验中的临床意义。
二、实验原理纸片扩散法是一种常用的抗菌药物敏感试验方法,其原理为:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种待检菌的琼脂平板上,纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后,不断地向纸片周围扩散,形成递减浓度梯度。
在纸片周围抑菌浓度范围内,待检菌的生长被抑制,从而产生透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映检测菌对测定药物的敏感程度,并与该药对待检菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
三、实验材料1. 标本:大肠埃希菌(18~24小时非选择性培养基上纯培养物)。
2. 试剂:营养肉汤或无菌生理盐水、直径为9cm水解酪蛋白(M-H)琼脂平板、药敏纸片(氨苄西林、头孢唑啉、庆大霉素、头孢曲松、环丙沙星、亚胺培南)等。
3. 器材:35℃培养箱、0.5麦氏比浊管或比浊仪、酒精灯、接种环、镊子、无菌棉拭子、毫米尺或游标卡尺等。
四、实验方法1. 菌液制备:用接种环或无菌棉拭子蘸取大肠埃希菌单个菌落,接种到有营养肉汤或0.9%无菌生理盐水的试管中,制成菌悬液,校正浊度为0.5麦氏浊度。
2. 接种平板:调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次,除去棉签上多余的液体,但也应适度。
用拭子划线整个琼脂表面,从平板顶部到底部。
3. 贴药敏纸片:用无菌镊子或纸片分配器将药敏纸片平贴于M-H琼脂平板表面,轻压。
直径9cm的平板可贴6张纸片,每张药敏纸片之间的距离24mm,距平板边缘15mm,纸片贴牢后不要移动。
4. 培养平板:将贴好药敏纸片的M-H琼脂平板置室温干燥3~5min,倒置放入35℃培养箱中培养16~24h。
5. 结果观察与记录:观察平板上抑菌圈的大小,并记录数据。
1. 氨苄西林:抑菌圈直径为18mm。
2. 头孢唑啉:抑菌圈直径为22mm。
3. 庆大霉素:抑菌圈直径为25mm。
实验6:纸片扩散法测定微生物的药敏性

实验6 抗生素等对细菌的药敏性检测antimicrobial susceptibility testing in vitro(圆盘滤纸片法disc diffusion test)一、实验目的:1、了解抗生素及化学试剂对微生物生长的影响2、掌握不同化学试剂的作用原理、常用浓度及使用方法二、实验原理许多微生物可以产生抗生素,能选择性的抑制或杀死其他微生物。
凡是抗菌谱即抗菌范围不广泛的抗生素称为窄谱抗生素,如青霉素只对革兰氏阳性菌有抗菌作用,而对革兰氏阴性菌、结核菌、立克次体等均无疗效,故青霉素就属于窄谱抗生素。
原来窄谱的抗生素如青霉素经过改造,产生了许多半合成的青霉素,扩大了原来的抗菌范围,如氨苄青霉素,不但对革兰氏阳性菌有效,而且对革兰氏阴性菌也很有效,对伤寒杆菌、痢疾杆菌效果也不错。
不同化学药品或同一化学药品对不同微生物的杀菌能力不同,此外,试剂浓度、作用时间及环境条件不同,其效果也不同。
应用前需进行试验,灵活选择。
三、实验器材1、菌种:培养24~28 h大肠杆菌、金黄色葡萄球菌斜面菌种。
2、培养基和试剂:牛肉膏蛋白胨培养基,大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的菌液3、仪器与其他用品:无菌平皿,无菌吸管(1ml),酒精灯,接种环,涂布棒,无菌滤纸片,无菌镊子,记号笔, 消毒棉球和培养箱。
四、实验步骤(以金黄色葡萄球菌操作为例)(1)菌液制备:将待检菌接种于普通营养琼脂平板,37℃培养16~18小时,然后挑取普通营养琼脂平板上的纯培养菌落,悬于3ml生理盐水中,混匀后与菌液比浊管比浊。
以有黑字的白纸为背景,调整浊度与比浊管(0.5麦氏单位)相同。
(2)倒平板:将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基溶化后倒平板,注意平皿中培养基厚度均匀,倒3套平板。
(平板厚度均匀,滤纸片大小一致)(3)涂平板:无菌操作,用无菌棉棒儿蘸取菌液(金葡)。
将多余菌液在液面上方管壁内轻轻旋转挤出,涂布在MH琼脂平板整个平面三次,每次旋转60度,最后沿周边绕两圈,保证涂均匀。
K-B 纸片扩散法测定抗生素敏感试验

平板霉素类似物生物活性评价平板霉素对耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐万古霉素肠球菌(VREF)等耐药菌具有很好的抑制活性。
抗菌活性的测试主要针对MRSA和VREF进行测定和相比。
最小抑制浓度(MIC)被确定抑制细菌生长的最低浓度。
通过生物活性数据的反馈,进一步指导平板霉素类似物的合成方向,希望获得活性更高、药效活性更好的抗耐药菌抗生素和药物先导化合物。
纸片扩散法测定抗生素敏感试验及MIC:1.原理:将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。
纸片中所含的药物吸取琼脂中的水分溶解后不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。
在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制,从而形成透明的抑菌圈。
抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度,并与该药对测试菌的最低抑菌浓度(MIC)呈负相关关系,即抑菌圈愈大,MIC愈小。
2.仪器及试剂仪器:纸片、试管、移液枪、烘箱、培养皿、培养箱、镊子、pH试纸、量筒、天平、高压灭菌锅、三角瓶、打孔器、超净工作台试剂:样品溶液、培养基3.菌液的配置从琼脂平板挑取新鲜分离的菌落数个或从保存的斜面上移种至3~5mL LB肉汤培养液中37℃培养2~8h,以待生长至轻微或中等浊度。
也可直接从孵育18~24h的琼脂平板上挑去纯菌落制成肉汤。
为保证药敏试验的准确度和精度,必须对接种菌液的浓度做相应的控制。
因此,将菌液稀释并校正浊度至0.5麦氏标准浓度,稀释时使用无菌肉汤或生理盐水,此时菌液的浓度约为1.5×108CFU/mL。
4.接种平板在超净工作台中,用量筒量取15mL配置好的灭菌培养基,倒在平板中,冷却凝固。
吸取稀释好的菌液500μL于洁净的灭菌试管中,加入4500μL的培养基,冷却到不烫手,摇匀,均匀倾倒置已凝固的平板表面,放置冷却至凝固。
5.粘贴药敏纸片用纸片分配器或无菌镊子取纸片(直径6mm,厚度1mm),贴于平板表面,并用镊子尖轻压一下纸片,使其贴平。
每张纸片的间距不小于24mm,纸片的中心距平板的边缘不小于15mm。
直接纸片扩散法对阳性血培养的药敏试验诊断价值

准 , 定 K B纸 片 扩 散 法 的 结 果 。严 重 误 差 : i k 判 — V t 2耐 药 , e 纸 片 扩 散 法 敏 感 ; 要 误 差 : tk 主 Vi 2敏 感 , 片 扩 散 法 耐 药 ; 要 e 纸 次
12 标 本 .
3 5 革 兰 阳性 球 菌 和 革 兰 阴性 杆 菌 标 本 来 自本 2株
院 2 0 年 1月 至 2 l 年 1月 的 门 诊 及 住 院 患 者 血 培 养 标 本 。 09 o1 13 阳性 血 培 养 瓶 的 处 理 . B c/ etD10报 警 后 , 5 atAl 3 2 r 取
1 3g a n g t eb cl ,h r r 0 3 a r e n ewen t t o s wi . v r j r 0 9 mao , 5 rm e ai a i it e ewe e9 . g e me tb t e womeh d , t 2 4 v l h ey mao , . j r
霉 素 ( 0/ ) 以 Sie te t—i区 分 链 球 菌 与 肠 球 菌 ; 发 3 z , g l xS rpokt d 若 现阴性短杆菌或球杆菌 , 片组合 : 纸 阿莫 西林 / 拉 维 酸 ( 0 1 克 2 /0
仪 缩 短 了 阳性 报 警 时 问 , 传 统 的 鉴 定 方 法 和 药 敏 试 验 依 然 耗 但
V tk i 2法 鉴 定 和 药 敏 的标 准方 法 同 时进 行 , e 比较 两种 方 法 的 药敏 结 果 差 异 。结 果 3 5株 阳 性 血 培 养 中 , 兰 阴性 2 革
杆 菌 的 药敏 结 果 与 Vi k t 2法 符 合 率 是 9 . , 重误 差 2 4 , 要 误 差 0 9 , 要 误 差 6 3 ; 兰 阳性 球 茵 的 e O3 严 . 主 . 次 . 革 药 敏 结 果 与 Vi k t 2法符 合 率是 9 . , 重 误 差 2 4 , 要 误 差 1 6 , 要 误 差 3 3 。 结 论 革 兰 阳性 球 菌的 e 26 严 . 主 . 次 . 苯 唑 西林 和 庆 大 霉 素 药 敏 试 验 结 果 , 兰 阴性 杆 菌 的 头孢 呋 辛 、 莫 西林 / 拉 维 酸 、 拉 西 林 / 唑 巴 坦 的 纸 片 扩 革 阿 克 哌 他
纸片扩散法药敏试验

纸片扩散法药敏试验纸片扩散法(K-B法)药物敏感试验是在涂有细菌的琼脂平板培养基上按照一定要求贴浸有抗菌药的纸片,培养一段时间后测量抑菌圈大小,并根据相关解释标准进行结果分析,从而得出受试菌株药物敏感性的结论。
中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论目录.1试验原理.2试验步骤.3结果分析.4注意事项基本信息中文名纸片扩散法药敏试验临床意义得出受试菌株药物敏感性的结论试验原理纸片扩散药敏试验的原理:将含有定量的抗菌药物的纸片贴在接种有待测菌的固体培养基上,通过抗菌药物在培养基上的扩散,观察是否出现抑菌环,推断是否抑制细菌的生长。
药物扩散的距离越远,药物浓度越低抑菌能力越强,因此可根据抑菌环的大小,判定药物对细菌的抑制作用强弱。
试验步骤1. 待测菌株接种物制备(1)通用情况:从过夜孵育的平板,优先选择哥伦比亚血琼脂平板上的菌落上挑取数个单个菌落,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
(2)特殊情况:嗜血杆菌属(本程序中所指的嗜血杆菌仅包括流感嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌):从过夜孵育的HTM平板,直接接种4.5%生理盐水制成菌悬液,使用比浊仪调整悬液的浊度使其达到0.5麦氏单位,使菌悬液中含有相当于ATCC 25922大肠埃希菌(1-2)*1012CFU/mL浓度。
2.接种平板(1)调整好悬液的浊度后,用无菌棉签浸入悬液内,紧贴试管内壁在液体上方旋转拭子数次,除去棉签上多余的液体,但也应适度。
(2)用拭子划线整个琼脂表面,从平板顶部到底部,均匀涂布,重复两次此过程(一共三次)每次旋转平板约60度,确保每次接种菌液均匀分布,最后在琼脂平板的边缘涂抹一圈,防止有流动的菌悬液,并使菌液涂布于整块平板的每个角落。
(3)涂布菌液完成的平板,可在室温放置一会(3-5分钟),以便在放置含有药物的纸片前使琼脂吸收表面多余的水分,但放置时间不应超过15分钟。
K-B纸片扩散法药敏试验技术要点

2.3菌液的接种量细菌接种量是药敏试验结果产生较大差的原因之一,余修中[3]在K-B纸片扩散法药敏试验菌液量的规范研究中提出固定接种0.35ml菌液量的规范。到目前为止,NCCLS推荐使用的是采用无菌棉拭子蘸取调好的菌液,在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次,以从中挤出过多的接种菌液。然后在琼脂表面均匀涂布接种3次,每次将平板转动约60度,最后用棉拭子涂抹琼脂的边缘,对接种菌量未做客观要求。鉴于上述情况,建议在进行药敏试验用棉拭子涂布时,尽量保证选用同一品牌、大小相同的棉拭子,以减少误差,确保药敏试验的准确可靠。
3培养基
3.1培养基的选择药敏试验中,为保证结果重复性及抑菌环的大小清晰,应选择对抗生素及磺胺药物无拮抗剂的培养基。水解酪蛋白(Mueller-Hinton,MH)培养基是CLSI推荐采用的需氧菌和兼性厌氧菌药敏试验标准培养基,PH为7.2-7.4,临床实验室常规敏感试验,除了检测容易生长的在M-H培养基的需氧、兼性厌氧菌外,尚有许多不能在M-H培养基上生长或生长不良的菌株。如链球菌属、流感嗜血杆菌及淋病奈瑟菌。培养基内必须补充特殊的营养成份。流感嗜血杆菌应选用嗜血杆菌试验培养基(HTM)[4];肺炎链球菌和其他链球菌所用培养基是在M-H琼脂中加5%脱纤维羊血。
[3]余修中,K-B法药敏试验中菌液量的规范[J],四川省卫生管理干部学院学报,2002.9(21):177.178.
[4]王传新、王国礼,现代检验医学技术及质量控制[M],济南,山东科学技术出版社,204:171.
药敏试验纸片扩散法原理

药敏试验纸片扩散法原理药敏试验纸片扩散法是一种常用的药敏试验方法,用于评估细菌对不同抗生素的敏感性。
该方法通过将含有不同抗生素的纸片放置在含有细菌的琼脂平板上,观察形成的药物溶解圈的直径大小来判断细菌对该抗生素的敏感性。
药敏试验纸片扩散法的原理主要包括两个方面:细菌的菌落培养和药物的扩散。
需要将凝胶琼脂平板制备好,并在其中接种细菌。
然后将平板孵育,使细菌在平板上形成菌落。
菌落形成后,将含有不同抗生素的纸片放置在平板的表面,待药物从纸片扩散到平板上。
不同抗生素的纸片在孵育过程中会逐渐溶解,药物分子会从纸片上释放出来。
药物分子会通过分子扩散的方式移动到平板中的琼脂层中,根据分子浓度梯度的差异,药物分子会从高浓度区域向低浓度区域扩散。
在扩散的过程中,抗生素分子与细菌发生相互作用,若细菌对该抗生素敏感,则可发生细菌的抑制,形成抗生素溶解圈。
根据药物在平板上扩散的效果,可以观察到不同大小的抗生素溶解圈。
抗生素的溶解圈直径大小与细菌对该抗生素的敏感性成正比,溶解圈越大,表示细菌对该抗生素越敏感,反之则表示细菌对该抗生素耐药性越强。
药敏试验纸片扩散法的优点在于操作简单、成本低廉、结果可靠。
不需要复杂的设备和专业技术,只需在细菌培养平板上放置相应抗生素纸片即可。
同时,该方法可以同时评估多个抗生素对细菌的敏感性,提供了多种药物对细菌的选择。
但是该方法也存在一些局限性。
首先,由于扩散的过程是靠分子的自由扩散,扩散速度受到分子大小、分子极性等因素的影响,因此可能存在不同抗生素扩散速度差异导致的误差。
其次,该方法只能评估细菌对单一抗生素的敏感性,无法反映多种抗生素联合应用时的效果。
此外,药敏试验纸片扩散法不适用于需进行定量药敏试验的情况,只能提供一种粗略的敏感性判断。
总之,药敏试验纸片扩散法是一种简单有效的药敏试验方法。
该方法通过评估药物的溶解圈直径大小来判断细菌对抗生素的敏感性,可以为临床提供合理使用抗生素的依据。
在实验室和临床中得到了广泛应用,为抗菌治疗提供了重要的参考依据。
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纸片扩散法在药敏试验中的应用
作者:黄志坚
作者单位:福建省三明市畜牧兽医站,365000
刊名:
福建畜牧兽医
英文刊名:FUJIAN JOURNAL OF ANIMAL HUSBANDRY AND VETERINARY MEDICINE
年,卷(期):2004,26(6)
被引用次数:11次
1.董永军.杨井泉.王丽荣.王三虎.杭柏林药敏片的研制及其抑菌效果观察[期刊论文]-安徽农业科学 2006(11)
2.徐倩倩.李继昌.李永科.刘立新.李睿中草药对犊牛腹泻主要病原菌体外抑菌试验[期刊论文]-中国奶牛 2008(7)
3.陈美婉.刘长秀.余思琴.杨志文.吴传斌纳米银温敏喷雾凝胶与环丙沙星联合应用体外抑菌作用[期刊论文]-中国消毒学杂志 2012(1)
4.方美娟.林启存.陆红法花(鱼骨)细菌性败血症病原分离鉴定及抑菌试验[期刊论文]-水产科学 2009(12)
5.张荣先.黄雪飞.先大强.游国辉西伯利亚鲟细菌性败血症病原菌的分离鉴定和药敏试验[期刊论文]-江苏农业科学 2012(5)
6.彭措扎西禽霍乱病原菌的分离鉴定及药敏试验[期刊论文]-养殖与饲料 2010(8)
7.吴雅欣.莫泽珣.张鑫.佘丹.李华无机盐及葡萄糖对广州管圆线虫三期幼虫的体外趋化作用[期刊论文]-热带医学杂志 2013(7)
8.傅力.任娟.李瑾瑜.牛淑萍新疆某猪场的几株沙门氏菌及大肠杆菌对16种抗生素药敏性研究[期刊论文]-新疆农业科学 2008(4)
9.徐海军.周科伟某养鸡场禽霍乱分离菌对常用抗菌药物的敏感性研究[期刊论文]-家畜生态学报 2006(3)
10.王瑞旋.王江勇.徐力文.冯娟军曹鱼养殖水体及其肠道弧菌的耐药性研究[期刊论文]-南方水产 2007(5)
11.王瑞旋.徐力文.王江勇.刘秀明.冯娟军曹鱼养殖水体及其肠道异养细菌的耐药性研究[期刊论文]-海洋环境科学 2008(6)
引用本文格式:黄志坚纸片扩散法在药敏试验中的应用[期刊论文]-福建畜牧兽医 2004(6)。