重组羧肽酶B
生物制药的非动物源性-李素霞
例1：重组人胰岛素过程中的AOF
供 仅 容
AOF 3胰岛素： 参会
参 表 代
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
此内
1）若培养基中含有蛋白胨、酵母粉等，原料供 应商保证原料生产过程的无动物源性。 2 ）重组胰蛋白酶和重组羧肽酶B为动物源性的 重组酶。
Contents
参 表 代 未经 ， 考 本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
此内
容仅
会 参 供1
背景介绍
2
大肠杆菌表达系统中的动物源性问题
3
动物细胞表达系统中的动物源性问题
AOF生物药物的发展方向
201305 生物制药周
4
什么叫做动物源性？非动物源性？ ， 概念的应用范围 ：药物及其生产用原料； 经 ，未 考 动物源性原料 ： 参 表 会代 参 供 1 ）直接来源于动物：如牛肉膏，骨粉，牛血清…… 仅 容 此内 2）部分来源于动物：如植物蛋白胨的生产过程中用 牛/猪蛋白酶消化所得…… 动物源性药物： 1）直接来源于动物或人：如血液制品，人白蛋白、 人免疫球蛋白等 2）直接来源于动物：如猪胰岛素、胰蛋白酶、糜蛋 白酶、肝素、透明质酸，等等……在药典中称为 生化药物
无蛋白培养基： 无血清、无蛋白成分，化学组分确定 等特点 （合成培养基）
主要成分包括：各种必需氨基酸，小 肽，维生素，微量元素，离子等
201305 生物制药周
例2：疫苗、抗体研发过程中的AOF
仅 容 内 会 参 供
羧肽酶a和b处理什么氨基酸
羧肽酶a和b处理什么氨基酸
羧肽酶是催化水解多肽链含羧基末端氨基酸的酶。
酶活性与锌有关。
羧肽酶A：是水解有芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。
比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等
羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。
羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸
羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg
但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用
羧肽酶是一种消化酶。
可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。
以酶原形式存在于生物体内。
常用的有A、B、C及Y ，4种羧肽酶。
羧肽酶A能水解蛋白质和多肽底物C端芳香族或中性脂肪族氨基酸残基，释放除脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和赖氨酸之外的所有C末端氨基酸，更易于水解具有芳香族侧链和大脂肪侧链的羧基端氨基酸。
比如酪
氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等。
羧肽酶A （carboxypeptidase A）,CPA，因其底物的首位字“A”而得名羧肽酶A 。
羧肽酶A的活性部位：精氨酸残基金属Zn 酪氨酸残基
精氨酸残基含有一个胍基，胍基是一种非常好阴离子络合点。
可在非常宽的PH范围内（pKa=13.5）都可以保持其质子化形式，并能与阴离子羧基、磷酸根、硫酸根等参与形成双氢键。
cpb酶切原理
CPB酶，即羧肽酶B，是一种能够从肽链的C端逐个降解并释放游离氨基酸的肽链外切酶。
CPB酶的工作原理是通过特异性地识别肽链的C端氨基酸残基，并催化水解该残基与相邻氨基酸之间的肽键，从而释放出一个游离氨基酸分子。
这个过程会持续进行，直到整个肽链被降解为单个氨基酸或短肽链。
在实际应用中，CPB酶常用于生物化学和分子生物学实验，尤其是在蛋白质分析和修饰研究中。
例如，在抗体电荷异构体的研究中，CPB酶可以用来确定赖氨酸对碱性异构体的贡献。
通过酶切反应，可以观察到由于赖氨酸修饰导致的电荷变化，这有助于研究者了解蛋白质的结构和功能。
总的来说，CPB酶是一种重要的工具酶，它通过特异性地切割肽链的C端氨基酸，帮助科学家研究蛋白质的结构和功能，以及在生物体内的作用机制。
牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范融资投资立项项目可行性研究报告(中撰咨询)
牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范立项投资融资项目可行性研究报告(典型案例〃仅供参考)广州中撰企业投资咨询有限公司地址：中国〃广州目录第一章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目概论 (1)一、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目名称及承办单位 (1)二、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目可行性研究报告委托编制单位 (1)三、可行性研究的目的 (1)四、可行性研究报告编制依据原则和范围 (2)（一）项目可行性报告编制依据 (2)（二）可行性研究报告编制原则 (2)（三）可行性研究报告编制范围 (4)五、研究的主要过程 (5)六、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范产品方案及建设规模 (6)七、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目总投资估算.. 6八、工艺技术装备方案的选择 (6)九、项目实施进度建议 (6)十、研究结论 (7)十一、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目主要经济技术指标 (9)项目主要经济技术指标一览表 (9)第二章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范产品说明 (15)第三章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目市场分析预测 (16)第四章项目选址科学性分析 (16)一、厂址的选择原则 (16)二、厂址选择方案 (17)四、选址用地权属性质类别及占地面积 (17)五、项目用地利用指标 (17)项目占地及建筑工程投资一览表 (18)六、项目选址综合评价 (19)第五章项目建设内容与建设规模 (20)一、建设内容 (20)（一）土建工程 (20)（二）设备购臵 (20)二、建设规模 (21)第六章原辅材料供应及基本生产条件 (21)一、原辅材料供应条件 (21)（一）主要原辅材料供应 (21)（二）原辅材料来源 (21)原辅材料及能源供应情况一览表 (22)二、基本生产条件 (23)第七章工程技术方案 (24)一、工艺技术方案的选用原则 (24)二、工艺技术方案 (25)（一）工艺技术来源及特点 (25)（二）技术保障措施 (25)（三）产品生产工艺流程 (26)牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范生产工艺流程示意简图 (26)三、设备的选择 (27)（一）设备配臵原则 (27)（二）设备配臵方案 (28)主要设备投资明细表 (28)第八章环境保护 (29)一、环境保护设计依据 (29)二、污染物的来源 (30)（一）牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目建设期污染源 (31)（二）牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目运营期污染源 (31)三、污染物的治理 (31)（一）项目施工期环境影响简要分析及治理措施 (32)1、施工期大气环境影响分析和防治对策 (32)2、施工期水环境影响分析和防治对策 (36)3、施工期固体废弃物环境影响分析和防治对策 (37)4、施工期噪声环境影响分析和防治对策 (38)5、施工建议及要求 (40)施工期间主要污染物产生及预计排放情况一览表 (42)（二）项目营运期环境影响分析及治理措施 (43)1、废水的治理 (43)办公及生活废水处理流程图 (43)生活及办公废水治理效果比较一览表 (44)生活及办公废水治理效果一览表 (44)2、固体废弃物的治理措施及排放分析 (44)3、噪声治理措施及排放分析 (46)主要噪声源治理情况一览表 (47)四、环境保护投资分析 (47)（一）环境保护设施投资 (47)（二）环境效益分析 (48)五、厂区绿化工程 (48)六、清洁生产 (49)七、环境保护结论 (49)施工期主要污染物产生、排放及预期效果一览表 (51)第九章项目节能分析 (52)一、项目建设的节能原则 (52)二、设计依据及用能标准 (52)（一）节能政策依据 (52)（二）国家及省、市节能目标 (53)（三）行业标准、规范、技术规定和技术指导 (54)三、项目节能背景分析 (54)四、项目能源消耗种类和数量分析 (56)（一）主要耗能装臵及能耗种类和数量 (56)1、主要耗能装臵 (56)2、主要能耗种类及数量 (56)项目综合用能测算一览表 (57)（二）单位产品能耗指标测算 (57)单位能耗估算一览表 (58)五、项目用能品种选择的可靠性分析 (59)六、工艺设备节能措施 (59)七、电力节能措施 (60)八、节水措施 (61)九、项目运营期节能原则 (61)十、运营期主要节能措施 (62)十一、能源管理 (63)（一）管理组织和制度 (63)（二）能源计量管理 (64)十二、节能建议及效果分析 (64)（一）节能建议 (64)（二）节能效果分析 (65)第十章组织机构工作制度和劳动定员 (65)一、组织机构 (65)二、工作制度 (66)三、劳动定员 (66)四、人员培训 (67)（一）人员技术水平与要求 (67)（二）培训规划建议 (67)第十一章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目投资估算与资金筹措 (68)一、投资估算依据和说明 (68)（一）编制依据 (68)（二）投资费用分析 (70)（三）工程建设投资（固定资产）投资 (70)1、设备投资估算 (70)2、土建投资估算 (70)3、其它费用 (71)4、工程建设投资（固定资产）投资 (71)固定资产投资估算表 (71)5、铺底流动资金估算 (72)铺底流动资金估算一览表 (72)6、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目总投资估算.. 73总投资构成分析一览表 (73)二、资金筹措 (74)投资计划与资金筹措表 (74)三、牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目资金使用计划 (75)资金使用计划与运用表 (75)第十二章经济评价 (76)一、经济评价的依据和范围 (76)二、基础数据与参数选取 (76)三、财务效益与费用估算 (78)（一）销售收入估算 (78)产品销售收入及税金估算一览表 (78)（二）综合总成本估算 (78)综合总成本费用估算表 (79)（三）利润总额估算 (80)（四）所得税及税后利润 (80)（五）项目投资收益率测算 (80)项目综合损益表 (81)四、财务分析 (81)财务现金流量表（全部投资） (83)财务现金流量表（固定投资） (85)五、不确定性分析 (86)盈亏平衡分析表 (87)六、敏感性分析 (88)单因素敏感性分析表 (88)第十三章牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目综合评价 (89)第一章项目概论一、项目名称及承办单位1、项目名称：牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范投资建设项目2、项目建设性质：新建3、项目承办单位：广州中撰企业投资咨询有限公司4、企业类型：有限责任公司5、注册资金：100万元人民币二、项目可行性研究报告委托编制单位1、编制单位：广州中撰企业投资咨询有限公司三、可行性研究的目的本可行性研究报告对该牦牛胰腺制取与重组羧肽酶B技术产业化示范项目所涉及的主要问题，例如：资源条件、原辅材料、燃料和动力的供应、交通运输条件、建厂规模、投资规模、生产工艺和设备选型、产品类别、项目节能技术和措施、环境影响评价和劳动卫生保障等，从技术、经济和环境保护等多个方面进行较为详细的调查研究。
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人羧肽酶B（carboxypeptidase B，CPB）是一种重要的胰脾酶家族成员，具有在肽链C端切除氨基酸的功能。
CPB在体内参与多种生理过程，如蛋白质降解、消化和免疫调节等。
由于其重要性，对CPB的研究已经引起了广泛关注。
CPB的异源表达、纯化和酶活研究一直是研究者面临的挑战之一。
本文将重点讨论关于人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究的最新进展。
一、异源表达人羧肽酶B的异源表达可以利用细胞培养技术，如大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。
大肠杆菌是一种常用的表达系统，因为其生长快速、易于操作、表达量高等优点。
通常通过将CPB基因克隆到表达载体中，并转化至大肠杆菌中进行表达。
值得注意的是，CPB的表达量和纯度受到多种因素的影响，如表达宿主的选择、表达条件的优化等。
二、纯化表达获得的融合蛋白需要进行纯化才能得到纯净的CPB。
传统的CPB纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
近年来，随着蛋白质工程技术的进步，一些新的纯化方法也被应用于CPB 的纯化，如亲和抓卡技术、蛋白质组学方法等。
这些新方法在提高纯化效率、减少操作步骤和成本等方面具有明显优势。
三、酶活研究人羧肽酶B的酶活研究是对其生物活性和功能的理解的关键。
酶活性通常通过对底物的降解速率进行测定来评估。
对CPB的底物特异性、抑制剂活性等也是酶活研究中的重要内容。
通过对CPB的酶活性进行研究，可以深入了解其在生理和病理条件下的作用机制，并为相关疾病的治疗提供理论基础。
人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究是对其功能和应用进行深入探究的重要方向。
随着技术的不断进步，相信对CPB的研究将会取得更多突破，为相关领域的发展带来新的机遇和挑战。
第二篇示例：人羧肽酶B（CPB）是一种重要的内源性蛋白酶，广泛存在于哺乳动物细胞中，扮演着调控蛋白质的降解、修复和合成等生理功能的关键角色。
重组羧肽酶B
重组羧肽酶BCat.No.：RCPB01CAS:9025-24-5EC:3.4.17.2来源：基因工程生产，大肠杆菌表达1.简介羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。
分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。
纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。
稳定：冻干粉，易于储存和运输。
3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉成分Tris，NaCl和糖类蛋白含量35%-60%电泳鉴定（12.5%SDS-PAGE）单一主条带分子量33.8kD比活≥170 u/mg pro其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于10ppm酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。
4.用途重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。
5.推荐使用方法用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。
6.储存和稳定性重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。
遇到失意伤心事，多想有一个懂你的人来指点迷津，因他懂你，会以我心，换你心，站在你的位置上思虑，为你排优解难。
一个人，来这世间，必须懂得一些人情事理，才能不断成长。
就像躬耕于陇亩的农人，必须懂得土地与种子的情怀，才能有所收获。
一个女子，一生所求，莫过于找到一个懂她的人，执手白头，相伴终老。
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究
人羧肽酶B（carboxypeptidase B，CPB）是一种重要的酶类蛋白，参与多种生物学过程。
为了研究其结构和功能，科学家进行了人羧肽酶B的异源表达、纯化和酶活研究。
研究人员选择了一种适合的宿主表达系统，将人羧肽酶B的基因导入到该宿主中。
通过优化培养条件和诱导表达，成功地实现了人羧肽酶B的异源表达。
接着，利用各种细胞破碎技术，将表达的蛋白从细胞中释放出来。
为了纯化人羧肽酶B，研究人员采用了一系列的分离和纯化技术。
首先，通过离心和过滤等方法，去除细胞残渣和杂质。
然后，利用色谱技术，如亲和层析和凝胶过滤层析，将人羧肽酶B与其他蛋白分离开来。
最后，通过浓缩和洗脱等步骤，得到高纯度的人羧肽酶B。
为了研究人羧肽酶B的酶活性，研究人员设计了一系列的实验。
首先，他们确定了适宜的反应条件，如温度、pH值和底物浓度等。
然后，通过测定反应体系中底物的消耗量或生成物的产生量，来评估人羧肽酶B的酶活。
同时，他们还研究了不同底物对人羧肽酶B的亲和力和反应速率的影响。
通过上述的异源表达、纯化和酶活研究，科学家们成功地获得了高纯度的人羧肽酶B，并对其酶活性进行了深入研究。
这些研究结果
对于理解人羧肽酶B的生物学功能和应用具有重要意义，为进一步的研究奠定了基础。
通过这些工作，我们对人羧肽酶B的异源表达、纯化和酶活研究有了更深入的认识，为进一步探索其在生物学和医学领域的应用提供了有力支持。
LT-3 蛋白质化学 生物化学习题汇编
目录第三章蛋白质化学 (2)一、填充题 (2)二、是非题 (6)三、选择题 (8)四、问答题 (16)五、计算题 (24)第三章蛋白质化学一、填充题1、氨基酸的结构通式为( )。
2、组成蛋白质分子的碱性氨基酸有( )、( )和( )。
酸性氨基酸有( )和( )。
3、在下列空格中填入合适的氨基酸名称。
(1)( )是带芳香族侧链的极性氨基酸。
(2)( )和( )是带芳香族侧链的非极性氨基酸。
(3)( )是含硫的极性氨基酸。
(4)( )或( )是相对分子质量小且不含硫的氨基酸，在一个肽链折叠的蛋白质中它能形成内部氢键。
(5)在一些酶的活性中心中起重要作用并含羟基的极性较小的氨基酸是( )。
4、Henderson-Hasselbalch方程为( )。
5、氨基酸的等电点(p I)是指( )。
6、氨基酸在等电点时，主要以( )离子形式存在，在pH >pI的溶液中，大部分以( )离子形式存在，在pH ＜pI的溶液中，大部分以( )离子形式存在。
7、在生理条件下( pH 7.0 左右)，蛋白质分子中的( )侧链和( )侧链几乎完全带正电荷，但是( )侧链则带部分正电荷。
8、脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应产生( )色的物质，而其他氨基酸与茚三酮反应产生( )色的物质。
9、范斯莱克(Van Slyke)法测定氨基氮主要利用( )与( )作用生成( )。
10、实验室常用的甲醛滴定是利用氨基酸的氨基与中性甲醛反应，然后用碱(NaOH)来滴定( )上放出的( )。
11、通常可用紫外分光光度法测定蛋白质的含量，这是因为蛋白质分子中的( )、( )和( )三种氨基酸的共轭双键有紫外吸收能力。
12、寡肽通常是指由( )个到( )个氨基酸组成的肽。
13、肽链的形式有( )、( )和( )三种，其中以( )最常见。
14、在一些天然肽中含有( )、( )和( )等特殊结构。
这些结构在蛋白质中是不存在的。
很可能这些结构上的变化可使这些肽免受蛋白水解酶的作用。
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重组羧肽酶B
Cat.No.：RCPB01
CAS:9025-24-5
EC:3.4.17.2
来源：基因工程生产，大肠杆菌表达
1.简介
羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。
分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
2.优势
无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。
纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。
稳定：冻干粉，易于储存和运输。
3.特性
来源重组大肠杆菌
纯化HPLC
产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉
成分Tris，NaCl和糖类
蛋白含量35%-60%
电泳鉴定
（12.5%SDS-PAGE）
单一主条带
分子量33.8kD
比活≥170 u/mg pro
其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于
10ppm
酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水
解的酶量为一个酶活单位。
4.用途
重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其
它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。
5.推荐使用方法
用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。
6.储存和稳定性
重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。