羧肽酶B
重组羧肽酶B
重组羧肽酶BCat.No.：RCPB01CAS:9025-24-5EC:3.4.17.2来源：基因工程生产，大肠杆菌表达1.简介羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。
分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。
纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。
稳定：冻干粉，易于储存和运输。
3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉成分Tris，NaCl和糖类蛋白含量35%-60%电泳鉴定（12.5%SDS-PAGE）单一主条带分子量33.8kD比活≥170 u/mg pro其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于10ppm酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。
4.用途重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。
5.推荐使用方法用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。
6.储存和稳定性重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。
羧肽酶的活动 的作用
羧肽酶的活动的作用全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：羧肽酶是一种在生物体内扮演重要角色的酶类，其主要功能是催化羧基的水解反应。
羧基是一种众多有机分子中的常见官能团，它包含一个碳原子和一个氧原子，其中氧原子与碳原子形成一个双键。
在生物体内，羧基常常与氨基结合形成肽键或脂肪酸酯键等，而羧肽酶的作用就是将这些化学键水解，使得有机分子在代谢或合成过程中得以有效地进行。
羧肽酶具有广泛的分布和多样的种类，它们在细胞内外各个组织和器官中均有所存在，包括胃肠道、肝脏、肾脏、胰腺等。
不同种类的羧肽酶在催化反应的底物特异性、反应速度和抑制剂敏感性等方面存在差异，这使得它们能够适应不同的生物代谢需求和环境条件。
羧肽酶的活动对于生物体的正常功能和生存至关重要。
羧肽酶可以参与蛋白质和多肽的降解过程，将复杂的有机分子分解成更小的碎片，从而为细胞提供能量和原料。
羧肽酶还可以帮助调节细胞内外的物质浓度和平衡，维持生理功能的正常运作。
最重要的是，羧肽酶参与了许多生物活动的调控过程，例如细胞增殖、分化、凋亡等，对于维护机体内部稳态和适应外界环境也具有重要价值。
在一些疾病和病理状态中，羧肽酶的活动异常可能导致疾病的发生和发展。
胃肠道中的羧肽酶在胃溃疡和消化系统疾病中发挥重要作用，其异常活动可能引起胃黏膜受损和溃疡形成。
肝脏中的羧肽酶在代谢过程和药物解毒中具有关键作用，异常活动可能导致肝功能障碍和毒素蓄积。
对羧肽酶活动的监测和调节对于疾病的预防和治疗具有重要意义。
第二篇示例：羧肽酶是一类在生物体内起关键作用的酶，主要负责在蛋白质的合成和降解过程中催化反应。
它们在生物体内具有多种作用，包括对蛋白质的分解、合成和修饰等。
羧肽酶在蛋白质的降解过程中扮演了重要角色。
在生物体内，蛋白质会受到各种外界因素的影响，导致部分蛋白质变性、老化或者失去功能。
这些蛋白质通常会通过蛋白质降解途径被分解成小分子，以便于后续的代谢利用。
在这个过程中，羧肽酶会催化蛋白质的水解反应，将蛋白质分解成氨基酸和小肽。
羧肽酶A
7. 与锌离子配位 的水在Glu270的 帮助下进行质子 转移，电离为金 属离子键合的羟 基
＋
靠近
2.底物的疏水残基 落入疏水口袋中
3.底物肽 键的羰基 与锌离子 配位
5.由于锌离子和 精氨酸正电荷的 作用，肽键羰基 被极化和伸长， 使羰基的碳原子 1.多肽链进入活性部位， Arg145的侧链移动与带 呈正电性 负电的羧基端生成盐键
催化机理
Tyr248的羟基给予被裂 开的肽键的-NH一个质 子
羟基亲核进 攻羰基碳原 子，肽键断 裂
由于谷氨酸羰基端负电荷的静电 斥力与产物羧基端负电荷的静电 斥力，产物被驱出活性部位。
锌离子的作用
• 被裂解的肽键的羰基指向锌离子，锌离子起吸电 子的作用，使C=O键比正常的更为极化，使羰基 C原子更易接受亲核进攻 • 锌离子处在非极性环境促进了诱导偶极子的产生， 增加了它的有效电荷 • Glu270的负电荷的逼近也对羰基上产生一个大 的偶极子做出了贡献。 • 从而羧肽酶A诱导底物上的电子应变以加速催化。
• 存在于哺乳动物的胰脏 • 存在于牛胰脏的羧肽酶A为单一的多肽链，约有300个 氨基酸残基，分子量为34.5kDa • 每个酶分子含有一个 • 其前体为以亚基双聚体或三聚体形式存在的羧肽酶原A。 在胰蛋白酶的激活下释放出大约60个氨基酸残基的N末端裂解物成为羧肽酶A。
羧肽酶A的活性中心
羧肽酶A的活性中心
羧肽酶A
应化1003班 杨杰 李开成 庄原 刘漫
氨肽酶
肽链端解酶
肽 酶
肽链内切酶
羧肽酶A：水解由芳香族和中性脂肪族氨基酸形 成的羧基末端。比如酪氨酸，苯丙氨 酸，丙氨酸等。 羧肽酶
羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端
。。。
羧肽酶a和b处理什么氨基酸
羧肽酶a和b处理什么氨基酸
羧肽酶是催化水解多肽链含羧基末端氨基酸的酶。
酶活性与锌有关。
羧肽酶A：是水解有芳香族和中性脂肪族氨基酸形成的羧基末端。
比如酪氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等
羧肽酶B：主要水解碱性氨基酸形成的羧基末端。
羧肽酶A可以切割C端除了Lys、Arg、Pro的氨基酸
羧肽酶B可以切割C端的Lys或Arg
但如果倒数第二个氨基酸为Pro两种羧肽酶均不能作用
羧肽酶是一种消化酶。
可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。
以酶原形式存在于生物体内。
常用的有A、B、C及Y ，4种羧肽酶。
羧肽酶A能水解蛋白质和多肽底物C端芳香族或中性脂肪族氨基酸残基，释放除脯氨酸、羟脯氨酸、精氨酸和赖氨酸之外的所有C末端氨基酸，更易于水解具有芳香族侧链和大脂肪侧链的羧基端氨基酸。
比如酪
氨酸，苯丙氨酸，丙氨酸等。
羧肽酶A （carboxypeptidase A）,CPA，因其底物的首位字“A”而得名羧肽酶A 。
羧肽酶A的活性部位：精氨酸残基金属Zn 酪氨酸残基
精氨酸残基含有一个胍基，胍基是一种非常好阴离子络合点。
可在非常宽的PH范围内（pKa=13.5）都可以保持其质子化形式，并能与阴离子羧基、磷酸根、硫酸根等参与形成双氢键。
cpb酶切原理
CPB酶，即羧肽酶B，是一种能够从肽链的C端逐个降解并释放游离氨基酸的肽链外切酶。
CPB酶的工作原理是通过特异性地识别肽链的C端氨基酸残基，并催化水解该残基与相邻氨基酸之间的肽键，从而释放出一个游离氨基酸分子。
这个过程会持续进行，直到整个肽链被降解为单个氨基酸或短肽链。
在实际应用中，CPB酶常用于生物化学和分子生物学实验，尤其是在蛋白质分析和修饰研究中。
例如，在抗体电荷异构体的研究中，CPB酶可以用来确定赖氨酸对碱性异构体的贡献。
通过酶切反应，可以观察到由于赖氨酸修饰导致的电荷变化，这有助于研究者了解蛋白质的结构和功能。
总的来说，CPB酶是一种重要的工具酶，它通过特异性地切割肽链的C端氨基酸，帮助科学家研究蛋白质的结构和功能，以及在生物体内的作用机制。
Worthington丨羧肽酶B说明书
Worthington丨羧肽酶B说明书
羧肽酶(Carboxypeptidases, CPs)是一种专一性地从肽链的C端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶。
羧肽酶A、B是一种消化酶。
可专一性地从肽链的C端开始逐个降解，释放出游离氨基酸的一类肽链外切酶。
以酶原形式存在于生物体内。
Worthington 羧肽酶 B基本信息：
来源：猪胰腺
I.UB：3.4.17.2
羧肽酶 B 催化多肽 C 末端碱性氨基酸赖氨酸、精氨酸和鸟氨酸的水解。
分子量为 34,500 道尔顿，最适 pH 值为 7.9，pI 为 6.0。
羧肽酶 B 被精氨酸、赖氨酸和鸟氨酸竞争性抑制。
该酶不受二异丙基氟磷酸盐 (DFP) 的抑制，但受金属螯合剂如 1,10-菲咯啉的抑制。
单位定义：一个单位在25°C、pH 7.65 下每分钟水解 1 微摩尔马尿酰-L-精氨酸。
Worthington 碳酸酐酶的描述说明：
羧肽酶 B
色谱纯化。
100mM 氯化钠溶液。
糜蛋白酶和胰蛋白酶 0.02%。
储存在-20°C。
需要特殊运输：冰袋
活动：≥170单位/mg 蛋白质
羧肽酶 B相关研究：
羧肽酶 Y (COY)
糜蛋白酶，TLCK 处理 (CDTLCK)
梭菌蛋白酶，Endo-Arg-C (CP)
蛋白酶，Stap，Endo-Glu-C (STAP)
胰蛋白酶，SeqENZ (TRSEQII) 和修饰 (TRSEQZ)。
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究
人羧肽酶b的异源表达,纯化及其酶活研究全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：人羧肽酶B（carboxypeptidase B，CPB）是一种重要的胰脾酶家族成员，具有在肽链C端切除氨基酸的功能。
CPB在体内参与多种生理过程，如蛋白质降解、消化和免疫调节等。
由于其重要性，对CPB的研究已经引起了广泛关注。
CPB的异源表达、纯化和酶活研究一直是研究者面临的挑战之一。
本文将重点讨论关于人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究的最新进展。
一、异源表达人羧肽酶B的异源表达可以利用细胞培养技术，如大肠杆菌、酵母菌、昆虫细胞和哺乳动物细胞等。
大肠杆菌是一种常用的表达系统，因为其生长快速、易于操作、表达量高等优点。
通常通过将CPB基因克隆到表达载体中，并转化至大肠杆菌中进行表达。
值得注意的是，CPB的表达量和纯度受到多种因素的影响，如表达宿主的选择、表达条件的优化等。
二、纯化表达获得的融合蛋白需要进行纯化才能得到纯净的CPB。
传统的CPB纯化方法包括亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等。
近年来，随着蛋白质工程技术的进步，一些新的纯化方法也被应用于CPB 的纯化，如亲和抓卡技术、蛋白质组学方法等。
这些新方法在提高纯化效率、减少操作步骤和成本等方面具有明显优势。
三、酶活研究人羧肽酶B的酶活研究是对其生物活性和功能的理解的关键。
酶活性通常通过对底物的降解速率进行测定来评估。
对CPB的底物特异性、抑制剂活性等也是酶活研究中的重要内容。
通过对CPB的酶活性进行研究，可以深入了解其在生理和病理条件下的作用机制，并为相关疾病的治疗提供理论基础。
人羧肽酶B的异源表达、纯化及其酶活研究是对其功能和应用进行深入探究的重要方向。
随着技术的不断进步，相信对CPB的研究将会取得更多突破，为相关领域的发展带来新的机遇和挑战。
第二篇示例：人羧肽酶B（CPB）是一种重要的内源性蛋白酶，广泛存在于哺乳动物细胞中，扮演着调控蛋白质的降解、修复和合成等生理功能的关键角色。
重组羧肽酶B
重组羧肽酶BCat.No.：RCPB01CAS:9025-24-5EC:3.4.17.2来源：基因工程生产，大肠杆菌表达1.简介羧肽酶B专一水解蛋白质C-末端碱性氨基酸（赖氨酸、精氨酸、组氨酸）；又称为肽酰-L-赖氨酸（L-精氨酸）水解酶；精蛋白酶。
分子量为33.8kD，等电点为6.0，最适pH为7-9，活性受精氨酸、赖氨酸的竞争性抑制，金属离子螯合剂如EDTA等抑制酶活。
2.优势无动物源性：重组生产，无外源性的病毒污染，如猪流感病毒、猪细小病毒等。
纯度高：无糜蛋白酶、羧肽酶A等活性，胰蛋白酶含量小于10ppm，酶切反应无其它副反应。
稳定：冻干粉，易于储存和运输。
3.特性来源重组大肠杆菌纯化HPLC产品性状白色或类白色或者淡黄色冻干粉成分Tris，NaCl和糖类蛋白含量35%-60%电泳鉴定（12.5%SDS-PAGE）单一主条带分子量33.8kD比活≥170 u/mg pro其他酶含量无糜蛋白酶、羧肽酶A等，胰蛋白酶含量小于10ppm酶活定义：25℃，pH7.65，1min催化1μmol 马尿酰-L-精氨酸水解的酶量为一个酶活单位。
4.用途重组胰岛素及其类似物的生产；蛋白质C-末端氨基酸的测定；其它重组多肽类物质的生产；某些特殊化合物的酶促合成。
5.推荐使用方法用无菌水或者25mM Tris-HCl （pH 7.65）溶解羧肽酶B,使酶液浓度为1-10mg/ml；（质量比）酶量：目的蛋白=1：50-1：1000，最适PH为7-9。
6.储存和稳定性重组羧肽酶B冻干粉存于2℃-8℃，24个月稳定；溶解以后存于-20℃，24个月稳定，反复冻融10次酶活保持在90%以上。
遇到失意伤心事，多想有一个懂你的人来指点迷津，因他懂你，会以我心，换你心，站在你的位置上思虑，为你排优解难。
一个人，来这世间，必须懂得一些人情事理，才能不断成长。
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Revised: 02/20/96
SIGMA QUALITY CONTROL TEST PROCEDURE
Enzymatic Assay of CARBOXYPEPTIDASE B
(EC 3.4.17.2)
PRINCIPLE:
Hippuryl-L-Arg + H 2O Carboxypeptidase B > Hippuric acid + L-Arginine
Abbreviations used:
Hippuryl-L-Arg = Hippuryl-L-Arginine
CONDITIONS: T = 25°C, pH = 7.65, A 254nm , Light path = 1 cm
METHOD: Continuous Spectrophotometric Rate Determination
REAGENTS:
A. 25 mM Tris HCl Buffer with 100 mM Sodium Chloride, pH 7.65 at 25°C
(Prepare 100 ml in deionized water using Trizma Hydrochloride, Sigma Prod. No. T-3253, and Sodium Chloride, Sigma Prod. No. S-9625. Adjust to pH 7.65 at 25°C with 1 M NaOH.)
B. 1.0 mM Hippuryl-L-Arginine Solution (Hippuryl-L-Arg)
(Prepare 50 ml in Reagent A using Hippuryl-L-Arginine, Sigma Prod. No. H-2508. PREPARE FRESH.)
C. Carboxypeptidase B Enzyme Solution
(Immediately before use, prepare a solution containing 4 - 8 units/ml of Carboxypeptidase B in cold deionized water.)
PROCEDURE:
Pipette (in milliliters) the following reagents into suitable quartz cuvettes:
Test Blank
Reagent B (Hippuryl-L-Arg) 2.90
2.90
EC 3.4.17.2)
PROCEDURE: (continued)
Equilibrate to 25°C. Monitor the A254nm until constant, using a suitably thermostatted
spectrophotometer and Reagent B as the reference.1 Then add:
Blank
Test
Deionized Water ------ 0.10
Reagent C (Enzyme Solution) 0.10 ------ Immediately mix by inversion and record the increase in A254nm for approximately 5 minutes. Obtain
the ∆A254nm/minute using the maximum linear rate for both the Test and Blank.
CALCULATIONS:
(∆A254nm/min Test - ∆A254nm/min Blank)(3)(df)
Units/ml enzyme =
(0.36) (0.1)
3 = Total volume (in milliliters) of assay
df = Dilution factor
0.36 = Millimolar extinction coefficient of hippuric acid at 254 nm
0.1 = Volume (in milliliters) of enzyme used
units/ml enzyme
Units/mg solid =
mg solid/ml enzyme
units/ml enzyme
Units/mg protein =
mg protein/ml enzyme
UNIT DEFINITION:
One unit will hydrolyze 1.0 µmole of hippuryl-L-arginine per minute at pH 7.65 at 25°C.
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Revised: 02/20/96
EC 3.4.17.2)
FINAL ASSAY CONCENTRATION:
In a 3.00 ml reaction mix, the final concentrations are 24 mM Tris, 0.97 mM hippuryl-L-arginine,
97 mM sodium chloride, and 0.4 - 0.8 unit carboxypeptidase B.
REFERENCES:
Folk, J.E., Piez, K.A., Carroll, W.R. and Gladner, J.A. (1960) J. Biol. Chem. 235, 2272-2277 NOTES:
1.The substrate solution has a high initial A254nm which requires the use of Reagent B rather
than air as the reference.
2. This assay is based on the cited reference.
3. Where Sigma Product or Stock numbers are specified, equivalent reagents may be
substituted.
Sigma warrants that the above procedure information is currently utilized at Sigma and that Sigma products conform to the information in Sigma publications. Purchaser must determine the suitability of the information and products for its particular use. Upon purchase of Sigma products, see reverse side of invoice or packing slip for additional terms and conditions of sale.
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Revised: 02/20/96。