聚乙二醇牛血红蛋白偶联物对血清炎性因子的影响
聚乙二醇牛血红蛋白偶联物对血清炎性因子的影响
聚乙二醇牛血红蛋白偶联物对血清炎性因子的影响作者：赵明霞，龙村，贺学英，管博，王蕊【摘要】目的探讨在体外循环（extracorporeal circulation，ECC）预充液中加入聚乙二醇牛血红蛋白偶联物（PEG-bHb）对兔血清炎性因子的影响。
方法 24只成年健康大耳白兔，通过股动脉、颈静脉插管建立体外循环通路，转流1 h。
随机分成三组，对照组（n＝8），以晶/胶体液作为ECC预充液；实验组1（n＝8），在预充液中加入PEG-bHb，PEG-bHb占总容量（兔循环血量＋预充量）的5%；实验组2（n＝8），预充液中加入PEG-bHb，占总容量（兔循环血量＋预充量）的15%，ECC开始时放出自体血（放血量占兔循环血量的20%），ECC 结束后将自体血回输。
每组监测ECC前、中和ECC后的血气参数，用ELISA法测定各时间点血清白介素－6（IL-6）、肿瘤坏死因子（TNF-α）、C反应蛋白（CRP）浓度。
结果三组在ECC后各时间点的炎性因子无显著差异，但实验组2在ECC后各时间点的炎性指标较对照组相比有下降的趋势。
结论血液代用品PEG－bHb单纯用于预充对兔ECC 后炎性反应无影响，用PEG-bHb置换自体血有可能减轻兔ECC后炎性反应。
【关键词】炎性因子；血液代用品；体外循环；PEG-bHb Abstract: OBJECTIVE To investigate the effect of PEG-conjugated bovine hemoglobin (PEG-bHb) on inflammatory factors when added directly to extracorporeal circulation（ECC）prime in anaesthetized rabbit. METHODS 24 anaesthetized rabbits (2.59±0.19)kg, connected to ECC by jugular venous and femoral arterial cannulation and bypass for 1 hour, were randomly divided into 3 groups. In control group(n=8), a crystalloid/colloid solution was used as prime solution. In experimental group 1(n=8), PEG-bHb (5% total volume) was added to the pump prime of bypass. Total volume is the sum of circulation volume and prime volume. In experimental group 2(n=8), PEG-bHb (15% total volume) was used in the pump prime with previous blood harvesting(20% circulation volume) before ECC. Blood gas were monitored throughout the procedure. The inflammatory factors (IL-6,TNF-α,CRP) were measured using ELISA.RESULTS There were no significant difference of IL-6,TNF-α and CRP between three groups. But in experimental group 2, the inflammatory factors were less than those in control group, but not significantly.CONCLUSION PEG-bHb added to the prime of a rabbit ECC circuit does not independently affect inflammatory response. PEG-bHb on the prime with previous blood harvesting before ECC may improve inflammatory response.Key words： Inflammatory factor; Blood substitute; Extracorporeal circulation; PEG-bHb聚乙二醇牛血红蛋白偶联物（polyethylene glycolconjugated bovine hemoglobin，PEG-bHb）是我国研究开发的一种血红蛋白类血液代用品，研究表明，PEG-bHb具有良好的携带、释放氧的能力，同时具有大分子物质的扩容效应，因此，PEG-bHb在提升血压、恢复微循环血流量的同时，可以改善组织的氧供(资料由北京凯正生物工程发展有限责任公司提供)。
动物病理学炎症介质
这些疾病的发生和发展过程中，炎症介质的异常表达和调节都起到了关键作用， 对疾病进程产生影响。
炎症介质与动物病
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理过程
炎症介质的病理生理作用
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促炎作用
炎症介质能够激活免疫细 胞，促进炎症反应，导致 局部组织红肿、热痛等症 状。
炎症介质的研究有助于深入了解 动物疾病的发生发展机制，为制 定更加科学有效的预防控制策略
提供理论支持。
通过监测动物体内炎症介质的变 化，可以及时发现疾病的预警信 号，采取相应的预防和控制措施
。
在预防控制策略中，需要综合考 虑炎症介质的调节作用和其他因 素的影响，制定综合性的防控方 案，提高动物疾病防治的效果。
炎症介质与疫苗设计
疫苗设计过程中需要充分考虑炎症介质的作用，以提高疫苗的免疫效果和保护率。
通过调节炎症介质的产生和作用，可以优化疫苗的免疫原性和安全性，提高疫苗的 保护效果。
在疫苗设计中，还需要考虑不同动物的免疫系统特点和炎症介质表达差异，以制定 更加科学合理的疫苗研发策略。
炎症介质与疾病预防控制策略
机制较为复杂。
在炎症反应过程中，不同炎症介质之间存在相互促进或抑制的
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相互作用，共同调节炎症反应的强度和持续时间。
常见动物炎症介质
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花生四烯酸代谢产物
总结词
花生四烯酸代谢产物是动物炎症反应 中的重要介质，包括白三烯和前列腺 素等。
详细描述
花生四烯酸代谢产物是由炎症细胞合 成和释放的，具有多种生物活性，能 够诱导炎症反应、促进白细胞趋化和 血管通透性增加等。
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在自身免疫性疾病中，炎症介质 如细胞因子和趋化因子可能失调 ，导致免疫细胞过度活化和组织 损伤。
血液代用品
血液代用品摘要医学实践表明，对于急性大量失血的患者，如在受伤早期几小时内得到有效的血液补充，救治率可达90％以上。
研究人血代用品自然而然也就成了世界各国科学家争先涉足的领域。
用动物血液代替人血是人血代用品的主攻方向，血液中的最主要成分是人血红细胞。
研究人血代用品，实际上就是研究人血红细胞代用品。
血红蛋白是人血红细胞中的具有携氧功能的有效成分，我国科学家采用现代生物技术手段以动物血红蛋白为原料，采用分子修饰的方法有效的解决了输血过程致命的免疫反应。
最终将动物血红蛋白转化为安全有效的人血红蛋白代用品。
关键字人血代用品血红蛋白正文血液代用品的种类目前可载氧血液代用品的研究主要集中在两大类：氟碳类化合物(perfluorocarbon compounds，PFC)和血红蛋白类制剂(hemoglobin，Hb)。
1 氟碳类化合物(PFC)：这类化合物是一类直链或环状碳氢化合物的氟取代物，其特点能有效地溶解气体(02、CO2和其他气体)，不能直接溶于水，需经表面活性剂乳化后才能输入体内。
高氟碳乳胶液在血液中的半衰期取决于其相对分子质量，一般数小时至数天不等，通过体循环到达各个组织和器官，最终通过网状内皮系统以原形由肺排出。
第1代氟碳类化合物如2O％全氟萘烷已获FDA批准，但由于副作用强，还仅限于冠状动脉成形术后冠状动脉灌流。
第2代氟碳类化合物如全氟辛溴含有卵磷脂作为表面活性剂，具有更高携氧能力和保存期，被应用于静脉营养输入。
但其有限的氧含量和体内半衰期短影响其广泛应用。
全氟类化合物产生明显的流感样症候群副作用。
有人认为，此类副作用的出现是机体清除排斥反应的结果，也是体内单核和巨噬细胞被破坏、花生四烯酸分解代谢、前列腺素和过氧化物释放，以及引起迟发性发热反应的细胞因子的释放等因素参与作用的结果。
因此，全氟类化合物在广泛用于临床之前必须解决输注时产生的流感样综合征等副作用。
严格意义上说，全氟碳化合物还不等于血液代用品，其作用只能是在血液极稀释情况下维持组织的氧合作用，延缓自体血的回输时间。
聚乙二醇在药物制剂中的应用
聚乙二醇在药物制剂中的应用聚乙二醇别名聚氧乙烯醇或聚氧乙烯二醇,系环氧乙烷与单乙二醇或双乙二醇在碱性催化剂催化之下聚合而成,分子质量因聚合度不同而异,通常在200～35 000之间,PEG 的性质随分子质量而变化,目前常见的PEG种类有PEG200、PEG300、PEG400、PEG600、PEG2000、PEG4000、PEG6000、PEG8000等;药物溶剂PEG200、PEG300、PEG400、PEG600 系无色、略有微臭的粘性液体,化学性质稳定,安全低毒,故常作为药物的溶剂;另外,为了增加难溶性药物的溶解度,常使用潜溶剂即乙醇、甘油、丙二醇、苯甲醇、聚乙二醇等与水组成的混合溶剂;用于软胶囊剂软胶囊剂的囊材多以一定比例的明胶、增塑剂和水等组成,因此对蛋白质性质无影响的药物和附加剂均可填充;如各种油类、液态药物、药物溶液、药物混悬液和固体药物等;由于低分子质量PEG 能与水混溶,故是水溶性药物和某些有机药物很好的溶剂,如硝苯地平软胶囊;目前,软胶囊剂多为固体药物粉末混悬在油性或非油性PEG400 等分散介质中包制而成;另有报道,水合氯醛应用聚乙二醇作为溶剂可大大降低它对明胶蛋白的分解作用用于注射剂由于PEG200～PEG600 可提高难溶性药物的溶解度且对水不稳定药物有稳定作用,故可作为注射用溶剂;单一以PEG 作为注射用溶剂的注射剂并不多见,如噻替哌注射液以PEG400 或PEG600作为溶剂,可避免噻替哌在水中的聚结沉降作用；盐酸苄去氢骆驼莲碱注射液以 PEG200 作为溶剂,安全稳定,贮放 2 a 保持不变;但一般多用混合溶剂潜溶剂,如以V PEG300: V苯甲醇: V 丙二醇 = 80:5:15 时可作为质量分数为5 % 黄体酮或睾丸酮注射液的混合溶剂,此2 种注射液经肌肉注射后,与体液接触即在局部析出药物沉淀,形成药物仓库,逐渐从组织中释放,具有长效作用,售商品有病毒灵注射液、安乃近注射液、痢菌净注射液、穿心莲注射液、菌毒杀星注射液等;用于滴眼剂研究表明,以PEG400 为溶剂,可制成吲哚美辛滴眼剂;对此滴眼剂进行的稳定性研究结果表明,PEG400 处方优于Span80 处方;另外,PEG 可作为滴眼剂中的增稠剂,增加粘度,使药物在眼内停留时间延长,从而增加药效,减少刺激作用;润滑剂与粘合剂PEG4 000、PEG6 000是片剂中水溶性润滑剂的典型代表,在片剂处方中可直接加入适量聚乙二醇进行整粒,也可将其先配成醇溶液、混悬液或乳液进行制粒,润滑效果不变;利用聚乙二醇制得片剂的崩解和溶出不受影响,可提高主药在胃内的溶解性,最终有助于增加生物利用度;近年来,聚乙二醇在片剂中的使用越来越广泛,它们不仅可用作润滑剂,还可作为粘合剂,以PEG4 000最为常用;如以 PEG4 000为粘合剂熔点较低,在高速搅拌下呈熔融态,α -乳糖为填充剂,交联聚乙烯吡咯烷酮为崩解剂,硬脂酸镁为润滑剂,采用熔融制粒法可制备卡马西平速释片另外对于热不稳定药物,若采用 PEG4 000为粘合剂,可在干燥状态下进行粉末直接压片,效果较为理想;市售商品主要有痢菌净片、多钙片、钙中钙片、痢特灵片等;药物载体PEG 随分子量的增加则由液体逐渐呈半固体至固体,熔点也随之升高;由于PEG 对人体无毒无害,亦无致畸,致癌和基因突变等副作用,且可增加某些药物的溶出速率,提高药物的生物利用度,故是最常用的水溶性载体之一;基质PEG 是一类亲水性基质,其性质稳定,对皮肤无刺激性,而具有润滑性,故广泛应用于软膏剂、栓剂、凝胶剂、滴丸剂、乃至胶囊剂;如水硫软膏基质系由PEG300 与PEG4 000质量比为 2:1 时于70 ℃水浴熔合而成;复方磺胺甲恶唑SMZ栓以mPEG6 000 : mPEG4 000:m水=57:33:10 为基质,其融变时限和体外药物溶出速率均优于可可豆酯、半合成脂肪酸酯等基质;以PEG 为基质,加入主药和一些药物赋形剂可制备水凝胶剂,如氯硝西泮水凝胶,擦在病人身体上可使药物快速透过皮肤进入血液循环从而发挥抗惊厥作用;另外,PEG400、1 500、4 000～20 000 均可作为半固体基质,将硬胶囊改装液体或半固体药液,如硝苯地平1 份、液体 PEG 5 ～25份、PVP ～10 份混合药液罐装的硬胶囊剂具有长效作用,可广泛用于心绞痛的治疗聚乙二醇作为软膏剂水溶性基质,市售的品种有百多邦莫匹罗星、环丙沙星霜等；作为栓剂基质,市售的品种有制霉菌素栓、甲硝唑栓、新霉素栓等;固体分散材料固体分散体系指药物以分子、胶态、无定型、微晶等状态均匀分散在某一固体载体物质中所形成的分散体系;PEG 分子质量为1 000～20 000 是一类常用的水溶性载体材料,可用于增加药物的溶出速率,如以 PEG6 000作为载体,采用熔融法制备格列苯脲固体分散体,其溶出速率和生物利用度与市售达安宁片相比显着提高PEG 也可作为缓释固体分散体的载体材料,如采用熔融法,将药物溶解于熔化的PEG 中,将药液装入硬胶囊中,室温下药液固化,药物按溶蚀机制缓慢释放,故具有缓释作用;另外,药物从PEG 载体中溶出的快慢主要受PEG 分子质量的影响,一般随着 PEG分子质量增大,药物溶出速率会降低;当药物为油类时,宜用分子质量更大的 PEG 类作为载体,如PEG12 000 或PEG6 000与PEG20 000 的混合物,若单用 PEG6 000作载体,固体分散体会变软,特别是在温度高时载体会发粘稳定剂目前,蛋白质类药物制剂的主要问题是药物稳定性差;对于液体剂型蛋白质类药物,可通过加入辅料稳定剂如聚乙二醇、糖类、盐类、表面活性剂等改变其性质增加稳定性;高浓度的PEG常作为蛋白质的低温保护剂和沉淀/ 结晶剂,它可与蛋白质的疏水链作用;研究表明,不同分子量的PEG 作用不同,如 PEG300 质量分数为 %或2 % 可抑制rhKGF 重组人角化细胞生长因子的聚集；PEG200、400、600 和1 000可稳定 BSA 和溶菌酶；PEG4 000不同质量分数可高达质量分数15 %可抑制低分子量尿激酶的热聚集此外,复合型乳剂稳定性差也是妨碍其广泛应用的主要原因;W/O/W型复乳常见的问题是分层,不过发生了分层的复乳经振摇后可复原;油膜破裂使内水相外溢是W/O/W型复乳不稳定的主要原因;若在内外水相中加入高分子物质作为稳定剂可增加其稳定性,如在外水相中加入PEG 、泊洛沙姆等可使复乳的粘度增大,降低复乳乳化膜的流动性,这对减小W/O/W型复乳的分层是有利的,且不影响其倾倒性和通针性;增塑剂与致孔剂PEG 是亲水性高分子物质,可作为增塑剂以改变聚合物的物理机械性质,使其更具柔顺性、塑性;如为了使明胶微囊具有良好的可塑性,不粘连且分散性好,常需加入增塑剂如聚乙二醇,山梨醇,丙二醇,甘油等;研究表明,在单凝聚法制备明胶微囊时,加入增塑剂可减少微囊聚集,降低囊壁厚度,且加入增塑剂的量同释药半衰期之间呈负相关;PEG 作为增塑剂也广泛应用于薄膜包衣材料中,PEG 带有羟基,可作为某些纤维素衣材的增塑剂,如以醋酸纤维素为膜材,PEG400 为增塑剂,阿拉伯胶为渗透压活性物质和助悬剂所制备的难溶性药物萘普生的单室单层渗透泵上下面均有释药小孔以零级速率释药,药物在12 h 的累积释放率可达 81 %;此外,PEG 作为增塑剂在膜剂和涂膜剂中也有应用;PEG 是能与水互溶的聚合物分子,所以 PEG 可作为膜控型缓控释药物的致孔剂;PEG 这类致孔剂能很快溶于介质中,形成较大的孔道,随着孔道的增加,外部溶剂很容易扩散穿过控释膜,加速了药物的释放;因而通过选择合适的聚合物衣膜和致孔材料可使药物达到恒速释放;如头孢氨苄缓释小丸以乙基纤维素为包衣材料,PEG6 000为致孔剂,此缓释胶囊包衣增质量 30 %,在 7 h内表现为药物零级释放,释药重现性良好;又如伪麻黄碱渗透泵无释药小孔以醋酸纤维素为膜材,酞酸二乙酯和PEG400 为致孔剂,碳酸氢钠为渗透压活性物质,其在12 h 内遵循零级释药规律修饰材料聚乙二醇类PEG 修饰剂是 pH中性、无毒、水溶性的聚合物,具有高度的亲水性和良好的生物相容性及血液相容性,并且没有免疫原性;故采用PEG 进行结构修饰可改善药物的以下性质：1 增加稳定性,降低酶降解作用；2 改善药物动力学性质,如延长血浆半衰期、降低最大血药浓度、血药浓度波动减小等；3 降低免疫原性和抗原性；4降低毒性,提高体内活性；5改善体内药物分布,靶向性增强；6 减少用药频率,提高病人依从性用于修饰脂质体传统脂质体和免疫脂质体易被网状内皮系统RES 的细胞识别并摄取,导致血循环半衰期很短通常低于30 min,到达靶器官之前即被清除,故应用很受限制;若在脂质体膜表面引入亲水性聚合物分子PEG ,可在脂质体表面形成一层水化膜,掩盖脂质体表面的疏水性结合位点,阻碍血浆成分接近脂质体,从而降低RES 对脂质体的识别和摄取,延长脂质体的血循环时间;PEG 修饰脂质体可以在病变部位如肿瘤、感染、心肌梗死等区域通过所谓的“被动靶向” 或代偿滤过机制缓慢积累,并促进药物在这些区域的转运;如PEG 修饰的多柔比星脂质体在动物实验及人体临床试验中均取得显着效果,且已有产品长效脂质体多柔比星Doxil 上市;此外,PEG 修饰的阿霉素脂质体与传统的阿霉素脂质体相比,药代动力学特征显着变化,抗肿瘤活性明显增强,毒性有所降低;这表明了PEG 修饰脂质体是一种很有前景的药物传递系统;用于修饰乳剂长循环乳剂是指对静脉注射用脂肪乳剂表面进行适当的修饰,以避免单核吞噬细胞系统MPS 的吞噬,延长体循环时间的乳剂;乳滴表面被柔顺而亲水的 PEG 链覆盖,亲水性增强,减少血浆蛋白与其相互作用的几率,降低被 MPS 吞噬的可能性;以二棕榈酰磷脂酰胆碱为乳化剂,助乳化剂,三油酸甘油酯为油相,加入适量PEG 修饰的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺DSPE-PEG,可制得粒径为44 nm 的微乳,静注后在血中的清除率比未经修饰的微乳明显降低布洛芬溶解度极小,市售只有其衍生物氟布洛芬酯的乳剂,Park 等以油酸乙酯为油相、卵磷脂为乳化剂、DSPE-PEG 为助乳化剂制备了氟布洛芬微乳,与前者相比,t1/2、AUC、MRT都显着增加,同时可降低MPS的吞噬;另外,据文献23 报道,以 PEG 和叶酸修饰的阿柔比星微乳对于癌细胞具有显着的靶向性;用于修饰纳米粒和微球可生物降解的聚合物纳米粒作为药物输送载体有很多优势,如可控释、靶向、低毒等;但是,由于聚合物纳米粒经静脉给药后,数秒或数分钟内会被RES 清除而无法普遍应用;为克服这一缺点,可引入亲水性聚合物PEG 对聚合物进行修饰;研究表明,亲水性PEG 修饰的纳米粒,用于静脉给药时,血液清除和RES 摄取显着减小,并且PEG 引入会影响纳米粒的生物降解行为,调节释药方式;如Ruxandra 等以乳化溶剂蒸发法制备的环孢酶素CyA PLA-PEG共聚物纳米粒粒径分布很窄,呈单峰分布,且此分散体系性质稳定,包封率很高83 ℅ ～96 ℅ ,其体外释药符合扩散机制;另外,PEG 修饰的吲哚美辛脂质微球与传统的脂质微球相比,体内总清除率明显降低,药物靶向性显着提高,药物动力学参数如t1/2、AUC、MRT都显着增加用于修饰多肽和蛋白类药物 PEG 末端的醇羟基化学性质不活泼,为保证其与药物活性基团间有适宜的反应速率,需对醇羟基进行活化,以利于与蛋白质的α-和ε-氨基的反应;按PEG 与蛋白质氨基形成的连接键类型,活化PEG 可分为以下两类：1 烷基化 PEG ,如醛基化 PEG 、PEG-三氟乙基磺酸酯PEG-T 等；2 酰化 PEG ,如 PEG 琥珀酰亚胺基琥珀酸酯PEG-SS、PEG 琥珀酰亚胺基碳酸酯PEG-SC等;蛋白质和多肽类药物主要包括酶、细胞因子等一些具有特殊功能的蛋白质,其PEG 的修饰即PEG 化,是将活化的 PEG 通过化学方法偶联到蛋白质和多肽上;PEG 修饰蛋白药物可以延长药物的半衰期、降低免疫原性和毒副作用,同时最大限度地保留其生物活性;自从1991 年第一种用 PEG 修饰的腺苷脱氨基酶PEG-ADA被 FDA 批准上市后, PEG 修饰药物蛋白的技术飞速发展,近几年上市的还有PEG-干扰素、PEG-GSF、PEG-生长抑素;如普通干扰素α-2b 的半衰期只有 4 h,而经过聚乙二醇化的干扰素α-2b 的半衰期达 40 h ,可在体内持续作用168 h,刚好满足1 周1 次给药;故聚乙二醇干扰素又叫长效干扰素商品名：佩乐能;另外,PEG 修饰的重组人粒细胞集落刺激因子也已经上市,其体内半衰期显着延长,临床上用于治疗化疗引起的嗜中性白血球减少症;目前处于临床前研究的 PEG 修饰的蛋白药物有几十种,处于临床实验的有：超氧化物歧化酶即将上市,美国Enzon 公司、白介素-2 Ⅱ期临床,挪威Chiron 公司、水蛭素Ⅱ期临床,德国 BASF AG公司、抗-TNFα抗体片段Ⅲ期临床,瑞典Pharmacia公司、牛血红蛋白Ⅰ期临床,美国Enzon 公司、抗-PDGF 抗体片段Ⅱ期临床,英国Celltech公司等;渗透促进剂渗透促进剂是指能可逆的改变皮肤角质层的屏障功能,又不损伤任何活性细胞的化学物质;理想的渗透促进剂应无药理活性、无毒、无刺激性、无致敏性,与药物、基质和皮肤有良好的相容性,无臭无味;常见的渗透促进剂有亚砜类、表面活性剂类、多醇类、吡咯酮类等;多醇类化合物有乙醇、丙二醇、聚乙二醇、异丙醇和丙三醇等;多元醇类的作用机制是使角蛋白溶剂化,占据蛋白质的氢键结合部位,减少药物与组织间结合,增加并用的其他渗透促进剂在角质层的分配;Chaudhuri等比较了心得安在 5 种介质中的人体透皮速率,结果 PEG > 二乙醇 > pH 磷酸盐缓冲液 > 辛醇 > 肉豆蔻酸异丙酯;据 Touitou等报道,包含油酸、PEG 等基质能使茶碱对大鼠的透皮吸收增强260 倍;另有研究表明,在1 % 普萘洛尔水溶液中各加 5 % 的促渗剂,对 5 种渗透促进剂促渗效果进行了比较,结果二甲基亚砜 > PEG400 ,油酸 > 丙三醇 > Span80 ;综上,PEG 在透皮吸收制剂中的作用并不亚于油酸;但据研究报道,PEG 由于含有大量的醚氧原子,与药物产生氢键结合可能性很大,这势必降低药物的热力学活性;同时,由于 PEG 本身粘度较大,故会增加载体微环境的的粘度,这样不仅抑制了角质层的水合,而且角质层会因其高渗作用发生脱水,促渗效果并不理想;因此,PEG 应与油酸、氮酮、丙二醇等促渗剂联合应用应用局限性聚乙二醇有以下缺点：作为软膏基质时,长期应用可引起皮肤干燥；可与一些药物如苯甲酸、水杨酸、鞣酸、苯酚等络合,导致基质过度软化,也会降低酚类防腐剂的活性;聚乙二醇作为软胶囊填充剂时,由于选择性吸收胶囊壳内水分,导致囊壳硬化,从而影响药物释放速率;制备栓剂易出现孔洞影响外观；随高分子量的聚乙二醇加入量增加,水溶性药物的释放率减小;对粘膜的刺激性比脂肪性基质大;聚乙二醇的不良反应已有报道：局部用药可能引起过敏反应,包括荨麻疹和延迟性过敏反应；最严重的不良发应在烧伤病人局部应用聚乙二醇产生的高渗性,代谢物的酸中毒和肾功能减退;低分子量的聚乙二醇毒性最大,但二醇类毒性是相当低的;。
聚乙二醇－牛血红蛋白停搏液对离体心脏功能和超微结构的影响
聚乙二醇－牛血红蛋白停搏液对离体心脏功能和超微结构的影响【摘要】目的观察含聚乙二醇－牛血红蛋白（polyethylene glycol-bovine hemoglobin， PEG-bHb）的心脏停搏液对离体心脏功能的影响。
方法 32只成年雄性S-D大鼠根据停搏液不同随机分为4组，麻醉后开胸取心，建立Langendorff离体心脏灌注模型，平衡20 min后灌注冷St. Thomas液或三种不同浓度的PEG-bHb停搏液，30℃保持60 min后恢复灌注。
记录各组左室发展压（LVDP）、左心室内压最大变化速率（±dp/dtmax）和冠脉流出量（CF）等血流动力学指标，并行超微结构观察。
结果恢复灌注后，三个PEG-bHb组的LDVP、±dp/dtmax及CF均显著高于St.Thomas液组（P<0.05），超微结构也得到较好的保护。
三个PEG-bHb组之间除CF外，其余指标均无明显差异（P>0.05）。
结论以PEG-bHb制成的含血停搏液可以改善离体心脏的血流动力学表现和超微结构。
【关键词】聚乙二醇－牛血红蛋白停搏液心脏功能血流动力学超微结构Abstract: OBJECTIVE To evaluate the effect of polyethyleneglycol-bovine hemoglobin (PEG-bHb)-containing cardioplegic solution on cardiac function in isolated animal hearts. METHODS The hearts of 32 male S-D rats were harvested and transferred to langendorff circuit. They were pided into 4 groups according to cardioplegia: St.Thomas or 3 different concentrations of PEG-bHb in St.Thomas solution. After 20 min balance period，hearts were perfused with cold (4℃) cardioplegic solutions，and preserved at 30℃ for 60 min， then reperfused. RESULTS After reperfusion， left ventricular developed pressure (LVDP)，derivative of pressure (±dp/dtmax) and coronary flow (CF) were higherin PEG-bHb groups (P<0.05). Ultrastructures were better preserved inPEG-bHb groups. There was no difference among 3 PEG-bHb groups except CF. CONCLUSION PEG-bHb in cardioplegic solutions can improve hemodynamic values and ultrastrctures in hearts after ischemia.Key words： Polyethylene glycol-bovine hemoglobin; Cardioplegic solution;Myocardial function;Hemodynamics;Ultrastructure70年代晶体停搏液成功用于心脏手术，随后Follette等［1］提出了含血心脏停搏液。
血红蛋白氧载体研究进展
血红蛋白氧载体研究进展王程;隋春红;吕士杰【摘要】血红蛋白氧载体(HBOCs)作为血液代用品有广阔的临床应用前景.将无细胞基质血红蛋白制备成适用于临床的HBOCs已经历了30余年研究,国内近几年的HBOCs产品研究也有长足进步.本文综述了HBOCs制备所用血红蛋白的来源、无基质Hb及各种HBOCs作为基础血液代用品的最新研究进展.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2008(029)001【总页数】5页(P44-48)【关键词】血红蛋白氧载体;血液代用品【作者】王程;隋春红;吕士杰【作者单位】吉林医药学院,生化教研室,吉林,吉林,132013;吉林医药学院,化学教研室,吉林,吉林,132013;吉林医药学院,生化教研室,吉林,吉林,132013【正文语种】中文【中图分类】R452自1901 年维也纳大学Landsteiner首先发现人红细胞血型以来[1]，输血成为医疗的一部分。
临床常规输血技术是安全的，但是由于血液贮存期短、供-受血者之间需要配型、血液传播血源性疾病等原因，限制了配体输血技术在紧急状况的广泛应用，由此促进了血液代用品的研究开发。
血液代用品是具有携氧扩容功能的溶液，有人将其定义为“携带氧气的扩容剂”[2]，必须具备来源充足、无毒性、无免疫原性、良好的流变学性质、较长的血管内存留时间和正常的生理代谢途径等特点。
目前有两类血液代用品正在研究开发之中：一类是血红蛋白氧载体(hemoglobin-based oxygen carriers，HBOCs)，另一类是氟碳化合物(Perfluorocarbon Compounds，PFC)。
在此主要阐述HBOCs的研究进展。
1 制备HBOCs的血红蛋白来源目前用于制备HBOCs的血红蛋白(hemoglobin,Hb)来源有3种：一是过期的人血红细胞(outdated human erythrocy)。
由于其来源限制，难以大规模发展人源性HBOCs。
聚乙二醇
摘要越来越多的蛋白质多肽类药物被应用于人类疾病的治疗，与其它合成化学药物相比，它们有易引起机体的免疫反应，体内半衰期短，在体内易水解、变性等缺点。
化学修饰作为一种新兴技术，能改善上述不良特性。
本文主要优化合成了一种PEG修饰剂——mPEG．NHs，采用牛血清白蛋白BsA和溶菌酶作为模式蛋白对其修饰条件进行了优化，并用层析法分离修饰后蛋白质。
mPEG．NHS的合成主要通过两个反应得到，第一步是mPEG同丁二酸酐之间的酯化反应，得到mPEG—SA，第二步是mPEG—SA同NHS(N．羟基硫代琥珀酰亚胺)反应，在脱水剂DCCI(N．N’一二己基碳二亚胺)的催化下得到mPEG．NHS。
通过优化反应条件使得mPEG的转化率和mPEG．NHs的纯度都得到提高。
优化后反应条件分别为：n1酯化反应采用毗啶为催化剂，酸醇比为10：I，反应时间3 h；f2)脱水反应时间25h，温度400C反应物摩尔比mPEG．sA：NHS为1：2．5。
优化后的两步反应的转化率分别为60．1％和56．O％。
mPEG—NHS修饰蛋白质在不同的反应条件下得到不同修饰率的蛋白质，优化反应条件后能得到更高氨基修饰率的修饰产物。
最佳修饰反应条件为：反应时间10min，蛋白质和修饰剂质量比为1：5，采用pH=9．O的硼砂缓冲液，在优化条件下可得到修饰率为47．5％的产物。
由于修饰反应得到的蛋白质溶液中含有连接有修饰剂的蛋白质和未连接修饰剂的蛋白质，可通过层析的方法将它们分离开。
溶菌酶修饰产物采用seDhadex G．75凝胶层析和Deae．sepharose CL-6B阳离子交换层析相结合的方法：BsA 修饰产物采用sephadex G．100和Q．SeDharose阴离子交换层析相结合的方法。
用sDs．PAGE电泳检测分离产物，证明未修饰的蛋白质同被修饰的蛋白质被分离开来。
关键词：PEG修饰化学修饰合成优化分离层析随着生物工程技术的迅速发展，生物技术活性物质不断面世，已有不少生物技术药物应用于I}缶床，国内外已批准上市的约40多种，目前正在研究的则成倍增加，在这些品种中，大量的均为多肽与蛋白质类药物“。
犬膀胱移行上皮癌的病例报告
142019·12中国工作犬业Disease· breeding犬病 繁育犬膀胱移行上皮癌的病例报告陶巍夫 卫少光 倪宏波>>> 一、病例信息雪纳瑞犬，雌性，11kg，疫苗驱虫完全，未绝育，犬粮饲喂为主。
持续血尿约2年，近3天全程红色尿液。
>>>二、临床检查（一）理学检查体温38.6℃、呼吸数22次/min、脉搏135/min。
ASA 评分Ⅱ级，BCS 评分5分。
（二）血液学检查血液学检查见表1～2，血液生化检测显示肌酐降低，血液细胞分析结果显示白细胞总数、淋巴细胞数目和淋巴细胞百分比升高，中性粒细胞百分比、红细胞总数、血红蛋白、红细胞压积、平均血红蛋白浓度降低。
提示机体可能存在病毒感染、严重贫血。
犬膀胱肿瘤占已报告犬肿瘤的2%，犬膀胱移行上皮癌(TCC)约占膀胱肿瘤的90%。
TCC 是一种侵袭性很强的肿瘤，常发生于膀胱三角区。
TCC 的临床症状包括血尿、排尿困难、尿频和尿淋漓等。
手术治疗可能出现局部和远端转移，化疗治疗可改善犬的生活质量，但多数犬的TCC最后会死亡。
表1 血液细胞分析仪检测报告表2 血液生化检测报告152019·12中国工作犬业Disease· breeding犬病 繁育（三）影像学检查（大概）X 线检查见图1~4，胸片显示肺部非血管线性纹理增多，考虑与老年相关，腹片显示膀胱内存在3颗结石。
B 超检查见图5，膀胱内可见3.29mm×1.40mm 中等回声、不规则团块，考虑膀胱肿瘤或息肉。
图1 术前胸部腹背位X 线图2 术前胸部右侧位X 线图3 术前腹部右侧位X 线图4 术前腹部腹背位X 线图5 膀胱B 超检查>>>三、诊断结果膀胱结石，膀胱内肿物。
>>>四、手术治疗（一）麻醉方案麻醉前吸氧3min，后按每千克体重静脉注射丙泊酚5mg 诱导麻醉，诱导后进行气管插管。
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Ｅ Ｃ后各时间点的炎性 指标 较对照组相 比有下降的趋势 。结论 Ｃ
关键词 ： 炎性因子 ； 血液代用 品 ； 体外循环 ；Ｅ ｂ ｂ Ｐ Ｇ— Ｈ 中图分类 号： ６ ４ １ 文献标识码 ： Ａ Ｒ ５．
血液代用 品 Ｐ Ｇ—ｂ ｂ单纯用于预充对兔 Ｅ Ｃ Ｅ Ｈ Ｃ
后炎性反应无影响 ， Ｐ Ｇ—ｂ 用 Ｅ Ｈｂ置换 自体血有可能减轻兔 Ｅ Ｃ后 炎性 反应 。 Ｃ 文章编号 ： ７ １ ２—１０ （ ０ ７ ０ ０ ４ ６ ４ ３ ２ ０ ） １— ０ ３—０ ４
流 １ｈ 。随机分成三组 ， 对照组（ ８ ， ｎ＝ ） 以晶／ 胶体液作 为 Ｅ Ｃ预充液 ； Ｃ 实验组 １ ｎ＝ ） 在预 充液 中加入 Ｐ Ｇ— （ ８ ， Ｅ ｂ ，Ｅ Ｐ Ｇ—ｂ ｂ占总容量 （ Ｈ 兔循 环血量 ＋预充量 ） ５ ； 验组 ２ ｎ＝８ ， 的 ％ 实 （ ） 预充 液 中加 入 Ｐ Ｇ—ｂ ｂ 占总容 量 Ｅ Ｈ ，
（ 兔循环 血量 ＋ 充量 ） １ ％ ，Ｃ 预 的 ５ Ｅ Ｃ开始时放出 自体血（ 放血量 占兔循环血量 的 ２ ％ ） Ｅ Ｃ结 束后将 自体 血 回 ０ ，Ｃ
输 。每组监测 Ｅ Ｃ前、 Ｃ 中和 Ｅ Ｃ后的血气参数 ， Ｅ ＩＡ法测定各 时间 点血清 白介素 一 （Ｌ一 ） 肿瘤坏 死因 Ｃ 用 ＬＳ ６Ｉ ６ 、 子 （ Ｎ ） Ｃ反应蛋 白（ Ｒ 浓度 。结 果 Ｔ Ｆ— 、 Ｃ Ｐ） 三组 在 Ｅ Ｃ后各 时 间点 的炎性 因子无 显著差 异 ， Ｃ 但实 验组 ２在
摘要 ： 目的
探讨在体 外循 环（ ｘ ａｏｐｒ ｌ ｉ ｕａ ｏ ， Ｃ 预充 液中加入 聚 乙二 醇牛血 红蛋 白偶 联物 （ Ｅ ｅｔ ｃｒｏｅ ｒ ｌ ｎ Ｅ Ｃ） ｒ ａ ｃｃ ｔ ｉ Ｐ Ｇ—
ｂ ｂ 对兔 血清炎性 因子Байду номын сангаас影 响。方法 ２ Ｈ） ４只成年健康 大耳 白兔 ， 通过股动脉 、 颈静脉插管建立体外循环通路 ， 转
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中国体外循环杂志 ２０ ０ ７年第 ５卷第 １期
４ ３
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论 著 ・
聚 乙二 醇 牛 血 红 蛋 白偶 联 物对 血 清 炎性 因子 的影 响
赵 明霞 龙 ， 村 贺 学英 管 ， ， 博 王 ， 蕊
（． １ 中国医学科学 院阜外心血管病 医院体外循环科 ， 北京 １０ ３ ；． ００ ７ ２ 北京凯正生 物工程发 展有 限责任公 司 ， 北京 １０ ５ ） ０ ８０
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