解脂耶氏酵母研究进展
亲环素论文：解脂耶氏酵母亲环素的原核表达与纯化
亲环素论文：解脂耶氏酵母亲环素的原核表达与纯化【中文摘要】亲环素(Cyclophilins, CyPs)是一类广泛存在于各种具细胞结构的生物体内且结构高度保守的蛋白家族。
它们是一种分子伴侣,类属肽脯氨酰顺反异构酶超家族,能催化含脯氨酸亚氨基肽键异构化,协助蛋白质正确折叠、组装和运输。
此外,亲环素还与环孢素A结合参与对机体的免疫抑制,并在细胞凋亡、氧化应激、胆固醇代谢等生命活动中发挥的重要的作用。
解脂耶氏酵母(Yarrow ia lipolylica)属于子囊菌纲真菌,它能在较广的pH范围内生存,并能以葡萄糖,脂肪酸和烃类等常见而廉价的物质作为代谢底物,是一种重要的工业酵母菌。
解脂耶氏酵母是非致病菌,因此能用于食品和药物生产。
此外,由于解脂耶氏酵母代谢分泌大量的有机酸和蛋白质到胞外培养基,所以也被人们开发成为—种优良的酵母表达系统。
迄今发现并克隆的亲环素家族成员已经超过一百多种,研究者也从解脂耶氏酵母基因组中找到了13种亲环素基因。
本文以解脂耶氏酵母亲环素基因YALIOC15653g (Gene ID:2909417)为研究对象,以解脂耶氏酵母总DNA为模板,PCR扩增该亲环素基因；产物经T-A克隆后进行测序鉴定；构建亲环素原核表达载体pET32a-CyP,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS;阳性克隆经IPTG诱导表达亲环素,经Ni-NTA金属螯合亲和层析纯化亲环素,纯化效果通过SDS-PAGE电泳进行检验。
现将结果小结如下：●测序结果证实成功扩增得到全长解脂耶氏酵母亲环素基因。
●菌落PCR检验证实成功构建原核表达质粒pET32a-CyP。
·SDS-PAGE结果证实,成功在大肠杆菌中诱导表达出亲环素。
以上结果表明,本研究成功克隆出解脂耶氏酵母亲环素基因,并能在原核细胞中正确表达,为进一步研究解脂耶氏酵母亲环素的结构和功能奠定了基础。
【英文摘要】Cyclophilins comprise a protein family of highly conservative structure which exist in almost all organisms. As the peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (PPIase), cyclophilins can catalyze the cis-trans isomerization of the X-Pro peptide bonds. In the same time, cyclophilins work as molecular chaperones in helping proteins flod, assemble and transport. They are also playing pivotal roles in cyclosporin A-mediated immunosuppression and other events like programmed cell deaths, oxidative stress, cholesterol metabolism. The yeast Yarrowia lipolylica belongs to the ascomycetous yeast. It is an important industrial yeast which can survive wild range of pH conditions and take ordinary and cheap substances like glucose, fatty acids, hydrocarbons as substrates. Since Yarrowia lipolytica is nonpathogenic, it can be used in the food and medicine production. Yarrowia lipolylica secrets large amounts of metabolites like organic acids and proteins, so it was developed into a new yeast expression system. More than one hundred of cyclophilins have been identified, and there arealso 13 putative cyclophilins through out the Yarrowia lipolytica genome.In this study, we picked one of the putative Yarrowia lipolytica cyclophilins (Gene ID:2909417) as our research object and obtained the gene information from the NCBI database. Primers were designed on the open reading frame of the cyclophilin gene. And the genomic DNA was extracted for amplification of the cyclophilin gene by PCR. TA cloning and sequencing was conducted to identify the insert, after which the expressive vector PET32a-CyP was constructed. Then the constructed expressive vector pET32a-CyP was transformed to E. coli BL21 (DE3) plysS for expression under induction of IPTG. The cells were breaked by ultrasonic. Then the induced cyclophilin protein was obtained by immoblized metal-chelate affinity chroma to graphy and identified bySDS-PAGE.Sequencing result confirmed that the full length cyclophilin gene has been cloned. Colony PCR analysis proved that expressive vector pET32a-CyP was correctly constructed. SDS-PAGE showed that The molecular weight of the induced cyclophilin protein was about 95KD. Conclusion:The successful prokaryotic expression of the Yarrowia lipolytica cyclophilin gene may lay the foundation for future structural and functional Studies.【关键词】亲环素解脂耶氏酵母基因克隆原核表达【英文关键词】Cyclophilin Yarrowia lipolytica Gene cloning Prokaryotic expression【目录】解脂耶氏酵母亲环素的原核表达与纯化摘要3-4ABSTRACT4-5第一章前言9-18 1.1 引言9 1.2 亲环素家族9-10 1.3 亲环素的分子结构10-12 1.4 亲环素的分布与亚细胞定位12 1.5 亲环素生物活性的研究12-14 1.5.1 PPIase活性12-13 1.5.2 分子伴侣13 1.5.3 核酸酶活性13-14 1.6 亲环素生物学功能的研究14-17 1.6.1 免疫抑制14-15 1.6.2 氧化应激15 1.6.3 胆固醇代谢15 1.6.4 HIV病毒感染15-16 1.6.5 植物发育16-17 1.7 本研究的目的与意义17-18第二章实验材料18-25 2.1 主要的仪器18 2.2 主要的试剂18-19 2.3 菌株及其培养基19-20 2.4 主要溶液和缓冲液配制20-22 2.4.1 核酸提取类缓冲液20 2.4.2 电泳类缓冲液20-21 2.4.3 其它溶液21-22 2.5 电泳凝胶22 2.6 引物和质粒22-25 2.6.1 载体质粒22-24 2.6.2 实验引物24-25第三章实验方法25-38 3.1 实验技术路线25-26 3.2 亲环素基因克隆载体构建26-33 3.2.1 菌种复苏26 3.2.2 解脂耶氏酵母基因组DNA的提取26-27 3.2.3 基因组DNA的电泳检测27 3.2.4 DNA浓度测定27 3.2.5 PCR扩增目的基因27-28 3.2.6 PCR结果鉴定28 3.2.7 割胶回收纯化28-29 3.2.8 DH5a感受态制备29 3.2.9 克隆载体构建29-30 3.2.10 克隆质粒转化细菌30 3.2.11 菌落PCR重组子鉴定30-31 3.2.12 阳性菌扩大培养31 3.2.13 阳性菌质粒提取31-32 3.2.14 重组质粒双酶切鉴定32 3.2.15 菌液测序32-33 3.3 亲环素基因原核表达载体构建33-34 3.3.1 克隆载体和表达质粒双酶切33 3.3.2 目的片段和双酶切PET32a的连接与转化33-34 3.3.3PET32a-Cyp质粒鉴定34 3.3.4 表达菌保种34 3.4 亲环素基因原核表达与纯化34-38 3.4.1 诱导表达34-35 3.4.2 重组蛋白表达SDS-PAGE检测35 3.4.3 蛋白包涵体SDS-PAGE检测35-36 3.4.4 亲环素重组蛋白纯化36-38第四章结果与分析38-52 4.1 亲环素基因克隆载体构建38-47 4.1.1 总DNA提取结果与分析38-39 4.1.2 PCR扩增结果与分析39 4.1.3 菌落PCR 阳性菌鉴定结果39-40 4.1.4 阳性菌质粒提取结果40-41 4.1.5 质粒双酶切鉴定与分析41-42 4.1.6 克隆载体测序结果与分析42-47 4.2 亲环素基因表达载体构建47-48 4.2.1 PET32a双酶切结果47-48 4.2.2 菌落PCR 表达菌鉴定结果48 4.3 原核表达和纯化的结果与分析48-52 4.3.1 重组蛋白表达结果48-50 4.3.2 蛋白包涵体检测结果50 4.3.3 亲环素重组蛋白纯化结果50-52第五章讨论52-56 5.1 克隆目的基因52-53 5.2 展望53-56致谢56-57参考文献57-61攻读学位期间的研究成果61。
解脂耶氏酵母表达系统研究进展
酸、 并柠檬酸 ） 蛋 白类（ 白酶 、 ， 蛋 脂肪酸、 酯酶 、 酸酶、／ 磷 Ｏ 甘露糖 苷酶 、 Ｎ ｓ） 一 Ｒ ａｅ 。烷烃类廉价物质作 为底物分 泌大量
的代谢产物 ， 自上世纪 ４ ０年代被发现 以来， 越来越受到研 究者 的重视 ， 于上世 纪 ９ 并 ０年代 被 开发 成为一种新 的酵 母表达 系统 ， 用于 ４ ２种异源蛋 白的 高效表达。综述 了解脂 耶氏酵母表 达 系统及其特 点 ， 利 于研 究者从转 录和 翻 有 译 的水平研究并源蛋 白在此 茵中的表达分 泌路径 以及寻找到调控型启动子。 关键词 ： 脂耶氏酵母 ； 解 表达 系统 ； 异源蛋 白表达 中图分类号 ： ３ Ｑ６ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ：６ ２—３７ （０ ８ ０ ０ １ １７ ６ ８ ２ ０ ）３— ０ ０—０ ７
Ｒｅ ｉｗ ｆＹ ｒｏｗｉ ｉ ｌｔｃ ｘ ｅ ｓｏ ｙ ｔ ｍ ｖｅ ｏ ａ ｒ ａ ｌ ｙ ｉａ ｅ ｐｒ ｓｉ ｎ ｓ ｓｅ ｐｏ
Ｚ Ａ ｅｙ ｎ Ｕ Ｇ Ｙ ｎ ， Ａ Ｇ Ｊ ｎ —ｅ Ｘ ｉ Ｙ Ｎ Ｙ ｎｊｎ Ｈ Ｏ Ｈ —ｕ ，Ｈ ＡＮ ｉｇ Ｙ Ｎ ｉ ｇｋ ， Ｕ Ｌ ， Ａ ｕ － ａ ｕ
赵鹤云 ， 黄 瑛 ， 杨江科 ， 徐 莉 ， 闫云君
（ 中科技 大 学 生命科 学 与技术 学 院 ， 育部分 子 生物 物理 重 点实验 室 ， 汉 ４ ０７ ） 华 教 武 ３０４
摘
要： 解脂耶 氏酵母 （ ａｒｗａｌ ｏ ｔａ 是非常规 酵母 中具代表性 的一种 ， Ｙ ｒ ｉ ｐ ｌ ｉ ） ｏ ｉ ｙｃ 它底物广泛 ， 尤其能 利用有机酸 （ 柠檬
ｔ ｘ ｒ ｓ ｂ ｕ ２ ｈ ｔｒ ｌｇ ｕｓ ｐ ｏ ｅｎ ｕ ｃ ｓｆ ｌ ｏ ｅ ｐ ｅ ｓａ ｏ ｔ４ ｅ ｅｏ ｏ ｏ ｒ ｔｉ ｓ ｓ ｃ ｅ ｓｕ ｌ Ｔ ｈ ｒ ｃｅ ｓｉ ｘ ｒ ｓｉ ｎ ｓ ｓｅ ｏ ａ ｒ ｗｉ ｙ． ｈｅ ｃ ａ ａ ｔ ｒ ｔ ｅ ｐ ｅ ｓｏ ｙ ｔｍ ｆ Ｙ ｒｏ ａ ｉ ｃ
解酯耶氏酵母产γ-癸内酯的研究进展
Ｓ ｏｉ ｏ ｏｕ ｐ ｒｄｉｂ ｌ ｓ ｓ ｍ ｏ ｉｏｏ 【 一 ａｌ ｎ ｃ ｌ ｒ
Ｆｉ １ Ｓ ｒ ｃｕｒｌｆｒ ｇ． ｔｕ ｔ ａ ｏｍｕｌ ｆ 一 ｅ ａａ ｔｎｅ ａ ｏ ｄ ｅ ｌｃｏ
＾癸 内酯 天 然 存 在 于 桃 子 、 莓 、 子 、 果 、 ｙ 一 草 椰 芒
杏、 啤酒 、 朗姆酒 中 ， 也存 在于 乳制 品的风 味物质 中 ，
在 ８ ％ 以上 ） 如 图 ２ 为底 物 ， ４次 Ｂ氧 化 使碳 ０ （ ） 经 －
摘 要 ：介 绍 了微 生 物 通 过 Ｂ 氧 化 转 化 蓖 麻 油 酸 产 生 ． 内 酯 的 机 理 和 国 内 外 对 解 脂 耶 罗 维 亚 － 癸
酵母在 产 ＾癸 内酯方 面的一 系列相 关研 究进展 ， ｙ 一 同时介 绍 了本研 究组 应 用 同源重 组基 因敲 除和 自
克 隆技 术 对 解 脂 耶 罗 维 亚 酵 母 进 行 的 某 些 基 因遗 传 改 良工 作 ， 过 本 研 究 组 的 工 作 ， 用 解 脂 耶 罗 通 应
．
１ 微 生 物 发 酵 生 产 天 然 － 内 酯 的 癸
机 理
早在 ２ ０世 纪 ６ ０年 代 ， ｃ ｅ等 在 研 究 多 种 Ｗａｈ
微 生 物的羟 基酸 代 谢 产 物时 就 发 现 ， 些微 生 物 具 某
收稿 日期 ： ０ ９—１ ２０ ２—１ ５ 基 金 项 目：北 京 市教 育 委员 会 科 技 计 划 重 点 资 助项 目（ Ｚ ０ ９０ １０ １ ． Ｋ ２ ０ １０ １０ ）
解脂耶氏酵母(Y.lipolytica)利用玉米芯发酵产赤藓醇的研究
产量的影响。研究结果表明：Y. lipolytica 可以利用玉米芯为唯一碳源发酵产赤藓醇，发酵最适碳源浓度为 60 g/L、
最佳氮源种类为氯化铵、最佳氮源浓度为 2.5 g/L；添加浓度为 50.0 g/L 的 NaCl 能为发酵产醇提供较适宜的渗透压；
向培养基中添加 8 mg/L 的 Zn2 ＋和 15.0 mg/L 的 Fe3 ＋，能进一步提升赤藓醇的产量。在最优培养基条件下持续发酵
were added to the fermentation medium. After continuous fermentation for 96 h under the above optimal conditions，the yield of erythritol reached a maximum of 37.26 g/L，and the conversion rate of erythritol was as
yield of erythritol. The results show that corn cob can be fermented as the sole carbon source to produce erythritol. The optimum carbon source concentration is 60 g/L， the best nitrogen source is ammonium chloride，
96 h，赤藓醇的产量最高可达 37.26 g/L，赤藓醇转换率可达 62.1%。该研究为废弃玉米芯的再利用和赤藓醇的低成
本发酵生产探索了一条新途径。
关键词：玉米芯，赤藓醇，解脂耶氏酵母，发酵
中图分类号：TQ920.6
文献标识码：A
文章编号：1674-506X（2019）04-0023-0005
代谢工程改造解脂耶氏酵母生产脂肪酸及其衍生物
空燃油、聚合物、增塑剂、润滑剂和食品添加剂等[2]。
来，随着人们对资源与环境问题的日益关注，利用
过去为了摆脱对化石原料的依赖，人们致力于利用
收稿日期：2020-07-28
修回日期：2020-09-21
通信作者：纪晓俊（1982—），男，博士，教授，xiaojunji@
第一作者：王凯峰（1996—），男，博士研究生，1001140528@
引
言
微生物生产脂肪酸及其衍生物以代替传统化石和
动植物来源的相应产品被认为是绿色生物制造的
绿色生物制造利用可再生的生物质资源为原
典范。微生物来源的脂肪酸及其衍生物广泛应用
料，将其绿色转化为具有更高附加值的生物基产
于能源、材料和营养化学品等领域，可用于生产航
[1]
品，是一种新型的可持续发展的工业模式 。近年
Metabolic engineering of Yarrowia lipolytica to produce fatty acids and
their derivБайду номын сангаасtives
WANG Kaifeng, WANG Jinpeng, WEI Ping, JI Xiaojun
(College of Biotechnology and Pharmaceutical Engineering, Nanjing Tech University, Nanjing 211816, Jiangsu, China)
CIESC Journal , 2021, 72(1): 351-365
化工学报 2021 年 第 72 卷 第 1 期 |
DOI：10.11949/0438-1157.20201043
解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)ATCC30162脂肪酶基因Yllip1和Yll
生物资源2019，41（2）：166~173Biotic ResourcesDOI：10.14188/j.ajsh.2019.02.011解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）ATCC30162脂肪酶基因Yllip1和Yllip2的结构及表达特征游灵杰1†，叶蕴瑶1，2†，王丹1，戴妮杰1，龚阳敏1*（1.中国农业科学院油料作物研究所农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，湖北武汉430062；2.孝感高中，湖北孝感432000）摘要：以目前报道油脂产量最高的解脂耶氏酵母菌株（Yarrowia lipolytica）ATCC30162为对象，采用逆转录PCR扩增到脂肪酶编码基因Yllip1和Yllip2，编码产物分别为816和549个氨基酸。
保守结构域预测表明，Yllip1包含Patatin类磷脂酶和功能未知的DUF3336结构域，而Yllip2包含lipase_3类脂肪酶结构域，且这两个蛋白都具有1~4个跨膜区域。
与不同物种来源的脂肪酶同源蛋白的多序列比对表明Yllip1和Yllip2分别包含8和6个保守区域，这些生物信息学分析表明这两个来源于解脂耶氏酵母的脂肪酶作用底物可能分别为细胞内膜磷脂和酰基甘油酯。
荧光定量PCR分析表明：培养基中添加油酸在短期内（6h）诱导了这两个脂肪酶基因Yllip1和Yllip2的显著上调表达，表明它们可能参与了酵母分解利用油酸的生化过程。
关键词：解脂耶氏酵母；脂肪酶；保守结构域；多序列比对中图分类号：Q939.9文献标识码：A文章编号：2096‐3491（2019）02‐0166‐08Cloning of two lipase genes Yllip1and Yllip2from Yarrowia lipolytica ATCC30162and their protein sequence analysisYOU Lingjie1，YE Yunyao1，2，WANG Dan1，DAI Nijie1，GONG Yangmin1*（1.Oil Crops Research Institute，Chinese Academy of Agriculture Science，Wuhan430062，Hubei，China；2.Xiaogan High School，Xiaogan432000，Hubei，China）Abstract：Reverse transcription PCR was conducted to amplify two lipase genes from the yeast strain Yarrowia li⁃polytica ATCC30162，which was reported to produce highest lipid yield till now.The sizes of the encoding products of these two lipase genes，Yllip1and Yllip2，are816and549amino acids，respectively.Prediction of conserved domain suggests that Yllip1contains a Patatin‐like phospholipase and a DUF3336conserved domain with unknown function，whereas Yllip2contains a lipase_3class domain.Both of these two lipase proteins have1~4transmembrane regions. Multiple sequence alignment of Yllip1，Yllip2and their homologues shows that they contain8and6conserved regions，respectively.These bioinformatics analyses suggest that these two lipase proteins from the yeast Yarrowia lipolytica ATCC30162may have different substrates with Yllip1using intracellular membrane phospholipids as substrate while Yl‐lip2using acyl glycerides as substrate.Quantitative RT‐PCR analysis shows that supplementation of oleic acid in the me‐dia within6h induces the up‐regulation of both Yllip1and Yllip2，suggesting that these two lipases possibly participate in 收稿日期：2018‐09‐16修回日期：2018‐10‐24作者简介：游灵杰（1996‐），男，本科生，研究方向为微生物脂肪质代谢。
首次发现解脂耶氏酵母菌败血症
首次发现解脂耶氏酵母菌败血症目的及时报道败血症中首次发现解脂耶氏酵母菌并探讨该真菌败血症的发生特点。
方法应用法国梅里埃公司BACTED 9050血培养系统进行血培养，鉴定采用法国梅里埃公司VITEK 32全自动细菌鉴定仪进行。
结果第一次血培养发现解脂耶氏酵母菌生长，1w治疗后，第二次血培养仍有少量解脂耶氏酵母菌，同时出现屎肠球菌。
结论解脂耶氏酵母菌为条件致病菌，多发生在多种易感因素患者，真菌败血症可以为单一真菌感染，亦可伴有细菌、病毒或寄生虫混合感染，对于高危患者应加强重视。
标签：败血症；真菌；解脂耶氏酵母菌随着广谱抗生素、新型免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用，导致深部真菌感染发生率增加，且常与细菌感染并存[1]，本文报道的解脂耶氏酵母菌常用于工业上处理含油废水，此次发现解脂耶氏酵母菌败血症实属首例，现报道如下。
1 资料与方法1.1一般资料患者，男，71岁，因”发热伴下肢浮肿半月余”入院，无外伤史，有高血压病史10年，10年前被诊断为”糖尿病”遂皮下注射胰岛素治疗，至2010年行前列腺增生切除术和尿道结石手术，2013年6月在武汉某大医院复查时发现，血肌酐为1000μm/L，行血液透析治疗，2次/w，透析5月余后，发现右手动静脉造瘘处血管闭塞而改行颈静脉置管透析，并改为5次/2w。
15d前发现午后低热，伴食欲减退，嗜睡，来本院就诊，门诊以”慢性肾衰竭”、”败血症”收入院，入院后查体温39.2℃，呼吸20次/min，血压146/68mmHg，心率80次/min，律齐，肺部呼吸音粗，颈内静脉留置管处有15cm×15cm大片皮肤溃烂，患者经常骚抓破溃处，伴渗液，右肾叩击（+），双下肢水肿。
院外血培养为金黄色葡萄球菌生长，故入院后给予派舒注射液、透析+肝素抗凝治疗，实验室检查，血常规：WBC2.8×109/L。
3月30日，血培养结果为解脂耶氏酵母菌生长，药敏显示对两性霉素B、制霉菌素、氟康唑、克霉唑均敏感，因此使用大扶康（氟康唑）抗真菌治疗；4月7日，第2次血培养结果为①屎肠球菌；②解脂耶氏酵母菌。
解脂耶氏酵母异源合成α-檀香烯的菌株构建及发酵探究
解脂耶氏酵母异源合成α-檀香烯的菌株构建及发酵探究檀香油是来源于植物檀香的一种名贵香料,具有抗菌、美容和镇静等作用。
α-檀香烯是檀香油主要成分α-檀香醇的前体物质。
解脂酵母是一种公认安全的微生物,可以利用多种碳源生产萜类或生物燃料等多种高附加值产物。
本文提出了一种解脂耶氏酵母异源合成α-檀香烯的方法。
以解脂耶氏酵母ATCC 201249为底盘菌,将经密码子优化的植物源α-檀香烯合成酶STS整合到基因组上,双相发酵得到5.19mg/L的α-檀香烯。
质粒过表达MVA途径上游系列基因 ERG8、ERG10、ERG12、ERG13、ERG19、HMG1和fHMG1,发现ERG8、HMG1和tHMG1可以提高FPP供给并提升产量,其余基因的优化更趋向于竞争途径鲨烯的合成。
将关键基因ERG8和HMG1分别进行多拷贝优化,α-檀香烯的产量均有所提升。
又分别构建和表达了单拷贝pERG8HMG1质粒和多拷贝ERG8-HMG1模块,其中单拷贝pERG8HMG1质粒过表达使α-檀香烯产量提升最明显,达到13.31mg/L。
双相发酵优化中探索了正十二烷添加量、添加时间和发酵时长对产物积累的影响,在发酵6h添加10%的正十二烷,发酵5天最有利于菌体生长和产物积累。
通过4种碳源浓度优化和5种补料方法确定了最佳碳源补料策略,以50 g/L的葡萄糖为初始碳源,补料过程中将碳源浓度维持在5-20 g/L最有利于产量的提升。
利用5-L罐进行了单批发酵和分批补料发酵验证发酵优化的结果。
最终,分批补料发酵菌体OD值达到80,α-檀香烯产量达到26.4mg/L,是初始产量的2.56倍。
与酿酒酵母底盘相比,解脂酵母生产α-檀香烯的产物中不含有副产物farnesol和trans-α-bergamotene。
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Ａｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ： Ｙ ａ ｒ ｒ ｏ ｗｉ ａ ｌ ｉ ｐ ｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ｉ ｓ ａ ｎ ａ ｅ ｒ ｏ ｂ ｉ ｏ ｔ ｉ ｃ ， ｎ ｏ ｎ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｇ ｅ ｎ ｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｄ ｉ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｉ ｃ ｎ ｏ ｎ — ｃ ｏ ｎ ｖ ｅ ｎ ｔ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ ｙ ｅ ａ ｓ ｔ ． Ｉ ｔ ｉ ｓ ｆ ｏ —
业大学生物工程专业 ， 工 学 学 士 。２ ０ ０ ９ —２ ０ １ ４ 年 参 与 国 家 自然 科 学 基 金 资
助 项 目（ ３ ０ ８ ７ １ ３ ４ ７ 和 ３ １ ３ ７ ０ １ ２ ４ ） ， 采用遗传学操作手段 ， 运 用 分 子 生 物 学Ｍ 、 生 物 化 学 以 及 细 胞 生 物 学 相 关 实验 方 法 ， 在 解 脂 耶 氏 酵 母 中 成 功 的 找 到 了一 些 控 制 出 芽位 点 选 择 的 关 键 基 因 ， 并 通 过 对 这 些基 因的 功 能 和 相 互 关 系 的 Nhomakorabea・
博士论坛 ・
解 脂 耶 氏酵 母 研 究 进 展
李 运 清
（ 济 宁 医学 院基 础 学 院 ， 山东 济 宁 ２ ７ ２ ０ ６ ７ ）
Ａ
ｍ 李运清 ， 女， １ ９ ８ ６年 １ ｏ月 生 于 山 东 省 济 宁 市 。２ ｏ １ ４年 毕 业 于 武 汉 大
学 生命 科 学 学 院 微 生 物 学 专 业 ， 获理 学博 士 学 位 。２ ０ ０ ９年 毕 业 于哈 尔滨 工 Ｂ
Ｌ ｌ 二
研 究 来探 索 控 制 解 脂 耶 氏酵 母 出 芽位 点 选 择 的 信 号 通 路 。
摘 要 解 脂 耶 氏酵 母 （ Ｙ ａ ｒ ｒ ｏ ｗ ｉ ａ ｌ ｉ ｐ ｏ ｌ ｙ ｔ ｉ ｃ ａ ） 是 一种需氧 的、 无 致 病 性 的 二 型 性 非 常 规 酵 母 。该 酵 母 因其 可 以有 效 地 利 用 疏 水 性 底 物 为 唯 一 碳 源 进 行 生长 繁 殖 而 得 到 研 究 人 员 的 关 注 。 与模 式 生 物 酿 酒 酵 母 相 比 ， 解 脂 耶 氏酵 母 表 现 出很 多特 殊 的 生理 、 代 谢 以 及基 因 水 平 上 的 特 性 ， 这 些特 性使 得 很 多研 究小 组 以该 酵 母 为 模 式 生 物 进 行 了一 系 列 的 基 础 理 论 和 应 用 研 究 ， 并 取 得 了很 多非 常 有 价 值 的研 究 成果 。 本 文 就 解 脂 耶 氏酵 母 中 一 些 基 础 理 论 的研 究现 状 以及 其 在 污 染 物 的处 理 和 工 业 生产 中的 应用 进 行 简 单 介 绍 。 关 键 词 解 脂 耶 氏酵 母 ； 选择性剪接； 二 型性 ； 疏水底物 ； 污 染物 中图分类号 ： Ｑ９ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章编号 ： １ ０ ０ ０ ９ ７ ６ Ｏ （ ２ ０ １ ５ ） ０ ２ ０ ０ ８ — ０ ６
目前被研究的相对较多的是该酵母的基因组中含有大量的内含子这与其他的酵母菌也是不半子囊菌纲的酵母菌基因组中都含有很少的内含子如酿酒酵母中仅含有287个内含子因密度为70白色念珠菌candidaalbicans含有415个内含子基因密度为62酵母中共含有1119个内含子基因密度仅为458提高基因编码效率的一个有效策略就是采用选择性剪接将外显子选择性的转录并采用不同方式进行排列这样就可以编码出种类更多的蛋白因此研究基因的选择性剪接有着非常重要的实际意义
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Ｊ Ｊ ｉ ｎ ｉ ｎ ｇ Ｍｅ ｄ Ｕｎ ｉ ｖ， Ｆ ｅ ｂ ｒ ｕ ａ ｒ ｙ ２ ０ １ ５， Ｖｏ １ ． ３ ８ ， Ｎｏ ． １
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． ｉ ０ ０ ０ — ９ ７ ６ ０ ． ２ ０ １ ５ ． ０ １ ． ０ ０ ２
ｕｅ ｓ。 ｔ ｈｉ ｓ ｏ ｒ ｇ ａ ｎｉ ｓ ｍ ｅ ｘｈ ｉ ｂ ｉ ｔ ｓ ｓ ｐｅ ｃ ｉ ｆ ｉ ｃ ｐ ｈｙ ｓ ｉ ｏｌ ｏ ｇｉ ｃ ａ ｌ 。 ｍｅ ｔ ａ ｂ ｏ ｌ ｉ ｃ ａ ｎ ｄ ｇ ｅｎ ｏｍ ｉ ｃ ｃ ｈａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｉ ｓ ｔ ｉ ｃ ｓ， ｗｈ ｉ ｃ ｈ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅｒ ｅｎ ｔ ｉ ａ ｔ ｅ ｉ ｔ ｆ ｒ ｏ ｍ